敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的 探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法 慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株，用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平；TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡；MitoTracker染色评估线粒体分裂情况；用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果 与shCtrl组相比，shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比，shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05)...     

敲减G蛋白偶联受体75表达抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡

目的:探讨G蛋白偶联受体75(GPR75)对20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)诱导H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法:慢病毒转染敲减H9c2心肌细胞GPR75基因表达;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-qPCR法检测GPR75以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的mRNA表达;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测GPR75、Bcl-2、Bax及细胞色素C(CytC)蛋白表达;发色底物法检测caspase-3的活性。结果:H9c2心肌细胞在mRNA及蛋白水平均表达GPR75,敲减GPR75抑制了20-HETE诱导的细胞凋亡(P<0.05);同时,敲减GPR75阻断了20-HETE诱导的Bax和CytC表达上调以及caspase-3活性增高作用(P<0.05),逆转了20-HETE诱导的Bcl-2表达下调和线粒体膜电位下降(P<0.05)。结论:20-HETE通过GPR75介导引起线粒体功能紊乱,诱导H9c2心肌细胞凋亡。     

异麦角甾苷对肺癌细胞A549 凋亡和氧化应激的影响

【摘要】　目的　探讨异麦角甾苷(ISO) 对A549 细胞凋亡和氧化应激的影响。方法　CCK-8 实验检测细胞的活力; A549 细胞分为ISO 0、5、10 和20 μmol/ L 4 组, 克隆形成实验检测细胞增殖; 流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化; Western 印迹检测凋亡相关蛋白的表达; 试剂盒检测细胞中的超氧化物歧化酶(SOD) 和丙二醛(MDA) 含量。结果　与ISO 0 μmol/ L 组比较, ISO 10 μmol/ L 及以上浓度均显著降低A549 细胞活力(P<0. 05), ISO 10 和20 μmol/ L 组抑制A549 细胞的增殖(P<0. 05), 促进细胞的凋亡 (P<0. 05), 降低细胞线粒体膜电位, 上调Bax/ Bcl-2 和Caspase-3 蛋白表达, 下调c-Myc 蛋白表达(P<0. 05), 促进氧化应激(P<0. 05)。结论　ISO 能抑制A549 细胞增殖, 促进细胞凋亡和氧化应激。     

盐霉素增强吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的作用

 目的：探讨盐霉素联合吉非替尼诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的协同作用。方法：采用MTT的方法检测盐霉素对A549细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549细胞凋亡和线粒体膜电位的影响;比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western bloting 分析细胞色素C、Bcl-2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白水平。结果：盐霉素与吉非替尼单用均出现不同程度的细胞增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用;而盐霉素与吉非替尼联合作用,能更显著地抑制细胞增殖,且凋亡细胞显著增加（P<0.05）。盐霉素单独作用A549细胞,线粒体膜电位显著下降,细胞内活性氧和Ca2+在短期内显著升高,胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义;吉非替尼单用则主要表现为对p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达的抑制作用,而对胞浆细胞色素C含量以及caspase-3、-8和-9活性影响较少。Western blotting检测发现,联合用药组的Bcl- 2、p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达量明显减少,但是对EGFR、Akt和ERK总蛋白水平无显著影响。结论：盐霉素与吉非替尼联用具有较好的协同作用,可能通过Bcl-2途径及线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,提高A549细胞对吉非替尼的敏感性。     

京尼平抑制高糖诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化应激及凋亡损伤

目的:探讨京尼平(genipin,GEN)对高糖损伤的大鼠心肌H9c2细胞的抗氧化作用和抑制细胞凋亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,高浓度(50 mmol/L)葡萄糖处理H9c2细胞建立细胞损伤模型,分为正常糖对照组(NC组,葡萄糖浓度为5.6 mmol/L)、高糖损伤组(HG组,葡萄糖浓度为50 mmol/L)、正常糖+京尼平组(NC+GEN组)和高糖+京尼平组(HG+GEN组,京尼平浓度为10μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力;酶标法和WST-1法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;荧光探针DCF检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;ELISA法检测核小体片段的聚集值;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞内线粒体膜电位变化;利用Western blot法检测线粒体内抗氧化酶锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),以及早期凋亡蛋白细胞色素C(Cyt C)、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与HG组比较,HG+GEN组细胞活力显著升高(P 0.05),细胞内MDA的含量及细胞上清液中LDH的活性明显降低(P 0.05),细胞内SOD活性升高(P 0.05),细胞内线粒体膜电位明显升高(P 0.05),ROS水平降低(P 0.05),核小体片段聚集程度显著降低(P 0.05)。HG组线粒体内抗氧化酶Mn-SOD比NC组降低(P 0.05),但线粒体内凋亡蛋白Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平比NC组显著升高(P 0.05),而HG+GEN组与HG组相比,Mn-SOD升高(P 0.05),Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著降低(P 0.05)。结论:京尼平对高糖损伤的心肌H9c2细胞具有抗氧化保护作用和抑制细胞凋亡的作用。     

白藜芦醇缓解低氧/复氧诱导的TCMK1细胞线粒体自噬

目的 研究白藜芦醇(Res)对低氧/复氧(H/R)导致小鼠肾小管上皮细胞系TCMK1内线粒体功能及线粒体自噬的影响。方法 体外建立H/R细胞模型,经Res或(和)线粒体自噬抑制剂1 (Mdivi-1)预处理TMCK1细胞2 h,采用CCK8法检测TCMK1细胞存活率;试剂盒法检测钙离子超负荷情况;流式细胞测量术测定线粒体膜电位(MMP)变化和活性氧(ROS)含量;Western blot检测线粒体融合蛋白(OPA)、分裂蛋白(DRP)以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3,Bax, Bcl2表达;免疫荧光检测线粒体外膜转位酶(TOMM20)和自噬溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)共定位情况。结果 与对照组相比,H/R组TCMK1细胞存活率显著减低(P<0.05),细胞内钙离子、ROS及MMP含量显著减低(P<0.05),OPA表达显著减低(P<0.05),同时DRP表达显著增高(P<0.05),线粒体与LAMP2共定位的细胞数目显著减少;与H/R组相比,10μmol/L Res可以显著增加TMCK1细胞的存活率(P<0.05),抑制细胞内ROS的...     

脂肪因子chemerin对肥大的心肌细胞线粒体功能障碍的影响

目的:研究脂肪因子chemerin对肥大的大鼠心肌H9C2细胞线粒体的调节作用,探讨其对肥大的H9C2心肌细胞线粒体功能障碍的影响。方法:体外细胞实验分为正常组、chemerin组、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)模型组和AngⅡ+chemerin组。采用免疫荧光染色方法和qPCR实验鉴定模型构建是否成功,电镜观察心肌细胞线粒体的形态变化,流式细胞术检测心肌H9C2细胞中线粒体膜电位和膜通透性,酶活性试剂盒检测细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)的活性。结果:与正常组比较,AngⅡ组和chemerin组H9C2细胞的线粒体结构损坏严重,线粒体膜通透性显著增加(P<0. 01),线粒体膜电位及COX和SDH酶活性明显降低(P<0. 01),且AngⅡ+chemerin组线粒体损伤更明显(P<0. 05)。结论:脂肪因子chemerin刺激不仅可诱导心肌H9C2细胞肥大,还可促进肥大的心肌H9C2细胞线粒体功能障碍。     

shRNA 沉默CCAT2 通过抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549 化疗敏感性的 影响

目的:探究shRNA沉默CCAT2抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及机制。方法:细胞分为A549/DDP组、Scramble组、CCAT2 shRNA组,转染相应的shRNA处理细胞,RT-PCR检测CCAT2基因表达水平,CCK8检测A549/DDP的细胞活力,Hoeschst和流式细胞法检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶3(cl-caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果:与A549细胞株相比,A549/DDP细胞株中CCAT2表达水平显著升高。与A549/DDP组相比,CCAT2 shRNA组CCAT2表达水平显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Bax、cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平比率显著降低,Beclin1蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高。结论:沉默CCAT2可提高非小细胞肺癌细胞A549株化疗敏感性,作用机制可能与抑制自噬作用有关。     

橙皮素通过抑制钙超载减轻低氧/复氧诱导的心肌 H9c2细胞凋亡

目的:本研究旨在探讨橙皮素对低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌H9c2细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:建立心肌H9c2细胞H/R模型,使用橙皮素进行预处理,利用CCK-8和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒分别测定细胞活力和损伤情况;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Fluo-3AM孵育后观察细胞内的钙离子荧光强度;细胞Ca~(2+)-ATP酶活性与三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平测定利用相应的ELISA试剂盒;利用JC-1染色检测线粒体膜电位;采用Western blot测定Bcl-2、Bax和细胞色素C(cytochrome C, Cyt-C)的蛋白表达水平。结果:橙皮素预处理可明显逆转H/R所致心肌H9c2细胞活力降低,并且减少细胞的凋亡率,降低细胞内钙离子的荧光强度,提高细胞Ca~(2+)-ATP酶活性,抑制线粒体膜电位去极化并提升ATP的水平(P0.05),同时抑制Cyt-C蛋白从线粒体释放入胞浆并增加线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的比值(P0.05);而给予钙离子拮抗剂尼莫地平后,与H/R组相比,线粒体膜电位去极化程度减轻,ATP获得提升并且线粒体凋亡相关蛋白表达降低(P0.05)。结论:橙皮素可抑制H/R诱导的心肌H9c2细胞凋亡,其机制可能与减轻钙超载从而改善线粒体功能有关。     

亚硒酸钠通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制

目的通过检测亚硒酸钠诱导人胃癌SGC-7901细胞系凋亡过程中Bax/Bcl-2、线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)表达的变化,探讨亚硒酸钠诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。方法将人胃癌细胞系SGC-7901细胞加入不同浓度亚硒酸钠(2.5、5.0、10.0mol/L)的培养液中培养24h、48h,免疫细胞化学法和免疫印迹法(Western blotting)检测Bax/Bcl-2蛋白的表达;以罗丹明123(rhodamine123)为细胞染色剂,采用流式细胞技术检测细胞的线粒体膜电位的变化;Western blotting检测细胞质Cyt C和线粒体Cyt C蛋白含量的变化。结果免疫细胞化学法和Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够能够提高Bax蛋白的表达(P0.05)、降低Bcl-2蛋白的表达(P0.05),且呈剂量依懒性;流式细胞术结果显示,亚硒酸钠能够降低细胞线粒体膜电位;提示:亚硒酸钠可以通过改变Bax、Bcl-2蛋白的含量,降低线粒体的膜电位来诱导细胞凋亡。Western blotting检测结果显示,亚硒酸钠能够提高细胞质Cyt C蛋白的表达(P0.05)并降低线粒体内Cyt C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内的Cyt C向细胞质内释放。结论亚硒酸钠通过上调Bax并下调Bcl-2蛋白表达,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到细胞质,通过线粒体途径诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

四川新康温石棉通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)通路诱导A549细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)途径在四川新康温石棉诱导A549人肺上皮细胞凋亡过程的作用。方法采用(12.5、25、50、100、200)μg/m L温石棉作用A549细胞24 h,MTT法检测细胞存活率;设置ROS抑制组,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡、JC-1标记检测线粒体膜电位、二氯二氢荧光黄乙酰乙酯(DCFH-DA)负载检测ROS水平,Western blot法检测磷酸化的c-JNK1(p-JNK1)、p-JNK2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白水平。结果随着温石棉剂量增大,细胞存活率下降,温石棉半数抑制剂量为223.43μg/m L;细胞凋亡率呈现剂量-效应关系,胞内ROS水平升高,p-JNK1、p-JNK2、c-caspase-3蛋白水平明显上调,线粒体膜电位降低;与相同剂量温石棉组比较,ROS抑制剂能显著抑制细胞凋亡,降低ROS水平,减少线粒体膜电位的降低程度,并下调p-JNK1、p-JNK2和c-caspase-3蛋白的表达。结论四川新康温石棉可能通过ROS/JNK途径诱导A549细胞发生凋亡。     

Notch1表达下调抑制病理性瘢痕成纤维细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨慢病毒介导的Notch1表达下调对病理瘢痕成纤维细胞(PSF)中caspase-9活化水平及线粒体膜电位的影响。方法分离培养增生性PSFs,感染Notch1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒。分别采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中Notch1mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;PI单染法检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、活化的caspase-3(c-caspase-3)和caspase-9(c-caspase-9)蛋白及胞质和线粒体中细胞色素C(cytochrome C)蛋白;JC-1法检测细胞线粒体膜电位。结果Notch1 siRNA慢病毒感染后的PSFs中Notch1表达水平明显低于阴性对照慢病毒和未感染的PSFs的表达水平(P<0.05)。下调Notch1后的PSFs增殖能力降低(P<0.05);细胞G0/G1期比例升高(P<0.05);细胞凋亡率升高(P<0.05);c-caspase-3和c-caspase-9蛋白表达升高(P<0.05);细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.05);细胞中cyclin D1和CDK4蛋白水平降低(P<0.05);胞质内的cytochrome C蛋白含量升高(P<0.05)及线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05)。结论Notch1表达下调抑制PSFs增殖并诱导凋亡。     

IL-8促进A549细胞迁移过程中对线粒体融合与分裂基因表达的影响

目的:探讨IL-8作用下人肺腺癌A549细胞的迁移率变化以及线粒体融合与分裂基因的变化。方法:实验分为对照组和IL-8作用组。采用细胞划痕实验方法观察IL-8作用下细胞迁移能力的变化;Transwell小室检测细胞的迁移率;ELISA实验检测不同迁移率的细胞内源性IL-8的分泌量;Western blot法检测线粒体外膜蛋白Tom20及线粒体膜间腔蛋白细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)的表达。RT-PCR检测线粒体融合基因Mfn1、Mfn2、OPA1及分裂基因Fis1、Drp1、MTP18的表达;Mito Tracker Red CMXRos染色激光共聚焦显微镜观察细胞中线粒体的形态。结果:肺腺癌A549细胞的迁移率高于SPC-A-1细胞,且内源性IL-8的分泌也高于SPC-A-1细胞。IL-8作用下A549细胞的迁移率增加,并存在时间依赖性。与对照组比较,IL-8作用组的A549细胞线粒体膜间腔蛋白Cyt C蛋白表达降低(P0.05),外膜蛋白Tom20表达增加(P0.05),线粒体外膜融合基因Mfn1及Mfn2表达增加(P0.05),内膜融合基因OPA1表达降低(P0.05),分裂基因Fis1无明显变化(P0.05),Drp1及MTP18增加(P0.05);激光共聚焦显微镜显示IL-8作用下线粒体形态发生变化,出现点状聚集。结论:A549细胞在IL-8作用下迁移率增加,可能与A549细胞线粒体融合与分裂基因变化有关。     

肝素结合血凝素通过抑制A549细胞的自噬作用增强耻垢分枝杆菌的感染能力

目的将肝素结合血凝素(HBHA)重组表达于耻垢分枝杆菌(MS),鉴定其对A549细胞自噬作用的影响。方法将HBHA克隆于穿梭表达质粒pMV261,构建HBHA重组载体,电转化至MS;感染A549细胞,Western blot法鉴定A549细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,并检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的变化可估计自噬的水平;利用单丹磺酰尸胺(MDC)将自噬体染色后,激光共聚焦观察细胞内自噬体变化的情况;通过MS、rMS-HBHA感染A549细胞18 h,计算胞内活菌数,鉴定感染状况。结果 rMS-HBHA经42℃热诱导成功表达HBHA蛋白;相对野生型MS,重组表达HBHA蛋白的MS(rMS-HBHA)可以显著抑制A549细胞中的LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的表达,rMS-HBHA组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值为0.625显著低于MS组2.025,表明rMS-HBHA组自噬体形成受到抑制;并且rMS-HBHA感染A549细胞18 h后胞内活菌为6.3×106,明显高于MS组1×105。结论外源性HBHA可以通过抑制A549细胞的自噬作用增强MS的感染能力。     

rL-RVG体外抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡北大核心CSCD

目的将表达狂犬病毒糖蛋白的重组LaSota株新城疫病毒疫苗(rL-RVG)感染至A549肺腺癌细胞,观察其对肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法采用直接感染的方法将rL-RVG感染至A549细胞,采用Western blot法检测rL-RVG中RVG和NDV蛋白在A549细胞内的表达;MTT法检测rL-RVG对细胞增殖的影响,TUNEL法检测rL-RVG对A549细胞凋亡的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞检测术检测A549细胞凋亡情况;Western blot法检测caspase-3的表达,并与对照组LaSota株进行比较,PBS组为空白对照组。结果 A549细胞感染rL-RVG后RVG蛋白和NDV蛋白都稳定表达,MTT法结果显示细胞增殖明显被抑制,rL-RVG组抑制率高于LaSota组。A549细胞凋亡增多,其中流式细胞检测术中显示rL-RVG组早期凋亡细胞较其他2组增多,差异有统计学意义(P<0.05),TUNEL检测凋亡指数增加,rL-RVG组较其他2组增多,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot法显示促凋亡蛋白caspase-3表达增加,加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,caspase-3蛋白表达明显降低。结论 rL-RVG感染A549细胞后能在细胞内稳定表达,rL-RVG可抑制肺癌细胞生长、促进肺癌细胞凋亡,效果优于野生LaSota株。     

红景天甙对缺氧/缺糖损伤的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

目的:观察红景天甙对SH-SY5Y 细胞缺氧/缺糖损伤时细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位和活性的变化,探讨其对神经细胞线粒体膜电位的影响。方法:应用细胞培养,四唑盐比色实验( MTT )检测细胞线粒体活性,流式细胞术检测细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果: SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2、4、6、12 h后,细胞内[Ca²⁺]i和细胞凋亡百分率明显高于对照组, 均有显著差异(P<0.01);细胞经缺氧/缺糖处理后,线粒体膜电位和活性明显低于对照组,2 h时分别为29.17%(P<0.01),38.80% (P<0.01), 12 h时分别为56.72%(P<0.01), 63.58% (P<0.01);红景天甙能显著降低细胞内[Ca²⁺]i,抑制细胞凋亡的发生,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧/缺糖损伤组相比均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论:红景天甙可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关。     

脂多糖诱导脓毒症小鼠心肌细胞及线粒体自噬

目的探讨脓毒症心肌损伤时心肌细胞及线粒体自噬水平的变化。方法雄性C57BL/J小鼠随机分为空白对照组(NC)、LPS处理6、12、24、36 h组。LPS处理组小鼠腹腔注射10 mg/kg LPS建立脓毒症模型,空白对照组注射等量生理盐水。分别于以上时间点处死小鼠,收集血液及心脏组织,提取心肌组织胞质蛋白、线粒体及线粒体蛋白,另取心肌组织进行冰冻切片;应用ELISA试剂盒测定血清心肌肌钙蛋白I(c Tn I)含量变化;JC-1染色结合荧光酶标仪检测LPS刺激后不同时间点线粒体膜电位变化;Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、PTEN诱导激酶1(pink1)、E3泛素连接酶帕金森病蛋白(parkin)水平;免疫荧光组织化学染色检测心肌组织LC3、pink1/parkin蛋白的定位及其在不同处理组的表达差异。结果与对照组相比,LPS诱导的脓毒症小鼠血清c Tn I在6 h即开始明显升高;LPS处理组线粒体膜电位下降,在LPS 12 h组最低;细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在腹腔注射LPS 12 h明显升高,然后逐渐下降;pink1/parkin在腹腔注射LPS 6 h明显升高,然后逐渐下降。结论脓毒症心肌损伤时心肌细胞及线粒体自噬水平升高,自噬应激可能更早发于心肌线粒体。     

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的: 探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法: 采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨ_m)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2 μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨ_m显著下降,而细胞内活性氧和Ca²⁺浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl- 2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。     

成纤维细胞生长因子19改善缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤

目的:研究成纤维细胞生长因子19(FGF19)对缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤的改善作用。方法:将心肌细胞H9c2分为Control组(常规方法培养)、H/R组(细胞经缺氧/复氧处理)、NC+H/R组(细胞转染pcDNA 3.1后再经缺氧/复氧处理)和FGF19+H/R组(细胞转染pcDNA 3.1-FGF19后再经缺氧/复氧处理)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹(Western blot)检测各组FGF19 mRNA和蛋白表达水平,ELISA检测各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、LDH、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western blot检测各组细胞中活化的半胱天冬酶-3(C-Caspase-3)、活化的半胱天冬酶-9(C-Caspase-9)蛋白表达和胞浆中细胞色素C(Cyt C)蛋白水平,JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位变化。结果:与H/R组和NC+H/R组比较,FGF19+H/R组心肌细胞中FGF19 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01)。H/R组与NC+H/R组心肌细胞中FGF19 mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Control组比较,H/R组细胞培养液中LDH水平升高(P<0.01),细胞中MDA和ROS水平升高(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活力降低(P<0.01),细胞凋亡率、C-Caspase-3、C-Caspase-9和Cyt C蛋白水平升高(P<0.01),线粒体膜电位降低(P<0.01)。与NC+H/R组比较,FGF19+H/R组细胞培养液中LDH水平降低(P<0.01),细胞中MDA和ROS水平降低(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活力升高(P<0.01),细胞凋亡率、C-Caspase-3、C-Caspase-9和Cyt C蛋白水平降低(P<0.01),线粒体膜电位升高(P<0.01)。结论:FGF19可能通过减少细胞凋亡和氧化损伤改善缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤。     

超低频电磁场处理水对骨骼肌细胞糖脂代谢及线粒体功能的影响

背景：超低频电磁场处理水(简称频谱水)作用于生物体, 在很多方面能够改善生物体的生理功能,但其对骨骼肌细胞糖脂代谢和线粒体功能的影响上,还需要更进一步的理论和实验研究。 目的：探究频谱水培养对C2C12骨骼肌细胞糖脂代谢和线粒体功能的作用。 方法：采用频谱水配制的DMEM培养C2C12骨骼肌细胞96 h后收样,甲基噻唑基四唑(MTT)细胞计数法检测细胞增殖,检测培养基中葡萄糖含量、细胞内三酰甘油浓度、线粒体ATP含量,线粒体膜电位,以及葡萄糖糖转运子1、4和细胞色素C氧化酶的蛋白水平。 结果与结论：频谱水培养C2C12骨骼肌细胞96 h细胞葡萄糖消耗量增加2.4%(P < 0.05),三酰甘油浓度略有减少(P > 0.05),葡萄糖糖转运子1蛋白表达增加35.8%(P < 0.05),细胞色素C氧化酶1蛋白表达增加43.7%(P < 0.01),线粒体ATP含量和线粒体膜电位均没有明显变化(P > 0.05)。结果提示：①频谱水培养C2C12骨骼肌细胞可通过增加骨骼肌细胞膜上葡萄糖糖转运子1的含量来提高骨骼肌细胞葡萄糖利用量。②频谱水不改变正常骨骼肌细胞线粒体膜电位。③频谱水可能通过提高线粒体中细胞色素C氧化酶1的表达量而在骨骼肌细胞能量需要增加时加强线粒体的产能功能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程