南京地区1999-2006年淋球菌青霉素耐药性及耐药质粒基因型研究

目的了解南京地区淋球菌青霉素耐药状况及产青霉素酶淋球菌的质粒基因型的流行情况。方法采用琼脂稀释法检测淋球菌对青霉素的最小抑菌浓度采用纸片酸度定量法检测菌株是否产青霉素酶。采用单管PCR方法对产青霉素酶淋球菌耐药质粒进行基因分型。结果8年间共检测1208株淋球菌，青霉素总耐药率为84．02％（1015／1208）。非产青霉素酶淋球菌中，染色体介导的耐青霉素淋球菌占74．02％（550/743）。产青霉素酶淋球菌占38．49％（465／1208），其中177（38．06％）株同时为质粒介导的耐四环素淋球菌即质粒介导的高度耐四环素淋球菌。产青霉素酶淋球菌阳性率自1999（8．04％）年起逐年增加，至2004年达最高（57．36％），2005、2006年略有下降。质粒PCR分型显示，所测菌株均携带亚洲型质粒。结论南京地区耐青霉素淋球菌始终维持在较高水平，产青霉素酶淋球菌近年增加较快，携带亚洲型质粒的产青霉素酶淋球菌在南京地区流行，未发现其他类型的质粒。     

淋球菌对头孢曲松的敏感性及淋球菌多抗原测序分型研究

【摘要】 目的 探讨南京市淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）基因型别。 方法 2007年和2012年在中国疾病预防控制中心性病控制中心临床防治基地分别收集了204株和81株淋球菌,经过分离纯化及鉴定后,用琼脂稀释法测定其对头孢曲松的最小抑菌浓度（MIC）;菌株培养后利用试剂盒提取DNA,并进行淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）。 结果 测试的285株淋球菌MIC ≥ 0.060 μg/ml的菌株比例为63.2%,MIC ≥ 0.125 μg/ml的比例为31.6%。2012年MIC ≥ 0.060 μg/ml和MIC ≥ 0.125 μg/ml的菌株比例分别为44.4%和11.1%,2007年MIC ≥ 0.060 μg/ml和MIC ≥ 0.125 μg/ml的菌株比例分别为70.6%和39.7%。NG-MAST分型研究显示,285株淋球菌共有166个型别,菌株多样性较高,其中73种为已知型别,93种为新型别。2007年测定的所有菌株中以ST568（n = 13）,ST270（n = 9）,ST421（n = 7）,ST2288（n = 5）,ST1731（n = 4）,ST1766（n = 4）,ST1866（n = 4）,ST1870（n = 4）等为主。2012年测定的所有菌株中以ST2318（n = 5）,ST1053（n = 4）,ST5990（n = 4）,ST8726（n = 4）为主。相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值。 结论 2012年与2007年菌株的优势型别有较大变化,某些型别与头孢药敏值有较强对应关系。NG-MAST分型可能作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测。     

淋球菌对头孢克肟等6种抗生素敏感性及耐药质粒分型研究

目的:检测2011年广东省广州、佛山、江门、肇庆四市临床分离的淋球菌流行株对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢克肟、头孢曲松和大观霉素等6种抗生素的敏感性,对质粒介导的产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高水平耐药淋球菌(TRNG)进行耐药质粒TEM-1和tetM基因分型。方法:采用琼脂稀释法测定菌株对6种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),判断敏感性按WHO西太区淋球菌耐药性监测统一标准,其中头孢克肟敏感性试验和判断标准按美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)判断。用纸片酸度法检测产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)菌株,多重PCR方法鉴定β-内酰胺酶质粒并进行TEM-1和TRNG tetM基因分型。结果:来自四市429株淋球菌中检出青霉素耐药364株(84.8%),四环素和环丙沙星耐药株(率)分别为389株(90.7%)和418株(97.4%),未发现对大观霉素、头孢克肟和头孢曲松耐药菌株,但头孢曲松低敏率达到34.0%(146/429),头孢克肟低敏只有1株(0.2%)。青霉素、四环素和环丙沙星的MIC50及MIC90均已超过耐药标准。检出PPNG株156株(36.4%),TRNG株201株(46.9%)。耐药质粒TEM-1基因分型以亚洲型为主(94.9%,148/156),只有8株携带非洲型质粒;tetM基因分型均为荷兰型。结论:四市淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高,对大观霉素、头孢克肟和头孢曲松的敏感性较高,TEM-1基因质粒分型以亚洲型为主,tetM基因分型均为荷兰型。     

质粒介导产β －内酰胺酶淋球菌的检测及其TEM-1基因质粒分型

【摘要】 目的 调查质粒介导的产? －内酰胺酶淋球菌 (PPNG)在淋球菌临床分离株中流行情况及TEM-1基因的分子流行病学情况。方法 收集2000-2008年从性病门诊患者中分离的 934株淋球菌,纸片酸度法测定PPNG,多重PCR方法鉴定?－内酰胺酶质粒并行TEM-1基因分型。 结果 2000-2008年共检测934株淋球菌,检出230株PPNG(24.6%),流行率逐年增多,由2000年的17.1%上升到2008年的42.1%;PPNG的TEM-1基因质粒分型以亚洲型质粒流行为主,只在2008年检测出1株含非洲型质粒,未见多伦多型质粒。结论 PPNG流行率逐年增高,产? －内酰胺酶的TEM-1基因流行以亚洲型质粒为主,偶见非洲型质粒。     

淋球菌基因分型方法的研究进展

淋球菌是引起淋病的病原菌,如不及时治疗可以引起严重的并发症。为了更好的研究淋球菌的流行特点、遗传学、免疫学等科学问题,有必要研究淋球菌的分型方法。目前淋球菌分型可分为传统分型和基因分型,其中后者应用较多。在基因分型中,又可分为凝胶电泳DNA条带分型和序列分型。应用除多位点可变数串联重复序列分型以外的凝胶电泳DNA条带分型方法所得到的结果较主观,实验室之间的结果不具有可比性。     

2008年中国淋球菌临床分离株耐药性的流行病学研究

目的 通过对2008年淋球菌耐药监测结果进行分析,了解我国不同地区淋球菌耐药株的流行现状.方法 淋球菌株来自2008年全国淋球菌耐药监测点符合要求的951例淋病患者,其中江苏156例、浙江71例、福建102例、广东207例,广西77例、海南43例、新疆45例、陕西72例、四川80例、重庆44例、天津54例.通过纸片酸度定量法测定β-内酰胺酶,琼脂稀释法测定大观霉素、环丙沙星、头孢曲松钠、四环素对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC).结果 大观霉素有2株耐药(0.21%),头孢曲松451株中度敏感(47.42%),质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG)487株(51.21%),产青霉素酶淋球菌(PPNG)332株(34.91%),环丙沙星928株耐药(97.58%).淋球菌对多种抗菌药物敏感性间的等级相关分析显示,TRNG阳性率与PPNG阳性率呈正相关(r=0.20,P<0.01),淋球菌对头孢曲松的敏感性与PPNG阳性率负相关r=-0.09,P<0.01),而淋球菌对头孢曲松的敏感性与对环丙沙星的敏感性及TRNG阳性率、淋球菌对环丙沙星的敏感性与PPNG阳性率及TRNG阳性率间没有相关性.卡方分析显示,各省收集的淋球菌对头孢曲松的中敏率之间相差比较大,广西、海南、新疆、陕西四省的中敏率(分别为87.01%、69.77%、82.22%、86.11%)高于总体水平(47.42%);陕西省有2株淋球菌对大观霉素耐药;各省收集的淋球菌对环丙沙星的耐药率较一致(86.11%～100%);广东省收集的淋球菌中TRNG的阳性率(68.60%)明显高于总体水平(51.21%);四川省、浙江省收集的淋球菌中PPNG的阳性率(分别为63.75%和54.93%)明显高于总体水平(34.91%)(P<0.05).结论 不同地区的淋球菌对抗生素的耐药性有明显的差别,其中陕西省收集的淋球菌对首选药物中头孢曲松的中度敏感率及对大观霉素的耐药率较高,应引起重视.

Abstract：

Objective To study the current status of antimicrobial resistance of clinical Neisseria gonorrhoeae isolates in China by analyzing the surveillance results in 2008.Methods N. gonorrhoeae strains were collected from 951 eligible patients at national monitoring sites for resistance of N. gonorrheae,including 156 patients from Jiangsu province,71 from Zhejiang province,102 from Fujian province,207 from Guangdong province,77 from Guangxi province,43 from Hainan province,80 from Sichuan province,44 from Chongqing,45 from Xinjiang Uygur Autonomous Region,72 from Shaanxi province,and 54 from Tianjin.The production of β-lactamase was detected by paper acidometric testing,and minimum inhibitory concentrations(MICs)were determined by agar dilution method for spectinomycin,ciprofloxacin,cefiriaxone,tetracycline,respectively.Results Among the 951 N. gonorrhoeae isolates,2(0.21%)were resistant to spectinomycin,451(47.42%)showed reduced sensitivity to ceflriaxone,928(97.58%)were resistant to ciprofloxacin.Penicillinase-producing N.gonorrhoeae (PPNG) and plasmid mediated tetracycline-resistant N. gonorrhoeae (TRNG) accounted for 34.91%(332/951)and 51.21%(487/951) of these isolates respectively.Kendall rank correlation analysis showed that there was a positive correlation between the positivity rate of TRNG and PPNG(r=0.20,P<0.01),but a negative correlation between the susceptibility to cefiriaxone in N.gonorrhoeae and positivity rate of PPNG(r=-0.09,P<0.01).No correlation was observed between the susceptibility to cefiriaxone and susceptibility to ciprofloxacin or the positivity rate of TRNG,or between the susceptibility to ciprofloxacin and positivity rate of PPNG or TRNG.Chi-square analysis showed a marked increase in the percentage of N.gonorrhoeae isolates with reduced susceptibility to ceftriaxone in Guangxi province,Hainan province,Xinjiang Uygur Autonomous Region and Shaanxi province,the percentage of N.gonorrhoeae isolates with resisitance to spectinomycin in Shaanxi province,prevelance of TRNG in Guangdong province,and prevelance of PPNG in Sichuan and Zhejiang provinces compared with the average level (all P<0.05).Conclusions Thero is a significant diffefence in antimicrobial susceptibility of N.gonorrhoeae from difierent areas of China.A significant elevation is observed in the percentage of N.gonorrhoeae with reduced susceptibihty to cefifiaxone and resistance to spectinomycin in Shaanxi province.to which close attention should be paid.     

淋球菌opa基因分型方法的建立与评估

Objective To establish a molecular typing method (opa-typing) for Neisseria gonorrhoeae, and to evaluate its performance based on epidemiological data. Methods Twenty-six gonorrhea patients were recruited from March to April 2006 at two sites, including 17 cases from the STD Clinic of Institute of Dermatology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College and 9 cases from the STD Clinic of Shandong Provincial Institute of Dermatology. Of the 26 patients, 6 were from three known sexual links, while the remaining 20 patients did not have any sexual contact with each other. The opa gene was amplified by using PCR from Neisseria gonorrhoeae isolates from these patients followed by overnight digestion with restriction enzymes Taq Ⅰ and Hpa Ⅱ. The enzyme digestion band patterns were analyzed using the Cel-Compar program. Results The opa gene was successfully amplified from all the 26 Neisseria gonorrhoeae strains, and restrictedly digested by endonucleases Taq Ⅰ and Hpa Ⅱ . Identical band patterns were observed between patients with sexual links, but not among the remaining 20 patients. Conclusions The results of opatyping of Neisseria gonorrhoeae coincide with the information on sexual behaviour provided by patients. Opatyping may serve as a reliable tool in sexual network analysis.     

系统评价中国大陆地区有关淋球菌头孢曲松耐药监测的研究

目的 收集近期国内外发表的有关中国大陆淋球菌头孢曲松耐药监测文献,分析文献的质量及淋球菌的耐药趋势.方法 检索中国期刊全文数据库、PubMed、Cochrane数据库,筛选合格文献进行系统评价.结果 入选46篇文献,共报道10 163株淋球菌头孢曲松药敏情况.23篇文献主要来自华南(50%);26篇提供的标准菌株为WHO淋球菌分离株(56.52%);32篇文献药敏试验方法为WHO推荐的琼脂糖稀释法(69.57%);淋球菌的头孢曲松耐药率仍较低,但有增加趋势.结论 应该进一步提高淋球菌耐药监测研究的质量,使之能更好地反映淋球菌耐药状况.     

淋球菌opa基因分型方法的建立与评估

Objective To establish a molecular typing method (opa-typing) for Neisseria gonorrhoeae, and to evaluate its performance based on epidemiological data. Methods Twenty-six gonorrhea patients were recruited from March to April 2006 at two sites, including 17 cases from the STD Clinic of Institute of Dermatology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College and 9 cases from the STD Clinic of Shandong Provincial Institute of Dermatology. Of the 26 patients, 6 were from three known sexual links, while the remaining 20 patients did not have any sexual contact with each other. The opa gene was amplified by using PCR from Neisseria gonorrhoeae isolates from these patients followed by overnight digestion with restriction enzymes Taq Ⅰ and Hpa Ⅱ. The enzyme digestion band patterns were analyzed using the Cel-Compar program. Results The opa gene was successfully amplified from all the 26 Neisseria gonorrhoeae strains, and restrictedly digested by endonucleases Taq Ⅰ and Hpa Ⅱ . Identical band patterns were observed between patients with sexual links, but not among the remaining 20 patients. Conclusions The results of opatyping of Neisseria gonorrhoeae coincide with the information on sexual behaviour provided by patients. Opatyping may serve as a reliable tool in sexual network analysis.     

淋球菌opa基因分型方法的建立与评估

Objective To establish a molecular typing method (opa-typing) for Neisseria gonorrhoeae, and to evaluate its performance based on epidemiological data. Methods Twenty-six gonorrhea patients were recruited from March to April 2006 at two sites, including 17 cases from the STD Clinic of Institute of Dermatology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College and 9 cases from the STD Clinic of Shandong Provincial Institute of Dermatology. Of the 26 patients, 6 were from three known sexual links, while the remaining 20 patients did not have any sexual contact with each other. The opa gene was amplified by using PCR from Neisseria gonorrhoeae isolates from these patients followed by overnight digestion with restriction enzymes Taq Ⅰ and Hpa Ⅱ. The enzyme digestion band patterns were analyzed using the Cel-Compar program. Results The opa gene was successfully amplified from all the 26 Neisseria gonorrhoeae strains, and restrictedly digested by endonucleases Taq Ⅰ and Hpa Ⅱ . Identical band patterns were observed between patients with sexual links, but not among the remaining 20 patients. Conclusions The results of opatyping of Neisseria gonorrhoeae coincide with the information on sexual behaviour provided by patients. Opatyping may serve as a reliable tool in sexual network analysis.     

1999-2006年南京地区淋球菌对环丙沙星耐药现状的分析

目的 了解南京地区1999-2006年淋球菌对环丙沙星的耐药现状.方法 对1999-2006年在南京地区性病门诊患者中分离到的1208株淋球菌,采用琼脂稀释法测定环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC).结果 对环丙沙星耐药(MIC 1mg/L)的淋球菌率由1999年的83.93%(94/112)上升至2006年的98.99%(196/198),平均总耐药率为96.61%(1167/1208).其中环丙沙星高度耐药(MIC≥4mg/L)的淋球菌比率达71.61%(865/1208).结论 南京地区流行的淋球菌对环丙沙星的耐药情况极其严重.     

广州淋球菌基因特征及其多抗原序列分型与环丙沙星耐药相关性研究

目的 探讨2014年广州市97株淋球菌环丙沙星耐药株的基因特征及其多抗原序列分型（NG-MAST）与淋球菌耐环丙沙星的相关性。 方法 用琼脂稀释法测定淋球菌对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC）,PCR分别扩增淋球菌的gyrA、parC基因和NG-MAST分型基因porB、tbpB基因并测序,获取耐药菌株的ST型别。 结果 97株淋球菌中95株（97.9%）对环丙沙星耐药。95株环丙沙星耐药菌株均在gyrA基因对应丝氨酸的第91和95位点上发生了突变,其中93株菌出现了parC基因突变。41株高水平耐药株（MIC ≥ 16 mg/L）中35株（85.4%）出现了parC基因87位点突变,54株低水平耐药株中32株（59.3%）出现此突变,差异有统计学意义（χ2 = 7.64,P < 0.05）。96株淋球菌分离株配对后,50株为网站已编号型别,共35个不同的ST型,其中10个ST型含有2 ~ 4个不同的分离株,ST型别中最常见ST5309。对淋球菌菌株系统进化树分析,淋球菌流行株可分为两群,第1群84株中MIC ≥ 16 mg/L的菌株39株占46.4%,第2群12株中只有1株MIC值为16 mg/L,差异有统计学意义（χ2 = 6.27,P = 0.012）。 结论 淋球菌对环丙沙星的高水平耐药主要与parC基因87位点突变相关。NG-MAST分型与环丙沙星耐药程度高低可能存在相关性。     

淋球菌rpsE基因突变与大观霉素耐药性的研究

目的 探讨淋球菌rpsE基因突变与淋球菌大观霉素耐药的相关性。 方法 对临床分离的4株大观霉素耐药的淋球菌株（MIC128 μg/ml、256 μg/ml）的rpsE基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,通过DNA转化技术将含有突变基因的细菌基因组DNA转化入敏感的淋球菌株,检测转化成功的淋球菌的MIC并进行PCR扩增测序,分析发现的突变位点与淋球菌大观霉素耐药的相关性。 结果 4株大观霉素耐药的菌株均发现rpsE基因A70C（Thr24Pro）突变,而16S rRNA大观霉素耐药决定区（SRDR）未发现任何突变;大观霉素敏感菌株的16S rRNA和rpsE基因均未发现突变。转化后获得的大观霉素耐药淋球菌中亦发现了同样的rpsE基因突变。 结论 rpsE基因单点突变与淋球菌对大观霉素耐药相关。     

尿液标本淋球菌多抗原序列分型研究

【摘要】 目的 探讨江苏常州、扬州,广西梧州、贺州,海南三亚、琼海,广东江门、茂名淋球菌多抗原序列分型（NG-MAST）的型别分布。方法 88份淋球菌核酸检测阳性的男性性病门诊就诊者（MSP）的尿液标本,用Qiagen试剂盒提取DNA,并进行2次PCR扩增porB、tbpB基因片段,扩增成功的标本测序后登陆NG-MAST网站进行序列比对,获取菌株基因型别信息。 结果　对88份阳性标本提取DNA进行单次PCR,扩增porB、tbpB基因的效率分别为13.6%和14.8%,共有12份标本比对成功,得到菌株基因型别,分型效率为13.6%（12/88）;进行2次PCR扩增后,porB、tbpB基因的PCR扩增效率分别为71.6%和72.7%,分别增长了58.0%和57.9%,共有62份标本比对成功得到菌株基因型别,分型效率为70.5%（62/88）,分型效率提高了56.9%。62份标本共分出45个基因型,其中40个型为已知型别,5个为新型别。所有型别中,ST1866型丰度最高,有6份标本为此型别,ST1972、ST3356各有4份标本,都集中于江苏项目点。ST532有3份,集中于广东项目点。ST2221有2份,集中于广西项目点,其余各基因型均只有1份标本,散在分布于各省。5个新型别为：porB基因型为892、tbpB基因型98%相似于46型的标本,且丰度较高,仅发现于江苏项目点;porB基因型为903、tbpB基因型99%相似于958型;porB基因型为130、tbpB基因型96% 相似于504型;porB基因型为2790、tbpB基因型99%相似于32型;porB基因型为1053、tbpB基因型99%相似于856型。结论　尿液标本可以用于NG-MAST分型研究,2次PCR扩增可以提高尿液标本的分型效率,不同地区淋球菌NG-MAST型别表现为多样性。 【关键词】 奈瑟球菌,淋病; 基因型; 淋球菌多抗原序列分型     

淋球菌耐药性的研究进展

淋球菌对常用抗生素有不同的耐药率及耐药机制。对青霉素耐药的主要机制是产生 β-内酰胺酶 ;对四环素耐药的主要机制是细胞膜对药物的通透性降低 ;对大环内酯类、大观霉素耐药的主要机制是作用靶位的改变 ;对氟喹诺酮类耐药的主要机制是 gyrA及parC基因的突变 ;对第三代头孢菌素类敏感性降低或耐药的机制尚未明确 ,但与penB、penA等基因密切相关。     

南京地区1999-2004年四环素高度耐药淋球菌tetM基因分型及流行研究

目的 了解南京地区四环素高度耐药淋球菌(TRNG)tetM基因的分子流行病学情况.方法 采用琼脂稀释法检测菌株是否为TRNG,采用纸片酸度定量法测定菌株是否产β-内酰胺酶.采用单管PCR方法对TRNG阳性菌株作tetM基因分型.结果 1999-2004年间南京地区804株淋球菌中共检出136株(16.92%)TRNG,β-内酰胺酶阳性的淋球菌(PPNG)为290株,所有TRNG中69.85%(95/136)为PPNG/TRNG,TRNG的阳性率逐年增高.tetM基因分型结果显示,荷兰变型为135株,美国变型仅1株.结论 南京地区流行的TRNG以荷兰型tetM基因为主(99.26%),美国型仅为偶发.     

淋球菌对抗生素耐药性研究

目的:研究广州地区2001年度分离的淋球菌对青霉素、四环素、壮观霉素、头孢曲松和环丙沙星的耐药性。分析耐药菌株的流行特点。方法:采用琼脂稀释法测定菌株对5种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),判断敏感性按WHO西太区淋球菌耐药性监测统一标准。用纸片酸度法检测产青霉素酶淋球菌(PPNG)菌株。结果:153株淋球菌中检出127株对青霉素耐药(83.0％),产青霉素酶淋球菌(PPNG)占17.0％(26/153);四环素耐药129株(84.3％);其中质粒介导高度耐四环素淋球菌菌株(TRNG)占总数的24.1％(37/153);环丙沙星耐药117株(76.5％),其中92株同时对青霉素和四环素有耐药性,三重耐药占60.1％;壮观霉素和头孢曲松敏感性最高,分别为100.0％和81.0％。结论:淋球菌对青霉素、四环素和环丙沙星耐药率较高;壮观霉素和头孢曲松敏感,应作为临床的首选药物。     

广州地区淋球菌血清学和营养分型研究

目的 确定广州地区淋球菌血清型和营养型流行特点。方法 采用乳胶凝集法对１３１株淋球菌进行血清学分型和Ｌａ Ｓｃｏｌｅａ法分析１０８株淋球菌培养型。结果 血清学分型以ＷⅡ／ＷⅢ为主，占８７．８％（１１５／１３１），ＷＩ型仅为９．９％（１３／１３）；营养型则以Ｐｒｏｔｏ、Ｐｒｏ＾－和ＩＬｅ＾－３种营养型为主，分别占４２．６％、２１．３％和１２．０％；另外ＷＩ仅见于Ｐｒｏｔｏ和Ｐｒｏ＾－营养型，ＷⅡ／Ｗ