羧胺三唑乳清酸盐抑制小鼠胶质瘤细胞系GL261增殖及线粒体能量代谢

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对小鼠胶质瘤细胞系GL261增殖和凋亡的影响.方法 体外培养小鼠胶质瘤细胞系GL261,实验分为对照组和不同浓度CTO组,采用活细胞计数检测细胞增殖;采用碘化丙啶(PI)染色及流式细胞测量术检测各组GL261的细胞周期;采用annexinⅤ/PI双染色及流式细胞测量术检测各组GL26...     

羧胺三唑乳清酸盐抑制人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株增殖及线粒体能量代谢

目的 研究羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对人胰腺癌耐吉西他滨细胞株(AG细胞)增殖、代谢和凋亡的影响.方法 体外培养AG细胞.将细胞分为对照组和不同浓度CTO组;用磺酰罗丹明B(SRB)检测细胞活力;用annexin V/PI双染色及流式细胞测量术检测细胞凋亡;用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色及流式细胞测量...     

羧胺三唑乳清酸盐对小鼠胶质瘤相关巨噬细胞系促癌表型的影响

目的 初步探索羧胺三唑乳清酸盐(CTO)对小鼠胶质瘤细胞系GL261和肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)系促癌表型的调控作用及其机制.方法 以GL261细胞培养上清诱导骨髓来源巨噬细胞(BMDM)或巨噬细胞系RAW264.7作为研究对象,用qPCR检测TAMs促癌介质mRNA水平;通过Seahorse细胞能量测定方法检测TA...     

羧胺三唑增强小鼠脾脏淋巴细胞促进结肠癌细胞系MC38和C26凋亡

目的 探讨羧胺三唑(CAI)直接或通过小鼠脾脏淋巴细胞间接对小鼠结肠癌细胞系(MC38和C26)存活和凋亡的影响.方法 体外培养结肠癌细胞系MC38和C26细胞,分离小鼠脾脏淋巴细胞,MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养,不同浓度CAI处理细胞.CCK-8法检测细胞存活,流式细胞测量术检测细胞凋亡以及小鼠脾...     

羧胺三唑对RBL-2H3细胞活化脱颗粒的影响

目的研究羧胺三唑(CAI)对RBL-2H3肥大细胞增殖、凋亡及活化脱颗粒的影响,探索CAI的抗感染作用机制。方法以C48/80诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒模型,中性红染色法观察细胞脱颗粒的形态学,分别用ELISA法和底物显色法检测细胞培养上清中组胺和β-氨基己糖苷酶的释放水平,CCK-8法测定细胞活力,Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,10、20和40μmol/L CAI能够不同程度抑制C48/80诱导的RBL-2H3细胞脱颗粒反应,20和40μmol/L CAI能够降低C48/80诱导的组胺释放(P0.01),40μmol/L CAI能够降低β-氨基己糖苷酶的释放(P0.01)。另外,所用各浓度的CAI对细胞增殖和凋亡均无明显影响。结论 CAI能有效抑制RBL-2H3肥大细胞的活化脱颗粒,此作用并不是通过细胞毒发挥作用的。CAI可能部分通过下调肥大细胞的功能活化,发挥其抗感染作用。     

羧胺三唑在BV2细胞模型中的抗炎作用

目的 探讨羧胺三唑(CAI)对BV2细胞模型中多种炎性细胞因子的调节作用.方法 将不同浓度的CAI加入BV2细胞中培养18 h后,用CCK-8法测定其细胞数.分别用ELISA试剂盒和硝酸盐还原法测定细胞培养基上清中的TNF-a、IL-IB、IL-6、NO的含量,用荧光定量PCR法测定BV2细胞中TNF-α、IL-1β、...     

羧胺三唑抑制肿瘤细胞诱导的巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α的释放

目的观察体外培养的肿瘤细胞对巨噬细胞炎症因子——肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的诱导作用;初步探索羧胺三唑(CAI)对肿瘤诱导的巨噬细胞中TNF-α释放的影响。方法利用transwell装置,建立Lewis肺癌细胞(LLC)与RAW264.7巨噬细胞共培养体系,采用荧光定量PCR方法和ELISA方法分别分析RAW264.7中TNF-α的表达和释放;用LLC条件培养基(LCM)诱导RAW264.7,同时给予CAI处理,采用CCK-8方法分析LCM和CAI对RAW264.7活力的影响,采用ELISA方法分析CAI对诱导后的RAW264.7中TNF-α释放的影响。结果与LLC共培养24 h可显著增加RAW264.7中TNF-α相对表达量[单独培养vs共培养,(1.00±0.12)vs(2.23±0.17),P<0.01]和释放[单独培养vs共培养,(65.21±12.76)vs(143.92±19.22)pg/ml,P<0.05];LCM和CAI在1 h和4 h对RAW264.7活力没有影响,CAI可以显著抑制LCM对RAW264.7中TNF-α释放的诱导(4 h,P<0.01)。结论 LLC肿瘤微环境可以诱导RAW264.7中TNF-α的表达增加;CAI对这种诱导的抑制使其在肿瘤环境中表现出一定的抗炎作用,可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

羧胺三唑抑制大鼠腹腔巨噬细胞iNOS表达和NF-κB活化

目的探讨羧胺三唑(CAI)对多种炎性相关因子的体外调节作用及机制。方法利用MTT法观察5~40μmol/L的CAI对细胞活力的影响。将上述浓度的CAI加入巨噬细胞中共同培养18 h,同时加入脂多糖(LPS)诱导上述细胞活化。分别用硝酸还原法和TNF-αELISA检测试剂盒测定培养基上清中NO的含量和TNF-α的水平,用Western blot法测定iNOS蛋白的表达和NF-κB活化。结果浓度在5~40μmol/L范围内的CAI对正常大鼠腹腔巨噬细胞的细胞活力没有影响,但20和40μmol/L的CAI能够剂量依赖性地降低LPS诱导的NO释放(P<0.01和P<0.001)以及TNF-α分泌(P<0.05和P<0.01),且明显抑制LPS引起的iNOS蛋白表达和NF-κB活化。结论CAI对与炎性反应相关的调控因子iNOS蛋白表达和NF-κB活化具有抑制作用,该机制与抑制IκBα磷酸化和降解相关。     

双氢青蒿素对人胰腺癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖活性及凋亡的影响,及其作用机制。方法30、60、120、240和480μmol/L双氢青蒿素作用PANC-1 48 h后,采用MTT法检测双氢青蒿素对PANC-1增殖活性的影响,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡的变化,Western blotting检测细胞内周期相关蛋白cyclin B1、Cdk1、p21及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9和细胞色素C(Cyto C)蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,30~480μmol/L双氢青蒿素对PANC-1增殖活性具有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素可以使PANC-1细胞周期阻滞于G2/M期,并诱发PANC-1细胞发生凋亡,且随药物浓度呈现升高趋势(P<0.05)。Western blotting结果显示,双氢青蒿素作用后周期相关蛋白Cdk1和Cyclin B1蛋白表达降低,而P21蛋白表达升高。凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能抑制PANC-1增殖并诱发细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。     

羧胺三唑通过抑制NFAT2核转运降低小鼠CD8^+T细胞中程序性死亡受体1的表达

目的研究羧胺三唑(CAI)对CD8+T细胞的作用,并探索其增强活化的T细胞杀伤作用的关键机制。方法用免疫磁珠分选出小鼠CD8+T细胞,分为对照组、CAI组、ZK756326(Ca2+激活剂)组以及CAI+ZK756326组。流式细胞计量术检测细胞内游离钙离子水平;酶联免疫吸附法检测细胞内钙调磷酸酶(CaN)的表达;免疫荧光染色检测细胞活化T细胞核因子2(NFAT2)核转运;染色质免疫共沉淀-qPCR检测细胞中NFAT2调控程序性死亡受体1(PD-1)表达。分离小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTLs),流式细胞计量术检测其中CD8+T细胞PD-1的表达。结果CAI组显著降低CD8+T细胞内Ca2+浓度(P<0.001),CAI+ZK756326组胞内Ca2+浓度有所升高(P<0.01);CAI显著降低CD8+T细胞中钙调磷酸酶的含量(P<0.001);CAI可显著抑制NFAT2核转运(P<0.001),并使NFAT2依赖的PD-1转录进程显著降低(P<0.001);CAI使小鼠脾脏CTLs细胞中PD-1+CD8+T细胞比例显著减少(P<0.001)。结论CAI通过抑制CD8+T细胞内钙离子水平以及钙调磷酸酶的表达抑制NFAT2核转运,从而降低CD8+T细胞PD-1的表达,进一步产生免疫治疗干预作用。     

TPX2的表达对胰腺癌预后的影响

目的 研究Xklp2靶蛋白(TPX2)在胰腺癌中的表达情况及其预测预后的潜在价值。方法 基于200个糖酵解代谢相关基因,从TCGA和GEO数据库获取胰腺患者的信息,对后者的糖酵解代谢特征进行评价,同时综合患者代谢特征及差异基因,采用Cox回归和Lasso回归分析建立风险模型,获得关键糖酵解相关基因TPX2,并用GEO数据库验证该模型的预后有效性。基于预后基因的表达分析胰腺癌患者的生存期,并分析正常胰腺组织和胰腺癌中预后基因的表达差异,最后在细胞水平验证预后基因的功能。结果 病例队列被分为高、中、低3个糖酵解代谢特征组,低速率糖酵解代谢患者存在一定生存优势,TPX2是该模型的关键基因,胰腺癌患者显示高表达TPX2,具有较差的预后。细胞水平上敲降TPX2可抑制胰腺癌细胞增殖和集落形成。结论 本研究基于糖酵解代谢模型有效地预测了胰腺癌患者的预后,TPX2有望成为胰腺癌预后预测的潜在标志性基因。     

CYB5A对胰腺癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的探究细胞色素b5(CYB5A)对胰腺癌细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞株AsPC-1,分别转染SiRNA和质粒对CYB5A进行抑制和过表达,CCK8法检测AsPC-1细胞增殖活性,Western blot与荧光定量PCR(RT-PCR)分析半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)、增殖细胞核抗原(PCNA)与B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)等增殖相关蛋白的表达情况,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果抑制CYB5A表达可导致AsPC-1细胞caspase-3的mRNA水平及蛋白水平增高(P0.05),PCNA及Bcl-2的mRNA水平及蛋白水平降低(P0.05),并可进一步降低细胞增殖率(P0.05),阻滞AsPC-1细胞于G2/M期(P0.05);诱导CYB5A则可使AsPC-1细胞高表达PCNA与Bcl-2的mRNA水平及蛋白水平(P0.05),而低表达caspase-3的mRNA水平及蛋白水平(P0.05),并进一步促进AsPC-1细胞增殖(P0.05),降低G2/M期细胞比例(P0.05)。结论 CYB5A可通过调控胰腺癌细胞AsPC-1增殖相关蛋白的表达,降低G2/M期细胞比例,进而促进胰腺癌细胞的增殖。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

Ad-siRNA-FoxO1腺病毒载体的构建及对人肝癌细胞系增殖的影响

目的 利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌细胞系中FoxO1基因的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响.方法 设计针对FoxO1基因的siRNA,构建于腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染包装细胞293细胞,获得含Ad-siRNA-FoxO1的重组腺病毒.体外感染人肝癌细胞系HepG2,Western印迹检测Ad-siRNA-FoxO1对FoxO1蛋白的抑制效率.与PEPCK.luc共转染HepG2细胞,检测FoxO1表达水平对PEPCK启动子活性的影响,并观察FoxO1表达水平的改变对肝癌细胞系增殖的影响.结果 成功构建3个针对FoxO1的siR-NA重组腺病毒载体,重组腺病毒均能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达,并抑制PEPCK启动子的活性和显著促进细胞增殖.结论 肝癌细胞系中FoxO1参与了细胞增殖的调节.     

蝙蝠葛碱抑制人胰腺癌SW1900细胞系增殖及诱导其凋亡

目的 探讨蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法 用不同浓度蝙蝠葛碱处理细胞系SW1900,采用MTT法检测细胞增殖,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率。Real-time PCR和免疫印迹法分析蝙蝠葛碱处理SW1900细胞中凋亡蛋白及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）的表达水平。结果 MTT实验显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地抑制SW1900细胞活力,F=783.7,P<0.001。流式细胞术结果显示,经0、6、12 mg/L蝙蝠葛碱处理的各组细胞凋亡率分别为（4.34±1.30）%、（14.94±1.94）%和（22.68±3.61）%,3组间均值差异有统计学意义,F=58.52,P<0.001,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性促进细胞凋亡。Real-time PCR实验结果显示,蝙蝠葛碱可剂量依赖性下调PI3K、Akt、Bcl-2的基因表达（PI3K mRNA,F=101,P=0.01;Akt mRNA,F=1666,P<0.01;Bcl-2 mRNA,F=753,P<0.001）。免疫印迹法结果显示,蝙蝠葛碱呈剂量依赖性地下调PI3K、Akt和Bcl-2的蛋白表达。结论 蝙蝠葛碱对人胰腺癌SW1900细胞具有抑制其增殖和诱导其凋亡等作用,可能通过PI3K/Akt通路下调Bcl-2的表达诱导SW1900细胞凋亡。     

淫羊藿苷对胰腺癌细胞BxPC-3增殖和凋亡的影响与miR-9上调有关

目的:探讨淫羊藿苷对胰腺癌细胞增殖和凋亡的作用及机制.方法:MTT法检测细胞活性确定给药浓度.对照组、淫羊藿苷12.5、25、50μmol/L组BxPC-3细胞用终浓度含有Icariin 0、12.5、25、50μmol/L培养基培养;顺铂10μmol/L组BxPC-3细胞用终浓度含有顺铂10μmol/L培养基培养;m...     

硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响

目的:探讨硫酸肝素对人肝癌HepG2细胞系增殖和凋亡的影响。方法:体外观察硫酸肝素作用于人肝癌细胞系(HepG2)的细胞增殖、凋亡效应和细胞ras基因表达的变化关系。结果:硫酸肝素能下调细胞HepG2的增殖能力及其细胞ras基因蛋白的表达并上调其细胞的凋亡率。结论:硫酸肝素对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响与ras基因蛋白介导的信号转导有关。     

miR-26a对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖和迁移的影响

目的观察miR-26a在人肝癌细胞中的表达情况及高表达的miR-26a对SMMC-7721细胞增殖和迁移的影响。方法生物信息学分析miR-26a在肝癌及正常肝组织中表达水平分布;化学合成miR-26a寡聚核苷酸,并行测序确认;利用pc DNA6.2-GW/Em-GFP-miR质粒构建miR-26a真核表达载体;pc DNA6.2-GW/Em-GFP-miR-26a质粒载体瞬时转染SMMC-7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR-26a的mRNA表达水平;高表达miR-26a后,CCK8法和划痕实验分别检测SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的变化。结果 miR-26a在肝癌组织中表达水平显著低于正常组织(P0.001);设计的miR-26a序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100%;pc DNA6.2-GW/Em-GFPmiR-26a质粒瞬转后人肝癌SMMC-7721细胞miR-26a的表达量与对照组相比显著增加(P0.05);miR-26a过表达SMMC-7721细胞的增殖能力与对照组相比均显著下降(P0.05);miR-26a过表达组细胞迁移速度低于对照组。结论 miR-26a在肝癌组织中低表达,而上调的miR-26a可抑制人肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移能力。     

COX-2抑制剂对胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖及凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶抑制剂Celebrex（西乐葆）对胰腺癌CFPAC-1细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用CCK-8比色法观察不同浓度、不同时间点的Celebrex对CFPAC-1细胞增殖的影响：流式细胞术检测不同浓度Celebrex作用下CFPAC-1细胞凋亡和细胞膜P-gP表达的变化。结果8、16、32、64p,mol／L的Celebrex作用于CFPAC-1细胞后，可明显抑制胰腺癌细胞株CFPAC-1的增殖，并呈时间和剂量依赖性，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；同时细胞凋亡率显著上升，而细胞膜MDRl（P-gp）表达阳性率显著降低（P〈0．05），上述作用均成剂量依赖性。结论Celebrex降低胰腺癌细胞株CFPAC-1细胞膜表面P-gP的表达，从而诱导细胞凋亡，这可能是其抑制胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖的作用机制之一。     

TWEAK反义寡核苷酸对人结肠癌细胞系SW480增殖及侵袭能力的影响

目的观察肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人结肠癌细胞系SW480增殖及侵袭能力的影响。方法合成TWEAK反义寡核苷酸(ASODN)、错义寡核苷酸(SCODN)后转染人结肠癌细胞系SW480,将细胞分为空白对照组、脂质体(LF)对照组、ASODN组、SCODN组;采用MTT法检测肿瘤细胞增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞周期分布,ELISA法检测细胞培养液上清中可溶性TWEAK及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的表达,Western blotting法、免疫荧光细胞化学法(IF)检测细胞中的TWEAK及Fn14蛋白的表达,运用Transwell侵袭实验观测结肠癌细胞侵袭能力的变化。结果空白对照组、LF对照组、SCODN组之间结肠癌细胞的增殖情况无明显差异(P0.05),与对照组相比ASODN组肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P0.05),且呈剂量-时间依赖关系;转染TWEAK ASODN后,G2+M期细胞比例明显高于对照组(P0.05),TWEAK及其受体Fn14在结肠癌细胞培养液及细胞内的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);转染TWEAK ASODN后肿瘤细胞侵袭抑制率为31.39%,明显高于对照组(P0.05);TWEAK及其受体Fn14在结肠癌细胞培养液及细胞内的表达均密切相关(P0.05)。结论 TWEAK ASODN可能通过抑制TWEAK与其受体Fn14结合干扰肿瘤的发生发展,抑制TWEAK表达能抑制人结肠癌细胞系SW480的增殖与侵袭。