ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS-ODN）对人牙乳头细胞（HDPC）增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响并分析可能的作用机制。方法采用细胞培养、基因转染、四唑盐（MTr）比色法、酶动力学法和流式细胞术（FCM）检测ADAM28反义核酸转染HDPC后对细胞生物学特性的影响。结果ADAM28 AS-ODN组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶（ALP）分泌活性显著降低,凋亡细胞百分比明显上升。结论ADAM28反义核酸可显著抑制HDPC的增殖和ALP的活性,显著诱导HDPC的凋亡并影响细胞周期的变化。     

ADAM28反义核酸对人牙周膜干细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙周膜干细胞(HPDISC)增殖、分化、凋亡特性的影响和可能的作用机制.方法:体外分离培养、鉴定HPDISC,将设计合成的ADAM28反义核酸和正义对照(S-ODN)分别转染HPDLSC,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28反义核酸对HPDLSC生物学特性的影响.采用SPSS13.0软件包中的SNK检验进行统计学分析.结果:ADAM28 AS-ODN组HPDLSC的增殖活性、增殖指数显著低于S-ODN组和未转染组,碱性磷酸酶(ALP)分泌水平及凋亡细胞百分比明显上升,差异显著(P<0.01).结论:ADAM28 AS-ODN可显著抑制HPDLSC的增殖并影响细胞周期的变化,促进ALP的分泌活性,显著诱导HPDLSC的凋亡.     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞生物学特性的影响

目的：研究ADAM28反义核酸（As—ODN）对人牙囊细胞（HDFC）增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、四唑盐（MTT）比色法、酶动力学方法和流式细胞术（FCM）检测ADAM28反义核酸转染HDFC后对细胞生物学特性的影响。结果：ADAM28AS—ODN组HDFC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶（ALP）分泌活性显著降低，凋亡细胞百分比明显上升。结论：ADAM28反义核酸可显著抑制HDFC的增殖和ALP的活性，显著诱导HDFC的凋亡并影响细胞周期的变化。     

ADAM28反义核酸对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的：探讨金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS-ODN）对人牙髓干细胞（HDPSCs）增殖、分化、凋亡特性的影响并分析可能的作用机制。方法：体外分离培养、鉴定HDPSCs,将FITC荧光标记的ADAM28反义核酸（AS-ODN）和正义对照（S-ODN）分别转染HDPSCs,用半定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法（Westernblot）检测ADAM28AS-ODN转染48h后的封闭效率,应用四唑盐（MTT）比色法、酶动力学法和流式细胞术（FCM）分别检测实验各组HDPSCs的增殖活性、碱性磷酸酶（AKP）的分泌活性以及细胞周期分布和凋亡百分比。采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析。结果：AS-ODN转染组ADAM28mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P〈0.05）,细胞增殖活性、增殖指数明显降低（P〈0.05）,碱性磷酸酶（AKP）分泌水平和细胞凋亡率显著增高（P〈0.05）。结论：ADAM28AS-ODN可显著抑制HDPSCs的增殖并影响细胞周期的变化,促进AKP的分泌活性并诱导HDPSCs的凋亡。     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶的影响

目的:研究ADAM28反义核酸(AS-ODN)对人牙囊细胞(HDFCs)增殖和碱性磷酸酶(AKPase)活性的影响。方法:采用细胞培养、基因转染、四唑盐(MTT)比色法和酶动力学方法,检测ADAM28反义核酸对牙囊细胞增殖、分化和影响碱性磷酸酶活性的可能机制。实验数据采用单因素方差分析的q检验(SNK)进行统计学分析。结果:ADAM28反义核酸成功转染人牙囊细胞,MTT和AKPase活性检测显示:ADAM28AS-ODN组细胞增殖和AKPase活性均显著低于S-ODN组和空白对照组,其中MTT检测的组间P值分别为0.0002、0.0001,P均<0.01;AKPase检测的组间P值分别为0.0007、0.0003,P均<0.01,即ADAM28反义核酸可显著抑制HDFCs的增殖和AKPase的活性。结论:ADAM28可能通过参与Notch信号途径来促进牙囊细胞的增殖和分化。     

金属蛋白酶解离素28对人牙乳头细胞生物学特性的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙乳头细胞(HDPC)增殖、分化、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:应用细胞培养、基因转染、MTT、流式细胞术(FCM)和酶动力学等方法,探讨ADAM28基因对HDPC生物学特性的影响,采用SPSS12.0软件包中的SNK检验进行统计学分析.结果:成功转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPC的增殖活性、增殖指数、碱性磷酸酶(ALP)分泌活性显著高于空载体组、未转染组,而凋亡细胞百分比显著低于两对照组,P<0.01.结论:ADAM28可显著促进HDPC的增殖和ALP的分泌,显著抑制HDPC的凋亡.     

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞内ADAM28表达的影响

目的：探讨金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸对人牙乳头细胞（HDPC）内ADAM28蛋白表达的影响。方法：应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDPC后,通过免疫细胞化学、PCR和Westernblot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果：ADAM28AS-ODN转RT-染HDPC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异（P〈0.01）。结论：应用ADAM28AS-ODN可有效封闭HDPC内ADAM28的表达,为进一步研究反义核酸在牙胚组织和细胞中的功能提供实验和理论依据。     

金属蛋白酶解离素28对人牙髓干细胞生物学功能的影响

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)基因对人牙髓干细胞(HDPSCs)增殖、分化、凋亡特性的影响和可能的作用机制.方法:体外分离培养、鉴定人牙髓干细胞(HDPSCs),应用基因重组构建ADAM28真核表达质粒并转染HDPSCs,应用四唑盐(MTT)比色法、酶动力学法和流式细胞术(FCM)检测ADAM28对HDPSCs生物学特性的影响.应用免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28对HDPSCs表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)的影响.采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析.结果:成功构建并转染ADAM28真核质粒,真核质粒转染组HDPSCs的增殖活性、增殖指数显著低于空载体组和未转染组,碱性磷酸酶(ALP)分泌水平及凋亡细胞百分比明显上升,差异显著(P＜0.05);HDPSCs内DSPP的表达水平显著提高(P＜0.05).结论:ADAM28可显著抑制HDPSCs增殖,促进ALP的分泌活性和HDPSCs内DSPP的表达,显著诱导HDPSCs的凋亡.     

ADAM28反义核酸对人牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响

目的：研究金属蛋白酶解离素28（ADAM28）反义核酸（AS—ODN）转染人牙乳头细胞（HDPC）后，对其表达多种细胞外基质蛋白（BSP、OPN、DSPP、CollagenⅠ／Ⅲ）的影响。方法：采用细胞培养、基因转染、免疫细胞化学和图像分析技术检测ADAM28反义核酸对HDPC表达上述基质蛋白的影响。结果：ADAM28反义核酸转染HDPC后BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达明显减弱（P〈0．01），OPN、Collagen Ⅲ的表达无明显变化（P〉0．05）。结论：ADAM28反义核酸可有效封闭人牙乳头细胞内BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达，ADAM28基因对BSP、DSPP、CollagenⅠ的表达起显著的正向调节作用。     

ADAM28反义核酸对人牙囊细胞内ADAM28表达的影响

目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸对人牙囊细胞(HDFC)内ADAM28蛋白表达的影响。方法应用反义核酸技术,设计并合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HDFC后,通过免疫细胞化学、RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果ADAM28 AS-ODN转染HDFC后,在转录、翻译和蛋白水平细胞内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显著性差异(P<0.01)。结论ADAM28 AS-ODN可有效封闭HDFC内ADAM28的表达。     

Influence of ADAM28 on biological characteristics of human dental follicle cells

Objectives

The aim of this study was to investigate the effects of a disintegrin and metalloproteinase 28 (ADAM28) on the biological characteristics of human dental follicle cells (HDFCs) and possible action mechanism.

Methods

Eukaryotic expression plasmid containing ADAM28 coding region and ADAM28 antisense oligodeoxynucleotides (AS-ODN) with FITC labelling were constructed and synthesised by gene clone and recombination. Then we respectively transfected them into HDFCs by Lipofectamine 2000 system and detected their effects on proliferation, differentiation and apoptosis of HDFCs by MTT assay, cell cycle detection, ALP activity and Annexin V-FITC/PI analysis. Finally we observed the effects of ADAM28 AS-ODN on HDFCs expressing extracellular matrix (ECM) proteins by immunocytochemical staining.

Results

ADAM28 eukaryotic plasmid was constructed and identified successfully, and could be correctly translated and expressed in HDFCs, furthermore overexpression of ADAM28 promoted the HDFCs proliferation and inhibited specific differentiation of HDFCs, while inhibition of ADAM28 exerted the opposite effects and induced apoptosis. Moreover ADAM28 could significantly inhibit the secretion of OPN and type III collagen of HDFCs.

Conclusions

ADAM28 might actively participate in the network regulation which associates HDFCs proliferation, differentiation, apoptosis with matrix mineralisation during tooth development by interacting with multiple signal molecules.     

ADAM28 dramatically regulates the biological features of human gingival fibroblasts

Odontology - This study was to explore the effects of a disintegrin and metalloproteinase 28 (ADAM28) on the proliferation, differentiation, and apoptosis of human gingival fibroblasts (HGFs) and...     

ADAM28反义核酸治疗牙根发育不良疾病的实验研究

目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)治疗牙根发育不良疾病(CHTR)的可行性和效果。方法:应用反义核酸技术、基因重组、动物实验和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测ADAM28 AS-ODN、S-ODN和真核质粒对CHTR的不同效应。结果:用药后AS-ODN组患牙松动度明显减轻,牙周袋深度显著变浅,COL-Ⅱ、IL-1β、PGE2水平均显著下降,呈现炎症愈合趋势;S-ODN组和真核质粒组各项检测结果正相反,炎症呈显著上升趋势。结论:应用ADAM28 AS-ODN(200μmol/L)可有效治疗牙根发育不良疾病,但最佳药物浓度和用药时间还需进一步探讨。