DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。     

CLCA1在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨CLCA1在结肠癌组织中的表达水平及其与肿瘤进展和预后的关系。方法:随机选取西安交通大学第一附属医院及第四军医大学西京医院行手术切除的临床结肠癌病例239例,应用免疫组织化学方法检测结肠癌组织及癌旁组织中CLCA1的表达情况,使用统计学方法分析CLCA1在结肠癌中的表达与肿瘤临床病理特征及预后的相关性。结果:CLCA1 在肿瘤中的表达较癌旁组织显著降低（P＜0.05）,CLCA1在结肠癌中表达与原发肿瘤浸润深度、淋巴转移和肿瘤TNM分期显著相关（P＜0.05）,而且CLCA1低表达组患者总体生存期较高表达组显著缩短（P＜0.001）,多因素分析显示CLCA1的表达可作为结肠癌的独立预后因素。结论:CLCA1在结肠癌中表达下调,CLCA1的低表达与肿瘤的侵袭转移和临床预后密切相关,有望作为结肠癌个体化治疗靶点。     

膜联蛋白A2对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响

目的:研究膜联蛋白A2(ANXA2)对人结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响.方法:采用siRNA技术沉默ANXA2在SW620细胞中的表达,实验分为干扰组、对照组和野生组,RT-PCR法检测各组ANXA2mRNA水平,Westem blot法检测各组ANXA2、纤维蛋白溶酶(PL)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达,Transwell侵袭实验检测各组SW620细胞穿膜能力.结果:干扰组与对照组、野生组相比,ANXA2 mR-NA水平、ANXA2、PL、MMP-1、VEGF蛋白表达及SW620穿膜细胞数差异均有统计学意义(P＜0.05),而对照组和野生组相比上述各指标均无统计学差异.ANXA2蛋白和PL、MMP-1、VEGF蛋白水平、穿膜细胞数呈正相关(P＜0.05).结论:沉默ANXA2基因后可能通过下调PL、MMP-1及VEGF蛋白的表达,抑制SW620细胞侵袭迁移能力起到抗肿瘤作用.     

肝细胞生长因子对结肠癌细胞SW620增殖、侵袭的影响

摘要：目的探讨肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）对人结肠癌细胞株SW620的增殖和侵袭能力的影响。方法应用MTT法分析HGF对SW620细胞增殖的影响,确定最佳促增殖浓度;应用基底膜重建实验和电镜观察HGF对细胞侵袭能力的影响;应用PCR技术检测HGF对MMP-2 mRNA表达的影响。结果当HGF浓度≥10ng/ml时促进SW620增殖且呈质量浓度依赖性; HGF明显促进SW620 移行且呈质量浓度依赖关系;加入 HGF 后,SW620细胞内的微丝明显增多,MMP-2表达水平升高。结论HGF可以在体外促进人结肠癌细胞SW620的增殖和移行。     

XIAP siRNA对TRAIL诱导结肠癌细胞SW620凋亡能力的影响

 目的
研究XIAP siRNA对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-Inducing Ligand,TRAIL)诱导结
肠癌细胞SW620凋亡的影响。方法SW620细胞分为转染XIAP siRNA组、空转染对照组或者siRNA阴性对照组,然后给予TRAIL处理。XIAP
表达水平的变化、细胞增殖抑制、Caspase-3活性分别由Western blot、MTT法和Caspase-3荧光测定来检测。切割PARP的表达水平由
Western blot来测定。结果XIAP siRNA转染以后显著下调XIAP蛋白表达水平。和空转染对照组、siRNA阴性对照组相比,XIAP siRNA
显著增强10、100、1 000 ng/ml等浓度的TRAIL作用以后SW620细胞的增殖抑制、Caspase-3活性和激活PARP。结论 XIAP siRNA能显
著增强TRAIL诱导结肠癌细胞SW620的凋亡。     

TMIGD1在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测TMIGD1在结肠癌及其相应的癌旁正常结肠上皮组织中的表达情况及过表达TMIGD1对结肠癌细胞生物学行为的影响,并探讨潜在分子机制.方法 通过生物信息学数据库和免疫组织化学染色检测TMIGD1在结肠癌与癌旁正常组织中的表达情况,并分析其与不同临床病理因素之间的关系.对结肠癌细胞系SW480通过慢病毒包装系统使...     

BP1基因在结肠癌组织中的表达

目的:检测BP1基因在结肠癌组织中的表达,探讨其与结肠癌临床病理因素的关系。方法:利用免疫组织化学SP法检测68例结肠癌及相应的结肠正常组织中BP1蛋白的表达情况,并分析其与病人年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果:免疫组化SP法检测示:结肠癌组织中BP1基因蛋白的表达水平明显高于结肠正常组织(P＜0.05),BP1的表达与肿瘤的分化程度及TNM分期有关(P＜0.05)。结论:BP1基因在结肠癌组织中的表达显著上调;BP1基因的表达与肿瘤分化程度、TNM分期有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、组织类型无关。     

Lrig1蛋白在人结肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(Lrig1)在人结肠癌组织中的表达情况及临床意义。方法:收集陕西省肿瘤医院2009年1月到2012年12月手术外科常规切除的结肠癌标本64例,正常结肠组织36例。采用免疫组织化学方法检测结肠癌组织和正常结肠组织中Lrig1蛋白的表达情况,并分析其临床意义。结果:Lrig1在结肠癌组织中的阳性表达率及表达强度均低于正常结肠组织(34.38%vs94.44%),差异具有统计学意义(P<0.05)。Lrig1在中、低分化的结肠腺癌组织中的表达显著低于高分化组织中的表达(P<0.05),TMN分期I+II期和III+IV期中,Lrig1表达的阳性率分别为68.18%和16.67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在有、无淋巴结转移的结肠癌组织中,Lrig1表达的阳性率分别为13.04%和46.34%(P<0.05)。Lrig1在肿瘤浸润全层及浆膜层中的表达明显低于浸润黏膜及肌层(P<0.05)。Lrig1的表达与患者年龄、性别及肿瘤大小无关。结论:Lrig1在结肠癌组织中的表达下调,与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及浸润程度相关,可能作为抑癌基因参与结肠癌的发生发展。     

胃癌组织中Notch1、Jagged1、Hes1的表达及临床意义

摘 要：［目的］ 探讨胃癌组织及其相应癌旁组织中Notch1及其配体Jagged1、下游信号Hes1的表达情况,并分析其临床意义。［方法］ 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测胃癌组织及其相应的癌旁组织（距癌组织＞5cm）中Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA的表达,免疫组织化学染色法检测Notch1、Jagged1、Hes1蛋白的表达,并分析三种蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系。［结果］ 免疫组织化学染色、qRT-PCR结果均显示Notch1、Jagged1在癌旁组织中的表达高于胃癌组织（P＜0.05）,Hes1在癌旁组织中的表达低于胃癌组织（P＜0.05）。Notch1、Jagged1、Hes1的表达与肿瘤脉管浸润、分化程度、浸润深度相关（P＜0.05）,而与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移无关（P＞0.05）。胃癌组织中Notch1与Jagged1的表达呈正相关（r=0.032,P＜0.05）,而Jagged1与Hes1的表达呈负相关（r=-0.862,P<0.001）。［结论］ Notch信号通路中Notch1受体及其配体Jagged1在胃癌组织中低表达,Hes1在胃癌组织中高表达,提示Notch1、Jagged1、Hes1的表达有望为胃癌诊断提供理论依据。     

HMGB1在结肠癌中的表达及其对VEGF-C的影响

目的：探讨HMGB1和血管内皮生长因子C（VEGF-C）在人结肠癌组织中的表达及二者之间的关系。方法：应用免疫组织化学染色方法,检测HMGB1和VEGF-C在70例人结肠癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系,两者之间的相关性进行统计学分析;以HMGB1作为干预因素,检测不同剂量HMGB1刺激后,结肠癌细胞HCT116中VEGF-CmRNA表达的变化趋势。结果：HMGB1在结肠癌组织中的阳性表达率为72.9%,其中有淋巴结转移的表达率为83.3%,无淋巴结转移的表达率为57.1%,差异有统计学意义。VEGF-C结肠癌组织中的阳性表达率为60%。而且HMGB1表达与VEGF-C表达呈正相关。结肠癌细胞HCT116中VEGF-CmRNA的表达也与HMGB1的作用剂量成量效关系。结论：HMGB1可通过诱导结肠癌组织中VEGF-C的表达,从而促进结肠癌的淋巴结转移。     

Musashi1在结肠癌中的表达及对细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨Musashi1(Msi1)基因在结肠癌中的表达,分析其对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测Msi1在结肠癌组织及癌旁正常组织中的表达情况。通过慢病毒载体构建稳定低表达Msi1的HCT116细胞株(shMsi1组),同时设置空白对照组和NC组。MTS实验检测增殖,流式细胞术检测凋亡,划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力。Western blotting检测沉默Msi1表达对Wnt和Notch信号通路关键分子的影响。结果结肠癌组织中Msi1表达量为3.36±0.75,明显高于癌旁正常组织的0.69±0.33,差异具有统计学意义(P<0.05)。沉默Msi1表达后,shMsi1组24、48、72 h的细胞增殖率分别为(128.00±3.13)%、(162.70±4.28)%、(191.86±7.72)%,明显低于空白对照组和NC组(P<0.05);shMsi1组48h细胞凋亡率为(8.47±1.04)%,明显高于空白对照组的(4.66±0.75)%和NC组的(4.83±1.07)%,差异具有统计学意义(P<0.05);shMsi1组细胞划痕愈合率为(27.38±9.63)%和侵袭细胞数为51.67±13.50,明显低于空白对照组的(58.12±8.54)%、219.00±24.56和NC组的(60.87±10.08)%、212.33±13.58,差异具有统计学意义(P<0.05)。下调Msi1表达后,shMsi1组Frat1蛋白表达量为0.53±0.10,低于空白对照组的1.00±0.16和NC组的0.94±0.13,而shMsi1组Numb蛋白表达量为1.74±0.09,明显高于空白对照组的1.00±0.17和NC组的0.73±0.09,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Msi1可能通过调控Frat1及Numb表达增强结肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制其凋亡。     

结肠癌转移相关基因1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨结肠癌组织中结肠癌转移相关基因1（MACC-1）的表达与结肠癌临床病理特征的关系。方法 采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法（Western blotting）检测48例结肠癌组织及其相应癌旁组织中MACC-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果 结肠癌组织中MACC-1 mRNA相对表达量为（8.52 ± 2.39）×10^-4,明显高于癌旁组织中的（1.47 ±1.24）×10^-5,差异有统计学意义（P＜0.05）。结肠癌组织中MACC-1蛋白表达的灰度值为7.73±0.03,高于癌旁组织的1.02±0.01（P＜0.05）。结肠癌患者组织中MACC-1 mRNA和蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、TNM分期显著相关（P＜0.05）,而与年龄、性别无关（P＞0.05）。结论 MACC-1表达的检测对结肠癌的诊断具有一定的临床意义,且MACC-1的表达水平与结肠癌的浸润和转移密切相关,可作为判断结肠癌转移的肿瘤标志物之一。     

MMP-9和TIMP-1在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）及组织抑制剂1（TIMP-1）在结肠癌中的表达和临床意义。方法 采用RT-PCR、免疫组化、计算机图象分析方法定量检测200例结肠癌及其对应癌旁组织中MMP-9、TIMP-1 基因和蛋白表达水平,并分析其表达与临床病理特征的关系及两者的相关性。结果 结肠癌组织中MMP-9 mRNA的表达上调者141例（70.5％）,癌旁组织为21例（10.5％）,差异有统计学意义（P=0.001）。MMP-9 mRNA表达与结肠癌Dukes分期、淋巴结转移及分化程度相关。结肠癌及其癌旁组织中TIMP-1 mRNA表达上调者分别为104例（52.0％）和121例（60.5％）,差异无统计学意义（P=0.087）。TIMP-1 mRNA表达与结肠癌临床病理特征均无关。MMP-9蛋白在结肠癌组织中的免疫组织化学染色强度为1.79±0.11,高于癌旁组织的1.22±0.05（P=0.002）,MMP-9蛋白表达水平与结肠癌Dukes分期及淋巴结转移相关。TIMP-1蛋白在结肠癌和癌旁组织中表达均较MMP-9蛋白表达弱,其表达与临床病理特征无关。在结肠癌组织中MMP-9与TIMP-1蛋白表达呈负相关 （r=-0.63,P＜0.01）。 结论 MMP-9表达在结肠癌的进展中具有促进作用,而TIMP-1表达则可能具有拮抗作用。     

结肠癌组织中MTA1的表达水平及定位与患者预后的相关性研究

目的研究结肠癌组织中MTA1的表达水平及在细胞核、细胞质内的定位情况,分析其与结肠癌预后的相关性,并探讨其可能的机制。方法采用免疫组织化学染色方法在结肠癌组织芯片(30例肠癌组织、10例转移组织、8例正常组织)中检测MTA1与Sox2蛋白的表达水平及定位情况,统计分析二者与临床病理资料及预后的相关性;并初步探讨Sox2与MTA1表达的相关性。结果①肠癌组织及转移组织中MTA1细胞质染色强度均显著高于正常组织(P<0.05),而肠癌组织与转移组织间MTA1表达差异不显著(P>0.05);②MTA1在细胞质的表达强度与临床分期呈正相关(P=0.03),生存时间<5年的肠癌患者的肿瘤组织细胞质内MTA1的表达强度显著高于生存时间≥5年的患者组织(P=0.007);③Sox2在肠癌组织细胞核及细胞质内的表达均与MTA1细胞质表达具有显著的相关性(P<0.01)。结论 MTA1细胞质过表达提示结肠癌预后不良,这可能与Sox2的过表达相关。     

Reduction of Calponin h1 expression in human colon cancer blood vessels

Aims

Calponin h1 (CN) is a differentiation marker of smooth muscle cells that has been reported to be down-regulated in the blood vessels of several human tumors. In this study, we examined CN expression in blood vessels in relation to the clinical and pathological features of colon cancer tissue samples.

Methods

Fifty-six patients who had undergone colectomy for colon cancer were examined. To assess patients' disease-free survival, those who had metastasis at the time of surgical operation were excluded. Immunohistochemistry was performed by the indirect immunoperoxidase method, using serial sections made from formalin fixed and paraffin embedded tissue blocks.

Results

We found that the expression of vascular CN in the peripheral region of colon cancer tissues was significantly reduced in association with tumor progression, lymphatic invasion, vascular invasion and recurrence. This reduction of CN indicated not only a decrease of pericytes and/or smooth muscle cells in tumor vessels, but also the immaturity of those cells, since CN down-regulation occurred even in α-smooth muscle actin-positive cells. The down-regulation of CN in vessels in the peripheral region of tumor tissues was inversely associated with the expression of VEGF (vascular endothelial growth factor), seemingly advantageous to angiogenesis.

Conclusion

The down-regulation of CN expression in colon cancer vasculature evaluated by immunohistochemistry may be useful in conjunction with conventional staging procedures to predict more reliable outcome and to select therapeutic treatment.     

Hes1基因诱导小鼠肝原始细胞分化为胆管上皮细胞

背景与目的： 采用体外获得性表达外源发状分裂相关增强子-1(hairy and enhancer of split 1,Hes1)基因的方法,探讨Hes1在肝干细胞分化以及胆管上皮细胞发育中的作用。 材料与方法： 通过PCR方法从小鼠基因组中克隆Hes1基因片段,构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1- Hes1,将2种表达载体分别转染肝原始细胞系(LEPCs) ,应用RT-PCR和Real-time PCR技术检测胆管细胞分子标志物CK19、GGT,胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β,肝细胞分子标志物GS、BGP和肝卵圆细胞的分子标志物Thy-1的表达,并在荧光显微镜下观察EGFP标记的LEPCs细胞系荧光强度的变化。结果：成功构建表达载体pEGFP-C1- Hes1和pcDNA3.1-Hes1。RT-PCR和Real-time PCR检测均表明胆管细胞分子标志CK19、GGT表达量上调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达上调;肝细胞分子标志GS、BGP表达量下调;卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;LEPCs细胞系绿色荧光增强。 结论： 初步证明小鼠肝原始细胞经Hes1的表达诱导后可向胆管上皮细胞方向分化,推测Hes1为胆管上皮细胞分化的转录调控因子。     

结肠癌T-cadherin表达水平分析与5-Aza-CdR对其表达和结肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

背景与目的：结肠癌是临床常见恶性肿瘤,探讨抑癌蛋白T-cadherin在结肠癌中的表达情况及其与患者临床病理学特征的关系,并分析5-Aza-CdR对T-cadherin表达和结肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法：收集福建医科大学附属第二医院2015—2016年40例手术切除的结肠癌组织及癌旁组织新鲜样本,并经过病理学检查验证,分别提取总RNA和总蛋白质。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）分析T-cadherin mRNA的表达,采用蛋白质印迹法（Western blot）分析T-cadherin蛋白水平,并分析T-cadherin的mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。进一步以人结肠癌细胞系HT-29为研究对象,采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理HT-29细胞,分别采用RTFQ-PCR和Western blot分析T-cadherin表达变化,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）分析细胞增殖,采用Transwell实验验证细胞侵袭能力,采用流式细胞术分析细胞凋亡。结果：T-cadherin在结肠癌组织的蛋白水平和mRNA表达均明显低于癌旁组织,其mRNA表达与淋巴结转移（F=5.316,P=0.009 3）和分化程度（F=5.807,P=0.006 4）明显相关,而与其他病理变量（包括性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤浸润深度）无明显相关。药物5-Aza-CdR可以显著上调HT-29细胞中T-cadherin的表达水平,抑制HT-29细胞增殖、侵袭并促进细胞凋亡。结论：T-cadherin表达可能与结肠癌恶性程度密切相关,药物5-Aza-CdR处理可上调结肠癌细胞T-cadherin的表达,并抑制结肠癌细胞的增殖、迁移,促进结肠癌细胞凋亡,提示T-cadherin可能是结肠癌患者使用甲基化抑制剂5-Aza-CdR治疗的靶点。     

Vasohibin-1 suppresses colon cancer

Vasohibin-1 (VASH1) is an endogenous angiogenesis inhibitor. However, the clinical relevance of VASH1 in colon cancer and its regulations on cancer angiogenesis and cancer cell biological characteristics are still unknown. Here we showed that stromal VASH1 levels were negatively correlated with tumor size, advanced clinical stage and distant metastases in colon cancer patients. Overexpression of VASH1 in colon cancer cells induced apoptosis and senescence, inhibiting cancer cell growth and colony formation in vitro and tumor growth in vivo. In addition, knockdown of VASH1 in cancer cells promoted cell growth, adhesion and migration in vitro, and enhanced tumorigenesis and metastasis in vivo.