UVA照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达的影响

目的 探讨皮肤成纤维细胞中组织蛋白酶K(Cathepsin K,CatK)的表达随UVA照射后时间及其剂量的变化.方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验.先以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后24、48、72 h提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA.再以10 J/cm2、20 J/cm2、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,在照射后48 h收集细胞.用RT-PCR和Western印迹法分别检测各组间CatK mRNA、蛋白的表达的差异.结果 10 J/cm2 UVA照射后1、2、3d,照射组CatKmRNA表达分别为0.351±0.038(对照组0.177±0.006)、0.510±0.017(对照组0.176±0.002)、0.313±0.012(对照组0.173±0.002).照射组CatK蛋白灰度值分别为1.76±0.27(对照组0.82±0.45)、2.97±0.36(对照组1.58±0.15)、2.23±0.14(对照组1.29±0.32),照射组CatKmRNA、蛋白表达均较对照组升高(P＜0.05),且以照射后第2天表达最高.10、20、30 J/cm2UVA照射后,48 h皮肤成纤维细胞中CatK mRNA表达分别为对照组的2.34、2.91、3.18倍,CatK蛋白表达分别为对照组的1.77、2.82、3.64倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CatK在UVA照射后皮肤成纤维细胞中的表达升高.     

MAPK信号通路调控长波紫外线诱导的皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K表达

【摘要】 目的 研究MAPK信号通路调控长波紫外线（UVA）诱导皮肤成纤维细胞组织蛋白酶K（CatK）的表达。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞取自儿童包皮。Western印迹检测10 J/cm2 UVA照射前及照射后0.75、1.5、3和6 h皮肤成纤维细胞中磷酸化JNK（p-JNK）、JNK、磷酸化P38（p-P38）、P38蛋白的表达。800 nmol/L SP600125（SP）、10 μmol/L SB203580（SB）分别孵育皮肤成纤维细胞,实验分为无UVA照射的对照组、SP组、SB组及10 J/cm2 UVA照射的对照（UVA）组、UVA-SP组、UVA-SB组。先以Western印迹检测各组UVA照射后1.5 h磷酸化c-Jun（p-c-Jun） 和磷酸化MAPKAPK2（p-MAPKAPK2）表达,再以RT-PCR 和Western印迹检测各组照射后48 h CatK mRNA、蛋白的表达。 结果 皮肤成纤维细胞在UVA照射后0.75、1.5 h,p-JNK表达的灰度值分别为4.77 ± 0.19和4.68 ± 0.09,p-P38分别为2.44 ± 0.13、2.30 ± 0.04,均较照射前（p-JNK为3.2 ± 0.27,p-P38为1.61 ± 0.08）显著升高（均P ＜ 0.05）;而在照射后3、6 h的表达与照射前相比差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。p-c-Jun在UVA-SP组表达（2.55 ± 0.48）、p-MAPKAPK2在UVA-SB组表达（1.16 ± 0.12）均显著低于UVA组（分别为4.85 ± 0.96和2.46 ± 0.09）,均P ＜ 0.05。UVA-SP组、UVA-SB组CatK mRNA、蛋白的表达分别降为UVA组的38.9%、28.7%和55.7%、49.6%（P ＜ 0.05）,UVA-SP组CatK mRNA、蛋白的表达也均显著低于UVA-SB组（P ＜ 0.05）。 结论 JNK和P38信号通路在调控UVA上调的皮肤成纤维细胞CatK表达中起重要作用。     

晚期糖基化终末产物对UVA照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D表达及其活性的影响

目的：研究晚期糖基化终末产物（AGE）对长波紫外线（UVA）照射皮肤成纤维细胞组织蛋白酶D （CatD）表达和活性的影响。方法原代培养来自儿童包皮成纤维细胞。CCK?8法筛选对成纤维细胞无细胞毒性的AGE?牛血清白蛋白（BSA）浓度。分别以50、100、200 mg/L AGE?BSA孵育细胞24 h,以未处理细胞作为对照组,采用RT?PCR、Western印迹及荧光法检测AGE?BSA对细胞CatD表达和活性影响。将部分成纤维细胞分为6组,即对照组（正常皮肤成纤维细胞,不接受任何处理）、AGE?BSA组、BSA组、UVA组、UVA?AGE?BSA组、UVA?BSA组。AGE?BSA组加入最大无细胞毒性浓度AGE?BSA孵育24 h,BSA组加入相同浓度BSA孵育24 h,后3组除分别接受上述处理外再接受10 J/cm2 UVA照射。处理结束后,收集细胞mRNA和蛋白,采用RT?PCR、Western印迹及荧光法检测细胞CatD表达和活性。结果50、100、200 mg/L AGE?BSA对皮肤成纤维细胞增殖活性无显著影响。50 mg/L组、100 mg/L组、200 mg/L组细胞CatD mRNA水平分别为0.267±0.007、0.348±0.007、0.418±0.006,CatD蛋白水平分别为1.403±0.181、2.233±0.090、2.477±0.111,CatD活性分别为1.760±0.080、2.330±0.060、2.890±0.080,较相应对照组CatD mRNA（0.161±0.006）、CatD蛋白（0.903±0.200）以及CatD活性水平（1.100±0.090）均显著升高,均P<0.05。AGE?BSA呈剂量依赖性地刺激细胞CatD表达和活性。对照组、UVA组和UVA?AGE?BSA组细胞中CatD mRNA表达水平分别为0.155±0.005、0.480±0.005、0.394±0.008,蛋白表达水平分别为0.920±0.235、2.583±0.199、2.070±0.125,CatD活性分别为1.110±0.040、2.970±0.110、2.560±0.060;UVA组CatD mRNA水平、蛋白表达水平、酶活性均明显高于对照组（P<0.05）,但UVA?AGE?BSA组3种指标水平均显著低于UVA组（P<0.05）。结论 AGE可升高未接受UVA照射的皮肤成纤维细胞CatD表达和活性,但AGE却抑制UVA照射上调的CatD表达和酶活性。     

组织蛋白酶B在急性光损伤皮肤成纤维细胞中的表达及意义北大核心CSCD

目的 探讨组织蛋白酶B（CatB）在急性光损伤人皮肤成纤维细胞（HDF）中的表达变化及意义.方法 体外培养原代HDF,选取第4～8代细胞进行实验.实验设长波紫外线（UVA）照射组和不照射的对照组.CCK8法分别检测5、10、15、20和25 J/cm2 UVA照射后HDF的增殖率.用10 J/cm2 UVA单次照射致HDF急性光损伤,Western印迹及实时定量逆转录（RT）-PCR分别检测急性光损伤组HDF及对照组HDF照射后24、48、72 h CatB蛋白及mRNA表达;另外分别用10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF,Western印迹及实时定量RT-PCR分别检测急性光损伤组及对照组HDF照射后48 h CatB蛋白及基因表达.数据采用SPSS 13.0统计软件行方差分析,两组间比较采用最小显著差异法（LSD）.结果 UVA照射导致HDF增殖率下降;当UVA剂量≤10 J/cm2时,细胞存活率均保持在85％以上,各照光组分别与对照组24、48、72 h时比较,均P＜0.05.Western印迹结果显示,急性光损伤组（10 J/cm2 UVA照射）CatB蛋白灰度值在照射后24 h（0.76±0.14）、48 h（1.34±0.38）、72 h（0.82±0.09）均较对照组（分别为0.35±0.01、0.45±0.12、0.61±0.06）升高（均P＜0.05）.实时定量RT-PCR显示,在急性光损伤组CatB的mRNA表达在照射后24 h（0.149±0.009）、48 h（0.173±0.009）、72 h（0.185±0.158）也较对照组（分别为0.089±0.015、0.091±0.010、0.111±0.017）上调（均P＜0.05）.10、15、20、25 J/cm2 UVA照射HDF后48 h,CatB的蛋白灰度值分别为0.99±0.07、1.49±0.14、1.89±0.08、2.07±0.06,均较对照组（0.60±0.05）升高（均P＜0.05）,CatB的mRNA表达也较对照组升高.结论 UVA致急性光损伤的皮肤成纤维细胞中CatB蛋白及mRNA表达均上调.     

UVB照射诱导皮肤成纤维细胞早期衰老的研究

目的 探讨UVB诱导的细胞衰老与肿瘤发生的关系。方法 噻唑蓝（MTT）法检测UVB辐射后的细胞增殖情况,筛选诱导衰老适宜的亚毒性剂量和照射次数。染色法检测衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA β-gal）活性。RT－PCR检测衰老相关基因纤维结合素（FN）、骨结合素（ON）和平滑肌22（SM22）的表达。结果 以10 mJ/cm2的亚毒性剂量连续5次照射人成纤维细胞后,衰老的生物学特征得以明显表现：①MTT法检测显示细胞增生能力的减弱。②照射组具有SA β-gal活性的阳性细胞明显增加,照射组和对照组的阳性率分别为82.0%和33.7%（P < 0.01）。③3种衰老相关基因FN、ON和SM22的表达亦明显增强,分别约为对照组细胞的2.7、2.0、2.3倍（P < 0.05）。结论 反复亚毒性剂量UVB照射人成纤维细胞,初步建立一种UVB诱导的应激诱导的早期衰老（SIPS）模型。     

紫外线对人皮肤成纤维细胞的影响

紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。     

强脉冲光照射对皮肤成纤维细胞活性及其分泌基质金属蛋白酶的影响

目的 探讨强脉冲光(IPL)照射对培养状态下的人成纤维细胞形态、增殖活性以及分泌基质金属蛋白酶l(MMP-1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响.方法 由健康人皮肤标本中分离培养成纤维细胞,用一定剂量IPL分别照射后进行培养,光学显微镜观察成纤维细胞形态学变化,MTY法检测细胞增殖活性,ELISA法检测MMP-1及MMP-2水平.结果 成纤维细胞经IPL照射后形态无明显改变;能量密度为18,29,35J/cm²的IPL均可明显提高成纤维细胞活性,但无剂量依赖性.IPL照射后成纤维细胞MMP-1及MMP-2分泌水平无明显改变.结论 IPL照射能增强成纤维细胞增殖活性.     

长波紫外线照射对皮肤成纤维细胞产生白三烯B4及5-脂氧合酶mRNA表达的影响

紫外线照射可以使皮肤细胞释放多种炎症介质,从而引起皮肤产生急性或慢性炎症反应.长波紫外线(UVA)具有较强的穿透力,可穿过表皮到达真皮上部,主要作用于皮肤成纤维细胞,是引起皮肤炎症反应和皮肤光老化的重要因素.     

UVB对皮肤成纤维细胞相关骨架蛋白表达的影响

目的:确定UVB对皮肤成纤维细胞骨架蛋白的影响.方法:用150 mJ/cm2的UVB照射培养的皮肤成纤维细胞,用MTT法检测细胞活性,用Western blot法检测α-微管蛋白、β-微管蛋白、β-肌动蛋白和波形蛋白的含量.结果:150 mJ/cm2 UVB照射后β-微管蛋白含量逐渐降低,波形蛋白逐渐升高,α-微管蛋白和β-肌动蛋白改变不明显.结论:在UVB诱导人皮肤成纤维细胞光损伤过程中,β-微管蛋白和波形蛋白可能发挥着重要作用.     

长波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞表达一氧化氮合成酶和一氧化氮的影响

目的 通过检测UVA照射后人皮肤成纤维细胞的细胞形态及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) 和一氧化氮(NO)表达,初步探讨UVA引起成纤维细胞光损伤的发病机制.方法 以1J/cm2,5J/cm2和10J/cm2 UVA分别照射人成纤维细胞后24h,用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR )和化学细胞免疫方法检测iNOSmRNA和蛋白表达情况,Griess 法检测NO的含量,MTT试验检测细胞增殖能力,倒置显微镜和HE染色观察细胞形态变化.结果 10J/cm2UVA照射人成纤维细胞后24h出现皱缩最为明显,其细胞增殖能力(MTT)(OD值,0.2472±0.0328)与其他三组比较明显减退(P均<0.05),且iNOSmRNA(1.0568±0.0778)和iNOS蛋白表达强于1J/cm2和5J/cm2(P均<0.05),同时NO的含量(51.11±2.2760)nmol/mL高于1J/cm2的(32.44±3.1620)nmol/mL和5J/cm2的(41.32±2.4460)nmol/mL(P均<0.05).结论 人成纤维细胞iNOS和NO的表达与UVA照射呈剂量依赖.成纤维细胞的光损伤与iNOS和NO产生有关.     

中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞上清液对人真皮成纤维细胞增殖、老化及自噬的影响

目的 观察中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液对人真皮成纤维细胞增殖、老化及自噬的影响.方法 取健康青少年男子环切术后包皮进行人真皮成纤维细胞的分离培养.将中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞设为实验组,并设立对照组即正常成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞.处理20 d后,用CCK8法检测细胞增殖活性,EDU(5-乙炔基-2,脱氧尿嘧啶核苷)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,β半乳糖苷酶染色计算衰老细胞百分比,吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹法及间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3-B的表达水平.数据采用Graphpad Prism 5软件分析,两组间比较采用成组t检验.结果 实验组成纤维细胞增殖活力(0.831±0.017)明显低于对照组(0.973±0.017),但EDU染色及流式细胞仪检测结果均显示,实验组S期细胞百分比明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).β半乳糖苷酶染色显示,实验组成纤维细胞阳性率(25.710％±0.304％)高于对照组(5.257％±1.023％),差异有统计学意义(t=19.170,P＜0.05).吖啶橙染色结果显示,实验组成纤维细胞红色荧光量(14.287±2.269)低于对照组(29.614±2.650).Western印迹及间接免疫荧光结果均显示,实验组成纤维细胞LC3-B表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞的条件培养液可降低成纤维细胞的自噬及增殖,并加速其老化.     

沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞慢性光损伤的影响

【摘要】 目的 探讨沉默miRNA-23a对UVB照射所致成纤维细胞慢性光损伤的影响。 方法 将成纤维细胞分为空白对照组、UVB光损伤组、miRNA-23a 沉默组、UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组。SA-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色测定老化程度,流式细胞仪检测细胞周期,实时PCR法检测p53、p16、p21 mRNA的表达,免疫印迹法检测p53、p16、p21的蛋白表达量。 结果 UVB光损伤组与UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的SA-β-Gal细胞蓝染阳性率分别为（94.60 ± 2.58）%、（48.18 ± 3.70）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。G1期阻滞率分别为（85.06 ± 1.52）%、（57.48 ± 2.01）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的p53、p16、p21 mRNA及蛋白表达量与UVB光损伤组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞衰老有抑制作用,而miRNA-23a对下游衰老相关信号分子的抑制可能是其机制之一。     

芒果苷抑制中波紫外线诱导人成纤维细胞提前衰老的相关研究

【摘要】 目的 研究芒果苷是否对反复亚毒性剂量中波紫外线（UVB）诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰起抑制作用及其可能的机制。 方法 实验分成空白对照组（不做处理）,UVB-应激诱导的提前衰老（SIPS）组（单纯照光）,芒果苷4.0 mg/L组（单纯加药）,UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组（UVB照射联合药物处理）。成纤维细胞经5次UVB 10 mJ/cm2照射后,用细胞计数法（CCK8法）检测细胞增殖活性,β半乳糖苷酶染色（SA-β-Ga1）计算衰老细胞百分比,流式细胞仪测定细胞周期,蛋白印迹检测衰老相关蛋白p53、p21、p16含量,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达。采用单因素方差分析进行数据统计分析。 结果 UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组以及UVB-SIPS组细胞增殖活性（A450）依次为0.322 9 ± 0.011 3、0.336 1 ± 0.016 3、0.342 6 ± 0.014 4、0.288 2 ± 0.020 7（F = 110.08,P < 0.05）,β半乳糖苷酶染色阳性率依次为（88.83 ± 4.54）%、（46.33 ± 5.51）%、（32.17 ± 6.05）%、（93.67 ± 3.75）%（F = 283.54,P < 0.05;与UVB-SIPS组比较,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组外,其他两组均P < 0.05）;G1期细胞阻滞率依次为（72.19 ± 3.42）%、（60.99 ± 2.70）%、（49.80 ± 2.10）%、（82.09 ± 0.89）%（F = 156.01,P < 0.05）。与UVB-SIPS组相比,UVB + 各浓度芒果苷组细胞MMP1和MMP3 mRNA表达降低（F = 69.41、106.41,均P < 0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达增加（F = 66.41、46.81,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组P > 0.05外,其他各组均P < 0.05）,衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达降低（F = 265.60、151.82、329.85,均P < 0.05）,衰老相关蛋白p53、p21和p16的合成减少（F = 160.51、158.53、75.38,均P < 0.05）,各指标检测值的变化与芒果苷浓度之间呈一定依赖性。 结论 芒果苷可能通过下调p53、p21、p16基因的表达来抑制UVB诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰。     

紫外线及全反式维A酸对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响

目的 探讨紫外线照射及全反式维A酸（ATRA）对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响及机制。方法 2017年12月至2018年6月于南京医科大学附属第一医院皮肤科收集12份人皮肤组织标本,30 ~ 40岁、60 ~ 70岁曝光及非曝光部位标本各3份,免疫组化检测各组Hrd1表达。将40只BALB/c小鼠分为对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线 + ATRA组,其中紫外线组、紫外线 + ATRA组每日照射UVA 10 J/cm2和UVB 30 mJ/cm2,紫外线 + ATRA组（照光前给药）、ATRA组小鼠背部剃毛区域每日均匀涂抹1次0.1 ml 0.1% ATRA药膏,对照组既不涂药也不照射紫外线。14周后处死小鼠并取背部皮肤免疫组化观察Hrd1的表达。体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线 + ATRA组,紫外线组和ATRA + 紫外线组照光前用磷酸盐缓冲液覆盖细胞上层,照射10 J/cm2 UVA或30 mJ/cm2 UVB,ATRA + 紫外线组（照光后给药）和ATRA组用含ATRA 1 μmol/L的培养基继续培养24 h。Western印迹法检测各组成纤维细胞Hrd1表达,荧光显微镜观察各组细胞内活性氧水平。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P < 0.05认为差异有统计学意义。结果 30 ~ 40岁、60 ~ 70组曝光部位皮肤组织中Hrd1表达水平分别为0.307 ± 0.256、0.486 ± 0.579,均明显高于避光部位（0.196 ± 0.330、0.199 ± 0.375）,t值分别为5.486、10.579,P < 0.05。BALB/c小鼠体内实验中,对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线 + ATRA组小鼠皮肤中Hrd1表达水平分别为0.189 ± 0.015、0.288 ± 0.017、0.187 ± 0.020、0.226 ± 0.021,差异有统计学意义（F = 19.553,P < 0.001）,紫外线组高于对照组（t = 5.337,P = 0.033）和ATRA + 紫外线组（t = 4.891,P = 0.039）。体外实验中,人皮肤成纤维细胞分别经UVA、UVB照射后,4组细胞Hrd1水平差异均有统计学意义（F值分别为120.704、102.119,均P < 0.001）,UVA或UVB照射对Hrd1表达水平的影响基本一致,紫外线组Hrd1水平均明显高于对照组和ATRA + 紫外线组（均P < 0.05）。紫外线照射后,紫外线组活性氧水平均明显高于对照组和ATRA + 紫外线组（均P < 0.05）。结论 ATRA可以抑制紫外线介导的皮肤成纤维细胞中Hrd1的表达,其机制可能与ATRA抑制细胞内活性氧生成有关。     

黄芩苷对培养人原代成纤维细胞长波紫外线光损伤端粒的影响

目的 探讨黄芩苷对于长波紫外线（UVA）照射导致人皮肤成纤维细胞衰老的保护作用及对端粒途径的影响。方法 分离培养人原代成纤维细胞,将亚融合状态的培养细胞分为空白组、黄芩苷组、UVA组和UVA + 黄芩苷组,照光组中以10 J/cm2 UVA进行照射,药物干预组中加入50 μg/ml黄芩苷干预处理。以流式细胞仪测定细胞周期变化;以端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-ELISA）检测细胞端粒酶水平;以实时定量PCR法检测细胞端粒长度及衰老相关基因p53、p16和c-myc mRNA水平;以蛋白印迹法检测p16和c-myc蛋白水平。结果 UVA引起显著G1期阻滞,G1期细胞比值由正常对照组59.94%升高至81.04%,而黄芩苷处理后G1期细胞比值下降为65.55%。UVA照射后细胞端粒长度缩短为正常组的31.2%,黄芩苷干预组的端粒长度可恢复至正常细胞的63.9%。此外与正常组相比,UVA诱导p53和p16 mRNA表达水平升高为2.93 ± 0.21和2.14 ± 0.09,而c-myc mRNA水平下降为0.53 ± 0.03;黄芩苷干预可抑制上述改变。照射后与正常组相比,p16蛋白水平增高为5.84 ± 0.16,c-myc蛋白表达降低为0.35 ± 0.04;黄芩苷处理后p16蛋白表达量下降为4.09 ± 0.13（P < 0.05）;c-myc蛋白表达水平无明显变化（P > 0.05）。正常对照和UVA组的端粒酶活性为阴性,加入黄芩苷对端粒酶活性无影响。结论 黄芩苷可延缓人成纤维细胞光老化进程,其机制可能与调控p53等老化相关基因表达有关,与端粒酶活性无关。     

光老化对皮肤成纤维细胞降解晚期糖基化终末产物的影响

目的 探讨光老化对皮肤成纤维细胞降解胞内晚期糖基化终末产物（AGE）的影响。方法 连续长波紫外线（UVA）照射诱导成纤维细胞光老化,通过CCK8法、β半乳糖苷酶染色及细胞凋亡率检测验证模型是否构建成功。取原代成纤维细胞分为4组：光老化组（以UVA照射诱导光老化）,非光老化组（不做处理）,光老化 + AGE组（以UVA照射诱导光老化后加入200 mg/L AGE?BSA孵育）,非光老化 + AGE组（未诱导光老化细胞中加入200 mg/L AGE?BSA孵育）,孵育4 ~ 72 h后,流式细胞仪检测各组细胞内AGE?BSA荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜定位、半定量各组细胞8 h点胞内AGE?BSA。ELISA检测各组细胞24 h内AGE?BSA浓度变化。结果 与对照组（未照射UVA）相比,UVA照射组细胞增殖活性显著下降（t = 7.559,P < 0.05）,而凋亡率及β半乳糖苷酶染色阳性率显著升高（t值分别为14.075、43.524,均P < 0.05）。流式细胞仪检测示,孵育4、8、16、24、48、72 h后,光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度分别为293 ± 8.19、359.67 ± 11.59、347 ± 12.29、338 ± 12.77,334.67 ± 14.22、336.3 ± 10.21,非光老化 + AGE组分别为222.33 ± 8.74、276.33 ± 6.11、256.33 ± 5.51、243 ± 10.15,236.33 ± 1.53、240.33 ± 1.52,均分别高于相应时间点光老化组和非光老化组,差异均有统计学意义（P < 0.05）。其中光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度显著高于相应非光老化 + AGE组细胞（P < 0.05）。激光扫描共聚焦显微镜观察发现,吞入胞内的AGE?BSA主要位于溶酶体内,光老化 + AGE组AGE?BSA荧光强度显著高于非光老化 + AGE组,P < 0.05。ELISA检测发现,32 h点非光老化 + AGE组细胞AGE浓度较8 h点下降（14.6 ± 1.2）%,显著高于光老化 + AGE组（t = 6.604,P < 0.05）。结论 光老化皮肤成纤维细胞对吞入胞内AGE?BSA的降解能力下降,可能致AGE在光老化皮肤堆积。