黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移及侵袭的影响

  目的  通过观察黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外迁移侵袭能力及Ezrin、MMP-9、VEGF表达的影响, 探讨黄芩素对人肝癌细胞株SMMC- 7721体外迁移侵袭的作用及其可能机制。  方法  体外培养SMMC-7721, 经黄芩素干预后用划痕愈合实验和侵袭小室实验分别检测黄芩素对SMMC-7721细胞迁移运动能力和侵袭能力的影响; RT-PCR和免疫细胞化学法检测黄芩素作用于SMMC-7721细胞48h后对Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达的影响。  结果  划痕愈合实验显示各浓度实验组划痕愈合宽度占原宽度的比例比对照组明显下降（P < 0.05）; 体外侵袭实验显示实验组穿过人工基底膜胶的细胞数明显减少（P < 0.05）; 实验组Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白表达均明显下调（P < 0.05）。  结论  黄芩素可能通过直接或间接下调Ezrin、MMP-9、VEGF mRNA和蛋白的表达而抑制人肝癌细胞株SMMC- 7721体外迁移侵袭, 传统中药黄芩可望为肝癌临床治疗提供新的安全、有效、价廉的治疗方法。      

miR-34a对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制探讨

目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P＜0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。     

沉默FOXQ1基因抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞迁移侵袭能力

目的：探讨沉默叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)基因后对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）SMMC-7721细胞迁移侵袭能力的影响及其机制。方法: 制备FOXQ1-shRNA、NC-shRNA重组慢病毒,将其感染到SMMC-7721细胞中;实验设干扰组、阴性对照组和空白组,用Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blotting法检测SMMC-7721细胞中FOXQ1、MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果: 随着肝癌SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力的增强,FOXQ1的表达逐渐增加;干扰组较阴性对照组与空白组FOXQ1表达水平降低\[（0.34±0.03）vs（0.89±007）和（0.84±0.05）,P<0.05\];沉默FOXQ1基因后,SMMC-7721细胞的迁移侵袭能力显著下降\[(9.67±1.15) vs （25.67±208）和(27.33±2.52),P<0.05\],MMP-2与MMP-9表达水平下降\[MMP-2：(0.35±0.04) vs (0.61±0.05)和(065±008);MMP-9： (0.40±0.05) vs (0.73±0.07)和(0.77±0.06),均P<0.05\]。结论: 沉默FOXQ1基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与MMP-2与MMP-9的表达下调有关。     

HOXB7基因敲除对人肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 研究同源异型盒基因HOXB7（Homebox7）对人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及部分机制。方法 采用荧光定量PCR法选取HOXB7 mRNA高表达的人肝癌SMMC-7721细胞和HepG2细胞;设计靶向HOXB7的shRNA,瞬时转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光定量PCR和Westernblot法检测shRNA靶向沉默的效果,CCK8、Transwell和划痕实验分别用于检测细胞增殖、侵袭和迁移能力;Western blot法测量肝癌SMMC-7721细胞中Smad3、p-Smad3表达水平。结果 HOXB7 shRNA转染的肝癌SMMC-7721细胞中HOXB7基因mRNA和蛋白表达水平均显著降低,同时细胞增殖、侵袭和迁移能力随之下降,且TGF-β通路中p-Smad3蛋白表达水平下调。结论 HOXB7可促进肝癌细胞增殖、侵袭以及迁移能力,其机制可能与调节Smad3磷酸化水平有关。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

miR-26a对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响及初步机制的研究

目的:探讨miR-26a对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响及可能机制。方法:将miR-26a表达质粒及对照质粒分别转染HepG2细胞,qRT-PCR检测转染后miR-26a的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2细胞迁移和侵袭能力的改变,qRT-PCR和Western blot检测转染后AEG-1 mRNA和蛋白的表达。结果:转染miR-26a表达质粒后,HepG2细胞miR-26a表达明显增高(P＜0．01),迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05),AEG-1 mRNA及蛋白表达水平明显下调(P＜0.05)。结论:过表达miR-26a,可抑制HepG2细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制AEG-1表达相关。     

NS-398对肝细胞癌VEGF、MMP-9表达的调节

目的探讨NS-398对肝细胞癌血管生成和侵袭的调节作用。方法NS-398取0、25、50、75、100μmol/L5个浓度组,每个浓度组选取24h、48h、72h三个作用时间点进行检测。采用RT-PCR和流式细胞技术,观察NS-398对人肝癌SMMC-7721细胞株VEGF、MMP-9表达的影响。结果NS-398对SMMC-7721细胞有明显的生长抑制作用。与对照组相比,NS-398能显著抑制SMMC-7721细胞COX-2、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达,并呈显著的剂量和时间依赖性关系(P<0.001)。结论NS-398能显著抑制SMMC-7721肝细胞癌中VEGF、MMP-9mRNA和蛋白的表达。     

下调MLLT3/AF9基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 本文旨在研究组蛋白甲基转移酶MLLT3/AF9在人肝癌组织中的表达,观察体外下调MLLT3/AF9的表达对肝癌SMMC-7721细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 应用Real-time PCR技术检测100例肝癌组织、癌旁组织和肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2、Hu7、BEL-7402中MLLT3/AF9基因的表达水平;应用RNA干扰下调MLLT3/AF9的表达,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测MLLT3/AF9下调组和对照组SMMC-7721细胞的增殖及侵袭能力。结果 Real-time PCR检测结果显示肝癌组织中的MLLT3/AF9基因的表达量显著高于癌旁组织; Real-time PCR和Western blot检测到LVMLLT3-RNAi组中MLLT3/AF9 mRNA和蛋白的表达水平都降低,CCK-8、Transwell和划痕实验结果显示LV-MLLT3-RNAi组细胞的增殖和侵袭能力降低。结论 MLLT3/AF9在肝癌组织中表达水平明显升高,体外下调MLLT3/AF9的表达可以有效抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖与侵袭。     

miR-526b-3p通过靶基因TNKS2调控肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制探讨

目的:探讨miR-526b-3p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721、BEL-7402和正常肝细胞L02中miR-526b-3p和TNKS2的mRNA表达水平。建立miR-526b-3p过表达和TNKS2抑制表达的HepG2细胞株,采用MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测TNKS2蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因分析法验证miR-526b-3p可能的靶基因。结果:与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2、SMMC-7721及BEL-7402中miR-526b-3p的表达显著降低（P<0.05）,TNKS2的表达显著升高（P<0.05）。过表达miR-526b-3p或抑制表达TNKS2均可抑制HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。TNKS2是miR-526b-3p的靶基因。过表达TNKS2可部分逆转过表达miR-526b-3p对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:miR-526b-3p可通过下调TNKS2的表达,从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

β-榄香烯抑制HepG2细胞侵袭及转移的作用机制

目的:研究β-榄香烯（β-elemene）对体外培养的人肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法:细胞分为试验组和对照组,试验组细胞给予β-榄香烯处理,对照组细胞不添加任何药物。采用MTT法检测HepG2细胞的活力;分别采用划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验测定HepG2细胞的体外迁移、侵袭和黏附能力;采用明胶酶谱法及western blot检测HepG2细胞MMP-9酶活性及蛋白表达;采用免疫荧光染色及western blot检测HepG2细胞NF-κB p65核转位的情况。结果:划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验表明试验组细胞的迁移、侵袭和黏附能力均明显低于对照组（P＜0.05）,呈浓度依赖性;明胶酶谱法及western blot表明β-榄香烯能明显降低MMP-9的酶活性及其蛋白表达,呈浓度依赖性;免疫荧光染色及western blot表明与对照组相比,β-榄香烯可以明显抑制HepG2细胞NF-κB p65的核转位,从而抑制其活化,呈浓度依赖性。结论:一定量的β-榄香烯在体外可以抑制HepG2细胞迁移、侵袭和黏附,其机制可能与其通过抑制NF-κB p65活化从而抑制MMP-9的表达有关。     

miR-10b Promotes Migration and Invasion in Nasopharyngeal Carcinoma Cells

MicroRNA-10b (miR-10b) has been reported to play an important role in some types of cancer, but the effectsand possible mechanisms of action of miR-10b in the metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells (NPC) havenot been explored. The aim of the present study was to investigate the function of miR-10b in nasopharyngealcarcinoma and to determine the molecular mechanisms underlying its action. The MTT assay was used toassess proliferation of CNE-2Z cells. Wound healing and transwell migration assays were applied to assesscell migration and invasion, while and expression of E-cadherin and MMP-9 were detected using Western blotanalysis. Real-time PCR was employed to detect the expression of genes related to migration and invasion andthe 2-ΔΔCt method was used to calculate the degree of expression. MTT assay showed the expression of miR-10bto have no effect on the proliferation of NPC cell lines. The wound healing assay showed that miR-10b mimicspromoted the mobility and invasion of NPC cell lines. Inhibitors of miR-10b reduced the ability of NPC cell linesto migrate and invade. In addition, the expression of genes related to migration and invasion, such as E-cadherin,vimentin, and MMP-9, were confirmed to be different in the CNE-2Z NPC cell line transfected with miR-10bmimics and with miR-10b inhibitors. In the present study, miR-10b was found to upregulate the expression ofMMP-9 and knockdown of miR-10b was found to significantly downregulate the expression of E-cadherin. Onthe whole, these results showed that miR-10b plays an important role in the invasion and metastasis of NPCcells.     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达;双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系;将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组）,均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖;Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭;Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比,SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高,而miR-186表达降低,两者存在负相关性。与si-con组比较,si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降,迁移和侵袭细胞数明显减少,CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达,抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA NEAT1调控miR-4262表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:qPCR检测NEAT1和miR-4262在人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞株FTC-133、ML-1、SW579中的表达。用si-NEAT1或miR-4262 mimic转染SW579细胞,考察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。生物学信息预测结合双荧光素酶报告实验分析NEAT1和miR-4262之间的靶向关系。MTT法检测细胞增殖抑制率;Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。共转染si-NEAT1和anti-miR-4262,观察抑制miR-4262表达对抑制NEAT1表达诱导的SW579细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:NEAT1在甲状腺癌细胞中的表达显著上调（P＜0.05）,miR-4262表达下调（P＜0.05）。抑制NEAT1表达或过表达miR-4262显著增加SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,显著降低迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。miR-4262是NEAT1的靶基因。上调或下调NEAT1表达明显调控miR-4262表达（P＜0.05）。抑制miR-4262表达能逆转抑制NEAT1表达对SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达的促进作用,以及对细胞迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论:lncRNA NEAT1通过靶向miR-4262影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

MicroRNA-1277 Inhibits Proliferation and Migration of Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells by Targeting and Suppressing BMP4 Expression and Reflects the Significant Indicative Role in Hepatocellular Carcinoma Pathology and Diagnosis After Magnetic Resonance Imaging Assessment

Our study aimed to investigate the roles and possible regulatory mechanism of miR-1277 in the development of hepatocellular carcinoma (HCC). HCC patients were identified from patients who were diagnosed with focal liver lesions using magnetic resonance imaging (MRI). The expression levels of miR-1277 in the serum of HCC patients and HepG2 cells were measured. Then miR-1277 mimic, miR-1277 inhibitor, or scramble RNA was transfected into HepG2 cells. The effects of miR-1277 overexpression and suppression on HepG2 cell proliferation, migration, and invasion were then investigated. Additionally, the expression levels of epithelial– mesenchymal transition (EMT)-related markers, including E-cadherin, -catenin, and vimentin, were detected. Target prediction and luciferase reporter assay were performed to explore the potential target of miR-1277. miR-1277 was significantly downregulated in the serum of HCC patients and HepG2 cells. Suppression of miR-1277 promoted HepG2 cell proliferation, migration, and invasion, whereas overexpression of miR-1277 had opposite effects. In addition, after miR-1277 was suppressed, the expressions of E-cadherin and -catenin were significantly increased, while the expressions of vimentin were markedly decreased. Bone morphogenetic protein 4 (BMP4) was identified as the direct target of miR-1277. Knockdown of BMP4 reversed the effects of miR-1277 suppression on HepG2 cell migration and invasion, as well as the expressions of E-cadherin, -catenin, and vimentin. Our results indicate that downregulation of miR-1277 may promote the migration and invasion of HepG2 cells by targeting BMP4 to induce EMT. Combination of MRI and miR-1277 level will facilitate the diagnosis and treatment of HCC.     

沉默circZFR通过调控miR-497-5p表达抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:研究环状RNA（circular RNAs,circRNAs）circZFR是否通过调控微小RNA（microRNA,miRNA/miR）-497-5p的表达影响脊索瘤细胞增殖、迁移及侵袭。方法:实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测脊索瘤组织中circZFR和miR-497-5p的表达。在脊索瘤U-CH1细胞中转染si-circZFR或miR-497-5p。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭情况,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprotease-2,MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloprotease-9,MMP-9）蛋白表达,StarBase预测工具和双荧光素酶报告实验分析circZFR与miR-497-5p的靶向结合。si-circZFR和anti-miR-497-5p共转染,观察下调miR-497-5p表达对沉默circZFR表达诱导的U-CH1细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结果:与髓核组织比较,脊索瘤组织中的circZFR表达量明显增加,miR-497-5p表达量显著减少（P＜0.05）。沉默circZFR表达或过表达miR-497-5p明显降低U-CH1细胞48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量,显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。circZFR靶向调控miR-497-5p的表达。下调miR-497-5p表达逆转了沉默circZFR表达对脊索瘤U-CH1细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP-2及MMP-9蛋白表达的抑制作用,和对p21蛋白表达的促进作用。结论:沉默circZFR表达可以抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用机制与靶向调控miR-497-5p的表达有关。     

miR-601靶向调控MMP-17抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭CSCD

目的探讨miR-601对非小细胞肺癌(NSCLC)迁移和侵袭能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法RT-qPCR检测NSCLC组织中miR-601的表达,并分析表达水平与癌细胞侵袭和淋巴结转移的相关性。将miR-601 mimics瞬时转染A549细胞或H1299细胞,Transwell实验检测其对两种细胞迁移和侵袭能力的影响。生物信息学预测miR-601相关靶基因,采用双荧光素酶实验进行靶基因验证。检测miR-601的靶基因对A549细胞或H1299细胞迁移及侵袭能力的影响。结果miR-601在NSCLC组织中表达明显降低(P<0.001),且降低水平与癌细胞的浸润(P<0.007)及淋巴结转移(P<0.011)密切相关。瞬时转染miR-601 mimics能明显抑制A549细胞或H1299细胞的迁移及侵袭能力。生物信息学及荧光素酶报告实验提示MMP-17是miR-601的靶基因。MMP-17能促进A549细胞或H1299细胞的迁移和侵袭,但其促进迁移侵袭的能力可被miR-601抑制。结论miR-601通过靶向调控MMP-17而抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭。