淋球菌对大观霉素耐药基因的初步检测

【摘要】 目的 检测导致大观霉素耐药的淋球菌16S rRNA基因中的突变位点。 方法 对6株大观霉素耐药淋球菌［最小抑菌浓度（MIC） ≥ 128 mg/L］、20株大观霉素敏感菌株（MIC 32 mg/L和16 mg/L各10株）的16S rRNA基因进行DNA扩增和序列测定,分析16S rRNA基因突变情况。 结果 6株大观霉素耐药淋球菌的16S rRNA基因均发生了突变,其中2株（MIC > 256 mg/L）为C1192T突变,1株（MIC 256 mg/L）为C1344T和T1345A突变,1株（MIC 256 mg/L）为T990G和T991C突变,1株（MIC 128 mg/L）为T990G、G1343C和C1344T突变,1株（MIC 128 mg/L）为T991C突变。20株大观霉素敏感菌株均未发生突变。 结论 淋球菌16S rRNA基因不同位点突变可能与大观霉素不同程度的耐药相关,C1192T突变可能导致高度耐药,其他单一位点或多位点突变与不同程度的耐药相关。 【关键词】 奈瑟球菌,淋病; 壮观霉素; 点突变; RNA,核糖体,16S; 抗药性,细菌     

淋球菌染色体mtrR基因突变对淋球菌多重耐药性的影响

目的 对淋球菌的染色体耐药机理进行了一定的探索。方法 聚合酶链反应及Sanger双脱氧链终止法,测定淋球菌mtrR基因的碱基序列,并做相应淋球菌的药敏试验。结果 具有青霉素耐药性的淋球菌毫无例外都有mtrR基因的单碱基突变,而耐壮观霉素的淋球菌在mtrR基因上有两个位点突变。结论 淋球菌染色体上mtrR基因的突变会引起淋球菌多重耐药性的产生,增加淋球菌对脂溶性细胞毒因子如脂溶性抗生素、去污剂类脂肪酸的抗性。     

淋球菌gyrA和parC基因突变与氟喹诺酮类药物关系的研究

目的：探讨淋球菌gyrA和parC基因突变与淋球菌耐氟喹诺酮类药物之间的关系。方法：①纸片扩散法检测58株淋球菌对5种氟喹诺酮类药物的敏感性。②E测定法定量检测环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）。③PCR技术扩增gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR）相关序列并作测序分析。结果：①对环丙沙星、氧氟沙星、氟罗沙星、洛美沙星、依诺沙星同为敏感、中介、耐药者分别为2株、4株和39株。②环丙沙星MIC为敏感、中介、耐药分别为2株、17株和39株。③环丙沙星MIC为0．004－0．016μg/mL的2株淋球菌gyrA和parC基因均未发生突变；MIC为0．064－0．094μg/mL的菌株仅发生gyrA单位点突变；而MIC≥0.25μg/mL的菌株均发生gyrA双位点突变。MIC≤0．25μg/mL的菌株无parC基因突变，而MIC≥1.0μg/mL的菌株除出现gyrA双位点突变外均同时发生parC单位点突变。④在发生突变的16株菌中，Ser91(TCC)→Phe(TTC）突变为15株。结论：①gyrA基因突变介导淋球菌对氟喹诺酮类药物低和中水平耐药，而对氟喹诺酮类药物高水平耐药需要parC基因突变的共同参与。②gyrA基因Ser91→Phe的突变是导致淋球菌对氟喹诺酮类药物耐药的关键突变。     

淋病奈瑟菌对头孢菌素和阿奇霉素耐药性的研究进展

世界范围内出现了淋病奈瑟菌对一线治疗抗菌药物低敏、耐药的情况,尤其是对广谱头孢菌素和阿奇霉素的耐药性已经引起了人们的担忧。许多地区均出现了淋病奈瑟菌对广谱头孢菌素和（或）阿奇霉素高水平耐药的报告,为淋病联合治疗方案敲响了警钟。淋病奈瑟菌的耐药机制复杂,主要涉及到抗菌药物靶点的改变、药物内流减少和外排增加。各机制之间还存在某些依赖或协同效应。对淋病奈瑟菌耐药性的深入研究,有助于指导临床合理使用抗菌药物,延缓淋病奈瑟菌的耐药趋势。     

大观霉素与壮观霉素治疗淋病疗效比较

大观霉素与壮观霉素治疗淋病疗效比较钱宝文指导杨崇贵江苏洪泽县皮肤病防治所（邮政编码２２３１０１）我们用大观霉素（连云港东风制药厂生产）和壮观霉素（美国Ｕｐｊｏｈｕ药厂生产）对８０例门诊淋病患者进行治疗，现报告如下。临床资料８０例均为１９９４年３～６月...     

淋球菌耐药性的研究进展

淋球菌对常用抗生素有不同的耐药率及耐药机制。对青霉素耐药的主要机制是产生 β-内酰胺酶 ;对四环素耐药的主要机制是细胞膜对药物的通透性降低 ;对大环内酯类、大观霉素耐药的主要机制是作用靶位的改变 ;对氟喹诺酮类耐药的主要机制是 gyrA及parC基因的突变 ;对第三代头孢菌素类敏感性降低或耐药的机制尚未明确 ,但与penB、penA等基因密切相关。     

南京地区1999-2006年淋球菌青霉素耐药性及耐药质粒基因型研究

目的了解南京地区淋球菌青霉素耐药状况及产青霉素酶淋球菌的质粒基因型的流行情况。方法采用琼脂稀释法检测淋球菌对青霉素的最小抑菌浓度采用纸片酸度定量法检测菌株是否产青霉素酶。采用单管PCR方法对产青霉素酶淋球菌耐药质粒进行基因分型。结果8年间共检测1208株淋球菌，青霉素总耐药率为84．02％（1015／1208）。非产青霉素酶淋球菌中，染色体介导的耐青霉素淋球菌占74．02％（550/743）。产青霉素酶淋球菌占38．49％（465／1208），其中177（38．06％）株同时为质粒介导的耐四环素淋球菌即质粒介导的高度耐四环素淋球菌。产青霉素酶淋球菌阳性率自1999（8．04％）年起逐年增加，至2004年达最高（57．36％），2005、2006年略有下降。质粒PCR分型显示，所测菌株均携带亚洲型质粒。结论南京地区耐青霉素淋球菌始终维持在较高水平，产青霉素酶淋球菌近年增加较快，携带亚洲型质粒的产青霉素酶淋球菌在南京地区流行，未发现其他类型的质粒。     

2008年中国淋球菌临床分离株耐药性的流行病学研究

目的 通过对2008年淋球菌耐药监测结果进行分析,了解我国不同地区淋球菌耐药株的流行现状.方法 淋球菌株来自2008年全国淋球菌耐药监测点符合要求的951例淋病患者,其中江苏156例、浙江71例、福建102例、广东207例,广西77例、海南43例、新疆45例、陕西72例、四川80例、重庆44例、天津54例.通过纸片酸度定量法测定β-内酰胺酶,琼脂稀释法测定大观霉素、环丙沙星、头孢曲松钠、四环素对淋球菌的最小抑菌浓度(MIC).结果 大观霉素有2株耐药(0.21%),头孢曲松451株中度敏感(47.42%),质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNG)487株(51.21%),产青霉素酶淋球菌(PPNG)332株(34.91%),环丙沙星928株耐药(97.58%).淋球菌对多种抗菌药物敏感性间的等级相关分析显示,TRNG阳性率与PPNG阳性率呈正相关(r=0.20,P<0.01),淋球菌对头孢曲松的敏感性与PPNG阳性率负相关r=-0.09,P<0.01),而淋球菌对头孢曲松的敏感性与对环丙沙星的敏感性及TRNG阳性率、淋球菌对环丙沙星的敏感性与PPNG阳性率及TRNG阳性率间没有相关性.卡方分析显示,各省收集的淋球菌对头孢曲松的中敏率之间相差比较大,广西、海南、新疆、陕西四省的中敏率(分别为87.01%、69.77%、82.22%、86.11%)高于总体水平(47.42%);陕西省有2株淋球菌对大观霉素耐药;各省收集的淋球菌对环丙沙星的耐药率较一致(86.11%～100%);广东省收集的淋球菌中TRNG的阳性率(68.60%)明显高于总体水平(51.21%);四川省、浙江省收集的淋球菌中PPNG的阳性率(分别为63.75%和54.93%)明显高于总体水平(34.91%)(P<0.05).结论 不同地区的淋球菌对抗生素的耐药性有明显的差别,其中陕西省收集的淋球菌对首选药物中头孢曲松的中度敏感率及对大观霉素的耐药率较高,应引起重视.

Abstract：

Objective To study the current status of antimicrobial resistance of clinical Neisseria gonorrhoeae isolates in China by analyzing the surveillance results in 2008.Methods N. gonorrhoeae strains were collected from 951 eligible patients at national monitoring sites for resistance of N. gonorrheae,including 156 patients from Jiangsu province,71 from Zhejiang province,102 from Fujian province,207 from Guangdong province,77 from Guangxi province,43 from Hainan province,80 from Sichuan province,44 from Chongqing,45 from Xinjiang Uygur Autonomous Region,72 from Shaanxi province,and 54 from Tianjin.The production of β-lactamase was detected by paper acidometric testing,and minimum inhibitory concentrations(MICs)were determined by agar dilution method for spectinomycin,ciprofloxacin,cefiriaxone,tetracycline,respectively.Results Among the 951 N. gonorrhoeae isolates,2(0.21%)were resistant to spectinomycin,451(47.42%)showed reduced sensitivity to ceflriaxone,928(97.58%)were resistant to ciprofloxacin.Penicillinase-producing N.gonorrhoeae (PPNG) and plasmid mediated tetracycline-resistant N. gonorrhoeae (TRNG) accounted for 34.91%(332/951)and 51.21%(487/951) of these isolates respectively.Kendall rank correlation analysis showed that there was a positive correlation between the positivity rate of TRNG and PPNG(r=0.20,P<0.01),but a negative correlation between the susceptibility to cefiriaxone in N.gonorrhoeae and positivity rate of PPNG(r=-0.09,P<0.01).No correlation was observed between the susceptibility to cefiriaxone and susceptibility to ciprofloxacin or the positivity rate of TRNG,or between the susceptibility to ciprofloxacin and positivity rate of PPNG or TRNG.Chi-square analysis showed a marked increase in the percentage of N.gonorrhoeae isolates with reduced susceptibility to ceftriaxone in Guangxi province,Hainan province,Xinjiang Uygur Autonomous Region and Shaanxi province,the percentage of N.gonorrhoeae isolates with resisitance to spectinomycin in Shaanxi province,prevelance of TRNG in Guangdong province,and prevelance of PPNG in Sichuan and Zhejiang provinces compared with the average level (all P<0.05).Conclusions Thero is a significant diffefence in antimicrobial susceptibility of N.gonorrhoeae from difierent areas of China.A significant elevation is observed in the percentage of N.gonorrhoeae with reduced susceptibihty to cefifiaxone and resistance to spectinomycin in Shaanxi province.to which close attention should be paid.     

淋球菌对头孢曲松的敏感性及淋球菌多抗原测序分型研究

【摘要】 目的 探讨南京市淋球菌对头孢曲松的敏感性以及相应菌株的淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）基因型别。 方法 2007年和2012年在中国疾病预防控制中心性病控制中心临床防治基地分别收集了204株和81株淋球菌,经过分离纯化及鉴定后,用琼脂稀释法测定其对头孢曲松的最小抑菌浓度（MIC）;菌株培养后利用试剂盒提取DNA,并进行淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）。 结果 测试的285株淋球菌MIC ≥ 0.060 μg/ml的菌株比例为63.2%,MIC ≥ 0.125 μg/ml的比例为31.6%。2012年MIC ≥ 0.060 μg/ml和MIC ≥ 0.125 μg/ml的菌株比例分别为44.4%和11.1%,2007年MIC ≥ 0.060 μg/ml和MIC ≥ 0.125 μg/ml的菌株比例分别为70.6%和39.7%。NG-MAST分型研究显示,285株淋球菌共有166个型别,菌株多样性较高,其中73种为已知型别,93种为新型别。2007年测定的所有菌株中以ST568（n = 13）,ST270（n = 9）,ST421（n = 7）,ST2288（n = 5）,ST1731（n = 4）,ST1766（n = 4）,ST1866（n = 4）,ST1870（n = 4）等为主。2012年测定的所有菌株中以ST2318（n = 5）,ST1053（n = 4）,ST5990（n = 4）,ST8726（n = 4）为主。相同NG-MAST型别的菌株具有相同或相近的MIC值。 结论 2012年与2007年菌株的优势型别有较大变化,某些型别与头孢药敏值有较强对应关系。NG-MAST分型可能作为分子生物学标记用于淋球菌耐药监测。     

淋病奈瑟菌对头孢曲松耐药性及敏感性降低机制的研究进展

头孢曲松为目前治疗淋病的首选药物之一,国内外淋球菌耐药监测均发现淋球菌对头孢曲松敏感性降低,并已发现少数散发的头孢曲松耐药株。淋球菌对头孢曲松敏感性降低主要由染色体介导,目前大多数研究主要关注三个方面：一是抗生素作用靶位点的改变,影响抗生素与淋球菌的结合产生耐药;二是细菌细胞膜孔蛋白的改变,导致膜通透性降低产生耐药;三是外排系统的改变,导致细菌外排作用增强产生耐药。涉及的基因有penA、ponA、porB和mtrR等。     

淋球菌对头孢菌素耐药的治疗应对措施

淋病是淋球菌感染引起的性传播疾病之一,对人类健康及社会经济发展均有较大的危害.近年来,由于治疗不当、患者有耐药基因等多种原因,淋球菌逐渐对青霉素、四环素、环丙沙星等抗菌药出现耐药.目前头孢菌素为治疗淋球菌感染的一线药物,随着头孢菌素的广泛应用,淋球菌对其敏感性逐渐降低,出现临床治疗淋病失败的病例.为了进一步控制淋病,应对淋球菌耐药现象,临床已出现联合治疗、替代疗法、新药研发等方案,以期为控制对头孢菌素耐药的淋病治疗提供应对策略.     

淋病奈瑟菌分离株3种药物耐药基因检测

目的：从基因水平了解淋病奈瑟菌对青霉素类、四环素类、喹诺酮类3种抗菌药物的耐药状况。方法：采用聚合酶链反应(PCR)对常州地区的50株淋病奈瑟菌进行TEM-1基因、tetM基因检测并对gyrA基因的DNA进行测序分析。结果：50株淋病奈瑟菌中32株TEM-1基因阳性，24例tet基因阳性，经PCR扩增和DNA测序，gyrA基因全部存在突变，PPNG—TRNG—QRNG3种分子检测发现青霉素类、四环素类与喹诺酮类二重耐药分别占26％和10％，耐多种药物(MDR)菌株总数已达74％。结论：淋球菌对青霉素类、四环素类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性已相当高，迫切需要寻找新的敏感抗菌药物。     

1999-2006年南京地区淋球菌对环丙沙星耐药现状的分析

目的 了解南京地区1999-2006年淋球菌对环丙沙星的耐药现状.方法 对1999-2006年在南京地区性病门诊患者中分离到的1208株淋球菌,采用琼脂稀释法测定环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC).结果 对环丙沙星耐药(MIC 1mg/L)的淋球菌率由1999年的83.93%(94/112)上升至2006年的98.99%(196/198),平均总耐药率为96.61%(1167/1208).其中环丙沙星高度耐药(MIC≥4mg/L)的淋球菌比率达71.61%(865/1208).结论 南京地区流行的淋球菌对环丙沙星的耐药情况极其严重.     

淋球菌耐药性与耐药质粒的相关性研究

目的 探讨质粒在介导淋球菌耐药中的作用。方法 通过耐药质粒的接合、转化及消除试验,比较试验前后各菌株药物敏感性的改变。结果 耐药性淋球菌菌株通过耐药质粒的接合和转化,可将其耐药性传递给敏感的淋球菌菌株,而耐药质粒的消除可使耐药性淋球菌恢复对某些药物的敏感性。结论 质粒的介导在淋球菌耐药性的形成中起着重要作用。     

淋病奈瑟菌基因分型的研究进展

淋病奈瑟菌是引起淋病的病原体.淋病奈瑟菌基因分型方法在淋病奈瑟菌疫苗的研究、制定流行病学控制措施和淋病的治疗上均起到重要的作用.常见基因分型方法如:opa分型、脉冲电场凝胶电泳、por分型、随机扩增多态性DNA分型、多位点序列分型等.由于不同基因分型方法有着其各自不同的优点和不足,依据不同的需要,可选择合适有效的基因分型方法以达到实验的要求.     

淋病奈瑟菌L型的质粒图谱及耐药性研究

目的 探讨淋病奈瑟菌（ＮＧ）Ｌ型的耐药性与其质粒的关系。方法 将２株产青霉素酶淋病奈瑟菌（ＰＰ－ＮＧ）诱导成Ｌ型,并传代。测定每代菌中的质粒携带情况、β－内酰胺酶活性及对四种抗生素的敏感性。结果 传至第７代时,２株ＮＧ编码β－纳酰胺酶的质粒丢失,Ｌ型的β－内酰胺酶活性转阴,它们的回复菌对青霉素的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）比原菌大大降低,分别从８ｍｇ／Ｌ和１６ｍｇ／Ｌ降低到１ｍｇ／Ｌ和０．２５ｍｇ／Ｌ,     

长沙地区淋病奈瑟菌的耐药性及耐药性质粒分型研究

目的：了解长沙地区淋病奈瑟菌对抗生素的敏感性以及耐青霉素和耐四环素性质粒的流行情况。方法：采用纸片扩散法检测80株淋病奈瑟菌对7种抗生素的敏感性；碱裂解法分析产青霉素酶的淋病奈瑟菌（PPNG）株及耐四环素的淋病奈瑟菌（TRNG）株的质粒图谱；PCR扩增tetM基因片段，并经测序分析其基因型。结果：在测定的7种抗生素中，耐药性最高的为环丙沙星，耐药率为86．25％，敏感性最高的为大观霉素，为100％；PPNG和TRNG的检出率分别为50.0％和27．5％；40株PPNG株质粒电泳后发现除1株为非洲型耐青霉素质粒外，其余均为亚洲型耐青霉素质粒；22株TRNG株的PCR产物电泳条带均在约443bp处，取典型株经DNA测序分析与荷兰型tetM基因具有96％～98％的同源性。结论：质粒介导的淋病奈瑟菌对青霉素和四环素的耐药已普遍存在，本次研究中介导的耐青霉素和耐四环素质粒分别以亚洲型和荷兰型为主。