恒河猴精原干细胞的筛选、培养与鉴定

目的:建立恒河猴精原干细胞的筛选和培养方法。方法:采用改良的二步酶消化法分离恒河猴睾丸细胞,用改进的差异贴壁筛选法纯化恒河猴精原干细胞,用添加了胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、可溶性GFRα1和bFGF的DMEM/F12无血清培养基和小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养恒河猴精原干细胞,并通过形态观察、标志基因的免疫细胞化学分析和半定量RT-PCR分析鉴定培养细胞的干细胞活性。结果:分离纯化的恒河猴精原干细胞在添加了3种生长因子的培养基中能形成较大的干细胞克隆,并表达精原干细胞的标志基因。结论:本研究初步建立了恒河猴精原干细胞的培养体系,为进一步开展相关研究奠定基础。     

小鼠生精干细胞的初步分离与纯化

目的　寻求一种获取小鼠的生精干细胞的简单方法。方法　将新生小鼠睾丸采用改良的两步消化法消化 ,并通过贴壁分离方法纯化。结果　通过该方法能够获取较高纯度 ( 95 % )的A型精原细胞 ,并通过生精干细胞移植实验证实其有效性。结论　采用该方法对生精干细胞进行初步的分离和纯化是简单有效的     

食蟹猴疟原虫的世界分布及研究进展

食蟹猴疟原虫的世界分布及研究进展黄亚铭对食蟹猴疟原虫的大量研究出现在第二次世界大战期间［１］。当时为了寻找对自然感染间日疟的根治药，疟疾研究协调委员会遂推荐食蟹猴疟原虫作为研究手段。当时的研究报道显示，食蟹猴疟原虫的红内期形态与人类间日疟原虫难以区别...     

食蟹猴沙门氏菌带染率及生物学特性的实验观察

沙门氏菌是灵长类实验动物（猴）及人类共患的一种腹泻病的病原。实验动物常因感染沙门氏菌引起腹泻而导致实验的失败。为保证实验用猴的质量 ,对饲养的食蟹猴进行了沙门氏菌带染率、生物学特性、血清型别及对不同种抗菌素的敏感度作了实验观察 ,现将结果报告如下。１材料与方法１．１材料１９９８～１９９９年采集本中心饲养的食蟹猴粪便５５００份。沙门氏菌属“Ｏ”Ａ～Ｆ多价诊断血清及３０种分型因子血清 ,购自兰州生物制品所 ,有效期至２０００年１２月。抗菌素药敏纸片为浙江省军区后勤卫生防疫所生产的市售成品 ,有效期至２０００年…     

实验用食蟹猴生物学指标的研究

[目的]提供实验用食蟹猴的正常生理生化、免疫学、脑脊液指标的参考值. [方法]选取50只4～7岁食蟹猴,雌性24只,雄性26只,分别检测其生理学(心电图、体温、心率)、血液学(血常规、凝血酶原时间)、血液生化学、免疫学(CD3+、CD4+、CD8+、IgG、IgM)和脑脊液(白细胞、葡萄糖、蛋白质、氢化物)指标,并进行性别间比较. [结果]雌雄性动物相比,血常规指标中WBC差异有统计学意义(P<0.01);血生化指标中ALP、CHO、CRE、GLU差异有统计学意义(P<0.05);免疫学指标中IgM差异有统计学意义(P<0.01);脑脊液指标中蛋白质含量差异有统计学意义(P<0.05).其余各检测指标差异无统计学意义(P>0.05). [结论]本研究提供了食蟹猴生理生化、免疫学、脑脊液的背景数据,为其在生物医学领域的应用提供参考.     

蒿甲醚阻断食蟹猴疟原虫孢子增殖期发育研究

用蒿甲醚（Ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）注射液在食蟹猴疟原虫———大劣按蚊动物模型中的试验结果显示：给感染猴一次性肌注６４ｍｇ／ｋｇ蒿甲醚后，９ｈ内原虫密度无明显变化，配子体数量仍在增加，与治疗前相比，吸血按蚊蚊胃内卵囊阳性率和蚊胃中卵囊数以及唾腺子孢子阳性率均明显降低。２３ｈ后，蚊胃未有卵囊形成；一次性给药达２５５ｍｇ／ｋｇ体重时，５ｈ后吸血按蚊蚊胃内未有卵囊形成。结果提示：蒿甲醚不仅具有快速杀灭疟原虫无性体，毒性低、用量少、在体内滞留时间长等特点，而且还具有抑制蚊胃内卵囊形成的作用。在一定量的药物作用情况下，可阻断疟原虫孢子增殖期的发育，而且时间快     

大劣按蚊对食蟹猴疟原虫配子体最佳敏感期观察

以食蟹猴疟原虫大劣按蚊为动物模型,观察大劣按蚊对疟原虫不同密度及雄雌配子体不同比例情况下的敏感性。结果显示:猴体内疟原虫配子体密度在不治疗情况下不断增高,但雄雌配子体的比例在不断变化,当雄雌配子体比例为1:2.2的情况下,大劣按蚊可获得较高的感染率,蚊胃卵囊感染率为95.5%,腺感染率为91.7%。     

精原干细胞移植的研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞.精原干细胞(SSC)是一种成体干细胞,是哺乳动物成体睾丸生精上皮中唯一可复制的多能二倍体细胞,能在体外分离纯化、培养、冻存,可进行同体或异体移植.1994年Brinster和Zimmermann首次进行SSC移植试验,有关SSC的研究越来越多,SSC成为生殖领域巾的研究热点.主要以小鼠为例,就SSC的生物学特征、增殖与分化和移植及其相关研究进行综述.     

精原干细胞移植的研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞。精原干细胞(SSC)是一种成体干细胞,是哺乳动物成体睾丸生精上皮中唯一可复制的多能二倍体细胞,能在体外分离纯化、培养、冻存,可进行同体或异体移植。1994年Brinster和Zimmermann首次进行SSC移植试验,有关SSC的研究越来越多,SSC成为生殖领域中的研究热点。主要以小鼠为例,就SSC的生物学特征、增殖与分化和移植及其相关研究进行综述。     

人胎盘滋养层细胞的分离和鉴定

目的:体外分离足月妊娠胎盘滋养层细胞,观察其形态学特点,检测人类白细胞抗原-E(HLA-E)在滋养层细胞的表达情况。方法:采用0.25%胰酶和胶原酶I联合消化法及Percoll密度梯度分离法分离人足月妊娠胎盘组织中滋养层细胞,光学显微镜观察分离出的细胞形态,透射电镜观察分离出的细胞超微结构;RT-PCR技术检测分离出的滋养层细胞HLA-E的表达。结果:光学显微镜下初分离的细胞呈大圆形,以单个核为主;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富,胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴。在分离的细胞上检测到HLA-E的表达。结论:采用胰酶和胶原酶I联合消化及Percoll密度梯度分离法可获得高纯度的滋养细胞,在透射电镜下可见到超微结构,同时检测到滋养层细胞上表达HLA-E。     

微囊藻的分离纯化培养及产毒特性鉴定

目的建立微囊藻的分离纯化培养方法,并鉴定其生长和产毒特性。方法采用96孔板结合极限稀释法,对郑州市西流湖微囊藻进行分离纯化培养;用倒置显微镜观察分离微囊藻株的细胞学和生长特点;用可见分光光度法测定分离微囊藻培养液的吸光度,并绘制分离藻株的生长曲线,计算其生长速率常数和倍增时间;用全细胞PCR和ELISA鉴定分离微囊藻株的产毒性,用ELISA测定其微囊藻毒素粗提物的浓度,并计算其产毒量。结果成功从郑州市西流湖分离出2株微囊藻Microcystis XLH6和Microcystis XLH10,其生长曲线均呈“S”型,生长速率常数均呈先迅速升高然后逐渐降低的趋势;一个生长周期内Microcystis XLH6和Microcystis XLH10的平均生长速率常数分别为0.294和0.345,平均倍增时间分别为82h和70h。全细胞PCR和ELISA结果均为阳性,2株微囊藻均为产毒株,冻干藻细胞Microcystis XLH6和Microcystis XLH10的微囊藻毒素产量分别为1.0μg/mg和2.4μg/mg。结论郑州市西流湖有产毒微囊藻污染,96孔细胞培养板可用于分离纯化微囊藻。     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

人宫颈癌干细胞的分离鉴定

目的:通过分选人宫颈癌细胞中的侧群细胞验证其肿瘤干细胞特性。方法:取16例行宫颈鳞癌切除的手术标本进行宫颈癌细胞原代培养,流式细胞仪分选侧群细胞(Side Population,SP),对比SP细胞和非SP细胞(Non Side Population,Non-SP)的体外自我更新能力和肿瘤形成能力。结果:在原代培养的16株宫颈癌细胞中均分选出SP细胞,比例约占(1.67±0.94)%。SP细胞的克隆形成能力显著高于NSP细胞,SP细胞在裸鼠肿瘤形成能力显著高于NSP细胞。结论:人宫颈癌侧群细胞具有肿瘤干细胞特性,为宫颈癌干细胞的研究提供了简单、有效的分离方法。     

肝癌干细胞差异表达miRNA的筛选及鉴定

目的培养卵圆细胞、肝癌干细胞样细胞,筛选肝癌干细胞差异表达的microRNA并进行验证。方法体外分离培养卵圆细胞,肝癌干细胞样细胞,通过microRNA芯片检测差异表达的microRNA,对所得到的差异表达显著的microRNA进行Northern验证。结果表达差异显著的microRNA共有17个,经Northem杂交验证,其中6个差异显著的microRNA,发现hsa—let-7f-2、hsa—miR-199a-3p、hsa-miR-122在肝癌干细胞中的表达较卵圆细胞明显升高。结论hsa—let一7f-2、hsa—miR-199a一3p、hsa—miR-122在肝癌干细胞中的表达较卵圆细胞明显升高,可以进一步验证其在肝癌于细胞中的功能。     

体外诱导兔胚胎干细胞分化为神经细胞

目的:探讨体外诱导兔胚胎干细胞(ESCs)分化为神经细胞的方法。方法:应用多种诱导剂联合诱导兔ESCs,免疫荧光和流式细胞仪检测巢蛋白(Nestin)的表达。结果:诱导后兔ESCs能分化为具有典型神经元形态的细胞,Nestin阳性表达。结论:在体外采用定向分化诱导,兔ESCs可直接定向分化为神经干细胞。     

新生鼠体外神经干细胞培养、分化及鉴定

目的 探索新生SD大鼠神经干细胞体外分离培养基鉴定的方法。方法 分离新生SD大鼠海马组织, 无血清培养技术培养神经干细胞, 免疫组织化学技术检测其巢蛋白的表达;并用溴脱氧尿嘧啶核苷掺入试验, 免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况;诱导神经干细胞分化, 分别用神经元特异性烯醇化酶抗体和胶质纤维酸性蛋白抗体进行免疫组织化学技术鉴定分化细胞。结果 获得大量悬浮生长的单克隆神经球, 并可以分化为神经元和星形胶质细胞。结论 成功培养的新生SD大鼠神经干细胞具有增殖、自我更新和多分化潜能, 为体外基础和临床研究奠定基础。