氟对体外培养大鼠成釉细胞 HAT-7细胞活性和对细胞内 Ca2+浓度的影响

目的:观察氟对体外培养的大鼠成釉细胞HAT-7细胞活性及细胞内Ca2+浓度的影响。方法:取对数生长期的HAT-7细胞,分别加入不同浓度的Na F培养液,培养24、48、72 h后,用CCK-8检测细胞的活性;流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响;激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子的浓度。结果:Na F浓度为0.4、0.8 mmol/L时,促进成釉细胞增殖;当Na F浓度大于1.6 mmol/L时,促进成釉细胞凋亡,Na F浓度为1.6 mmol/L时,细胞早期凋亡数量增加,激光共聚焦显微镜检测证实,1.6mmol/L Na F可以诱导大鼠成釉细胞内Ca2+浓度升高,Na F对HAT-7细胞的上述作用与浓度和作用时间呈正相关。结论:低浓度氟促进HAT-7细胞增殖,高浓度则抑制其增殖。Na F浓度超过1.6 mmol/L时,可诱导成釉细胞凋亡,并诱导成釉细胞内Ca2+浓度增加。     

不同浓度氟化物对体外培养成釉细胞活性的影响

目的建立大鼠成釉细胞原代培养技术,观察不同浓度氟化钠对成釉细胞活性的影响,为研究氟斑牙的形成提供依据。方法取10¹5 d的Wistar大鼠磨牙牙胚组织进行原代培养,通过酶消化法,分离培养成釉细胞。加入不同浓度(0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L)的氟化钠作用于成釉细胞,分别培养24、48、72 h后,采用CCK-8法检测各组细胞的活性情况。结果①当氟化物浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有促进作用,且随着时间的增加而增强。②当氟化物浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的增殖有抑制作用,随着氟化钠浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且抑制作用随着时间的延长愈发明显。结论不同浓度的氟化物对体外培养成釉细胞的活性具有促进和抑制双向作用。     

氟对大鼠成釉细胞GRP-78和caspase-12表达的影响

目的研究GRP-78和caspase-12在氟致大鼠成釉细胞内质网应激和细胞凋亡中的作用,探讨氟所介导的内质网应激是否导致细胞凋亡。方法应用CCK8和流式细胞术观察不同浓度的氟对成釉细胞活性及凋亡数量的影响,以实时定量PCR和Western印迹法检测氟对内质网伴侣分子GRP-78和caspase-12基因和蛋白表达的影响,应用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果随着氟浓度的不断增加,大鼠成釉细胞活性呈逐渐下降趋势,流式细胞术同样显示发生凋亡的细胞数量逐渐上升;实时定量RT-PCR和Western印迹结果显示,GRP-78和caspase-12的表达量随着氟浓度增加而增加。结论过量氟介导了大鼠成釉细胞内质网应激,并且通过内质网应激,引起细胞凋亡。     

过量氟诱导成釉细胞钙超载及细胞凋亡的实验研究

目的 研究过量氟对体外培养大鼠成釉细胞内钙超载及细胞凋亡的影响。方法 取大鼠成釉细胞系HAT-7细胞,分别加入不同浓度（0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol·L^-1）的氟化钠培养液,培养48 h后,采用Cell Counting Kit 8（CCK-8）试剂盒检测各组细胞的活性,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响,激光扫描共聚焦显微镜、Western blot试验和实时荧光定量聚合酶链反应技术检测过量氟诱导大鼠成釉细胞内Ca²⁺浓度和钙网蛋白表达的变化。结果 氟化钠浓度高于1.6 mmol·L^-1时,可抑制成釉细胞的活性,成釉细胞内Ca²⁺浓度升高,钙网蛋白表达上调,细胞早期凋亡数量增加,并且随着浓度的增加,细胞凋亡的数量也随之增加。结论 过量氟可引起成釉细胞内钙超载,诱导成釉细胞凋亡。     

内质网应激分子在慢性氟中毒大鼠成釉细胞中的表达

目的 研究不同浓度的氟化物对大鼠成釉细胞内质网应激分子表达的作用,探讨氟牙症形成的机制.方法 选择30只Wistar大鼠,随机分成A、B、C3组,并分别饮用氟浓度为0、75、150mg/L的自来水,8周后处死动物,并制备下颌切牙切片,通过HE染色、免疫组化、透射电镜、TUNEL检测等实验方法,观察3组大鼠成釉细胞内质网应激分子的表达及细胞凋亡情况.结果 随着氟浓度的升高,内质网应激分子GRP78 A组为阳性表达,B、C组为强阳性表达（F=27.42,P＜0.05）;XBP-1 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=139.7,P＜0.05）;Caspase-12 A组为弱阳性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=43.91,P＜0.05）;CHOP A组为阴性表达,B组为阳性表达,C组为强阳性表达（F=19.61,P＜0.05）;TUNEL检测显示氟浓度为150mg/L组成釉细胞凋亡数量显著高于75mg/L组和自来水组（F=124.02,P＜0.05）.利用MetaMorph显微图像分析软件对结果进行分析,用spss13.0软件包进行统计处理.结论 大鼠饮用高浓度的氟化水可激活内质网应激分子,导致成釉细胞产生内质网应激,并最终诱导细胞发生凋亡.     

T-2毒素对大鼠切牙成釉细胞凋亡的影响

目的:研究不同剂量T-2毒素对大鼠切牙成釉细胞凋亡的影响.方法:选择30只大鼠,随机分为3组,对照组、实验组1(100ng/gBW·d-1),实验组2(200ng/gBW·d-1).4周后处死大鼠,利用原位细胞凋亡检测技术(TUNEL)观察T-2毒素作用下大鼠切牙成釉细胞的凋亡现象.结果:T-2毒素染毒组成釉细胞凋亡率...     

不同时期成釉细胞氟损伤程度差异的动物实验研究

目的：GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达和分布,探索氟牙症发病机制。方法：选择20只Wistra大鼠,饲喂氟浓度为75mg F-/L的自来水,8周后处死,通过HE染色和免疫组化技术观察大鼠成釉细胞形态和GRP78和BCL-2在氟中毒大鼠不同时期成釉细胞中的表达。结果：GRP78在成釉细胞分泌前期和分泌期表达高于转换期和成熟期,BCL-2在分泌期和转换期表达最高,在分泌前期和成熟期表达下降,各组间具有显著统计学差异（P<0.05）.结论：分泌早期和分泌期成釉细胞对氟诱导的内质网更加敏感,而在分泌期和转换期其抗凋亡能力更强。     

过量氟对大鼠切牙成釉细胞增殖与凋亡的影响

目的　研究氟牙症的发生机制。方法　选择 2 0只Wistar大鼠 ,随机分为 2组 :Ⅰ组 (对照组 )和Ⅱ组 (5 0mg/LF-)。 8周后处死动物 ,利用磨片、HE染色、核仁形成区嗜银染色 (AgNORs)和原位细胞凋亡检测 (TUNEL)技术观察过量氟对大鼠切牙形态及机能的影响。结果　Ⅱ组大鼠切牙釉质生长线明显 ,分泌期成釉细胞嗜伊红颗粒蓄积 ,分泌前期成釉细胞AgNORs颗粒数低于Ⅰ组 ,差异有显著性 (P <0 0 0 1) ,成釉细胞凋亡增多 ,并伴有凋亡现象向分泌期迁移。结论　过量氟可抑制成釉细胞增生 ,促进成釉细胞凋亡 ,为氟牙症发生的一种机制     

氟对大鼠切牙成釉细胞MMP-20及TIMP-2表达的影响及褪黑素对氟的拮抗作用

目的:通过研究不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞基质金属蛋白酶(MMP-20)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-2)表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制,并通过比较给氟组与加褪黑素组MMP-20、TIMP-2表达的差异,探讨褪黑素是否对氟斑牙的发生有拮抗作用。方法:40只Wistar大鼠随机分为6组,分别为对照组(A)、低氟组(B)、高氟组(C)、低氟组加褪黑素组(D)、高氟组加褪黑素组(E)和对照组加生理盐水组(F),建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化染色观察不同浓度的氟及褪黑素对大鼠切牙成釉细胞的形态及MMP-20、TIMP-2表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包,分别进行图像和数据统计学分析。结果:给氟组大鼠切牙牙面出现白垩色改变,可见釉质表面横纹;成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变;MMP-20、TIMP-2在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞均有表达,MMP-20在低氟组、高氟组的表达均显著低于对照组(P﹤0.01),但低氟组和高氟组之间无显著差别;TIMP-2在对照组和高氟组的表达差异有显著性(P﹤0.01),对照组和低氟组、低氟组和高...     

人胚成釉细胞体外培养的实验研究

目的 :探索成釉细胞离体培养方法 ,建立成釉细胞体外模型。方法 :运用组织细胞培养技术分离人胚成釉细胞进行原代培养 ,倒置显微镜下观察培养细胞生长特点 ,免疫组织化学染色检测培养细胞釉原蛋白。结果 :培养细胞成片生长 ,细胞形态结构清楚。免疫组化染色 ,多数细胞抗釉原蛋白抗体染色阳性。结论 :用消化培养法 ,胶原做基质饲养层 ,含 5 %小牛血清的HAMF -12作培养基并加入EGF、INS、HC ,可用于人成釉细胞的体外培养     

短期高浓度氟对小鼠磨牙成釉细胞形态及骨形成蛋白-4表达的影响

目的:通过研究短期高浓度氟对小鼠磨牙成釉细胞形态及骨形成蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)表达的影响,探讨氟牙症形成的可能机制。方法:选择4d龄的ICR小鼠共32只,随机分为2组,每组16只,再分实验动物和对照动物各半。实验动物单次腹腔注射剂量分别为10mg/kg和20mg/kg的NaF,对照动物单次腹腔注射等剂量的NaCl,注射量均为10μl/g。24h后处死动物。采用HE染色、免疫组化染色观察高浓度氟对小鼠磨牙不同分化阶段成釉细胞形态及BMP-4的表达,采用SPSS13.0软件对数据进行分析。结果:分泌早、晚期和过渡期的成釉细胞对短期暴露高浓度F-敏感,实验动物分泌晚期和过渡期的成釉细胞中BMP-4的表达明显弱于对照动物,差异有统计学意义(P<0.01),而成熟期成釉细胞未见明显变化。结论:短期高浓度氟可抑制BMP-4在分泌晚期和过渡期成釉细胞中的表达,影响釉质发育。     

氟对大鼠切牙成釉细胞内质网伴侣分子表达的影响

目的：研究不同浓度氟化物对大鼠切牙成釉细胞的影响,探讨内质网应激在氟斑牙形成中的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。观察大鼠切牙成釉细胞的形态学和GRP78、XBP-1、CRT和caspase-12表达的改变,采用MetaMorph显微图像分析软件和SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：随着饮水氟离子浓度的升高,切牙逐渐出现氟斑牙症状。免疫组化结果显示,CRT(F=11.72,P<0.05)、GRP78(F=27.42,P<0.05)、XBP-1(F=139.7,P<0.05)、caspase-12(F=43.91,P<0.05)表达随氟离子浓度的升高而升高,且各组间均具有显著性差异。结论：成釉细胞在一定浓度的氟化物作用下,其CRT、GRP78、XBP-1和caspase-12 均过表达,表明成釉细胞处于内质网应激状态,且caspase-12是导致细胞凋亡的重要途径。     

不同浓度氟对大鼠切牙成釉细胞Smad2/3表达的影响

目的:研究不同浓度氟对大鼠切牙生长过程中成釉细胞内信号转导分子Smad2/3表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。用HE染色和免疫组化方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞形态及Smad2/3表达的影响,采用MetaMorph显微图像分析系统和SPSS12.0软件包分别进行图像和数据分析。结果:给氟组大鼠切牙出现典型氟斑牙症状。给氟组Smad2/3的表达显著低于对照组(P<0.01),但低氟组和高氟组间未见显著差异(P>0.05)。结论:过量氟可能通过抑制Smad2/3的表达来影响釉质的分化和发育,导致氟牙症的发生。     

Effect of strontium in combination with fluoride on enamel remineralization in vitro

Previous studies showed that strontium (Sr) as well as fluoride (F) can enhance enamel remineralisation. The aim of this study was to evaluate the effects of Sr in combination with F on enamel remineralisation in vitro. Sixty enamel specimens obtained from caries free human premolars were demineralised to produce caries-like lesions. Half of each lesion was covered with nail varnish as an untreated control. The specimens were then randomly divided into F and Sr + F treatment groups. The F group was exposed to remineralising solutions (1.5 mM CaCl₂, 0.9 mM KH₂PO₄) containing 1 ppm, 0.1 ppm or 0.05 ppm F. The Sr + F treatment group was exposed to the same solutions including 10 ppm Sr. After 2 weeks, lesion depth, mineral loss and percentage enamel remineralisation were determined using transversal microradiography. There was a significant decrease in mineral loss in all groups (p < 0.001). Lesion depth was significantly reduced for all groups (p < 0.05) with the exception of group F. Remineralisation was significantly affected by F concentration (p = 0.000). The participation of Sr resulted in a significant enhancement of remineralisation (p < 0.001) with a synergistic effect of the Sr + F combination (p < 0.01). It was concluded that while the remineralising process was affected by the concentration of F, there was also an interaction between F and Sr when they were used in conjunction.     

Effect of sodium,amine and stannous fluoride at the same concentration and different pH on in vitro erosion

Objective

This study aimed to compare the effects 0.5% and 1% sodium, amine and stannous fluoride at different pH on enamel erosion in vitro.

Methods

Bovine enamel samples were submitted to a cyclic de- and remineralisation for 3 days. Each day, the samples were exposed for 120 min to pooled human saliva and subsequently treated with one of the fluoride solutions for 3 min: amine fluoride (AmF, 0.5% and 1% F⁻), sodium fluoride (NaF, 0.5% and 1% F⁻), each at pH 3.9 and 7.0, and stannous fluoride (SnF₂, 0.5% and 1% F⁻), at pH: 3.9. Additionally, two groups were treated with fluoride-free placebo solutions (pH: 3.9 and 7.0) and one group served as control (no fluoridation). Ten specimens each group were inserted in a so-called artificial mouth and eroded six times daily with hydrochloric acid (pH 2.6) for 90 s each intermitted by exposure to artificial saliva (1 h). After 3 days, enamel loss was analyzed profilometrically and evaluated statistically by ANOVA.

Results

Only the acidic 0.5% and 1% SnF₂ and 1% AmF solutions were able to reduce erosive enamel loss significantly, while all other solutions and placebos did not differ significantly from the control. Between the acidic SnF₂ and the 1% AmF solutions no significant differences could be detected.

Conclusion

At the same concentrations, acidic SnF₂ and AmF may be more effective than NaF to protect enamel against erosion.