川陈皮素对哮喘大鼠内质网应激信号通路及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化的影响

目的 探讨川陈皮素(NOB)对哮喘大鼠内质网应激信号通路及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法 通过卵清蛋白诱导建立大鼠哮喘模型。将50只造模成功大鼠随机分为低、中、高剂量实验组(分别灌胃100,200和400 mg·kg^-1·d^-1 NOB)、对照组(灌胃5 mg·kg^-1·d^-1地塞米松)、模型组(灌胃等量0.9%NaCl),每组各10只;另选取10只正常大鼠为空白组(灌胃等量0.9%NaCl)。6组大鼠每天灌胃1次,连续10 d。用酶联免疫吸附试验法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,用蛋白质印迹法检测肺组织中磷酸化C-Jun氨基端激酶(p-JNK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和NLRP3的表达水平。结果 低、高剂量实验组和对照组、模型组、空白组的血清IL-1β分别为(127.25±10.07),(74.32±4.53),(75.64±4.25),(152.33±10.23)和(56.43±3.12)pg·mL...     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝脏NLRP3表达的影响

目的 研究荔枝核总黄酮(total flavones from Lychee seed, TFL)对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine, DMN)所诱发的肝脏纤维化大鼠肝脏中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)表达的影响。方法 研究将Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀组和荔枝核总黄酮高、中、低剂量组。ELISA法测定血清中羟脯氨酸、透明质酸、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原和层粘连蛋白的水平;HE染色和Masson染色观察大鼠肝脏组织的病理变化;RT-qPCR测定肝脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(thioredoxin-interacting protein, TXNIP)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteine-aspartic proteases-1,caspase-1)、白细胞介素-1β(interleulin-1β,IL-1β)的mRNA表达水平。结果 荔枝核总黄酮减轻大鼠肝...     

五味子乙素对2型糖尿病大鼠氧化应激和炎症反应的影响

目的 研究五味子乙素（schisandrin B,Sch B）对2型糖尿病大鼠氧化应激和炎症反应的影响。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素及高糖高脂饮食构建2型糖尿病大鼠模型;给药组分别给予Sch B 40,80,120 mg·kg^-1灌胃;对照组和模型组给予2 mL·d^-1生理盐水灌胃,干预8周;称重法检测大鼠体质量变化,全自动化学分析仪检测FBG、TC、TG、HDL和LDL含量,HE染色观察肾损伤,Western blotting检测肾组织caspase-3、caspase-9、Bax、p-ACC、p-AMPK和p-LKB1表达,试剂盒检测血清MDA和SOD的水平,ELISA检测IL-6、IL-1β、IL-18的含量。结果 与模型组大鼠相比,给药组大鼠体质量明显增加,FBG、TC、TG和LDL含量明显减少,HDL含量明显增多,损伤程度明显减轻,caspase-3、caspase-9和Bax的表达明显下调,MDA含量明显减少、SOD活性明显增强,IL-6、IL-1b和IL-18的含量明显减少,p-ACC、p-AMPK和p-LKB1表达明显上调（P均<0.01）。结论 Sch B能够改善2型糖尿病大鼠体质量、糖脂代谢、肾损伤、氧化应激和炎症反应,并激活糖尿病大鼠的AMPK-LKB1信号转导通路。     

炎症小体NLRP3信号通路调控机制及其小分子靶点抑制剂的研究进展

炎症反应是机体常见的生理、病理活动,炎症小体在该反应中发挥重要调控作用。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3,NLRP3）是炎症小体中关键的调控蛋白之一。研究发现激活NLRP3的刺激因子及其相关分子调控信号通路与多种疾病的发生、发展密切相关,并越来越受到广泛关注,是临床药物研究开发的前沿热点方向。总结NLRP3炎症小体的生物结构、调控功能、信号通路和作用机制等研究进展,并梳理与其相关靶点抑制剂的研究结果,对开展炎症相关疾病的新靶标药物发现及其临床应用研究具有重要的参考价值。     

丹参提取物改善大鼠重症急性胰腺炎肺损伤模型的ROS-NLRP3炎症小体信号通路机制

摘 要 目的：探讨活性氧簇（ROS） 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体信号通路在丹参提取物改善急性胰腺炎肺损伤大鼠的作用机制。 方法: 60只SD大鼠随机分组5组：假手术组、模型组、丹参提取物（1.5 g·kg-1）组、ROS抑制剂组[N 乙酰 L 半胱氨酸（NAC）,20 mg·kg-1]、丹参提取物+NAC组（1.5 g·kg-1＋20 mg·kg-1）,每组12只。以逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠（1 ml·kg-1）法建立急性胰腺炎肺损伤大鼠模型,各组灌胃给药,模型组和假手术组给予等量生理盐水,qd,持续5 d。处死大鼠,测量腹水量、右肺干质量、右肺湿质量,计算湿质量/干质量（W/D）比值,采用苏木精 伊红（HE）染色法对大鼠肺组织病理症状进行Holfbauer评分,以全自动血气分析检测仪检测动脉血中氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）、氧合指数（OI）,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子 α（TNF α）、白介素 6（IL 6）水平,ROS检测试剂盒检测肺组织中ROS水平,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测NLRP3、半胱氨酸蛋白酶 1（caspase 1）、凋亡相关的斑点样蛋白（ASC）表达。 结果: 与假手术组比较,模型组大鼠腹水量、W/D比值、Holfbauer评分、PaCO2、TNF α、IL 6、ROS水平、NLRP3、caspase 1、ASC蛋白表达显著升高（P＜0.05）,PaO2、OI显著降低（P＜0.05）;与模型组比较,各药物处理组大鼠腹水量、W/D、Holfbauer评分、PaCO2、TNF α、IL 6、ROS水平、NLRP3、caspase 1、ASC蛋白表达显著降低（P＜0.05）,PaO2、OI显著升高（P＜0.05）;与丹参提取物组及NAC组分别比较,丹参提取物+NAC组大鼠腹水量、W/D、Holfbauer评分、PaCO2、TNF α、IL 6、ROS水平、NLRP3、caspase 1、ASC蛋白表达均显著降低（P＜0.05）,PaO2、OI显著升高（P＜0.05）。结论: 丹参提取物可以保护急性胰腺炎肺损伤大鼠的肺组织,可能通过下调ROS-NLRP3炎症小体信号实现。     

五味子乙素对M146L细胞分泌β淀粉样蛋白的影响

目的:探讨五味子乙素对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白(amyloid β-protein,Aβ)的影响。方法:体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病β淀粉样前体蛋白(Amyloid beta-protein precursor,APP)基因及突变型早老素1(prsenilin-1,PS1)基因的CHO(Chinese Hamster Ovary)细胞系(M146L),使之高效产生β淀粉样蛋白42(amyloid β-protein,Aβ_(42)),建立Aβ_(42)过度表达的细胞模型。加入待筛选的药物五味子乙素,用四甲基偶氮唑蓝比色法(microculture tetrazolium assay,MTT法)检测不同浓度的五味子乙素(1.67,5,15μg·mL~(-1))对M146L细胞毒作用,应用ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay)观察细胞分泌的Aβ_(42)的变化。结果:不同浓度的五味子乙素对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用。5和15μg·mL~(-1)的五味子乙素对细胞分泌的Aβ_(42)有抑制作用,以高剂量组最为明显。结论:一定剂量的五味子乙素对M146L细胞分泌的Aβ_(42)有明显的抑制作用。     

间充质干细胞介导NLRP3/Caspase-1通路对骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的 探讨与分析间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-binding oligomeric domain-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Cysteinerequiring aspartate protease-1,Caspase-1)通路对骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法 将骨关节炎模型大鼠42只随机分为3组：模型组、地塞米松组与MSCs组,每组14只。模型组给予生理盐水5mL/kg灌胃,每周2次;地塞米松组给予肌肉注射20mg/kg地塞米松约200μL,每周2次;MSCs组给予MSCs注射治疗,每周2次。3组分别在治疗第4周、治疗第8周各处死7只大鼠,检测软骨细胞凋亡情况。结果 地塞米松组与MSCs组治疗第4周、第8周的血清碱性磷酸酶（ALP）含量、软骨细胞凋亡指数水平、软骨组织NLRP3和Caspase-1蛋白相对表达水平均低于模型组（P<0.05）,且MSCs组低于地塞米松组（P<0.05）。地塞米松组与...     

五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠海马突触相关蛋白表达的影响

目的 研究五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力及突触相关蛋白表达的影响.方法 连续用白酒以灌胃的方式建立动物慢性酒精中毒模型,随机将中毒模型制备成功后的大鼠分为模型组和低、中、高剂量实验组,每组均8只;另取8只正常大鼠作为空白组.低、中、高剂量实验组分别按10,20,40 mg·kg-1的剂量给予0.01 g·mL...     

辣椒素对脑缺血再灌注损伤大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体表达的影响

目的 探讨辣椒素对脑缺血再灌注损伤大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体表达及下游炎性通路激活的影响.方法 用大脑中动脉闭塞法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型.将24只大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组8只.实验组术前3 h给予腹腔注射辣椒素0.2 mg·kg-1;模型组和假手术组术前3 h腹...     

NLRP3炎性小体在抑郁症中应用的研究进展

抑郁症是一种多因素引起的进展性情绪障碍,机制较为复杂.近年来,细胞因子学说受到越来越多学者的关注,抗炎治疗也逐渐成为抑郁症防治新的研究方向,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体是目前研究的较为深入的炎性小体之一.该文就核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在抑郁症中应用的现有进展进行了综述.     

NOD2和Toll样受体1在哮喘大鼠中的表达及布地奈德对其的影响

目的:观察核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)和Toll样受体1(TLR1)在哮喘大鼠中的表达及布地奈德对其的影响,探讨模式识别受体在哮喘炎症过程中的可能作用机制。方法:采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组和布地奈德组,免疫组织化学法检测肺组织NOD2的表达,流式细胞术检测血中性粒细胞(NEU)TLR1的表达。结果:哮喘组(0.148±0.009,OD值)肺组织NOD2的光密度值显著低于对照组(0.157±0.006,OD值)(P<0.05);布地奈德组(0.149±0.008,OD值)肺组织NOD2的光密度值分别与哮喘组、对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05)。哮喘组和布地奈德组(分别为74.07±6.26和78.54±4.65,OD值)NEU TLR1的平均荧光强度均显著性低于对照组(84.37±4.96,OD值)(分别为P<0.01、P<0.05);布地奈德组NEU TLR1的平均荧光强度与哮喘组相比差异无统计学意义(P>0.05)。TLR1与NOD2的表达水平呈显著正相关(n=2 6,r=0.780,P<0.01)。结论:哮喘大鼠NOD2和TLR1的表达水平下降,布地奈德可能对NOD2和TLR1的上调作用较弱,模式识别受体可能参与了哮喘的炎症过程。     

胞质蛋白NOD2重组腺病毒载体的构建

目的构建人NOD2腺病毒表达载体。方法采用分子克隆技术,从CoCa2细胞DNA中PCR扩增NOD2片段,经pcDNA3．1克隆到穿梭质粒pShuttle—CMV,以KpnⅠ和NotⅠ双酶切重组穿梭质粒,经电穿孔、抗性筛选,重组成pAdCMV-NOD2腺病毒质粒,经酶切鉴定正确后,在HEK293细胞中包装成为重组rvAdCMV-NOD2腺病毒,并进行PCR鉴定测定。结果成功扩增目的基因并鉴定,重组穿梭质粒pShuttle-CMV-NOD2鉴定,经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功。结论腺病毒载体应用广泛,细菌体内同源重组腺病毒pAdCMV-NOD2合成效率高,为炎症的基因治疗研究奠定基础。     

NLRP3炎性小体通路活化对足细胞迁移及骨架重构的影响

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体通路对足细胞迁移及骨架重构的调控作用。方法 将人足细胞分为空白组、正常对照(IgG)组、狼疮肾炎(LN)患者IgG组和MCC950+LN患者IgG组。空白组加入等量PBS,正常对照IgG组加入10 mg·L^-1正常对照者IgG,LN患者IgG组加入10 mg·L^-1 LN患者IgG,MCC950+LN患者IgG组用1μmol·L^-1 NLRP3阻滞药MCC950预处理1 h后加入10 mg·L^-1 LN患者IgG。以蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞NLRP3炎性小体通路蛋白表达水平;以划痕实验、Transwell检测细胞迁移能力;以黏附实验检测细胞黏附能力。结果 空白组、正常对照IgG组、LN患者IgG组、MCC950+LN患者IgG组细胞NLRP3/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)蛋白相对表达水平分别为0.30±0.33、0.92±0.24、1.08±0.15和0.65±0.21;Caspase1 p2...     

五味子乙素对慢性铝中毒大鼠海马突触超微结构的影响

目的 研究五味子乙素对慢性铝中毒大鼠海马突触超微结构及学习与记忆功能的影响.方法 用AlCl3水溶液拌入饲料中连续喂养大鼠建立慢性铝中毒模型.按照随机分组方法,将慢性铝中毒动物模型的大鼠分为5组:模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组.阳性对照组用吡拉西坦按40 mg·kg-1灌胃给药;低、中、高3个剂量实验组用...     

丙泊酚对缺氧复氧的肠上皮细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及凋亡的影响

目的:探讨丙泊酚处理对缺氧复氧的肠上皮细胞活性氧(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)通路及凋亡的影响.方法:对人肠上皮HIEC细胞进行培养,并进行缺氧复氧处理;通过不同浓度(25,50,100μmol·L-1)丙泊酚对缺氧复氧HIEC细胞进行处...     

NLRP1信号通路在心房颤动发病机制中的作用

目的:探索核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎症小体信号通路相关蛋白表达与心房颤动(AF)发病的关联性.方法:选取某院收治的房颤患者(AF)40例,其中阵发性房颤(PAF)和非阵发性房颤(nPAF)各20例,另选20例病史和体检均无AF证据的体检者作为对照组(CON组).通过磁珠分选、实时定量PCR、We...     

达格列净激活自噬并抑制活性氧-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路发挥抗动脉粥样硬化的研究

目的 探究达格列净激活自噬并抑制活性氧(ROS)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路发挥抗动脉粥样硬化(AS)的作用。方法 将30只SD雄性大鼠分为正常组、模型组和实验组。模型组与实验组喂养高脂饲料16周诱导AS。AS建模成功后,实验组予以达格列净(3 mg·kg^-1)灌胃干预4周,正常组及模型组则灌胃等量的0.9%NaCl干预4周。用酶联免疫吸附试验法检测大鼠血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、ROS和白细胞介素1β(IL-1β),用蛋白质印迹法检测腹主动脉的微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、选择性自噬接头蛋白(p62)和NLRP3蛋白的表达水平。结果 实验组、模型组和正常组的血清ox-LDL含量分别为(381.56±108.08)、(640.89±181.06)和(360.19±102.65)pg·mL^-1,血清ROS含量分别为(8.01±1.39)、(15.47±2.65)和(7.89±1.07)ng·mL^-1,血清IL-1β含量分别为(84.18±37.90)、(141.44±88.05)和...