miR-181a对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响

目的研究与唾液腺腺样囊性癌（SACC）侵袭转移相关的微小RNA（miRNA）,探讨miR-181a对SACC侵袭和迁移的影响。方法选择1对不同侵袭迁移能力的SACC细胞株（SACC-LM/SACC-83）,采用miRNA芯片技术分析细胞株中miRNA的表达差异,初步筛选出与SACC侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a的表达,进行细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学处理,以P〈0.05为差异具有统计学意义。结果 miRNA芯片结果显示,高侵袭迁移能力的SACC细胞株miR-181a表达明显下降。细胞划痕和Transwell实验结果表明,SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后体外侵袭迁移能力明显受到抑制（t=-5.235,P〈0.05）;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后体外侵袭迁移能力有所提高（t=7.713,P〈0.05）。结论不同侵袭迁移能力的SACC细胞株中存在多种miRNA的差异表达。miR-181a的表达降低可能导致SACC细胞侵袭迁移能力的增强。     

miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移

目的 研究miR-181a靶向SLUG抑制涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.方法 利用生物信息学软件预测出侵袭转移相关基因SLUG为miR-181a的候选靶基因.利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-181a对靶基因SLUG的直接调控作用.在SACC-LM细胞中沉默SLUG后通过细胞划痕和Transwell实验检测转染后细胞侵袭迁移能力的改变.结果 生物信息学软件预测发现,SLUG mRNA序列中包含miR-181a的结合位点.双荧光素酶报告基因实验证实,与对照组相比,miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-3' UTR共转染组细胞内荧光素酶活性明显下降(P＜0.05),而miR-18la mimics与psi-CHECK-2-SLUG-mut-3'UTR共转染组细胞内荧光素酶活性无明显变化(P＞0.05),即SLUG为miR-18la的靶基因.转染SLUG siRNA可成功沉默SACC-LM细胞中内源性表达的SLUG,同时细胞的侵袭迁移能力明显下降(P＜0.05).结论 SLUG为miR-181a的靶基因.miR-181a可靶向调控SLUG,从而调控涎腺腺样囊性癌的侵袭和迁移.     

miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究

目的 探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用。方法 利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平。过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变。Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达。通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞。SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平升高。裸鼠肺转移模型miR-181a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组（P<0.05）。结论 miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移。     

吴茱萸碱抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖的实验研究

目的:研究吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响。方法:用终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/ml的吴茱萸碱处理ACC-M 24、48、72 h后,应用MTT比色试验、倒置显微镜、Giemsa染色、Annexin-V-FITC和流式细胞仪检测和观察ACC-M的生长抑制率和凋亡情况。结果:吴茱萸碱(1μg/ml以上)对ACC-M细胞具有时间-浓度依赖性生长抑制作用,最大生长抑制率可达89%。吴茱萸碱可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异。吴茱萸碱同时可引起ACC-M细胞坏死。结论:吴茱萸碱可以诱导细胞凋亡和/或坏死,从而抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖。     

姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响

目的体外研究姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和凋亡的影响。方法用终浓度为2.5、5、10、15、20mg/L的姜黄素处理SACC-83。应用MTT比色试验,倒置显微镜,Giemsa染色,Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞后流式细胞仪和透射电镜检测和观察SACC-83的生长抑制率和细胞凋亡情况。结果姜黄素对SACC-83的生长抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性（P〈0.01）。用药组细胞明显凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升,各组间有显著差异（P〈0.01）。结论姜黄素具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。     

三氧化二砷诱导涎腺腺样囊性癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对人涎腺腺样囊性(SACC)细胞的作用机制,寻找治疗SACC的新途径.方法 应用As2O3对SACC细胞株作用,以 MTT、软琼脂集落形成和形态学分析法观察细胞的变化.结果 三氧化二砷作用后,癌细胞异形性逐渐消失,细胞凋亡现象明显,可见凋亡小体.结论 As2O3对SACC细胞株具有显著的抑制增殖、诱导分化和促进凋亡作用.     

肺高转移性涎腺腺样囊性癌细胞株的筛选

为了筛选出具有肺高转移性的克隆株，为涎腺腺样囊性癌肺转移提供实验基础。作者通过５次连续裸鼠体内传代，结合体外克隆技术、血小板凝集能力分析，从Ａｃｃ－２细胞系中筛选出肺高转移性腺样囊性癌细胞株——Ｍ－５ｃｌｏｎｅ２４，命名为Ａｃｃ－Ｍ。其转移能力与Ａｃｃ－２相比有明显增强，转移率由１８％提高至９６％（Ｐ＜０．００１），转移灶肺重量由０．３１ｇ提高至０．８８ｇ（Ｐ＜０．０１）；细胞使血小板凝集能力与转移率（ｒ１＝０．８９）、转移灶肺重量（ｒ２＝０．８５）呈高度相关。本研究提示，血小板凝集能力可作为判断涎腺腺样囊性癌细胞转移能力的一个指标     

涎腺腺样囊性癌细胞生物学特性的探讨

一、材料和方法1.材料 :将正常涎腺 2 3例和腺样囊性癌 (ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＡＣＣ) 2 6例常规 10 %甲醛固定 ,石蜡包埋并切成4μｍ厚 切片以备ＨＥ染色和免疫组化染色。单克隆和多克隆抗体Ｓ 10 0Ａ1、Ｓ 10 0Ａ2、Ｓ 10 0Ａ4、Ｓ 10 0Ａ6和Ｓ 10 0Ｂ均由瑞士的Ｚｕｒｉｃｈ大学的ＣＷＨｅｉｚｍａｎｎ教授馈赠。其余的抗体来源如下 :ＧＦＡＰ6Ｆ 2 (ＭｏＡｂ) ,ＧＦＡＰ(ＰｏＡｂ ) ,ＮＳＥ(ＭｏＡｂ) ,ｖｉｍｅｎｔｉｎ(ＭｏＡｂ) ,ＥＭＡ (ＭｏＡｂ)和ＣＥＡ (ＰｏＡｂ)购自Ｄａｋｏ,Ｄｅｎｍａｒｋ。ＧＦＡ…     

微小RNA-181a及其在恶性肿瘤中的作用

微小RNA(miRNA)是一类非蛋白质编码的小分子RNA,参与调控不同基因的表达,对癌细胞的侵袭和转移有着十分重要的影响。miRNA-181a(miR-181a)参与调控细胞的分化和免疫以及肿瘤的发生发展及预后等。本文就miR-181a的结构和功能,miR-181a在其他恶性肿瘤发病中的作用,miR-181a在口腔鳞状细胞癌发病中的作用等研究进展作一综述,以期为进一步研究miR-181a提供帮助。     

涎腺腺样囊性癌细胞对抗癌药物敏感性的研究

目的 检测涎腺腺样囊性癌对抗癌药物的敏感程度。方法 采用ＭＴＴ法测试了１４种抗癌药物对ＳＡＣＣ－８３、ＡＣＣ－２和ＡＣＣ－Ｍ等３个体外培养的涎腺腺样囊性癌细胞株的杀伤作用强度。结果 ３种细胞株对１４种药物的敏感性大体相似而又有差别,在抗代谢类抗肿瘤药物中,对ＭＴＸ、ＤＮＡ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＭＭＣ的敏感性较强,在植物来源的抗癌药物中,对Ｔａｘｏｌ有明显的敏感性。结论 药物敏感性测定对临床选用有效的     

RD抗涎腺腺样囊性癌细胞转移的体外实验研究

目的　研究精氨酸 天冬氨酸 (RD)抗涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)转移的作用。方法　MTT法测定RD对SACC LM与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原粘连的影响 ,用改良Boydenchamber方法观察RD对SACC细胞人工重组基底膜侵袭以及趋化运动能力的作用。结果　RD在 5mg/L时能抑制SACC LM与细胞及纤维粘连蛋白的粘附 ,而对SACC LM与层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附无明显作用。RD在 1、5、2 5mg/L时能明显抑制SACC LM对人工基底膜的侵袭。RD在2 5mg/L时能抑制SACC LM的趋化运动。结论　体外实验表明RD有抗SACC转移的作用     

蛋白多糖与涎腺腺样囊性癌增殖的关系

目的 探讨蛋白多糖(proteoglycans)合成的阻抑对人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖的影响.方法 构建靶向人木糖基转移酶-Ⅰ(xylosyltransferase-Ⅰ,XT-Ⅰ)基因的短发卡状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体shRNA-WJ3,转染人涎腺腺样囊性癌高转移株ACC-M细胞,通过G418筛选稳定转染的细胞,采用实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法测定shRNA-WJ3的基因沉默效果;检测各组细胞蛋白多糖合成分泌水平的变化.采用甲基噻唑基四唑法(MTT)检测细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞周期改变.结果 shRNA-WJ3转染ACC-M细胞后,细胞中XT-I基因的mRNA和蛋白表达抑制率分别为83.70%和79.60%;稳定转染shRNA-WJ3的ACC-M-WJ3细胞蛋白多糖分泌显著降低(P<0.01),抑制率为49.71%～54.59%.MTT法检测结果表明:蛋白多糖合成阻抑后,ACC-M细胞增殖活性明显降低;ACC-M-WJ3细胞与对照组细胞相比:S期细胞数目减少;G_1～G_0期细胞数目增加,差异有统计学意义(P<0.01).结论 蛋白多糖合成分泌的阻抑能有效抑制ACC-M细胞的增殖.     

NDRG2对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭的影响

目的:探讨NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其对SACC-LM细胞增殖、侵袭的影响。方法:采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析唾液腺腺样囊性癌组织及癌旁组织样本中NDRG2的表达,采用RNA干扰技术降低腺样囊性癌细胞SACC-LM中NDRG2基因的表达,利用CCK-8实验及集落形成实验检测细胞增殖能力的变化,利用划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的变化,利用Western 免疫印迹实验检测侵袭标志蛋白以及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。采用SPSS 17.0软件包进行数据处理。结果:NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达低于癌旁组织（P=0.017）。在降低NDRG2基因的表达后,SACC-LM细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著增强（P<0.05）,侵袭标志蛋白MMP2表达量显著升高（P=0.0004）,上皮标志物E-Caherin表达量显著降低（P=0.0229）,间充质标志物N-Cadherin表达量显著升高（P=0.0009）。结论:NDRG2基因在腺样囊性癌中低表达,降低NDRG2的表达可增强SACC-LM的增殖、迁移及侵袭能力。     

涎腺腺样囊性癌细胞系中DNA甲基化研究

目的探讨涎腺腺样囊性癌（adenoidcysticcarcinoma，ACC）细胞系中抑癌基因甲基化状况及其与mRNA、蛋白表达之间的关系。方法甲基化特异性PCR法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中E-钙黏着蛋白（E-cadherin，E-cad）、p16、RASSFlA、DAPK、MGMT基因启动子区的甲基化状况。应用RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测E-cad、p16在mRNA和蛋白水平的表达。结果3个ACC细胞系中均检测到E-cad、p16基因的甲基化，而没有RASSFlA、DAPK、MGMT基因的甲基化；mRNA和蛋白水平均未检测到E-cad的表达，均检测到p16的表达。结论ACC细胞系中，E-cad、p16基因启动子区的甲基化是常见事件，甲基化可能是E-cad基因失活的主要机制之一。     

组织蛋白酶D在涎腺腺样囊性癌表达的研究

目的 探讨组织蛋白酶Ｄ（ｃａｔｈｅｐｓｉｎ－Ｄ,Ｃａｔｈ－Ｄ）与涎腺腺样囊性癌（ＳＡＣＣ）预后的关系。方法 采用免疫组织化学链亲和素法分析５２例ＳＡＣＣ的Ｃａｔｈ－Ｄ表达,并统计学分析Ｃａｔｈ－Ｄ与ＳＡＣＣ病理学分型、临床分期、局部复发、远处转移和患者生存率的关系。结果 Ｃａｔｈ－Ｄ表达与ＳＡＣＣ病理学分型、局部复发和患者生存率无明显相关（Ｐ〉０．０５）,而与临床分期和远处转移呈正相关关系（Ｐ〈０     

miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的：探讨miR-21对人唾液腺腺样囊性癌细胞株(SACC-LM)增殖、凋亡的影响及其相关作用机制。方法：将SACC-LM细胞分为 3 组,采用LipofectamineTM2000做瞬时转染。干扰组转染miR-21 inhibitor,阴性对照组转染无关核苷酸序列,空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-21和PDCD4、Bcl-2 mRNA的表达水平。以CCK8法检测转染24、48、72、96 h后细胞的增殖活性,Annexin-V/PI 双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Western免疫印迹检测转染后靶蛋白 PDCD4、Bcl-2的表达量。采用 SPSS 16.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果：转染miR-21 inhibitor的细胞中miR-21、Bcl-2表达下调（P＜0.01）,而PDCD4基因表达上调（P<0.05）。CCK8检测结果表明,miR-21表达下调可以明显抑制SACC-LM细胞的增殖活性,并呈时间依赖性（P<0.05）。流式细胞术检测结果表明,干扰组细胞凋亡率显著高于阴性对照组和空白组（P<0.05）;Western 免疫印迹结果显示, PDCD4蛋白的表达较对照组显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论：下调miR-21的表达可抑制SACC-LM细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞内PDCD4表达上调,Bcl-2表达下调有关。