葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖研究

目的 探讨葛根素(puerarin)对人子宫颈癌细胞株HeLa的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制.方法 MTT法检测不同浓度葛根素(0,12.5,25,50)处理48 h对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞术检测葛根素对HeLa细胞凋亡的影响.Western blotting 检测葛根素对HeLa细胞Wnt,β-catenin ,Bax,Bcl-2,p53和p21表达水平影响.结果 葛根素对 HeLa细胞增殖有明显的抑制作用,呈明显的剂量-效应依赖性;葛根素明显促进HeLa细胞凋亡;Western blotting检测显示,经葛根素处理72 h后,Wnt,β-catenin ,Bcl-2,p53和p21表达明显下降,呈浓度依赖性.结论 葛根素可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡, 其作用机制与抑制Wnt/β-catenin 信号通路相关.     

银莲花素A对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究银莲花素A(RA)对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡及β-连环蛋白(β-catenin)/c-Myc通路的影响。方法 体外培养人结肠癌HCT116细胞,将细胞分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用5、10和20μmol·L^-1 RA处理细胞。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测RA对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用;用荧光显微镜观察细胞核的形态学改变;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白质印迹法检测细胞β-catenin/c-Myc信号通路相关蛋白的表达情况。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为0、(19.15±0.65)%、(35.11±0.40)%和(49.93±1.13)%,细胞凋亡率分别为(0.16±0.18)%、(9.26±0.42)%、(17.87±2.54)%和(38.10±2.70)%,β-catenin蛋白相对表达水平分别为0.74±0.03、0.69±0.01、0.33±0.02和0.16±0.04,c-Myc蛋白相对表达水平分别为0.89±0.01、0.54±0.03、0.29±0.03和0.1...     

夏枯草对宫颈癌细胞增殖、侵袭及上皮间质转化的影响北大核心CSCD

目的研究夏枯草通过调控微小RNA-34b对宫颈癌细胞增殖、侵袭以及上皮间质转化(EMT)的影响。方法取宫颈癌HeLa细胞,将其随机分为对照组(等量生理盐水处理)和实验组(40μg·mL^(-1)夏枯草处理)。干预48 h后,用噻唑蓝(MTT)法检测各组宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制率;用Transwell实验检测各组宫颈癌HeLa细胞的侵袭能力;用蛋白质印迹(Western blot)法检测各组宫颈癌HeLa细胞EMT相关蛋白[E-钙黏附蛋白(E-cadherin),N-钙黏附蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)以及转录因子Twist]的表达水平;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各组宫颈癌HeLa细胞中miR-34b的表达水平。结果对照组和实验组72 h细胞增殖抑制率为0和(37.74±3.57)%;细胞侵袭数目分别为(127.17±10.97)和(83.35±7.13)个;E-cadherin的表达水平分别为1.01±0.05,1.57±0.06;N-cadherin的表达水平分别为1.00±0.04,0.56±0.06;Vimentin的表达水平分别为0.99±0.04,0.46±0.04;Twist的表达水平分别为1.00±0.06,0.54±0.04;miR-34b的表达水平分别为0.54±0.03,0.75±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论夏枯草可显著抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭以及EMT,其作用机制可能与上调宫颈癌HeLa细胞内miR-34b的表达相关。     

白细胞介素 -18抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)通过调控Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路影响肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制.方法 培养肝癌细胞株HepG2、Bel-7402与正常肝细胞株L02,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测细胞IL-18 mRNA及蛋白表达.预实验中筛选出HepG2细胞为实验细胞,分别转染pcDNA、pcDNA-IL-18,Western blotting验证转染效率.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)与膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色实验分别检测HepG2细胞增殖及凋亡情况.qRT-PCR与Western blotting分别检测HepG2细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平.HepG2细胞中转染IL-18过表达质粒后再加入Wnt/β-catenin通路激活剂(SKL2001),并检测其对HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 与L02细胞相比,肝癌HepG2、Bel-7402细胞中IL-18 mRNA及蛋白表达均显著降低[(1.02±0.12)比(0.39±0.09)/(0.45±0.12);(0.41±0.14)比(0.11±0.13)/(0.19±0.14)](P<0.05);IL-18过表达后HepG2细胞吸光度[24 h(0.31±0.10)比(0.27±0.13);48 h(0.63±0.12)比(0.39±0.14);72 h(0.98±0.18)比(0.54±0.15)]、Bcl-2及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平均明显低于pcDNA组,而细胞凋亡率[(6.93±0.22)％比(20.54±3.97)％]及Bax蛋白表达水平均明显升高;SKL2001可激活Wnt/β-catenin信号通路进而逆转IL-18对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的促进作用.结论 IL-18可下调肝癌细胞β-catenin表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路进而减弱肝癌细胞增殖能力并提高细胞凋亡水平.     

富含亮氨酸重复序列的 G蛋白偶联受体 6通过 Wnt/β-连环蛋白通路对结肠癌 SW480细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体6(LGR6)对人结肠癌SW480细胞增殖和侵袭的作用及机制.方法 在结肠癌细胞株SW480细胞中构建低表达LGR6的实验组、阴性对照组和空白对照组,用实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)验证LGR6 mRNA和蛋白的表达水平.用MTT法检测细胞增殖活性,用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,用Western Blot检测Wnt/β-连环蛋白(βcatenin)信号通路相关蛋白表达水平.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组LGR6 mRNA表达水平分别为(0.42±0.08)、(1.12±0.08)、(1.13±0.31),转染LGR6 siRNA的SW480细胞LGR6 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);转染后24、48、72 h时实验组细胞增殖活性[(0.24±0.04)、(0.27±0.06)、(0.45±0.08)、(0.63±0.09)]显著低于阴性对照组[(0.22±0.03)、(0.40±0.05)、(0.92±0.07)、(1.32±0.11)]和空白对照组[(0.26±0.04)、(0.42±0.07)、(0.94±0.09)、(1.21±0.12),均P<0.05].下调LGR6表达可促进结肠癌细胞Bax和Cleaved caspase 3蛋白的表达,并抑制结肠癌细胞βcatenin和c-Myc蛋白的表达(均P<0.05).结论 下调LGR6可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌SW480细胞的增殖和侵袭,并促进结肠癌SW480细胞的凋亡.     

dalbinol通过ROS/Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用;利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡率和ROS水平;通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μmol·L-1;Hoechst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化,同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率,且能增加细胞内ROS水平;Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达,从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解,进而诱导细胞凋亡;此外,dalbinol通过抑制Dvl-2和GSK3β(p S9)的蛋白表达,从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达,但胞质β-catenin无明显变化,最终下调Wnt/β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达水平。结论dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

三七皂苷R1对CD34^+人急性髓系白血病细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响北大核心CSCD

目的研究三七皂苷R1对CD34^+人急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及对线粒体相关通路的影响。方法将CD34^+AML细胞Kasu-mi-1分为对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别用10,20,40μmol·L^(-1)三七皂苷R1处理,对照组加等量生理盐水处理。分别用溴化四唑蓝(MTT)法、JC-1染色法检测细胞增殖及细胞线粒体膜电位,用蛋白免疫印迹法测定细胞中线粒体通路相关蛋白表达。结果培养12,24,36,48 h后,实验组细胞存活率明显低于对照组(P<0.05),且随三七皂苷R1浓度的升高细胞存活率逐渐降低(P<0.05)。低、中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较对照组降低(均P<0.05);中、高剂量实验组细胞线粒体膜电位较低剂量实验组降低(均P<0.05)。对照组和低、中、高剂量实验组Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.96±0.15,0.67±0.22,0.41±0.12,0.22±0.09,Bcl-2相关X蛋白(Bax)相对表达量分别为0.72±0.26,1.33±0.35,1.71±0.39,2.09±0.53,低、中、高剂量实验组细胞Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组(均P<0.05),实验组随三七皂苷R1浓度的升高Bcl-2蛋白相对表达量逐渐降低,Bax蛋白相对表达量逐渐升高(P<0.05)。结论三七皂苷R1可抑制CD34^+人AML细胞增殖,可能是通过激活线粒体通路促进细胞凋亡而发挥作用的。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

熊果酸诱导人急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的作用及机制。方法用不同浓度的熊果酸处理对数生长期的U937细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测Wnt、β-catenin、p53、Bcl-2、Bax表达,以及细胞浆凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素蛋白C(CytC)蛋白表达。结果熊果酸呈浓度依赖性诱导U937细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和细胞浆AIF、CytC表达,下调Wnt、β-catenin、p53及Bcl-2表达。结论熊果酸对U937白血病细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能为抑制Wnt/β-catenin/p53信号途径促发白血病细胞死亡。     

过表达蛋白LATS1对宫颈癌细胞增殖和凋亡能力的影响

目的：观察过表达蛋白LATSl（Large tumorsuppressor l）对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法购买已包装好的LATS1病毒上清和空载病毒上清,分别感染宫颈癌HeLa细胞并用Western blot检测LATS1的表达,建立稳定表达LATS1的HeLa细胞,然后通过MTT法检测过表达LATS1对增殖能力的变化;凋亡实验检测过表达LATS1对宫颈癌细胞凋亡的影响;Western blot检测过表达LATS1对与细胞增殖和凋亡相关蛋白的影响。结果成功建立稳定表达宫颈癌细胞,West－ern blot检测结果表明,与空质粒对照相比,处理组细胞LATSl蛋白明显表达升高, MTT实验结果表明过表达蛋白LATSl明显抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,凋亡实验结果表明过表达LATSl后凋亡比率为（5.12±0.36）%,空白组为（1.34±0.51）%,两组差异有统计学意义（P＜0.05）,Western blot实验表明p-Akt、Bcl-2蛋白明显下调,Bax蛋白明显上调。结论过表达蛋白LATSl可明显抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和促进凋亡。     

防己诺林碱对宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制研究北大核心CSCD

目的探索防己诺林碱(FAN)对宫颈癌He La细胞的作用及分子机制。方法人宫颈癌He La细胞随机分为空白组(0μmol·L^(-1)FAN)和低、高剂量实验组(7.5,15μmol·L^(-1)FAN)。通过CCK-8法、细胞划痕和Transwell检测FAN对宫颈癌He La细胞增殖、迁移和侵袭的影响,采用流式细胞术检测FAN对细胞周期和凋亡的作用。用Western Blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),P27,P53,B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl2),细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达。结果FAN对宫颈癌He La细胞有明显抑制作用,呈现浓度和时间依赖关系(P<0.05)。给药48 h后,空白组、低、高剂量实验组划痕愈合率分别为(48.10±5.19)%,(22.68±3.36)%,(12.31±2.79)%;侵袭细胞数量分别为(248.60±33.34),(186.60±24.58),(53.00±13.04)个。给药24 h后,空白组、低、高剂量实验组G0/G1期细胞比例分别为(68.67±2.32)%,(77.43±3.51)%,(85.90±1.31)%;细胞凋亡率分别为(4.07±0.40)%,(5.48±1.36)%,(10.25±1.88)%;Cyclin D1蛋白相对表达量分别为0.75±0.07,0.45±0.07,0.20±0.03;P27蛋白相对表达量分别为0.01±0.00,0.17±0.02,0.55±0.04;P53蛋白相对表达量分别为0.08±0.01,0.12±0.03,0.34±0.08;Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.40±0.03,0.17±0.02,0.06±0.01;p-ERK蛋白相对表达量分别为0.61±0.03,0.34±0.03,0.15±0.04;低、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论FAN能抑制宫颈癌He La细胞的增殖、迁移及侵袭能力,同时阻滞细胞周期并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路有关。     

蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制研究

目的观察蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,探讨其诱导凋亡的机制。方法采用体外细胞培养方法,以不同浓度蓝萼甲素作用于HeLa细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的存活率;透射电镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪(AnnexinV-FITC)检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。结果与对照组相比,蓝萼甲素对HeLa细胞有增殖抑制作用,呈剂量、时间依赖趋势;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调。结论蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其分子机制可能与线粒体信号通路有关。     

miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响以及对Bcl-2表达的调节

目的研究miR-143对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,探讨miR-143对宫颈癌HeLa细胞系Bcl-2蛋白及mRNA表达的调节作用。方法将miR-143,anti-miR-143以及microRNA空对照高表达质粒用脂质体转染进宫颈癌He-La细胞中,MTT法检测宫颈癌HeLa细胞增殖的变化,His-tone/DNA ELISA检测细胞凋亡;Western blot和RT-PCR检测Bcl-2蛋白和mRNA的表达情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-143的靶位点。结果 MiR-143抑制HeLa细胞的增殖,促进细胞凋亡,而anti-miR-143促进HeLa细胞增殖,抑制细胞凋亡;高表达的miR-143抑制Bcl-2蛋白的表达,anti-miR-143增加Bcl-2蛋白的表达量,而Bcl-2 mRNA的变化很小;miR-143抑制Bcl-2 3'端的荧光素酶的活性,突变miR-143与Bcl-2的预测结合位点后,荧光素酶的活性恢复。结论 MiR-143至少部分通过打靶Bcl-2抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并且促进HeLa细胞凋亡。     

基于Wnt3a/β-catenin通路研究金银花提取物对脱氧胆酸诱导胃黏膜肠上皮化生的影响

目的探讨金银花提取物(FL)是否通过Wnt3a/β-连环蛋白(β-catenin)通路影响脱氧胆酸(DCA)诱导的胃黏膜肠上皮化生。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测1、10和100 g/L金银花提取物对DCA诱导的胃黏膜上皮细胞GES-1增殖的影响。将GES-1细胞分为对照组(未处理),DCA组(500μmol/L DCA),DCA+FL组(500μmol/L DCA+100 g/L FL),DCA+FL+Wnt3a/β-catenin通路激活剂LiCl组(500μmol/L DCA+100 g/L FL+LiCl)。采用流式细胞术和Western blot分别测定GES-1细胞的凋亡和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、三叶因子2(TFF2)、绒毛蛋白(VIL1)、CDX2、Wnt3a和β-catenin的表达水平。结果 1、10和100 g/L金银花提取物降低DCA诱导的GES-1增殖,差异有统计学意义(P0.05),选择金银花提取物浓度最明显的100 g/L进行后续研究。与对照组比较,DCA组GES-1细胞的凋亡率、Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2、TFF2、VIL1、CDX2、Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05);与DCA组比较,DCA+FL组GES-1细胞的凋亡率、Bax蛋白表达水平提高,并且Bcl-2、TFF2、VIL1、CDX2、Wnt3a和β-catenin蛋白水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。与DCA+FL组比较,DCA+FL+LiCl组GES-1细胞的凋亡率、Bax蛋白水平减少,Bcl-2、TFF2、VIL1和CDX2的蛋白水平增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论金银花提取物通过下调Wnt3a/β-catenin通路,促进DCA诱导的胃黏膜上皮细胞的凋亡和抑制肠上皮化生。     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。     

红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其作用机制。方法以MTT法检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L分别在24、48、72 h对人宫颈癌HeLa细胞增殖作用的影响,并在倒置显微镜下观察HeLa细胞形态学改变。流式细胞仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡的影响。实时荧光定量PCR仪检测红三叶异黄酮20、40、80μg/m L对HeLa细胞凋亡中调节基因Bax、Bcl-2表达水平的影响。结果红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,表现为时间、浓度的相关性。红三叶异黄酮对HeLa细胞的形态学改变,表现为随药物浓度增加细胞固缩变小,并出现凋亡小体。流式细胞仪检测分析显示红三叶异黄酮能引起HeLa细胞凋亡,并随药物浓度的增加而明显,当红三叶异黄酮达到一定有效浓度时,诱导其细胞凋亡。通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖,能使Bax表达上升、Bcl-2表达下降,且呈剂量相关性。结论红三叶异黄酮对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有抑制作用,并呈一定的剂量和时间相关性,提示通过调节Bax mRNA与Bcl-2 mRNA的表达,促进抑制HeLa细胞增殖。     

ZFX基因在骨肉瘤中的表达及其作用机制

目的　探讨X 染色体偶联锌指蛋白（ZFX）基因在骨肉瘤中的表达及其作用机制。方法　采用手术切除后存档的人骨肉瘤组织及瘤旁组织石蜡包埋标本50 例,通过Western blot 检测其中ZFX 的表达。体外培养人骨肉瘤MG63 细胞,分别用ZFX 小干扰RNA（ZFX- siRNA）和阴性对照（siRNA-NC）转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h后,用Western blot 检测细胞中ZFX、Bcl-2、Bax、β-catenin、CyclinD1 蛋白表达变化;CCK-8 检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果　ZFX 基因在骨肉瘤组织中的蛋白表达显著高于瘤旁组织（P<0.01）;siRNA-NC 组细胞增殖活力、凋亡率及ZFX、Bcl-2、Bax、β-catenin、CyclinD1 蛋白表达与对照组比较无显著差异（P>0.05）;ZFX-siRNA 组细胞活力及ZFX、Bcl-2、β-catenin、CyclinD1 蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Bax 蛋白表达显著高于对照组（P<0.01）。结论　ZFX 基因在人骨肉瘤组织中高表达,可能通过促进人骨肉瘤MG63 细胞增殖并抑制其凋亡在其发生发展过程中发挥重要的作用,其机制可能与Wnt 信号通路的激活有关。     

葛根素对人胰腺癌PANC-1细胞增殖凋亡的影响

目的探讨葛根素对人胰腺癌细胞株PANC-1的作用及其机制。方法取对数生长期的PANC-1细胞,分别用不同浓度的葛根素(0、50、100、200μmol/L)干预48 h后,利用CCK-8检测PANC-1细胞增殖水平;Annexinv-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Fas、Fas-L、Bax、Bcl-2、Caspase-7表达水平。结果葛根素对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制呈浓度依赖性;不同浓度的葛根素干预PANC-1细胞48 h后,细胞凋亡率分别为2.47%±0.64%、6.37%±0.71%、8.33%±0.90%、12.40%±1.01%,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);Western blot实验表明,葛根素对胰腺癌PANC-1细胞干预48 h后,随着葛根素浓度的增加,细胞中Fas、Fas-L、Caspase-7、Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2的表达量下调,实验组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论葛根素可通过激活Fas/Fas-L信号通路诱导PANC-1细胞增殖抑制和凋亡。     

鸦胆子苦醇联合长波紫外线辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响研究北大核心CSCD

目的观察鸦胆子苦醇联合长波紫外线(UVA)辐射对人恶性黑色素瘤A375细胞凋亡的影响及机制。方法人恶性黑色素瘤A375细胞分为空白组、对照组和实验组。空白组细胞不做任何处理,对照组用75 k J·m^(-2)长波紫外线处理,实验组在75 k J·m^(-2)长波紫外线处理2 h后分别加入10,20,50,100,200nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇。检测各组细胞活性、细胞周期及凋亡率,检测人转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)通路及线粒体凋亡途径相关蛋白表达情况。结果对照组和实验组细胞活性均显著低于空白组,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞活性均显著低于对照组,且随鸦胆子苦醇作用浓度增大而逐渐降低(P<0.05或P<0.01)。对照组和10,20,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞凋亡率分别为(3.21±0.24)%,(3.45±0.26)%,(5.86±0.42)%,(12.62±1.12)%,(13.02±2.24)%,(16.15±2.78)%,均显著高于空白组的(0.89±0.12)%,20,50,100,200 nmol·L^(-1)实验组细胞凋亡率均明显高于对照组(均P<0.01)。对照组和实验组与空白组比较,人恶性黑色素瘤A375细胞G0/G1期细胞比例逐渐升高,G2/M和S期细胞比例逐渐降低(P<0.05或P<0.01)。空白组、对照组和50 nmol·L^(-1)实验组Nrf2蛋白相对表达量分别为1.69±0.23,1.23±0.24,1.03±0.15,谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)蛋白相对表达量分别为2.43±0.16,2.89±0.18,2.78±0.21,B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量分别为0.59±0.14,1.05±0.21,1.59±0.24,胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白相对表达量分别为2.63±0.15,2.71±0.26,2.63±0.28。与空白组比较,对照组和实验组人恶性黑色素瘤A375细胞Nrf2蛋白表达相对量降低,Bax和GSTP1蛋白表达相对量升高,caspase-3无明显变化。结论鸦胆子苦醇联合UVA辐射可抑制人恶性黑色素瘤A375细胞增殖,且存在一定的量效关系,与抑制Nrf2信号通路及激活线粒体凋亡途径相关蛋白,加速细胞凋亡有关。     

牡荆素通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路抑制人骨肉瘤细胞生长的研究

目的 研究牡荆素如何影响骨肉瘤细胞的生长以及所涉及的机制。方法 将143B细胞分为空白组(不给予任何处理，正常培养细胞)、对照组(0.1%二甲基亚砜)和低、中、高剂量实验组(20,40和60μmol·L^-1牡荆素)。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况，用蛋白质印迹法检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平。结果 干预24 h后，中、高剂量实验组和对照组、空白组的细胞增殖率分别为(51.34±4.69)%、(33.16±3.67)%、(99.32±2.66)%和(100.00±3.26)%,p-PI3K蛋白相对表达水平分别为0.34±0.03、0.27±0.03、0.87±0.05和0.87±0.03,p-Akt(ser473)蛋白相对表达水平分别为0.35±0.03、0.22±0.04、1.02±0.07和0.97±0.06,p-Akt(thr308)蛋白相对表达水平分别为0.33±0.02、0.31±0.03、0.93±0.04和0.93±0.02。中、高剂量实验组的上述指标与对照组和空白组比较，差异均有统计学意义(均...