寻常型天疱疮抗原EC1-2表位的致病性

目的：通过寻常型天疱疮新生鼠模型的建立研究寻常型天疱疮抗原（PVA）致病性表位及其相应抗体的致病作用。方法：构建重组PVA细胞外区（EC）1－2片段分子，经亲和层析纯化后，免疫家兔，得到兔抗PVA EC1－2融合蛋白的抗血清，将提纯IgG抗体成分，被动转移到BALB／c新生鼠，15－18h后对新生鼠皮肤，血清进行组织病理，电镜和免疫荧光检查。结果：在对实验组新生鼠的评价中，其组织病理示表皮内水疱形成，棘细胞间棘突消失，棘 层松解；电镜示棘细胞间距离增宽，桥粒分离，溶解，消失，DIF和IIF均示棘细胞间免疫荧光沉积，面对照组小鼠除了IIF示棘细胞间微弱的荧光沉积外，其余检查均正常。结论：通过寻常型天疱疮新生鼠模型的建立，证明PVA分子中EC1－2表位为致病性表位，其相应的抗体为致病性抗体，另外，PVA重组分子的构建，新生鼠模型的建立为天疱疮以及其它自身免疫性疾病的诊断和治疗提供了一个模型 。     

寻常型天疱疮抗原细胞外区3-4表位的致病性研究

目的：研究寻常型天疱疮抗原(pemphigus vulgaris antigen，PVA)细胞外区3—4(extracellular domain，EC3—4)表位的致病性，并与EC1—2进行比较。方法：通过寻常型天疱疮新生鼠模型，构建含有PVA EC3—4片段的重组质粒，进行融合蛋白的表达和纯化。通过免疫家兔获得特异性抗血清，皮下注射至BALB/c新生鼠，从临床、组织病理、电镜和免疫荧光等方面进行评价。结果：实验组小鼠经皮下注射特异性兔抗EC3—4抗体后均未出现红斑、水疱等临床表现；组织病理亦未见表皮内水疱形成，可见棘层松解现象。电镜显示棘层细胞排列松散，细胞间距增宽，部分桥粒分离、溶解、消失。免疫荧光以正常小鼠皮肤为底物，显示IgG荧光沉积。结论：PVA EC3—4表位亦为PVA的致病性表位。     

桥粒芯糖蛋白3刺激下寻常型天疱疮患者外周血T淋巴细胞增殖检测分析

目的 观察桥粒芯糖蛋白3（Dsg3）对寻常型天疱疮（PV）患者外周血T淋巴细胞增殖的影响。方法 PV患者12例,正常人22例,提取外周血单一核细胞（PBMC）,采用流式细胞仪技术分别检测Dsg3刺激下PBMC中T淋巴细胞亚群变化及T淋巴细胞增殖情况,分析PV患者与正常人之间存在的差异。结果 PV患者PBMC在Dsg3刺激下Th2型T淋巴细胞所占比例为12.17% ± 5.32%,Th1型T淋巴细胞所占比例为4.08% ± 1.50%;未经Dsg3刺激的阴性对照组分别为9.84% ± 5.41%和3.91% ± 1.38%。PV患者PBMC在Dsg3刺激和无Dsg3刺激时的Th2型T淋巴细胞所占比例均显著高于正常人（P < 0.05）;Dsg3刺激下PV患者T淋巴细胞发生增殖,CD4+ T淋巴细胞增殖率为4.65% ± 3.28%,显著高于正常人（P < 0.05）。结论 Dsg3可诱导PV患者CD4+ T淋巴细胞发生特异性增殖,且主要为Th2优势型。     

CD_4~+T淋巴细胞与寻常型天疱疮相关性研究进展

寻常型天疱疮(PV)是一种危及生命的自身免疫性大疱性皮肤黏膜病,以往认为PV的发生与体液免疫有关,目前认为,除了B细胞的功能异常产生致病性抗体外,T细胞所介导的细胞免疫异常介导了PV患者出现病理性免疫应答。现就CD4+T淋巴细胞在寻常型天疱疮发病中的研究进展作一综述。     

阿维A对寻常型银屑病皮肤组织中Th1、Th17细胞的影响

采用免疫荧光双重标记法检测健康对照、阿维A治疗前、后寻常型银屑病患者皮损中Th1细胞(CD3+IFN-γ+)和Th17细胞(CD3+IL-17+)的数量变化.阿维A治疗前的寻常型银屑病患者皮损真皮浅层T细胞数量、Th1细胞数量、Th17细胞数量较健康对照组T细胞、Th1细胞、Th17细胞明显增多(P＜0.01);治疗后较治疗前皮损真皮浅层T细胞、Th1细胞、Th17细胞数明显下降(P＜0.01).阿维A治疗寻常型银屑病的作用可能涉及到其对Th1和Th17细胞的影响;同Th1细胞一样,Th17细胞可能是寻常型银屑病病情演变过程中关键的T细胞亚群之一.     

银屑病患者外周血Th1、Th2和Th17细胞的检测

目的:检测寻常型银屑病(PV)患者外周血辅助性Th1、Th2和Th17细胞的水平及其在PV发病中的意义。方法:选取PV患者36例、正常对照20例静脉血标本,刺激5 h后通过流式细胞术检测各种不同T细胞的含量。结果:PV组外周血IFN-γ^+ CD4^+ T细胞(Th1细胞)及IL-17A^+CD4^+T细胞(Th17细胞)显著高于正常对照组(P值分别为0.005,0.001),患者组IL-4^+CD4^+T细胞及IL-10^+CD4^+T细胞(Th2细胞)与正常对照组比较无差异(P值分别为0.163和0.544)。结论:PV患者外周血升高的Th1和Th17细胞可能迁移至局部皮肤参与炎症,发挥致病作用。     

Th17细胞与大疱性类天疱疮相关性研究

大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid, BP)是一种获得性自身免疫性皮肤病,好发于老年人.既往研究认为BP为Th2细胞占优势的自身免疫性疾病.随着研究的深入,Th17细胞已成为研究的热点.其在防御胞外细菌感染、介导慢性炎症以及自身免疫病中发挥重要作用[1].白介素(IL)-23是T细胞分泌IL-17的关键触发因素,调节T细胞亚群分泌IL-17或IL-17相关细胞因子,形成IL-23/IL-17免疫应答途径.此途径在慢性肠病、自身免疫性疾病、肿瘤、变态反应性疾病等研究中已见到,而在自身免疫性大疱性皮肤病研究中却很少见到.为研究IL-17/IL-23免疫途径在BP发病中的作用机制及与临床的相关性,我们设计了本课题.     

系统性红斑狼疮患者Th1／Th2细胞平衡的研究

系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)是一种有体液免疫功能显著异常的自身免疫性疾病 ,其抗核抗体产生为Ｔ细胞依赖性[1 ] ,其作用机制尚未完全清楚 ,Ｔｈ1 Ｔｈ2平衡与ＳＬＥ的发病有关。但在单个核细胞水平是对Ｔｈ细胞亚群平衡的研究还很少。我们利用酶联免疫斑点法在单个核细胞水平上检测了ＰＢＭＣ内细胞因子的表达 ,了解Ｔｈ1 Ｔｈ2平衡在ＳＬＥ发病机制中的作用 ,现报告如下。1　材料与方法1.1　研究对象　 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 1年 5月我院门诊病人中 2 0例初诊未经治疗的活动期ＳＬＥ患者。均为女性病人 ,年龄 14～ 38岁 ,平均 2 4 .5岁 ,均…     

利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原模拟表位

目的 利用噬菌体随机9肽库筛选寻常型天疱疮抗原桥粒芯糖蛋白3（desmoglein, Dsg3）模拟表位,加深对寻常型天疱疮发病机制的认识。方法 通过大肠杆菌表达Dsg3的胞外结构域1和2（extracellular domain, EC1-2） 和谷胱甘肽转移酶（GST）的融合蛋白,从寻常型天疱疮患者血清中纯化与EC1-2特异结合的多克隆抗体,对噬菌体随机线九肽库和环九肽库进行亲和筛选,阳性噬菌体展示肽经ELISA和竞争性ELISA验证。结果 经过两轮亲和筛选,与自身抗体结合的噬菌体明显富集,免疫筛查、验证后得到3个阳性噬菌体展示肽,ELISA检测显示它们与患者血清反应,而不与正常人血清反应,竞争性ELISA检测显示它们可以抑制寻常型天疱疮患者血清与重组蛋白EC1-2的结合。结论 利用噬菌体随机9肽库筛选到3个与寻常性天疱疮密切相关的模拟表位。     

天疱疮和大疱性类天疱疮患者外周血滤泡辅助性T细胞水平的研究

目的 探讨滤泡辅助性T细胞（Tfh）在天疱疮和大疱性类天疱疮发病中的作用。 方法 天疱疮和大疱性类天疱疮患者各10例,与天疱疮和大疱性类天疱疮患者年龄、性别相匹配的正常人对照各10例。采用流式细胞仪检测外周血单一核细胞（PBMC）中Tfh水平,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测其血清中白介素21（IL-21）水平,同时检测大疱性类天疱疮患者血清中抗BP180-NC16A抗体滴度,并进行抗体滴度与IL-21、Tfh水平的相关性分析。结果 天疱疮患者组血清中IL-21水平（95.33 ± 33.69 ng/L）显著高于其正常人对照组（54.50 ± 18.13 ng/L）（t = 3.38,P ＜ 0.01）,Tfh水平（12.08% ± 4.74%）亦显著高于其正常人对照组（6.15% ± 1.62%）（t = 3.74,P ＜ 0.01）。大疱性类天疱疮患者组血清中IL-21水平（106.70 ± 44.91 ng/L）显著高于其正常人对照组（55.37 ± 15.89 ng/L）（t = 3.41,P ＜ 0.01）,Tfh水平（11.85% ± 3.14%）亦显著高于其正常人对照组（6.03% ± 1.74%）（t = 5.13,P ＜ 0.01）。大疱性类天疱疮组抗BP180-NC16A抗体滴度与IL-21水平呈正相关（r = 0.77,P ＜ 0.01）,与Tfh水平亦呈正相关（r = 0.67,P ＜ 0.05）。结论 天疱疮和大疱性类天疱疮患者Tfh及其分泌的细胞因子IL-21水平均明显升高,可能在其发病过程中起一定的作用。     

Autoantibodies against desmoglein 2 are not pathogenic in pemphigus

BackgroundAnti-desmoglein 1 and 3 autoantibodies justify acantholysis in pemphigus; however, the pathogenesis of anti-desmoglein 2 is hypothetical.ObjectiveTo compare the participation of desmogleins 1, 2 and 3 through the production of serum autoantibodies, and protein and gene expression in the skin/mucosa of patients with pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris.MethodsThe autoantibodies were titrated by ELISA in 202 samples of pemphigus foliaceus, 131 pemphigus vulgaris, 50 and 57 relatives of patients with pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris, respectively, and 114 controls. Protein and gene expressions were determined by immunohistochemistry and qPCR in the skin/mucosa of 3 patients with pemphigus foliaceus and 3 patients with pemphigus vulgaris.ResultsHigher titers of anti-desmoglein 2 (optical density) resulted in pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris, when compared to controls (0.166; 0.180; 0.102; respectively; p < 0.0001). There was a correlation between anti-desmoglein 2 and anti-desmoglein 1 titers in pemphigus foliaceus (r = 0.1680; p = 0.0206). There was no cross-reaction of anti-desmoglein 2 with desmoglein 1 and 3. Protein overexpression of desmoglein 2 was observed in intact and lesional skin of patients with pemphigus compared to the skin of controls. Internalization granules of desmoglein 1 and 3, but not of desmoglein 2, were observed in lesions of pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris, respectively. Gene overexpression of desmoglein 2 was observed in the mucosa.Study limitationsSmall sample size for the statistical analysis of protein and gene expression.ConclusionAutoantibodies against desmoglein 2 are not pathogenic in pemphigus; protein and gene overexpression of desmoglein 2 in the skin and mucosa may be involved in acantholysis repair.     

Resolving lesions in human cutaneous leishmaniasis predominantly harbour chemokine receptor CXCR3‐positive T helper 1/T cytotoxic type 1 cells

Background Cutaneous leishmaniasis (CL) is an epidemic disease affecting millions of individuals worldwide. Treatment options have several side‐effects and a vaccine does not exist at present. Objectives To translate information about protection against CL from mice to man, we studied the local immune response in CL skin biopsies and correlated these findings with clinical information. Methods The frequency of inflammatory cells was determined in skin biopsies of 20 patients diagnosed with CL using immunohistochemistry. In addition, the nature of the resulting adaptive immune response was assessed by (double) immunostaining against CD4 and chemokine receptors CXCR3 (T helper 1, Th1)/CCR4 (Th2). Results All lesions contained CD4+ and CD8+ T cells, B cells and CD68+ macrophages. CD1a+ epidermal Langerhans cells were absent above the centre of the lesions, but normally distributed in the surrounding tissue. Mast cell and CD56+ natural killer cell numbers were not affected. Interestingly, CCR4+ Th2 cells were not detected in any of the 20 samples. In contrast, the number of infiltrating CXCR3+ cells was high and the majority of these were CD4+ or CD8+ indicating that they represent interferon‐γ‐producing Th1/T cytotoxic type 1 (Tc1) cells. Finally, these findings did not correlate with clinical information about the country where the infection was acquired, or age or sex of the patients. However, lesions that had already persisted for more than 6 months contained fewer CXCR3+ CD4 and CD8 T cells than those that had persisted for less than 6 months. Conclusions Our data on the inflammatory infiltrate of human CL lesions underline the relevance of findings obtained in experimental models. Both Th1 and Tc1 cells appear to be critical for healing in CL in mouse and man.     

寻常型天疱疮患者血清骨桥蛋白的检测北大核心CSCD

目的 探讨寻常型天疱疮（PV）患者血清中骨桥蛋白在PV发病中的作用.方法 用酶联免疫吸附试验对31例寻常型天疱疮患者和35例健康对照组血清骨桥蛋白的浓度进行测定.用SPSS17.0及Excell统计软件对数据进行处理.结果 PV患者血清骨桥蛋白的表达水平显著高于健康对照组（P＜0.01）.皮肤黏膜同时受累患者血清骨桥蛋白水平高于仅皮肤受累组（P＜0.05）.合并感染组血清骨桥蛋白水平高于未合并感染组（P＜ 0.01）; PV患者的血清骨桥蛋白水平与抗Dsg3抗体呈正相关（rs=0.489,P＜ 0.01）.结论 骨桥蛋白在PV患者血清中高表达,特别是皮肤黏膜同时受累的患者,且与天疱疮抗体滴度呈正相关.     

调节性T淋巴细胞和Th17细胞与银屑病的研究进展

银屑病是一种与T淋巴细胞相关的自身免疫性疾病,新近研究发现,除了与Th1细胞有关外,调节性T淋巴细胞尤其叉头/翅膀状螺旋转录因子诱导表达的调节性T细胞和Th17细胞在银屑病的发病过程中起着非常重要的作用。其中,叉头/翅膀状螺旋转录因子（＋）调节性T细胞平衡免疫抑制和免疫激活的转换在银屑病加重方面起到关键作用,Th17细胞分泌的细胞因子IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-23、IL-36及肿瘤坏死因子α等在皮肤疾病发生发展中起到重要的作用。银屑病是由调节性T细胞和Th17细胞等多种免疫细胞和细胞因子共同参与的疾病。     

血清几丁质酶3样蛋白1水平在寻常型天疱疮中的临床意义研究

【摘要】 目的 检测寻常型天疱疮患者血清中几丁质酶3样蛋白1（YKL-40）水平,并分析其与病情严重程度的相关性。方法 2017年1月至2018年5月于西南医科大学附属医院皮肤科采集38例寻常型天疱疮患者血清,同时收集14例年龄、性别、体重指数匹配的健康对照者血清,采用多功能流式点阵仪测定血清中YKL-40以及Th1/Th2/Th17相关细胞因子浓度。采用Mann-Whitney U检验分析患者组与对照组细胞因子差异;利用二元Logistic回归法分析与病情严重程度独立相关的因素;绘制受试者操作特征曲线（ROC）,采用曲线下面积（AUC）、敏感性及特异性评价YKL-40预测天疱疮严重程度的能力。结果 与对照组相比,寻常型天疱疮患者血清中YKL-40水平［M（Q1,Q3）］［15.22（14.19,15.93）比13.64（13.21,14.63） μg/L,z = -3.88］以及细胞因子白细胞介素（IL）-6［2.05（1.49,4.21）比1.57（1.38,1.75） ng/L,z = -2.44］、IL-7［7.45（5.63,11.63）比3.77（2.21,5.97） ng/L,z = -3.26］、IL-8［6.59（3.60,14.73）比4.36（2.96,6.53） ng/L,z = -1.96］、IL-2R-α［509.08（386.36,757.67）比336.44（309.86,458.71） ng/L,z = -2.35］和C5a水平［100.35（78.31,140.84）比72.08（37.23,82.08） ng/L,z = -3.04］均显著升高（P < 0.05）。天疱疮患者YKL-40血清浓度随着皮损面积的减少而逐渐降低（r = 0.63,P < 0.001）,且YKL-40与病情严重程度独立相关［P = 0.025,优势比：46.54（95% CI：1.61 ~ 1 347.19）］。YKL-40区分重度和极重度患者与轻中度患者的AUC为0.783（95% CI：0.613 ~ 0.953）］。结论 血清YKL-40水平与寻常型天疱疮严重程度相关性强,具有预测寻常型天疱疮病情严重程度的潜在价值。     

调节性T细胞与天疱疮

天疱疮是一种病因复杂的自身免疫性疾病。天疱疮患者的免疫功能处于一种非正常的”增高”状态，体内和体外研究均显示天疱疮发病中同时存在细胞免疫和体液免疫紊乱。研究表明调节性T细胞的减少可能在这种免疫紊乱中起作用，并发现又头翼状螺旋转录因子可调控调节性T细胞细胞发育及其功能效应。近年来通过研究调节性T细胞细胞的分类、产生和功能及其在天疱疮患者体内可能发挥作用的环节，有助于阐明天疱疮发病机制及寻找有效及有针对性的治疗措施。     

Antibody-mediated rosette formation of epidermal cells with leukocytes in pemphigus vulgaris

Summary Human peripheral-blood leukocytes (PBLs) were found to form rosettes with cultured human epidermal cells or a mouse epidermal cell line (Pam cells), but not with fibroblasts, when preincubated with heat-inactivated sera from patients with pemphigus vulgaris. Increased rosette formation was observed, however, when untreated sera were used for passive sensitization. Complement was not required for this reaction, because purified IgG fractions from a protein-A/Sepharose column retained the ability to induce rosette formation. Blocking experiments with -methylmannoside suggested that a carbohydrate moiety is involved in the binding of sensitized cells to epidermal cells. Thus, human PBLs can adhere to cultured mouse epidermal cells in the presence of PV IgG antibodies.