TGF-β1诱导小鼠成牙本质细胞系MDPC-23细胞凋亡

目的:研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是否诱导成牙本质细胞系MDPC23细胞凋亡。方法:培养MDPC23细胞,用不同浓度的TGFβ1刺激培养48h后,分别用3种检测细胞凋亡的方法,包括膜联蛋白V(AnnexinV)和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)双染色法、细胞凋亡的酶联免疫分析法、以及DNA琼脂糖凝胶电泳法,检测MDPC23细胞凋亡情况。结果:TGFβ1能诱导MDPC23细胞凋亡,且呈剂量依赖性。结论:TGFβ1在成牙本质细胞凋亡过程中发挥一定的作用     

建立稳定表达Smad蛋白的MDPC-23细胞模型

建立稳定表达Smad蛋白的MDPC -2 3细胞克隆。方法 :将Smad表达载体转染进MDPC -2 3细胞内 ,通过G418筛选出阳性克隆 ,用Flag抗体进行Westernblot鉴定。 结果 :表达Flag融合蛋白细胞克隆为稳定整合Smad基因的阳性克隆 ,不表达Flag融合蛋白细胞克隆为表达空载体的细胞克隆。结论 :获得稳定表达Smad的细胞克隆 ,为以后研究Smad在成牙本质细胞分化中的作用奠定了基础     

破牙细胞的调控机制及研究现状

破牙细胞在人乳牙根生理性吸收和炎性牙根内吸收等病理吸收中起非常重要的作用。其调控机制的研究尤其对理解机制尚不完全明确的炎性牙根内吸收有着重要的意义。本文综合新近文献中有关其调控机制及在牙根生理性及病理性吸收过程中作用机制的研究现状,阐述如下。     

TGF-β1对MDPC-23细胞DPP表达调控的体外研究

目的 :研究转化生长因子 β1(TGF -β1)对成牙本质细胞表达DPP的调控作用。方法 :给体外细胞培养的MDPC -2 3成牙本质细胞不同浓度的TGF -β1刺激 ,利用原位杂交的方法观察细胞内DPPmRNA的变化 ,所得结果进行图像分析和统计处理。结果 :TGF -β1刺激前后的成牙本质细胞均表达DPPmRNA ,但刺激后的成牙本质细胞DPPmRNA表达下降 ,不同浓度TGF -β1刺激成牙本质细胞后DPPmRNA表达程度不等。结论 :外源性TGF -β1下调成牙本质细胞表达DPP ,并有浓度差异。     

成牙本质细胞系MDPC-23的生物学特性

目的：观察成牙本质细胞系MDPC-23的生物学特性。方法：细胞培养，细胞计数和逆转录多聚酶链反应。结果：MDPC-23为上皮样细胞形态，有多个细胞膜突起，易形成细胞结节，细胞倍增时间少于24h。在mRNA水平证实MDPC-23表达Ⅰ型原胶原a2、碱性磷酸酶和牙本质涎磷蛋白。结论：MDPC-23保持其成牙本质细胞系的生物学特性。     

帕米膦酸钠对大鼠正畸牙移动过程中破牙骨质细胞及破骨细胞分化因子表达的影响

目的:研究帕米膦酸钠对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织压力侧破牙骨质细胞及破骨细胞分化因子(ODF)表达的影响.方法:选择24只6周龄SPF级健康雌性Wistar大鼠,建立正畸牙移动动物模型,每只大鼠上颌分实验侧和对照侧,于安装矫治器前3d,于实验侧大鼠第一磨牙近中腭侧黏骨膜下注射帕米膦酸钠50 μL,对照侧注射0.9％生理盐水50 μL,每3d注射1次.于正畸加力3、7、14 d时分批处死8只大鼠,制作牙周组织切片,观察破牙骨质细胞数量,免疫组化观察ODF的表达情况.采用PASW Statistics 18软件包对实验数据进行统计学处理.结果:实验侧在3、7、14d时,第一磨牙压力侧破牙骨质细胞的数目均少于对照侧,其中,7、14d时两侧差异显著(P＜0.05);实验侧在3、7、14d时,第一磨牙压力侧ODF阳性表达均低于对照侧,其中,7、14 d时两侧差异显著(P＜0.05).结论:局部注射二膦酸盐帕米膦酸钠能够减少大鼠正畸牙移动过程中牙周组织压力侧破牙骨质细胞的数量及ODF的阳性表达.     

人乳牙破牙细胞的体外分离培养及鉴定

目的 采用酶消化法建立成熟人破牙细胞分离和培养方法,为探讨破牙细胞的组织形态学特点及生物学特性奠定基础.方法 采用酶消化法从新鲜离体乳牙中分离获得破牙细胞,结合相差显微镜、苏木素-伊红(HE)染色、特异性抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase staining,TRAP)染色和扫描电镜对破牙细胞进行组织形态学观察和硬组织吸收功能鉴定.结果 采用酶消化法可分离得到成熟的破牙细胞,形态学上表现为多核巨细胞、有多个伪足;TRAP染色结果显示破牙细胞胞质呈酒红色阳性着色;扫描电镜下观察可见与细胞共培养的牙硬组织薄片表面有吸收陷窝形成.结论 应用酶消化法可以从离体吸收乳牙中成功分离获取人破牙细胞,可为探讨人乳牙根吸收机制提供细胞模型.     

白细胞介素与破骨(牙)细胞

破骨 (牙 )细胞的主要功能是吸收骨、牙根和钙化的软骨 ,白细胞介素 (IL)参与了这种细胞的功能调节。本文对IL -1、IL -4、IL -6、IL -8与破骨 (牙 )细胞的关系进行综述     

小鼠骨髓细胞和脾细胞诱导形成破骨细胞潜能的比较

目的在体外破骨细胞分化因子(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)联合应用的情况下,比较小鼠骨髓细胞和脾细胞形成破骨细胞的能力。方法选用小鼠M-CSF依赖性非附着性骨髓细胞和脾细胞,以不同的细胞密度在含有25ng/mlsM-CSF和30ng/mlsRANKL的(-MEM培养液中培养5、9天后,计数形成的抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)阳性多核细胞的数目和骨吸收面积。结果脾细胞形成的破骨样细胞与骨髓形成的细胞形态与功能均无明显差异,但所需的细胞密度为骨髓细胞的10~20倍。结论在特殊情况下,脾细胞可替代骨髓细胞进行体外破骨细胞实验,但培养条件应适当调整。     

伊班膦酸钠对正畸源性牙根吸收面积的影响

目的:通过牙齿移动距离的差异、牙周组织中破牙骨质细胞数量的变化及牙根吸收面积的差异,研究伊班膦酸钠对大鼠正畸源性牙根吸收的作用。方法:48只SPF级雌性Wistar大鼠,建立正畸牙齿移动动物模型,设置自身对照,对照侧为对侧未注药侧。在大鼠上颌双侧第一磨牙与上切牙之间安置一0.012英寸镍钛拉簧,施力60 g左右,所有大鼠均于安装矫治器前3 d在实验侧(大鼠上颌左侧)移动牙齿近中腭侧黏骨膜下局部注射50μL伊班膦酸钠,对照侧(大鼠上颌右侧)注射50μL 0.9%氯化钠液。每3 d注射一次直至实验结束。实验第3、7、14 d随机选择8只大鼠处死。分离大鼠头颅骨,用游标卡尺(精确度0.02 mm)测量上颌双侧第一磨牙移动的距离,并制备大鼠第一磨牙及其牙周组织切片,HE染色观察两侧牙周组织形态学变化,观察破牙骨质细胞的数量,采用图像处理软件对两侧的牙根吸收指数进行分析。结果:①牙齿移动距离随实验时间延长逐渐增加,组间比较:实验第3 d,实验侧和对照侧的牙齿移动距离平均值差异无统计学意义;实验第7 d和14 d,实验侧的牙齿移动距离均小于对照侧,差异具有统计学意义(P<0.05)。②实验侧第3 d、7 d和14 d大鼠第一磨牙牙周组织压力侧破牙骨质细胞数量均小于对照侧,且第7 d和14 d结果差异具有统计学意义(P<0.05)。③实验侧第3 d、7 d和14 d大鼠牙根吸收指数均小于对照侧,牙根吸收程度均比对照侧轻,且第7 d和14 d结果差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:局部应用伊班膦酸钠可以减缓正畸牙齿移动的速度,减少牙周组织压力侧破牙骨质细胞的数量,减少正畸源性牙根吸收的发生。     

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对成牙本质细胞系MDPC—23增殖和细胞周期的影响。方法：细胞培养，MTT比色测定法和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分析技术。结果：TGF-β1能明显抑制MDPC—23细胞增殖，无剂量依赖性，但呈时间依赖性；FCM结果显示，TGF-β1作用后，MDPC—23细胞G1％升高，而S％显著降低，反映细胞增殖活性的增殖指数Prl值(S G2M)％增高。结论：TGF-β1抑制成牙本质细胞系MDPC—23细胞增殖和DNA合成。     

小鼠牙本质涎磷蛋白基因启动子的克隆与序列分析

目的 克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein，DSPP)基因启动子片段。方法 培养MDPC一23细胞，从培养的细胞中提取基因组DNA，利用设计的上下游引物，进行PCR反应。将扩增得到的DSPP基因启动子片段克隆到pMD18-T栽体，酶切鉴定后，进一步进行DNA序列测定。结果 酶切结果表明成功构建重组质粒，序列分析结果与国外报道一致。结论 成功克隆获得小鼠DSPP基因的启动子片段。     

RNA干涉法观察成纤维细胞生长因子18对成牙本质样细胞涎磷蛋白表达的影响

目的：通过RNA干涉的方法研究成纤维细胞生长因子18（Fibroblast Growth Factor18．FGF18）对成牙本质样细胞中牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）表达的影响。方法：RNA干涉质粒pH1-siFGF18瞬时转染成牙本质样细胞MDPC-23，RT-PCR检测FGF18和DSPP的表达，观察FGF18低表达对DSPP表达的影响。结果：瞬时转染RNA干涉质粒后，MDPC-23细胞内FGF18表达明显减少，与此同时DSPP的表达量也明显减少。结论：FGF18可以调控DSPP的表达，影响成牙本质细胞的分化。     

Smad7在成牙本质细胞系MDPC-23内转化生长因子β信号转导中的作用

目的研究Smad7在成牙本质细胞系MDPC-23内转化生长因子(transforming growth factor-β1, TGF-β)信号转导的作用.方法培养MDPC-23细胞,免疫组化法观察TGF-β1对MDPC-23细胞内Smad7分子定位改变.通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad7分子对TGF-β1调控目的基因转录的影响.结果MDPC-23细胞表达Smad7蛋白,主要定位于细胞胞浆,在转化生长因子β1刺激30 min后,Smad7从胞核向胞浆转位聚集.TGF-β1显著诱导p3TP-Lux基础启动子活性.过表达Smad7完全抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,而过表达Smad7反义cDNA载体则显著促进了TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导.结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad7可能作为一种抑制性Smad分子在拮抗TGF-β1信号转导过程中发挥重要的作用.     

TGF-β1对成牙本质细胞系MDPC-23中 Smads mRNA表达的影响

目的：研究TGF—β1对成牙本质细胞系MDPC-23细胞中Smads mRNA表达的影响，探讨成牙本质细胞内Smads分子基因表达调控机制。方法：培养MDPC-23细胞，细胞分为5组，分别用TGF—β1刺激0、0．5h、1．5h、4h、24h，提取总RNA。用半定量RT—PCR观察Smad2、Smad3和Smad7mRNA表达变化。结果：MDPC-23细胞表达Smad2、Smad3和Smad7 mRNA。在TGF—β1作用24h内，MDPC-23细胞内Smad2 mRNA表达水平无明显变化。在TGF—β1作用4h后，Smad3 mRNA表达水平下调。Smad7 mRNA水平在TGF—β1作用下1．5h达到最高峰，以后逐渐下降。结论：在成牙本质细胞内，TGF—β1可能通过不同的方式调控其细胞内信号分子Smad2、Smad3和Smad7的表达，从而使成牙本质细胞对Smad介导的TGF—β1信号得到精确调控。     

神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白对牙髓细胞增殖的影响

目的探索神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白(NRAGE)对人牙髓细胞(h DPCs)和小鼠成牙本质细胞(MDPC-23)细胞增殖的影响。方法重组慢病毒转染细胞稳定敲除h DPCs和MDPC-23的NRAGE表达,体外组织块法原代培养h DPCs和MDPC-23,进而检测NRAGE对h DPCs和MDPC-23的增殖影响。采用CCK-8法分析NRAGE对h DPCs和MDPC-2细胞增殖的影响,流式细胞术分析NRAGE对h DPCs和MDPC-23的细胞周期分布和细胞凋亡影响。免疫荧光法检测NRAGE和NF-κB的表达和定位,分析NF-κB蛋白表达水平,并用IKK抑制剂处理细胞后,分析细胞周期和细胞凋亡。结果重组慢病毒转染后NRAGE的mRNA和蛋白水平下降显着。NRAGE敲减后抑制了h DPCs和MDPC-23的增殖活性和凋亡。NRAGE敲减后显示h DPCs的G0G1期滞留显著,而对MDPC-23没有影响。同时,NRAGE敲减后激活NF-κB信号通路。IKK抑制剂可以抑制NRAGE敲除后对h DPCs和MDPC-23的细胞凋亡的抑制作用。结论 NRAGE敲减后抑制牙髓细胞的增殖活性。NRAGE通过NF-κB信号通路调控h DPCs的细胞周期和凋亡。     

Smad8在成牙本质细胞系MDPC-23内BMP-2信号转导中的作用

目的：观察成牙本质细胞系MDPC-23内Smad8蛋白的表达,以及Smad8蛋白在骨形成蛋白-2（bonemorphogenetic protein-2,BMP-2）信号转导中的作用.方法：免疫组化法观察MDPC-23细胞内Smad8蛋白的表达,以及BMP-2和转化生长因子β1（TGF-β1）对MDPC-23细胞内Smad8分子定位的改变.结果：MDPC-23细胞的胞浆和胞核均有Smad8表达,在BMP-2刺激1 h后,Smad8从胞浆向胞核转位聚集.TGF-β1刺激后无类似现象发生.结论：成牙本质细胞系MDPC-23内存在Smad8的表达,且Smad8可特异性地将BMP-2的信号由胞浆转至胞核,但不能转导TGF-β1信号.     

Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23中的表达及功能

目的研究Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23作为转化生长因子(TGF)β信号分子的作用。方法常规条件下培养MDPC-23细胞,在TGF-β1刺激培养1h后,观察细胞内Smad分子的定位变化。将Smads真核表达载体分别与报告基因载体p3TP-Lux瞬时共转染至MDPC-23,在TGF-β1刺激培养24h后,裂解细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞裂解液中的荧光素酶活性。结果MDPC-23细胞表达Smad2和Smad3蛋白分子,主要定位于细胞质,在TGF-β1刺激1h后,Smad2和Smad3从胞质向胞核转位聚集。TGF-β1可诱导p3TP-Lux基础启动子活性,约增加13倍。过表达野生型Smad3蛋白可促进TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,但是过表达Smad3突变体抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导。和Smad3作用相比,过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1诱导p3TP-Lux启动子活性无明显影响。结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad信号途径存在并参与介导TGF-β1诱导的转录调控。