紫杉醇抗喉癌细胞作用及机制的实验研究

目的 研究紫杉醇(Taxol)抗人喉鳞状细胞癌细胞株Hep- 2的作用及机制.方法 以不同浓度Taxol作用于体外培养的人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2,用MTT法测定Taxol对细胞的增殖抑制率,分光光度法测定癌细胞膜唾液酸含量、膜磷脂含量及胆固醇含量变化.结果 发现紫杉醇对人喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2生长有明显抑制作用,且抑制作用呈浓度依赖性.癌细胞膜分析显示紫杉醇与细胞接触24h,可显著提高膜磷脂含量,降低细胞膜唾液酸含量,但是对胆固醇含量没有影响.结论 紫杉醇明显抑制人喉鳞状细胞癌细胞株Hep -2增殖,其作用机制可能与膜生化特性改变有关.     

多西紫杉醇对人胃癌细胞株MKN-45的抑制及诱导凋亡作用的研究

目的:研究多西紫杉醇对人胃腺癌MKN-45细胞的生长抑制作用及诱导人胃腺癌细胞凋亡作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞周期分布和凋亡率,应用电镜观察细胞凋亡的形态特点。结果:(1)多西紫杉醇在1.25~80μg.m l-1质量浓度范围内对MKN-45细胞株有抑制增殖作用,此作用与药物质量浓度呈正相关。(2)终质量浓度为20μg.m l-1的多西紫杉醇作用于MKN-45细胞8 h有凋亡峰的出现,12 h凋亡率接近50%。(3)以20μg.m l-1的多西紫杉醇诱导MKN-45细胞凋亡3 h和6 h与未加药的对照组比较,可见MKN-45细胞周期被阻滞在G2/M期,S期比例减少。(4)20μg.m l-1的多西紫杉醇作用MKN-45细胞12 h,可见典型的凋亡形态学改变。结论:多西紫杉醇可抑制人胃腺癌MKN-45细胞增殖,诱导MKN-45细胞凋亡。     

虫草素抑制人胃癌细胞MKN-28运动侵袭能力研究

[目的]探讨虫草素对人胃癌细胞MKN-28体外迁移、侵袭能力的影响及其可能作用的分子机制。[方法]CCK8法检测虫草素对MKN-28细胞的增殖抑制作用,体外迁移、侵袭实验观察虫草素对人胃癌细胞MKN-28迁移、侵袭能力的影响,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测虫草素作用24 h后MKN-28细胞Ezrin蛋白,基质金属蛋白9(MMP9)信使核糖核酸(mRNA)表达变化。[结果]200~800μg/mL虫草素可明显抑制MKN-28胃癌细胞增殖,体外迁移实验显示虫草素组细胞划痕闭合约18%,对照组细胞划痕闭合约25%,而表皮生长因子(EGF)组闭合约48%。虫草素组显著低于另两组(P0.05)。体外侵袭实验结果表明虫草素组穿过人工基底膜的细胞数明显减少(P0.05);虫草素组Ezrin和MMP9的表达明显下调(P0.05)。[结论]虫草素可能通过下调Ezrin及MMP9表达抑制人胃癌细胞MKN-28细胞的迁移与侵袭能力,从而发挥其抑制肿瘤生长的作用。     

雷公藤内酯醇对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对人喉癌Hep-2细胞生长的影响.方法 采用MTT法检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法(TUNEL)评价细胞凋亡;透射电镜观察雷公藤内酯醇对喉癌Hep-2细胞超微结构的影响.结果 10～40ng/mL的雷公藤内酯醇作用48h后能明显抑制Hep-2细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性;透射电镜观察到明显的细胞凋亡特征.结论 在体外培养的条件下雷公藤内酯醇能明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡.     

丙戊酸钠对Hep-2细胞增殖及COX-2和Survivin mRNA表达的影响

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对体外培养的人喉癌Hep-2细胞增殖及环氧化酶2(COX-2)和Survivin mRNA表达的影响.方法:以1、2、3、4和5 mmol/L的VPA处理人喉癌Hep-2细胞12、24、36、48、60和72 h后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,RT-PCR方法检测3 mmoL/L VPA处理Hep-2细胞0、24、48和72 h后COX-2和Survivin mRNA的表达.结果:VPA对人喉癌Hep-2细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性(F分别为50.518,80.602,164.699,236.579和243.972,P均<0.001)和时间依赖性(F分别为63.067,126.190,197.807,254.084,294.646和334.773,P均<0.001).以3 mmoL/L的VPA处理人喉癌Hep-2细胞,随作用时间的延长,COX-2和Survivin mRNA的表达逐渐降低(F分别为210.290和76.773,P均<0.001).结论:VPA对Hep-2细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与下调COX-2和Survivin mRNA的表达有关.     

雷帕霉素、RAD001抑制胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的实验研究

目的探讨雷帕霉素（rapamycin）、RAD001（everolimus）对胃癌细胞株MKN-28、MKN-45细胞生长的影响,并对其机制进行初步探讨。方法体外培养人胃癌MKN-28、MKN-45细胞,给予雷帕霉素、RAD001干预后通过细胞计数、流式细胞术检测肿瘤细胞生长、细胞周期分布情况。结果雷帕霉素、RAD001均可抑制MKN-28、MKN-45细胞生长,抑制作用具有时间依赖性,雷帕霉素作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为23.40%、36.26%;RAD001作用于MKN-28、MKN-45两种细胞株72 h抑制率分别为25.12%、40.11%。72 h时RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-28、MKN-45细胞计数差异有显著性（P〈0.05）。RAD001作用24 h后MKN-28、MKN-45细胞周期发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加。RAD001组与阴性对照组、DMSO对照组相比,MKN-45细胞周期差异有显著性（P〈0.05）,MKN-28细胞周期差异无显著性（P〉0.05）。结论两种药物相比较,RAD001相对敏感;两株细胞相比较,MK...     

IFN-γ对人喉癌细胞VEGF-C和bFGF表达的影响

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对人喉鳞癌细胞血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法IFN-γ以不同浓度(1、10、100、1000、10000U/mL)作用于人喉癌Hep-2细胞不同时间(0、12、24、36、48、60、72h)。MTT比色法检测细胞增殖情况,以确定IFN-γ作用的最适浓度。实时PCR法测定1000U/mLIFN-γ作用不同时间(0、2、6、12、24、36、48、60、72h),Hep-2细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达;采用ELISA法和免疫细胞化学方法测定在相同药物剂量和作用时间条件下,细胞培养上清液和细胞浆中VEGF-C和bFGF蛋白表达。结果MTT法检测显示,100、1000、10000U/mL的IFN-γ作用于Hep-2细胞48h后,对细胞生长有明显抑制作用(P<0.05)。与对照组比较,1000U/mLIFN-γ作用于Hep-2细胞36h后,VEGF-C mRNA表达下调(P<0.05),作用48h后差异更为显著(P<0.01);1000U/mLIFN-γ作用于Hep-2细胞24h后,bFGF mRNA表达上调(P<0.05),作用48h后差异更为明显(P<0.01)。1000U/mLIFN-γ作用Hep-2细胞48h后,其胞浆中棕色颗粒(VEGF-C和bFGF蛋白表达)明显少于对照组。结论IFN-γ下调Hep-2细胞VEGF-C mRNA表达,上调其bFGF mRNA表达;而对Hep-2细胞VEGF-C和bFGF蛋白分泌均有抑制作用。     

中药艾迪诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的 研究中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用.方法 四亚基噻唑蓝(MTT)法测定中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长的抑制作用,荧光显微镜观察人喉癌细胞Hep-2的凋亡状况,流式细胞仪技术(FCM)观察人喉癌Hep-2细胞周期及凋亡,荧光定量PCR法测定人喉癌细胞Hep-2环氧化酶(COX-2)的表达量.结果 不同浓度的中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长均有抑制作用,并有明显的时间和剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪分析显示中药艾迪能减少G1期的比例,增加G2和S期的比例,并能诱导细胞凋亡.中药艾迪作用人喉癌细胞Hep-2 24h后其环氧化物酶-2的表达量升高,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 中药艾迪在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,其机制可能是诱导细胞凋亡.     

IFN-γ对人喉癌细胞VEGF-C和bFGF表达的影响

目的 探讨γ干扰素(IFN-γ)对人喉鳞癌细胞血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响.方法 IFN-γ以不同浓度(1、10、100、1 000、10 000 U/mL)作用于人喉癌Hep-2细胞不同时间(0、12、24、36、48、60、72 h).MTT比色法检测细胞增殖情况,以确定IFN-γ作用的最适浓度.实时PCR法测定1 000 U/mL IFN-γ作用不同时间(0、2、6、12、24、36、48、60、72 h),Hep-2细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达;采用ELISA法和免疫细胞化学方法测定在相同药物剂量和作用时间条件下,细胞培养上清液和细胞浆中VEGF-C和bFGF蛋白表达.结果 MTT法检测显示,100、1 000、10 000 U/mL的IFN-γ作用于Hep-2细胞48 h后,对细胞生长有明显抑制作用(P＜0.05).与对照组比较,1 000 U/mL IFN-γ作用于Hep-2细胞36 h后,VEGF-C mRNA表达下调(P＜0.05),作用48 h后差异更为显著(P＜0.01);1 000 U/mL IFN-γ作用于Hep-2细胞24 h后,bFGF mRNA表达上调(P＜0.05),作用48 h后差异更为明显(P＜0.01).1 000 U/mL IFN-γ作用Hep-2细胞48 h后,其胞浆中棕色颗粒(VEGF-C和bFGF蛋白表达)明显少于对照组.结论 IFN-γ下调Hep-2细胞VEGF-C mRNA表达,上调其bFGF mRNA表达;而对Hep-2细胞VEGF-C和bFGF蛋白分泌均有抑制作用.     

FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附的影响

目的探讨FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附能力的影响。方法将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,分别用MTT法、平板克隆形成实验、黏附实验检测转染前后细胞增殖活性、克隆形成能力及粘附能力的变化。结果FHIT基因的过表达可降低MKN-45细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05),但是对MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。结论FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成,对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。     

三氧化二砷对人胃癌细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）抑制人胃癌细胞株MKN-28生长及诱导其凋亡的生物学效应。方法采用光镜观察、溴化二甲噻唑二苯四氮唑（MTT）还原法、流式细胞仪（FCM）检测法、琼脂糖DNA凝胶电泳法检测As2O3在不同作用时间、不同给药浓度时对MKN-28细胞生长的影响。结果MKN-28细胞经As2O3作用后，细胞增殖受到明显抑制，而且呈浓度-作用时间依赖关系。流式细胞仪检测结果显示DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰，细胞周期分析发现药物作用后MKN-28细胞的生长周期受到明显阻滞。琼脂糖DNA凝胶电泳检测到细胞发生凋亡时由于DNA的规律性降解而形成的梯状条带。结论As2O3既能有效地抑制人胃癌细胞株MKN-28的生长，又能诱导该细胞凋亡，而且呈浓度依赖性和作用时间依赖性。     

CIK、DC-CIK细胞杀伤胃癌MKN-28细胞的作用比较

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后对胃癌MKN-28细胞株的杀伤作用。方法取正常人外周血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,共培养成DC-CIK细胞,以MTS法测定不同组CIK细胞对MKN-28杀伤活性。结果与单纯CIK细胞相比较,DC-CIK组细胞增殖速率明显提高(P<0.05);具有更强的杀伤胃癌MKN-28细胞株的活性(P<0.05),效靶比为20.0∶1时,DC-CIK组对MKN-28的杀伤活性为(38.02±2.06)%,>CIK组的(29.78±1.84)%,差异有统计学意义。结论 DC-CIK细胞是一种增殖活性和细胞毒作用均高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。     

下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响

目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.     

人胃癌细胞高转移亚系的初步筛选及母亚两系生物学特性的比较

目的 筛选高转移胃癌细胞亚系并与其母系进行生物学特性的比较.方法 利用transwell小室筛选高转移力胃癌细胞亚系,通过HE染色比较母亚两系细胞形态改变;流式细胞仪检测母亚两系细胞周期;免疫细胞化学法检测两系细胞中MMP-9蛋白表达;transwell侵袭小室模型比较母亚两系的迁移能力.结果 利用transwell小室从母系MKN-28中成功筛选出高转移力胃癌细胞亚系MKN-28S, 母亚两系细胞形态上无明显差异,亚系增殖指数(PI)高于母系,且亚系中 MMP-9蛋白表达同母系相比显著增高,显微镜下细胞计数示亚系迁移至膜背面的数量较母系明显增多 (P＜0.05),细胞运动能力明显增强.结论 MKN-28S细胞较MKN-28细胞具有更强增殖能力和更高迁移力.     

丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响及机制研究

目的研究丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法运用CCK-8检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞增殖活性的影响。运用流式细胞仪检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞凋亡率的影响。划痕实验检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验比较丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞侵袭转移能力的影响。Western blot法检测丹酚酸B对人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。流式细胞术分析发现丹酚酸B能诱导人喉癌Hep-2细胞发生凋亡。划痕实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的迁移能力。Transwell实验发现丹酚酸B能抑制人喉癌Hep-2细胞的体外侵袭能力。Western blot法检测发现测丹酚酸B能有效降低人喉癌Hep-2细胞PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平。结论丹酚酸B在体外能够有效抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时抑制喉癌细胞的体外侵袭转移能力。其作用可能与下调PI₃K、Akt、Bcl-2蛋白表达水平相关。     

模拟CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响

目的 通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响。方法 建立体外模拟CO2的气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为12mmHg,作用时间4h。处理后用MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞周期变化。结果 MTT法检测细胞增殖结果显示,气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖速度与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;流式细胞仪检测人胃癌MKN-45细胞周期,CO2气腹组增殖指数与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 体外模拟持续12mmHg CO2气腹环境,连续对人胃癌MNK-45细胞作用4h,不会促进胃癌细胞的增殖和生长。     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的:观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法:采用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞(siRNA-eIF4E组),同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果:与空白对照组及空质粒组比较,siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调(P<0.01),Hep-2细胞生存率下降(P<0.05),细胞线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调(P<0.05)。结论:siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

维生素D衍生物EB1089对人喉癌细胞Hep-2细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨EB1089对人喉癌细胞Hep-2凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,1,10,100nmol／L）EB1089处理24,48,96h对Hep-2细胞的抑制率;TUNEL检测细胞凋亡;分光光度法检测Caspase-3活性．结果：EB1089在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制Hep-2细胞的生长（P〈0．05）,对Hep-2细胞的抑制率为2．6％-70．0％;10,100nmol／LEB1089处理细胞48h,可诱导Hep-2细胞发生凋亡,其凋亡指数分别为22．8±1．6和53．8±3．6,与对照组相比有统计学差异（P〈0．05）;EB1089处理细胞12,24,48,96h后Caspase-3的活性增加,与对照组相比分别增加了2．09,2．72,4．91,5．23倍（P〈0．05）;用Caspase-3活性抑制剂可部分缓解EB1089诱导的Hep-2细胞凋亡．结论：EB1089可能通过诱导Caspase-3活性增加的方式抑制Hep-2细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

siRNA沉默eIF4E诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其机制

目的：观察真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)对喉癌Hep-2细胞中eIF4E基因表达的影响,探讨其诱导喉癌细胞凋亡的作用机制。方法：采用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA-eIF4E转染入人喉癌Hep-2细胞（siRNA-eIF4E组）,同时设空白对照组和空质粒组。MTT法检测siRNA对Hep-2细胞增殖的抑制作用,罗丹明染色检测转染后细胞内线粒体膜电位的变化,TUNEL染色法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的变化。结果：与空白对照组及空质粒组比较, siRNA-eIF4E组Hep-2细胞中eIF4E基因转录和表达水平明显下调（P<0.01）,Hep-2细胞生存率下降（P<0.05）,细胞线粒体膜电位降低（P<0.05）,细胞凋亡率增加（P<0.05）,凋亡相关基因Bim、Bid及Caspase-3表达上调（P<0.05）。结论：siRNA-eIF4E在体外可抑制人喉癌Hep-2细胞增殖,其机制可能是通过激活线粒体凋亡途径诱导Hep-2细胞凋亡。     

Inhibitory Effects of Celecoxib and Sc-58125 on Proliferation of Human Carcinoma of Larynx Hep-2 In Vitro

The inhibitory effects of two kinds of selective cyclooxygenase-2 inhibitors on the proliferation of human carcinoma of larynx Hep-2 in vitro and their corresponding mechanisms were investigated. Hep-2 cells were cultured with two kinds of selective cyclooxygenase-2 inhibitors (Sc58125 and Celecoxib) at various concentrations for 24 h. Morphological changes were observed under the phase microscopy and the growth suppression was detected by using MTT colorimetric assay. Apoptotic DNA fragments were observed by agarose gel electrophoresis, and the cell cycle and apoptotic rate were detected by flow cytometry (FCM) respectively. Hep-2 cells became rounded and detached from the culture dish after being treated with Celecoxib for 24 h, however, they remained morphologically unchanged with Sc-58125. Sc-58125 could increase G2 phase cells, whereas, Celecoxib rose G1 phase cells. Both of the two effects were dose-dependent. Moreover, theep-2 cells cultured with 50 μmol/L and 100 μmol/L Celecoxib showed obvious apoptosis, with the nuclear DNA of cells exhibiting characteristic DNA ladder. So Sc-58125 could inhibit the proliferation of Hep-2 cells by altering the G2 phase cells. However, Celecoxib had the same effect by changing the G2 phase cells and inducing apoptosis at higher concentration.