光促HBV DNA生物素标记探针的制备

以 Bio—Psoralen(补骨脂素)为标记物与自备 HBVD—NA 在长波紫外灯下,光促形成单加成物,制备成 Bio—Psoralen HBVDNA 探针,并对43份可疑为乙肝患者的血清进行分子杂交检测,结果表明,Bi0—Psorlen HBV DNA 明显优于 ELISA 检出 HBeAg(P<0.01),而与32p HBVDN法无明显差异(P>0.05).     

DNA探针检测间日疟原虫的初步研究

由于间日疟原虫目前尚不能体外培养,抗原制备困难,使间日疟的流行病学调查及诊断受到限制。本文报道以间日疟原虫红内期基因组DNA库0.24kb DNA片段为探针,用~(32)P标记后进行点杂交试验检测间日疟原虫的初步结果。 材料与方法 含间日疟原虫红内期基因组DNA库亚克隆VPL101/5 0.24kb DNA片段的重组质粒pUC19由澳大利亚昆士兰医学研究所Kidson赠送。按文献方法进行感受态细胞JM 109的制备、重组质     

恶性疟原虫DNA探针检测血内恶性疟原虫的初步研究

从培养恶性疟原虫(Fcc-1)中分离纯化基因组DNA,用~(32)P标记,作为探针,按DNA斑点杂交法,检测血样。结果表明:该探针可检出9个恶性疟原虫感染红细胞/10_6红细胞;在现场应用时,与13例恶性疟阳性标本镜检符合率为92％:与1例间日疟原虫病例和正常人血、白细胞之间,未发现非特异性杂交。     

光生物素化重组DNA探针对恶性疟病人的检测研究

本研究采用光生物素(PHOTOPROBE~(TM)BIOTIN)标记重组质粒pPF14作为探针,以斑点杂文试验检测恶性疟病人血样。共检测恶性疟病人35例,阳性29例;恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染者1例为阳性。总计检测36例,阳性30例,阳性符合率为83.3％;正常人血样33例,阴性30例,阴性符合率为91％。此外,阳性检出率与原虫密度之间基本呈正相关,检出最低的虫血症水平为0.005％。     

应用光敏生物素标记DNA探针监测疟疾的研究

用光敏生物素标记含恶性疟原虫DNA片段的质粒pBF4探针，通过核酸分子杂交试验，探针的敏感性为20pg靶DNA和0．001％原虫血症；并可从多种疟原虫DNA标本中特异地检出恶性疟原虫DNA．显示该探针具有良好的特异性和敏感性。检测恶性疟病人血样，与镜检的符合率为95．4％（123／129），表明本探针有良好的应用价值。     

应用光敏生物素标记DNA探针监测疟疾的研究

用光敏生物素标记含恶性疟原虫ＤＮＡ片段的质粒ｐＢＥ４探针，通过核酸分了杂交试验，探针的敏感性为２０ｐｇ靶ＤＮＡ和０．００１％原虫血症，并可从多种疟原虫ＤＮＡ标本中特异地检出恶性疟原虫ＤＮＡ，显示该探针具有良好的特异性和敏感性，检测恶性疟病人血样，与镜检的符合率为９５．４％（１２３／１２９）表明探针有良好的应用价值。     

光敏生物素DNA探针用于血内和蚊体内疟原虫的检测

从恶性疟原虫（Ｐ．ｆ） 基因文库中筛选的具有Ｐ．ｆ 种特异的质粒型ｐＢＦ２ 克隆ＤＮＡ 经光敏生物素标记后作探针，用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫，敏感性和特异性均达应用水平，显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。     

光敏生物素DNA探针用于血内和蚊体内疟原虫的检测

从恶性疟原虫基因文库中筛选的具有Ｐ．ｆ种特异的质粒型ｐＢＦ２克隆ＤＮＡ经光敏生物素标记后作探针，用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫，敏感性和持异性均达应用水平，显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。     

应用生物素标记的DNA探针通过菌落杂交试验检测沙门氏菌

本实验应用Bio-11-dUTP标记的两个沙门氏菌属特异性核酸探针(Bio-8-0kb探针和Bio-3.4kb探针)成功地通过菌落杂交试验检测了60个血清型中的100株沙门氏菌。生长在硝酸纤维素滤膜上的菌落,经过溶菌酶,蛋白酶K、RNase及苯酚-氯仿严格的处理程序处理后,可以有效地消除内源性生物素、糖蛋白及生物素类似物等易与链亲和素结合产生非特异性反应的物质,从而获得了特异的杂交结果。此试验有利于使沙门氏菌核酸探针检测技术在基层得到推广应用。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。     

基因组、克隆重组DNA探针平行检测恶性疟原虫的初步研究

本文报告实验室制备恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ分离株）基因组ＤＮＡ．酶切冻融回收克隆重组ｐＰＦ１４ＤＮＡ，经３２Ｐ缺口移位法标记作为探针，按ＤＮＡ—ＤＮＡ斑点杂交试验平行检测Ｐ．ｆ．ＤＮＡ及血样中恶性疟原虫的初步结果．两探针检测人工培养的恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ）敏感度，基因组探针为０．０００７８％原虫血症和７．８３ｐｇ原虫ＤＮＡ，ｐＰＦ１４探针为０．００７８％和１５．６３ｐｇ。镜检确诊并复核后的５６例云南恶性疟病人血样，基因组探针检出５３例（９４．６４％），ｐＰＦ１４探针检出５１例（９１．０７％）．９例间日疟病人血样，基因组探针阳性７例，ｐＰＦ１４探针均未显示杂交．２例伯氏鼠疟、１例刚地弓形虫阳性鼠及１０例正常人血样皆为阴性．结果揭示：这两种探针似可用于我国疟疾主要流行区恶性疟原虫检测。与基因组探针相比，ｐＰＦ１４探针似是发展适合于我因恶性疟原虫大规模核酸诊断技术中，比较经济、方便的探针来源。     

光敏生物素标记人型结核分支杆菌DNA探针的研究

用国产光敏生物素醋酸盐,对人型结核杆菌(MT)全染色体DNA进行光照标记,然后与不同菌种DNA进行斑点杂交反应和Southern转移杂交,以亲和素-碱性磷酸酶(A-Ap)系统显色。探针的敏感性为1.5ng。探针与MT和卡介苗(BCG)DNA杂交呈强阳性;与其它分支杆菌DNA杂交呈弱阳性,与大肠杆菌质粒pUC19DNA杂交呈阴性;但与链霉菌染色体及其质粒p1J486DNA杂交也呈弱阳性。该探针的敏感性和特异性与放射性同位素~(32)p标记的MT探针的结果完全一致,而且适于常规实验室推广应用。     

生物素化质粒rep20探针检测恶性疟原虫感染的研究

Bio—ll—dUTP经切口平移法标记于质粒rep20,自身杂交敏感度为100pg。检出云南株Pf(恶性疟原虫)培养血和病人血样中pf密度低限分别为1/10~5和1/10~4(虫/红细胞),病人血样中最低pf检出数为12000个。检测30份云南省恶性疟患者血样,28份阳性;检测20份云南省和海南省问日疟患者血样、29份正常人血样均为阴性;与三种动物疟原虫及人白细胞的DNA未出现杂交反应。表明质粒rep20对云南株pf具有高度同源性和特异性,该生物素化探针检测Pf具较高敏感性。     

不同DNA探针检测疟原虫的灵敏度比较

本文通过分子杂交技术,以恶性疟原虫为靶DNA,对从恶性疟基因文库中筛出的含有高度重复顺序的pBF_4DNA探针和含单考贝基因的pBF_(13)DNA探针以及恶性疟原虫全基因组DNA探针进行了杂交比较,结果pBF_(13)DNA探针比全基因组DNA探针敏感度低10倍,比pBF_4DNA探针敏感度低100倍,全基因组DNA探针可检到的DNA含量为100pg。