应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测胰岛素mRNA

成年雄性Ｗｉｔａｒ大鼠，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针在胰腺切片上进行原位杂交，以检测胰岛Ｂ细胞胰岛素基因表达产物ｍＲＮＡ；同时并用免疫组织化学法显示相邻切片胰岛素免疫反应阳性细胞，进行比较，胰腺经４％多聚甲醋灌注固定，经Ｂｏｕｉｎ液再固定２０ｈ，常石蜡包埋和切片，经胰岛素ｃＲＮＡ探针杂交的胰腺切片中胰岛Ｂ细胞和核仁呈阳性反应，阳性信号为蓝色颗粒，胰岛其他细胞及胰腺泡细胞为阴性，方法照切片中均无阳性信     

地高辛标记的cDNA探针检测IL—6mRNA表达的方法

ＩＬ 6(ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 6)是一种由多种细胞分泌的细胞因子 ,在血液病及心、脑疾病时有异常表达。ＩＬ 6被认为是目前治疗各种血小板减少症的最佳药物 ,在治疗白细胞减少症及抗白血病、抑制肿瘤转移及骨髓移植方面也有重要作用。迄今 ,ＩＬ 6的检测多采用以细胞培养为基础的生物学活性检测 ,该方法不仅难以反映ＩＬ 6基因转录水平 ,而且特异性和灵敏度均受到限制。本文采用随机引物法对人ＩＬ 6ｃＤＮＡ探针进行地高辛标记 ,核酸分子原位杂交技术 ,建立了在转录水平上直观检测ＩＬ 6ｍＲＮＡ表达的实验技术 ,为研究ＩＬ 6的基因表达…     

用PCR制备地高辛精标记的单链探针进行原位杂交

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法制备地高精标记的单链探针，用以原位检测低丰度的β肾上腺素能受体ＭＲＮＡ在大鼠肺组织中扮布。结果表明本方法制备的探针的检测敏感性显著高于用随机引物法标记的双链探针。已克隆于载体的ＣＤＮＡ或ＲＴ－ＰＣＲ产物均可作为模板合成单链探针，江ＤＡＴＰ、ＤＣＴＰ、ＤＧＴＰ浓度各为２００μｍｏｌ／Ｌ，ｄＴＴＰ＋Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度降至５０－７５ μｍｏｌ／Ｌ，扩增产量无显著变化，ｄＴＴ     

地高辛精标记RNA探针原位杂交的简便方法

用地高辛精标记ＴＨ基因合成ＲＮＡ探针，在冰冻组织切片上进行原位杂交，通过碱性磷酸酶催化的呈色反应，检测在基因治疗帕金森病大鼠动物模型研究中酪氨酸羟化酶基因在脑内的表达。实验结果表明，简化原位杂交方法可适应于任何实验室。     

地高辛标记的大鼠nNOS mRNA探针的制备和应用

目的　制备大鼠神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)地高辛 (digoxigenin)标记的RNA探针 ,探讨nNOS在脊髓中的表达定位。方法　采用RT PCR方法 ,从大鼠脑组织中扩增nNOS基因mRNA部分片段 ,并经序列测定。以dig nNOSmRNA为探针 ,采用原位杂交观察成年大鼠脊髓组织中nNOSmRNA表达。结果　RT PCR法扩增出一特异产物与预期长度 2 4 0bp相符 ,T载体克隆测序与nNOS基因 10 0 %同源。原位杂交结果显示阳性信号出现在成年大鼠脊髓组织中。结论　采用RT PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织nNOS基因克隆 ,dig nNOSmRNA探针原位杂交显示正常SD大鼠腰段脊髓组织中表达nNOSmRNA。     

地高辛标记的cDNA探针检测GM-CSFmRNA表达

采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针进行地高辛标记,核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞、骨髓基质细胞、白血病细胞株（ＨＬ－６０,Ｋ５６２）、脐血细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：地高辛标记的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ 探针使用简便、灵敏度高、特异性强、杂交结果直观,探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。     

地高辛标记探针原位杂交检测肝内HDV RNA

本研究采用随机引物法用地高辛标记ＨＤＶ　ｃＤＮＡ全基因片段作为探针，通过原位杂交方法检测了５８例慢性乙型肝炎患者的肝组织石蜡切片中的ＨＤＶ　ＲＮＡ，发现ＨＤＶ　ＲＮＡ阳性者９例，检出率为１５．５％。ＨＤＶ　ＲＮＡ阳性物质在肝细胞内的分布方式有胞浆型、核膜型、核仁型、核膜核仁型和全核型等。ＨＤＶ　ＲＮＡ阳性肝细胞在显微镜下多数正常或只显示轻微病变。本文结果提示ＨＤＶ的致病性并非由于ＨＤＶ的直接细胞毒作用，而是宿主细胞和病毒共同作用结果，但其确切生物学意义还有待进一步探索。     

地高辛标记人IL-2cDNA探针的制备及临床初步应用

目的：制备ＩＬ－２地高辛标记探针,探讨类风湿关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ）患者外周血淋巴细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ的表达情况。方法 采用斑点杂交技术,对６例正常对照和１２例ＲＡ患者进行研究,结果：（１）从ｐＵＣ１２质粒子扩增制备了长度为１ｋｂ和ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段,用地高辛标记后制备探针,其敏感性达１ｐｇ同源ＤＮＡ,且特异性较高,（２）１２例ＲＡ患者外周血淋巴细胞ＩＬ－２ｍＲＮＡ     

地高辛标记的大鼠NGF RNA探针的制备和应用

制备用地高辛标记的神经生长因子(NGF)的RNA探针并用其研究NGF在海马组织中的表达。设计NGF引物,构建NGF/pGEMT重组质粒,分别用ApaⅠ和SacⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针。运用点膜杂交的方法检测探针的敏感度;运用该探针的原位杂交法分析NGF在海马中的表达。本研究成功地构建了NGF/pGEMT质粒,获得了正、反义digNGFRNA探针,并应用该探针在海马中观察到NGFmRNA的表达。本研究的结果为深入探讨NGF在海马发育和损伤过程中的表达奠定了基础。     

地高辛标记的cDNA探针检测GM—GSFmRNA表达

采用随机引物法对人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针进行地高辛标记，核酸分子原位杂交技术对人胸腺细胞，骨髓基质细胞，白血病细胞株，脐 细胞和胎肝组织的ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ的表达水平进行检测。结果表明：地高辛标记的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针使用简便，灵敏度高，特异性强，杂交结果直观，探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。     

地高辛标记的大鼠p75 RNA探针的制备和应用

目的制备用地高辛标记的神经生长因子低亲和力受体(p75)的RNA探针.研究p75在海马组织中的表达.方法设计p75引物,构建p75/pGEM-T重组质粒,分别用ApaⅠ和Sac Ⅰ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶转录合成酶合成地高辛标记的(dig-)正反义RNA探针.运用点膜杂交的方法检验探针的敏感度,运用该探针,通过原位杂交分析p75在海马中的表达.结果构建了p75/pGEM-T质粒,获得高效价的正、反义dig-p75 RNA探针,应用该探针发现p75 mRNA在海马中的表达.结论成功制备了地高辛标记的p75RNA探针,为进一步研究p75在海马中发育和损伤过程中的表达打下基础.     

地高辛素标记探针原位杂交法检测B淋巴瘤CD23基因的表达

目的:研究B淋巴瘤CD23基因表达。方法:SP免疫组化选出20例B淋巴瘤并进行CD23基因蛋白(膜CD23)检测, 地高辛素标记CD23DNA探针原位杂交检测CD23mRNA.结果:膜CD23的阳性率90%, CD23mRNA的阳性率90%.结论:CD23在B淋巴瘤中高表达, 这为研究CD23在B淋巴瘤中的发病机制和临床诊治提供了重要资料。     

用PCR法制备地高辛标记探针诊断DMD基因缺失

用ＰＣＲ法制备地高辛标记探针诊断ＤＭＤ基因缺失余元勋杜氏肌营养不良（ＤＭＤ）是一种对人危害严重的Ｘ－连锁隐性遗传病，大约每３５００名出生男婴中就有１名罹患此病［１］。约２／３的患者基因突变由遗传而来，而另１／３为新突变所致。肌营养不良蛋白（ｄｙｓｔｒ...     

地高辛标记的血小板T细胞活化抗原在cRNA探针的制？…

目的 制备用地高辛标记的血小板Ｔ细胞活化抗原１ｃＲＮＡ探针。方法 构建重组质粒ｐＧＥＭ－３ＺＦ（＋）－ＰＴＡ１,并做序列分析证实ＰＴＡ１基因的插入方向正确后,用ＥｃｏＲＩ消化得到线性ＤＮＡ片段,再用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶转录合成带有Ｄｉｇ标记的高比活度的单链ｃＲＮＡ探针。结果辛标记ＰＴＡ１ｃＲＮＡ探针的制备,为进一步研究ＰＴＡ１ｍＲＮＡ在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具。     

地高辛标记HBV DNA探针原位分子杂交技术

地高辛标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位分子杂交技术马学玲，杜卫东，阎惠平，张月娥自１９７１年Ｃｏｍｂｅｓ首次报道乙型肝炎病毒相关性肾炎（ＨＢＶＧＮ）以来［１］，人们利用各种方法对ＨＢＶＤＮＡ及其相关蛋白在肾小球肾炎发病过程中的作用进行了不断研究。近年有人推测...     

PCR技术在单克隆抗体cDNA的筛选及标记同位素探针上的应用

以往对cDNA克隆鉴定过程中,经斑点杂交筛选出的克隆数较多,在进一步的鉴定中不可避免地要进行质粒扩增、抽提、纯化酶解、片段分离等许多步骤。本文对这一步的鉴定采用了PCR技术,这样便可省去酶解及片段分离等繁琐步骤。且由于扩增片段纯净,故可直接用于Southern blot鉴定及DNA序列分析。 本文另一新的探索是利用PCR法标记探针,尤其是小片段DNA探针,其不同于常用的缺口平移和随机引物延伸标记。由于它在扩增过程中只有位于两个引物间的片段才能标上同位素,所以标记后的探针量大、比放射性强,加之PCR合成仪的出现,使此法更加高效、简便安全。     

地高辛标记的小鼠β—1，4—半乳糖基转移酶IRNA探针的制备和应用

为了制备小鼠β—1，4—半乳糖基转移酶I(β—1，4—galactosyltransferase I，β—1，4—GalT—I)地高辛标记的RNA探针以探讨β—1，4—GalT—I mRNA在坐骨神经组织的表达定位，本研究用提取的小鼠脑总RNA，采用RT—PCR方法，得到β—1，4—GalT—I的DNA片断，将其克隆到pGEM—T载体；采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β—1，4—GalT—IRNA探针；运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度；最后应用该探针，通过原位杂交的方法，分析β—1，4—GalT—ImRNA在小鼠坐骨神经的表达。结果：构建了β—1，4—GalT—I／pGEM—T质粒，获得了高效价的地高辛标记的正、反义β—1，4—GalT—IRNA探针，应用该探针发现β—1，4—GalT—I在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明，制备的地高辛标记的正、反义β—1，4—GalT—-RNA原位杂交探针可特异地检测β—1，4—GalT—ImRNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β—1，4—GalT—I在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。