三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的：初步探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）促进HL-60细胞凋亡及其可能机制。方法：不同浓度的As2O3（0、2.5、5、10μmol/L）作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1mRNA的表达。结果：As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性（P〈0.05）;As2 O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达（P〉0.05）。结论：As2 O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2 O3抑制HL-60细胞ERK活性有关。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡效应及抑制细胞ERK的活性

目的:初步探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)促进HL-60细胞凋亡及其可能机制.方法:不同浓度的As2O3(0、2.5、5、10 μmol/L)作用于HL-60细胞24h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3活化、ERK活性和cyclinD1蛋白的表达,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA的表达.结果:As2O3可抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞的凋亡,并呈浓度依赖性 (P<0.05);As2O3可使HL-60细胞Caspase-3激活,并抑制ERK活性,但不能下调cyclinD1的表达(P>0.05).结论:As2O3能抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应可能与As2O3抑制HL-60细胞ERK活性有关.     

未分化及失分化甲状腺癌治疗进展

未分化及失分化甲状腺癌是死亡率较高的内分泌恶性肿瘤,目前尚缺乏有效的治疗手段,寻找新的治疗手段显得尤为迫切.一系列新的治疗方法的出现为未分化及失分化甲状腺癌患者的治疗提供了可能:基因治疗,如通过恢复抑癌基因功能的基因治疗(恢复P53基因功能)或自杀基因导入治疗,抗肿瘤血管形成的基因治疗,钠/碘转运蛋白(NIS)基因介导的放射性碘治疗;诱导分化治疗如:通过维甲酸及组蛋白乙酰化酶抑制剂诱导分化治疗可促进肿瘤细胞的分化,有助于控制肿瘤的发展,而金属蛋白酶抑制剂的应用可控制肿瘤细胞的转移.而手术方式、放化疗方案的改进及综合应用亦可延长甲状腺未分化及失分化癌患者的生存时间.本文就上述新的甲状腺癌的治疗方案做一综述.     

Ras和磷酸化ERK信号通路参与三氧化二砷逆转耐药作用机制的研究

  目的   体外实验研究三氧化二砷(As₂O₃)对人胃癌阿霉素耐药细胞株(SGC7901/ADM)的逆转耐药机制。   方法   MTT法检测磷酸化ERK(p-ERK)激动剂G-CSF作用前后As₂O₃的逆转耐药倍数; 免疫细胞化学法测定As₂O₃及G-CSF作用前后SGC7901/ADM细胞内Ras和p-ERK的变化; 流式细胞仪测定G-CSF和As₂O₃干预后SGC7901/ADM的细胞周期和凋亡率。   结果   SGC7901/ADM对ADM耐药, As₂O₃可逆转耐药, 其中0.5μmol/L As₂O₃作用48 h后逆转耐药倍数约为6.29。G-CSF干预后, 逆转耐药倍数降至4.72;SGC7901/ADM中Ras表达高于亲本细胞株SGC7901/S, 而p-ERK无明显差异, As₂O₃可下调Ras及p-ERK的表达。G-CSF干预后, As₂O₃下调Ras及p-ERK表达的能力较干预前显著降低。0.1μmol/L和0.5μmol/L As₂O₃组的G₀~G₁期细胞比例和凋亡率均显著高于各个对照组; G-CSF干预后同一剂量的As₂O₃组G₀~G₁期细胞及凋亡率较干预前均显著降低。   结论   As₂O₃可逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM对ADM的耐药作用, 其机制与下调Ras/p-ERK信号传导通路中Ras、磷酸化ERK的表达有关。      

过氧化物还原酶1对蛋白酶体抑制剂诱导未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡作用的研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂对未分化甲状腺癌FRO细胞中过氧化物还原酶1(Prx1)表达的影响,以及Prx1在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用.方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设培养液处理空白对照组,蛋白酶体抑制剂MG132、PSI、Lactacystin处理组;利用RNA干扰技术降低Prx1的表达;实时定量RT-PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞Prx1 mRNA及蛋白表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率.结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂MG132、PSI和Lactacystin均显著增加FRO细胞系中Prx1基因表达水平(P<0.01);与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siPrx1处理组中Prx1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),其凋亡率显著增加(P<0.01).结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中Prx1基因的表达水平,siPrx1具有特异性降低Prx1基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌FRO细胞凋亡作用.     

银杏双黄酮对未分化型甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响与机制研究

目的:探究银杏双黄酮对未分化型甲状腺癌（ATC）细胞顺铂（DDP）耐药性的影响与分子机制。方法:体外培养人ATC细胞8505C,并构建8505C DDP耐药细胞株（8505C/DDP）。用不同浓度的DDP（1.25、2.5、5、10、20 μg/mL）或银杏双黄酮（1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）处理后,CCK-8法检测DDP、银杏双黄酮对8505C、8505C/DDP细胞的毒性作用以及两者联合对8505C/DDP细胞的毒性作用。将8505C/DDP细胞分为DDP组、DDP+银杏双黄酮组、DDP+AMPK抑制剂组、DDP+银杏双黄酮+AMPK抑制剂组,CCK-8法检测细胞增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western Blot检测AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达。结果:DDP对8505C/DDP细胞的半数抑制浓度（IC50）高于8505C细胞（P＜0.05）;银杏双黄酮对8505C/DDP、8505C细胞的IC50无明显差异（P>0.05）;银杏双黄酮可增强DDP对8505C/DDP细胞的敏感性（P＜0.05）。与8505C细胞比较,8505C/DDP细胞中p-AMPK/AMPK比值降低,p-mTOR/mTOR比值升高（P＜0.05）;银杏双黄酮可上调8505C细胞和8505C/DDP细胞中p-AMPK/AMPK比值,降低p-mTOR/mTOR比值（P＜0.05）。与DDP组比较,DDP+银杏双黄酮组8505C/DDP细胞增殖活力、划痕愈合率、侵袭数量、p-mTOR/mTOR比值降低,凋亡率、p-AMPK/AMPK比值升高（P＜0.05）;与DDP+银杏双黄酮组比较,DDP+银杏双黄酮+AMPK抑制剂组细胞增殖活力、划痕愈合率、侵袭数量、p-mTOR/mTOR比值升高,凋亡率、p-AMPK/AMPK比值降低（P＜0.05）。结论:银杏双黄酮可降低8505C/DDP细胞对DDP的耐药性,增强DDP对8505C/DDP细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用以及对细胞凋亡的诱导作用,其作用机制可能与激活AMPK/mTOR信号通路有关。     

迷迭香酸通过MAPK/ERK信号通路对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨迷迭香酸通过丝裂原激活的蛋白激酶/胞外信号调节的蛋白激酶（MAPK/ERK）信号通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。［方法］ 取对数生长期LS174T细胞,加入迷迭香酸（0、25、50和100μmol/L）处理24、48 和72h后,CCK-8法检测迷迭香酸对细胞增殖活性的影响。以100μmol/L迷迭香酸处理细胞,24、48 和72h后,采用流式细胞仪检测迷迭香酸对细胞周期和细胞凋亡率的影响;采用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白的表达及ERK1/2磷酸化水平。［结果］ 迷迭香酸对LS174T细胞呈时间浓度依赖性抑制细胞增殖;100μmol/L迷迭香酸处理LS174T细胞不同时间后,与对照组相比,迷迭香酸组细胞中S期和G2/M期细胞所占比例明显降低,G0/G1期比例显著升高,但组间时间效应不显著（P>0.05）;而Bcl-2蛋白表达、ERK1/2磷酸化水平明显降低,细胞凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著增强,均表现出明显的时效关系（P<0.05）。［结论］ 迷迭香酸能够抑制结肠癌LS174T细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。     

131I治疗老年分化型甲状腺癌患者的效果分析及对胞外信号调节激酶通路蛋白的调控作用研究

目的分析131I治疗老年分化型甲状腺癌患者的效果及对胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白的调控作用。方法对180例老年分化型甲状腺癌患者的临床资料进行研究,分析患者经131I治疗后血清中血细胞及肝肾功能变化,并检测患者血清中ERK通路蛋白水平变化。结果细胞数和血小板数均低于治疗前,差异均有统计学意义(P﹤0.05),而治疗前后红细胞数、淋巴细胞数、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血尿素氮(BUN)、碱性磷酸酶(ALP)及肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)水平比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。血清中ERK信号通路蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(BAX)、p53、p73蛋白水平均升高而Ras、Raf、胞外信号调节蛋白激酶(MEK)、ERK1/2、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白水平均降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论131I治疗老年分化型甲状腺癌患者效果与其调控患者体内ERK信号通路有关,且不影响患者的肝肾功能。     

三氧化二砷诱导恶性肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

三氧化二砷已广泛应用于白血病和各种实体瘤化学治疗的基础研究和临床实践中。近年来国内外多项研究证实三氧化二砷诱导凋亡是其杀伤肿瘤的主要机制,其分子机制尚未得到系统阐明,本文就其抗凋亡作用机制的研究进展作一综述。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3)诱导人卵巢癌细胞株3AO细胞凋亡的机制。方法：以人卵巢癌细胞株3AO细胞为体外实验对象。通过台盼蓝染色法，测定不同浓度As2O3作用不同时间对3AO细胞的生长抑制率；采用流式细胞仪检测法，通过碘化丙（PI）／罗丹明123（Rhodammine 123,Rh123)双重染色测定3AO细胞线粒体跨膜电位（△ψm) ；通过吖啶橙染色，荧光显微镜观察As2O3作用后3AO细胞的形态变化。结果：As2O3对3AO细胞的生长具有明显的抑制作用，且具有时间与剂量依赖性（P＜0．05）；3.0μmol/L的As2O3作用48h后3AO细胞中PI－Rh123^-细胞与对照组相比，差异有显著性（P＜0．05）；As2O3作用后，3AO细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征。结论：As2O3通过诱导凋亡来抑制人卵巢癌细胞株细胞的生长，其机制与线粒体跨膜电位△ψm下降有关。     

利用网络分析预测As2O3治疗结直肠癌的靶基因

目的:探究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）作用于结直肠癌的靶基因。方法:利用pharmGKB数据库和drugbank5.0数据库分别提取三氧化二砷的直接靶基因,利用STRING10.5数据库筛选与三氧化二砷已知靶基因互相作用的蛋白,利用webGestalt数据库对互作蛋白进行通路分析和GO注释,运用cBioProtal数据库和The Human Protein Atlas 数据库对重点通路的核心基因进行变异和表达分析。结果:pharmGKB数据库和drugbank5.0数据库共提取出11个直接靶基因,STRING10.5数据库筛选出384个互作蛋白,webGestalt数据库的GO注释这384个靶基因主要集中于19类分子功能,在前10条通路中筛选出3条与结直肠癌有关的通路,3个核心基因在结直肠癌中存在点突变和基因缺失,其中NF-κB1和RELA在结直肠癌组织中存在高表达。结论:三氧化二砷可能通过 NF-κB信号通路治疗结直肠癌。     

As2O3和全反式维甲酸对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的 探讨As2O3和全反式维甲酸(ATRA)对人宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响及其机制.方法 采用不同浓度As2O3和ATRA分别作用于人官颈癌HeLa细胞,观察细胞形态;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot法检测细胞中N-myc下游调节基因1(NDRG1)mRNA和蛋白的表达.结果 As2O3和ATRA能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,12.5 μmol/L As2O3处理HeLa细胞48 h的抑制率为(36.5±1.2)%,明显高于同时间低浓度组;1 × 10-5mol/LATRA处理HeLa细胞48 h的抑制率为(23.5±3.1)%,明显高于同时间低浓度组,并且同浓度的药物处理72 h的抑制率高于处理48 h的抑制率,呈浓度和时间依赖性(P<0.05).As2O3和ATRA能够从分子水平和蛋白水平上调宫颈癌HeLa细胞中NDRG1基因的表达,12.5 μmol/L As2O3和5×10-6mol/L ATRA处理HeLa细胞后,NDRG1 mRNA表达量分别为0.942±0.169和0.894±0.138,明显高于低浓度组的表达量;12.5 μmol/LAs2O3和5×10-6 mol/LATRA处理HeLa细胞后,NDRG1蛋白表达量分别为1.220±0.202和1.233±0.103,明显高于低浓度组的蛋白表达量.结论 As2O3能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,其抑制作用与NDRG1基因的表达上调相关.

Abstract：

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As2O3 ) and all-trans retinoic acid ( ATRA ) on human cervical carcinoma HeLa cell line.Methods HeLa cells were treated with As2O3 and ATRA.The cell proliferation was evaluated by MTT assay.The expressions of NDRG-1 protein and mRNA were determined by Western blot and RT-PCR analysis.Results MTT assay showed that As2O3 and ATRA inhibited the growth of human cervical carcinoma HeLa cells in vitro in a dose- and time-dependent manner.Western blot and RT-PCR techniques showed that As2O3 and ATRA down-regulated the expressions of NDRG-1 protein and mRNA (P < 0.05 ) .Conclusion As2O3 and ATRA can significantly inhibit the growth and proliferation of HeLa cells.The reason of these changes may be related with the down-regulation of expression of NDRG-1.     

三氧化二砷抑制裸鼠胃癌腹腔种植腹水生成

 目的　研究As2 O3对裸鼠胃癌腹腔种植腹水生成的影响及其作用机制。方法　 10 0只BALB/C nu/nu裸鼠腹腔内接种胃癌MKN 4 5细胞株后 ,随机分为 5组 ,然后分别腹腔内注射生理盐水、表阿霉素及不同剂量的As2 O3,观察癌细胞株对各组裸鼠的致瘤率、腹水生成量及生存时间的影响 ;透射电镜观察As2O3作用后腹腔内肿瘤细胞的形态学变化。结果　表阿霉素、低剂量As2 O3与生理盐水对照组相比可显著抑制裸鼠腹水的生成 ,延长生存期 (P <0 .0 1) ;中高剂量As2 O3还可通过诱导肿瘤细胞凋亡消除腹腔内肿瘤细胞、抑制腹水产生、而使裸鼠寿命明显延长。结论　As2 O3可通过诱导胃癌细胞凋亡而抑制或消除裸鼠胃癌腹腔种植及腹水的生成 ,不同程度地延长生存期。     

As2O3联合Ad-pml体外抗肝癌细胞作用的实验研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合腺病毒介导的早幼粒细胞性白血病基因(promyelocytic leukemia-adenovirus,Ad-pml)体外抗肝癌细胞作用。方法:同时设Ad-pml组、As2O3组、As2O3联合Ad-pml组以及正常细胞对照组,运用分子生物学和细胞生物学技术,观察联合应用As2O3和Ad-pml在体外治疗肝癌的效果,并进一步探讨其作用机制及特点。结果:Ad-pml与As2O3对肝癌细胞体外生长的影响:两因素析因设计分析结果表明,单用Ad-pml处理肝癌细胞,其抑制作用随Ad-pml MOI值的增加而增加(P<0.05),单独应用As2O3在浓度小于5μmol/L时,未发现有明显的肿瘤抑制作用(P>0.05);As2O3和Ad-pml联合应用具有协同抗肿瘤作用,二者之间存在着交互作用(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡结果:用Ad-pml和As2O3共同作用肝癌细胞24小时后,早期细胞凋亡率明显增高。RT-PCR结果表明,联合治疗组p53表达最高,而Bcl-2表达最低,相反,肝癌细胞对照组p53表达最低,而Bcl-2表达最高。结论:As2O3和Ad-pml联合应用有协同抗肝癌细胞作用,其机制与增强肝癌细胞凋亡及控制凋亡相关基因的表达有关。     

三氧化二砷对胃癌细胞系SGC7901的生长及VEGF表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对胃癌细胞株SGC7901的生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响.方法：体外培养胃癌细胞株SGC7901,加入不同浓度的As2O3干预,用Western bloting和荧光定量RT-PCR法测定VEGF蛋白和mRNA表达,加入外源性重组人VEGF165,观察VEGF对肿瘤细胞生长的刺激以及As2O3对此作用的抑制.结果：胃癌细胞株SGC7901经As2O3作用后,VEGF的蛋白表达明显减少,但VEGFmRNA拷贝数无差异.在SGC7901细胞培养中加入外源性VEGF165,其细胞活力有所增加,细胞存活率均大于100％;当同时加入VEGF165和As2O3时,其细胞存活率明显减低.结论：As2O3在蛋白水平抑制胃癌细胞株SGC7901的VEGF表达,抑制SGC7901的生长.     

Syk对三氧化二砷诱导脑瘤细胞周期阻滞的影响

背景与目的：探讨Syk（Spleen tyrosine kiruase）的表达对As2O3在诱导脑瘤细胞周期阻滞过程中的作用。材料与方法：将syk基因整合至逆转录病毒载体pIND,与载体pVgRXR协同转染携带突变P53基因的脑瘤细胞U373,诱导Syk表达。用Western blot法分析Syk诱导细胞周期负性调控因子P21的表达;用流式细胞仪分析细胞DNA含量,用共聚焦显微镜观察Syk的表达对As2O3在诱导脑瘤细胞周期阻滞过程中的调节作用。结果：转染syk基因的U373细胞（U373 Syk-ind）在诱导剂PonA的作用下表达Syk蛋白。As2O3可使U373细胞周期停滞于G／M期,而表达Syk的U373细胞被As2O3阻滞于G／M期的细胞比例下降。Syk的表达可上调P21的表达。结论：As2O3可影响脑瘤细胞U373的细胞周期发展,将其阻滞于G／M期,但在诱导癌细胞凋亡的同时也产生了致瘤性,而Syk蛋白的表达可以使被阻滞的细胞比例下降,减少了As2O3治疗肿瘤中的副作用。     

c-Myc和Fas在三氧化二砷体外诱导HL-60细胞凋亡中的变化与作用的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外诱导急性早幼粒白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)细胞HL-60凋亡的分子机制。方法:采用MTT方法检测As2O3对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和Fas蛋白表达,RT-PCR检测c-Myc和Fas的mRNA表达。结果:4.0μmol/L的As2O3作用96h可抑制70%的HL-60细胞,并使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡,P&lt;0.01;Fas蛋白表达升高,作用72h后阳性率由对照组的9.63%增加为32.84%,P&lt;0.01;Fas mRNA表达升高,c-Myc的mRNA表达降低,P&lt;0.01。结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Fas蛋白及mRNA表达,下调c-Myc的mRNA表达。     

p27Kip1在As2O3诱导白血病细胞凋亡中的作用机制

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)及转录生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人HL-60细胞增殖的影响,并探讨相关信号通路.方法:流式细胞术检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测p27Kip1、TGF-β1、Cyclin E和Bcl-2表达,免疫组织化学方法和Western blot方法检测p27Kip1、TGF-β1、Cyclin E和Bcl-2蛋白水平.结果:As2O3、TGF-β1单药或联合处理均可诱导细胞凋亡,以联合处理组凋亡最明显,并且As2O3单药组及联合处理组细胞周期阻滞于G1期.As2O3单药及联合处理组可见p27Kip1、内源性TGF-β1表达上调,Cyclin E和Bcl-2表达下调,外源性TGF-β1处理组可见p27Kip1 mRNA及蛋白表达上调,内源性TGF-β1 mRNA表达上调,内源性TGF-β1蛋白水平与对照组比较无明显变化,Cyclin E和Bcl-2表达下调,联合处理组p27Kip1及内源性TGF-β1表达上调及Cyclin E和Bcl-2表达下调程度强于单药处理组.结论:As2O3诱导细胞凋亡的机制可能是通过上调TGF-β1,从而上调p27Kip1,拮抗Cyclin E和Bcl-2的作用,抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G1期,从而诱导细胞发生凋亡,外源性TGF-β1通过上调内源性TGF-β1,从而上调p27Kip1,增强As2O3诱导细胞凋亡的作用.     

三氧化二砷联合热疗抗人大肠癌细胞的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）注射液联合热疗对人大肠癌细胞LoVo生长的影响及其作用机制。方法：经As2O3注射液联合热疗处理LoVo细胞后采用MTY法测定细胞的增殖抑制效应;应用透射电镜、AO／EB荧光染色法、流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期变化。结果：与As2O3单药或单用热疗相比,As2O3与热疗联合应用后可显著增强抑制LoVo细胞增殖和诱导细胞凋亡作用,并使细胞S期比例明显降低,G0／G1期明显升高。结论：As2O3联合热疗具有协同抗大肠癌作用,其机制可能与联合应用后增强诱导大肠癌细胞凋亡、细胞周期特异性治疗与细胞周期调控剂联合增效有关。