AntisenseGAD67ODN对戊四氮所致慢性癫痫大鼠作用的研究

目的：探讨谷氨酸脱羧酶（GAD）的抗癫痫作用。方法：采用戊四氮制备大鼠慢性癫痫模型，利用反义寡脱氧核苷酸技术，通过选择性地抑制海马GAD基因的表达来观察其对慢性癫阐述 大鼠行为、发作阈值及脑电图的影响；同时，采用高效液相色谱法检测其对海马组织内γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响。结果：给予AntisenseGAD67ODN处理后，GAD67mRNA表达下降、GABA浓度下降、痫性发作潜伏期缩短、发作程度加重及脑电图痫波频率增加。结论：从反面进一步说明GAD基因可能是抗痫基因，为GAD基因治疗癫痫提供实验依据。     

免疫球蛋白对癫痫大鼠γ-氨基丁酸受体及谷氨酸脱羧酶表达的影响

目的探讨免疫球蛋白对癫痫大鼠脑内γ-氨基丁酸（GABA）受体数量、谷氨酸脱羧酶（GAD）表达和细胞凋亡的影响。方法健康SD大鼠10只为空白对照组，其余30只采用印防已毒素（PTX）腹腔注射制做大鼠癫痫模型，模型组大鼠分为癫痫模型对照组、生理盐水（NS）干预组和免疫球蛋白干预组，每组10只。第8天断头取脑分别测定大鼠脑内GABA、GAD和神经细胞凋亡数量。结果致痫大鼠发作后，脑组织GABA受体数量较对照组数量增加，GAD表达增强，凋亡细胞出现。经免疫球蛋白干预后，GABA受体数量增加明显，GAD表达也有所增强，而神经细胞凋亡数量与对照组比较明显减少。结论免疫球蛋白可通过提高GABA的数量，增强GAD的表达和阻止神经细胞凋亡来控制癫痫的发作。     

海人酸致癎大鼠海马γ氨基丁酸及其转运体的动态变化研究

目的：研究海人酸(KA)致痫大鼠海马细胞外γ氨基丁酸(GABA)含量及其转运体mRNA表达水平的动态变化以及加巴喷丁干预对它们的影响，为临床上揭示复杂部分发作的发生、发展机制，开发新型抗癫痫药物提供理论依据。方法：海马CA3区注射微量KA建立大鼠复杂部分发作癫痫模型；采用高效液相色谱法测定癫痫大鼠海马细胞外GABA含量的动态变化；采用RT—PCR方法检测癫痫大鼠海马I型GABA转运体mRNA在不同时间点的表达；并用药物加巴喷丁(GBP)干预癫痫的发作，检测GBP对上述指标的影响。结果：给予KA后各时间点癫痫大鼠海马GABA浓度呈先低后高的增长趋势，24h内各组GABA浓度明显低于对照组，72h和7d组与对照组无明显差异，30天组明显高于对照组，GBP干预使大鼠海马细胞外GABA浓度增加；给予KA后2、6、12h，三组海马GAT-1mRNA表达明显升高，但有逐渐下降的趋势，24h恢复至正常水平，72h后显著下降。GBP可在一定程度上抑制GAT-1mRNA在大鼠海马的表达。结论：KA致痫大鼠急性癫痫发作传播和泛化的主要原因是脑组织中突触间隙GABA的显著减少。随后出现GABA能神经元抑制功能的代偿性增加，可能是机体内源性抗癫痫机制增强的的一种反应。     

迷走神经刺激对戊四氮癫痫大鼠海马区γ-GABA、Glu和脑电变化

目的 观察VNS对正常大鼠和戊四氮(PTZ)致癫痫大鼠的脑电图的影响,以及测定海马区GABA,GLU的变化.进一步探讨迷走神经刺激(VNS)的抗癫痫机制.方法 随机分为对照组、刺激A组、刺激B1组、刺激B2组、刺激B3组、刺激C组,各10只.分别观察脑电图和测定海马GABA、GLU的变化.结果 VNS可明显延长致病大鼠癫痫发作和痫波释放的潜伏期(P<0.05),减轻癫痫发作的严重程度,并能抑制皮层及海马癫痫波的释放,VNS对正常人鼠脑电图无影响.刺激各组海马GABA升高,GLU下降,组与组之间有明显差异P<0.05.结论 VNS可明显抑制PTZ诱导的大鼠癫痫.     

托吡酯对戊四氮点燃慢性癫痫大鼠海马Fas表达的影响

目的探讨托吡酯(TPM)对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫大鼠海马Fas表达的影响及其对海马神经元的保护作用。方法48只大鼠随机分为健康对照组(A组)、PTZ单纯致痫组(B组)、TPM40mg/kg干预组(C组)、TPM80mg/kg干预组(D组),通过腹腔注射PTZ建立慢性癫痫模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学改变,并用免疫组化染色观察Fas蛋白的表达。结果TPM可以明显抑制大鼠的痫性放电,减少其痫性发作级别,C组、D组与B组比较重型发作率明显降低(P<0.01);此外,TPM干预组凋亡相关基因Fas表达明显减低(P<0.01)。结论在PTZ慢性点燃癫痫大鼠模型中,TPM可降低凋亡相关基因Fas表达,从而减轻海马神经元的凋亡程度。     

经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮致痫大鼠海马谷氨酸脱羧酶表达的影响

目的 观察经皮三叉神经电刺激(TNS)预处理对戊四氮(PTZ)致痫大鼠癫痫行为及海马谷氨酸脱羧酶65、67(GAD65、GAD67)表达的影响.方法 将大鼠分为对照组和TNS组,分别给予连续1、7、14、28 d的假刺激和经皮TNS预处理后腹腔注射PTZ,观察给药后2 h内大鼠癫痫发作行为学表现,并应用免疫组化方法观察...     

马桑内酯致慢性癫痫鼠海马谷氨酸脱羧酶阳性神经元的变化

目的：观察马桑内酯慢性癫痫模型中谷氨酸脱羧酶(glutamlc acid decarhoxylase，GAD)阳性神经元的变化与癫痫的关系。方法：用马桑内酯(coriaria lactone，CL)亚致惊剂量肌注的方法建立慢性癫痫模型，对照组以生理盐水注射。用振动切片机连续冠状切片，选取含海马结构中部的相邻切片，行GAD65／GAD67免疫组织化学染色。结果：1．马桑内酯致痫组大鼠均被点燃，且随着注射次数的增加，发作的潜伏期逐渐缩短(从50min减少到10min左右)，发作时间逐渐延长(从数分钟到数十分钟)，对照组均无发作。2，海马各区和齿状回GAD65／GAD67阳性神经元数在马桑内酯致痫组明显低于正常组，免疫反应减弱。结论：马桑内酯致痫鼠中GAD65／GAD67神经元数目的减少，免疫反应减弱，与癫痫关系密切。     

愈痫灵对慢性致痫大鼠海马区氨基酸含量的影响

目的探讨以化瘀通络为组方原则的愈痫灵 (YXL)颗粒剂对慢性致痫大鼠氨基酸含量的影响。方法采用腹腔注射戊四氮 (PTZ)造成慢性癫痫大鼠模型 ,以高效液相色谱法 (HPLC)检测海马区氨基酸的含量。结果愈痫灵颗粒剂可明显减轻癫痫大鼠发作程度或缩短发作时间 ;使癫痫大鼠海马区兴奋性氨基酸Glu、Asp的含量减少 ,抑制性氨基酸GABA含量升高 ,与模型组比较具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论愈痫灵颗粒剂可调节海马区兴奋性和抑制性氨基酸含量的平衡失调 ,从而减轻癫痫大鼠发作程度和发作时间     

褪黑素对癫痫状态大鼠海马GAD67 mRNA表达的影响

目的 从神经递质角度探讨褪黑素(melatonin,Mel)抗癫痫作用的机制.方法 采用匹罗卡品(pilocarpine,PILO)诱发大鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE)模型,观察大鼠SE后4个时相点即6、48、72 h和7 d海马GABA含量和GAD67 mRNA表达的变化,以及Mel对其变化的影响.结果 PILO诱导大鼠SE后6 h至7 d,海马GABA含量显著降低,与对照组比较差异极显著(P＜0.01),GAD67 mRNA的表达于SE后6～72 h较对照组明显降低(P＜0.01),SE后7 d,GAD67 mRNA的表达升高并明显高于对照组(P＜0.05);PILO Mel组大鼠SE后6 h至7 d,海马GABA水平显著高于PILO组(P＜0.01),并且GAD67 mRNA的表达在SE后6～72 h,也显著高于PILO组大鼠(P＜0.05).结论 Mel可能通过上调GAD67 mRNA的表达,使GABA合成增加,抑制功能增强来发挥抗癫痫作用.     

致痫大鼠海马谷氨酸及γ⁃氨基丁酸在痫性发作后含量变化规律

目的：通过检测戊四氮（pentrazole，PTZ）致痫大鼠海马谷氨酸（glutamic amino acid，Glu）及γ?氨基丁酸（γ?aminobutyric amino acid，GABA）在痫性发作后30 min内的含量变化，研究癫痫的终止机制。方法：通过PTZ皮下注射建立SD雄性大鼠急性痫性发作模型，当大鼠痫性发作达Ⅳ~Ⅴ级时，分别于发作时（立即）及发作后5、10、15、20、25、30 min处死大鼠，断头取海马，采用高效液相色谱法检测海马组织Glu与GABA含量。生理盐水皮下注射作为正常对照组。结果：痫性发作达到Ⅳ~Ⅴ级时，0、5、10、15、20、25 min组海马组织Glu含量较正常对照组明显升高，差异具有统计学意义（P < 0.05），之后开始下降，30 min组Glu含量与正常对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）；海马组织中GABA含量在5 min时显著增高（P < 0.05），随后开始下降，10 min时下降至最低，在15 min时再次缓慢升高，持续至25 min时达到高峰（P < 0.05），之后开始下降。结论：痫性发作后Glu与GABA含量存在随时间变化的规律，Glu与GABA之间达到动态平衡，是癫痫发作终止的原因之一。     

Effects of antisense glutamic aciddecarboxylase oligodeoxynucl eotide on epileptic rats induced by pentylenetetrazol

ＧＡＢＡｉｓｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒｉｎｔｈｅｂｒａｉｎ ＩｔｈａｓｂｅｅｎｐｒｏｖｅｄｔｈｒｏｕｇｈｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｔｈａｔｔｈｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆＧＡＢＡ ｅｒｇｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｅｓｓｅｉｚｕｒｅｓ,ｗｈｅｒｅａｓｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓａｒｅｇｏｔｔｅｎｉｎａｎａｎｔｉｃｏｎｖｕｌｓａｎｔｅｆｆｅｃｔ Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍａｎｙａｎｔｉ ｅｐｉｌｅｐｓｙｄｒｕｇｓｏ…     

迷走神经刺激对戊四氮致痫大鼠行为及脑电图的影响

为探讨迷走神经刺激（ＶＮＳ）的抗癫痫作用,观察了ＶＮＳ对正常大鼠和戊四氮（ＰＴＺ）致痫大鼠行为和脑电图的影响,结果发现,ＶＮＳ可明显延长致痫大鼠癫痫发作和痫波释放的潜伏期（Ｐ＜０．０５）,减轻癫痫发作的严重程度（Ｐ＜０．０１）,并能抑制皮层及海马癫痫波的释放（Ｐ＜０．０１）,而对正常大鼠脑电图无影响。结果提示ＶＮＳ可明显抑制ＰＴＺ诱导的大鼠癫痫。     

氯喹对戊四氮致痫大鼠脑内神经递质表达的影响

目的 研究氯喹对戊四氮(PTZ)致痫大鼠脑内星形胶质细胞介导的腺苷激酶(ADK)及谷氨酸(Glu)表达的影响,探讨氯喹在控制癫痫发作中的治疗作用及机制。方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组、戊四氮(PTZ)致痫组和氯喹干预组,每组10只。观察大鼠行为表现,记录脑电改变,免疫组化法检测3组大鼠脑内ADK和Glu的表达水平。结果 对照组大鼠无痫样发作,戊四氮(PTZ)致痫组大鼠癫痫发作严重(Ⅳ~Ⅴ级),脑电图记录呈频发高幅的癫痫样波,氯喹干预组大鼠的痫样发作有所减轻(Ⅰ~Ⅲ级),脑电图显示癫痫样波幅低且缓。戊四氮(PTZ)致痫组大鼠脑内ADK和Glu表达增强,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),采用氯喹干预后,大鼠脑内ADK及Glu表达降低,与癫痫组相比差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 氯喹可减轻癫痫大鼠的痫样发作,抑制脑内ADK的表达水平,并能降低Glu的含量。     

戊四氮致痫大鼠海马c-FOS蛋白表达及钙拮抗剂的影响

目的：探讨戊四氮（PTZ）致痫后大鼠的海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS蛋白表达情况，和钙拮抗剂尼莫地平对c-FOS蛋白表达的影响。方法：大鼠腹腔注射PTZ 60mg/kg建立急性癫痫动物模型，测定痫性发作潜伏期、发作强度，用免疫组化LSAB法检测2h和4h后c-FOS的表达。结果：对照组大鼠无癫痫发作，干预组痫性发作潜伏期较致痫组明显延长（P＜0．01），且发作强度明显减弱（P＜0．01）；对照组海马各区c-FOS仅低水平表达，致痫后表达明显增高（P＜0．01），干预组2h比致痫组2h的c-FOS阳性率明显降低（P＜0．01），4h干预组与致痫组无显著性差异（P＞0．05）。结论：大剂量PTZ可诱发大鼠全面阵挛发作，诱导海马锥体细胞、齿状回颗粒细胞c-FOS表达增高，海马结构涉及PTZ致痫引起阵挛发作的发展或传播的病理生理机制，尼莫地平可延缓癫痫的发生，减轻发作强度，降低c-FOS的表达。     

穴位埋药线对难治性癫痫大鼠大脑海马及皮质多药耐药基因MDR1b的影响

目的探讨穴位埋药线对难治性癫痫大鼠大脑海马及皮质中多药耐药基因MDR1b的影响。方法选用雄性SD大鼠120只。随机分为空白对照组、模型组、拉莫三嗪组、普通线组、药线组。普通线组与药线组均取大椎、肝俞（双）、血海（双）、丰隆（双）穴,先埋一侧穴位,间隔15d后埋对侧穴位;拉莫三嗪组按照人用拉莫三嗪剂量为5mg／（kg·d）换算灌胃大鼠。每日2次;模型组给予灌胃同等体积（2mL／d）的蒸馏水,均干预30d。采用荧光实时定量聚合敏链反应（RT—PCR）的方法检测多药耐药基因MDR1b在海马与颞叶皮层的表达。结果与模型组相比,药线、普通线、拉莫三嗪干预后能降低致痫大鼠海马区多药耐药基因MDR1b的表达水平（P〈0．05）;与空白对照组比较,模型组中致痫鼠海马区多药耐药基因MDR1b的表达水平明显升高（P〈0．01）;与普通线组比较,药线组明显降低致痫大鼠海马区多药耐药基因MDR1b的表达水平（P〈0．05）;模型组的海马区与颞叶皮质区多药耐药基因表达差异有统计学意义（P〈0．05）。结论埋药线逆转与降低致痫大鼠海马区及皮质区多药耐药基因的表达水平．可能是其抗癫痫生物学作用机制之一。     

戊四氮致癫痫大鼠脑内nNOS表达的实验研究

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)的nNOS(神经元型)亚型在戊四氮致癫痫大鼠模型中海马部位的变化情况。方法 PTZ点燃癫痫大鼠,随机分为对照组、PTZ组观察大鼠癫痫发作后的行为学变化,脑电图描记,采用免疫组化,免疫印迹(Western blot)方法检测大鼠海马组织中nNOS表达的影响。结果注射PTZ后大鼠出现癫痫发作。EEG表现为尖、棘波节律。nNOS在癫痫大鼠大脑海马区阳性细胞表达升高。结论 PTZ诱导癫痫发作大鼠海马区内nNOS阳性细胞表达升高,起到致癫痫的作用。     

Effects of Chloroquine on GFAP, PCNA and Cyclin D1 in Hippocampus and Cerebral Cortex of Rats with Seizures Induced by Pentylenetetrazole

The effects of chloroquine on glial fibrillary acidic protein （GFAP）, proliferation cell nuclear antigen （PCNA） and Cyclin D1 in hippocampus and cerebral cortex of rats with seizures induced by pentylenetetrazole （PTZ） were observed in the present study. Forty-eight male adult Sprague-Dawley （SD） rats were randomly divided into control group, chloroquine intervening group, and PTZ group. The behavior and electroencephalogram （EEG） were observed and recorded. GFAP and PCNA were examined with immunohistochemistry. The content of Cyclin D1 in hippocampus and cerebral cortex was inspected with Western blot. The results showed no seizure activity in the control group, severe seizure activity in the PTZ group （Ⅳ - Ⅴ degree）, and slight seizure activity （ Ⅰ -- Ⅲ degree） in the chloroquine intervening group （P〈0.05）. EEG recordings showed no epileptic spikes in the control group, high amplitude with fast frequency in the PTZ group, low amplitude and slow frequency in the chloroquine intervening group. The expression of GFAP and the positive index of PCNA in the PTZ group were higher than those of control group （P 〈0.05 and P〈0.01, respectively）. No differences in GFAP expression and PCNA index were observed between chloroquine intervening and control groups （P〉0.05）. The content of Cyclin D1 in hippocampus and cerebral cortex was significantly higher in the PTZ group than in control and chloroquine intervening groups （P〈 0.05）. Therefore, it is considered that chloroquine, by inhibiting the functions and proliferation of glial cells in the hippocampus and cerebral cortex, can alleviate the seizure activities. These results suggest that chloroquine may be an ideal anticonvulsant in preventing and treating epilepsy.