海螵蛸多糖的提取分离及活性组分CPS-1的纯化

目的:从海洋中草药海螵蛸(乌贼骨)中提取分离得到多糖活性物质.对粗多糖中主要的活性组分CPS-1进行纯化,得到成分相对均一的天然活性多糖.方法:用热水抽提法提取海螵蛸多糖粗品,并对提取工艺进行正交设计,优化提取方法.对粗品组分进行总糖量测定.用DEAE-Sepharose F.F柱及Sepharose CL-6B柱对海螵蛸多糖粗品进行分离.通过活性检测实验确定活性部分.最后使用Sephacryl S-300柱进一步纯化.用HPLC来检测精品多糖的纯度.标准曲线法测定相对分子质量.结果:成功得到海螵蛸粗多糖.经过离子交换柱DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B柱及分子筛Sephacryl S-300柱的进一步分离纯化和活性跟踪,最后得到相对均一的活性精品多糖CPS-1,其含糖量达93.6%,相对分子质量为1×106.结论:不同的提取条件影响海螵蛸多糖的得率.不同性质的分离材料能够将相对分子质量及电荷有差异的多糖分离,达到分离的目的.精品多糖CPS-1是从海洋中草药海螵蛸中得到的均一多糖组分.     

正交设计优选酶法提取甘草多糖的工艺研究

【目的】研究酶法提取甘草多糖的最佳工艺。【方法】运用正交设计法设计酶法提取工艺,采用分光光度法测定多糖含量。【结果】酶法提取甘草多糖的最佳工艺是温度40℃、pH值5.0、加酶量5 g.kg-1、提取时间5 h。【结论】酶法提取甘草多糖速度快,提取率高。     

贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

目的：分离纯化贻贝多糖MP—I，并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法：采用热水提取，Sevage法除蛋白分离得粗多糖，DEAE-Sepharose、SepharoseCL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP—I。用GC及TLC法进行单糖组分的分析，用MTT法进行体外抗肿瘤活性的研究。结果：得到贻贝多糖纯品MP—I，多糖的得率为2．14％。单糖组分分析显示MP—I主要由葡萄糖组成，MP—I（0．5，0．1，0．02mg／m1）对体外HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞均有不同程度抑制作用（P〈0．01），其中高浓度组对HO-8910、MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别达到30．55％和36．38％。结论：贻贝多糖MP—I主要由葡萄糖组成，对HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞有体外抑制作用。     

补骨脂中补骨脂素的提取及纯化

目的 从中药材补骨脂中提取补骨脂素。方法 补骨脂经粉碎后用50%乙醇浸渍提取,浸提液进行浓缩沉淀,得到膏状物,膏状物用甲醇溶解,活性碳脱杂质,再除去溶剂,放置过夜析出晶体。甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体,甲醇重结晶后得针状白色晶体。薄层分析、高效液相色谱分析其纯度。紫外吸收光谱、H1-NMR谱鉴定其结构。结果与结论晶体物得率0.147%,是一个单体,经过波谱分析确定其为补骨脂素。用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法。     

霍乱肠毒素的纯化与鉴定

本法纯化的肠毒素有下列特点:1.纯化毒素与粗制毒素对抗血清呈现单一线条,并与标准抗血清完全融合。2.经免疫电泳、等电点聚焦电泳等方法测定其结果与美国制备肠毒素一致。3.本法所纯化的毒素与自然类毒素未分开,其家兔兰斑试验为IBD/0.002μg,回收率达35%,且杀弧菌抑制试验为阴性。     

贻贝水溶性多糖MP-Ⅰ的分离纯化及体外抗肿瘤活性研究

目的:分离纯化贻贝多糖MP-Ⅰ,并进行体外抗肿瘤活性的研究.方法:采用热水提取,Sevage法除蛋白分离得粗多糖,DEAE-Sepharose、Sepharose CL-6B柱层析纯化的方法从东海厚壳贻贝中得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ.用GC及TLC法进行单糖组分的分析,用MTT法进行体外抗肿瘤活性的研究.结果:得到贻贝多糖纯品MP-Ⅰ,多糖的得率为2.14﹪.单糖组分分析显示MP-Ⅰ主要由葡萄糖组成,MP-Ⅰ(0.5,0.1,0.02 mg/ml)对体外HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞均有不同程度抑制作用(P＜0.01),其中高浓度组对HO-8910、MCF-7肿瘤细胞的抑制率分别达到30.55﹪和36.38﹪.结论:贻贝多糖MP-Ⅰ主要由葡萄糖组成,对HO-8910、MCF-7、K562、SMMC-7721肿瘤细胞有体外抑制作用.     

人胎盘中Ⅴ型胶原的提取与纯化

V型胶原蛋白广泛地分布于血管壁、基底膜及神经内膜等部位,具有促进神经再生及抗凝血等重要生理功能。据国外文献报道,从人胎盘中提取的V型胶原有两种形式,即AB_2和ABC。国内由于缺乏V型胶原纯品,对其研究受到了限制。本实验参照Miller等人介绍的文献,从人胎盘中提取了V型胶原蛋白(AB_2)。     

桑叶中多糖提取分离工艺的研究

目的 优选桑叶多糖提取分离最佳工艺。方法 比较稀酸、稀碱、蒸馏水3种提取方法，采用L9(3^4)正交试验，对影响多糖的水提取工艺和醇沉分离工艺的因素水平进行了研究，并比较了不同蛋白去除法对多糖提取分离的影响。结果 桑叶多糖的最佳提取工艺为用10倍量蒸馏水在70℃下提取2次，每次1．5h。醇沉分离最佳工艺为醇沉时乙醇体积分数80％，药液浓缩至1mL药液／g生药，pH值为4。用三氯乙酸(TCA)法去除蛋白质的效果优于传统的Savage法。结论 优选的桑叶多糖提取分离工艺稳定可行。     

用正交试验法选择绞股蓝黄酮和皂甙提取的最佳条件

本文用正交试验进行绞股蓝黄酮、皂甙提取条件的选择.结果表明提取温度、溶剂乙醇浓度、溶剂量、提取时间及提取次数对提取效果都有不同程度的影响,以60%的乙醇为溶剂、100℃水浴回流1.5h为最佳提取条件.     

响应面法优化玉竹多糖的酶法提取工艺

[目的]优化酶法提取玉竹多糖的工艺.[方法]在单因素实验的基础上,采用响应面分析法对影响酶法提取玉竹多糖得率的主要因素(酶解时间、酶解温度和酶用量)进行优化,建立了影响因素与玉竹多糖得率之间的函数关系.[结果]玉竹多糖酶法提取的最佳工艺为:木瓜蛋白酶加酶量为6.5 g/L,酶解温度为50C、酶解时间为125 min,在此条件下,玉竹多糖得率达到100.89 mg/g,试验结果与模型预测值相符.[结论]Box-Behnken设计结合响应面分析法可以很好地对玉竹多糖酶法提取工艺进行优化.     

茵陈多糖的提取纯化及含量测定

目的提取纯化茵陈多糖并测定其含量。方法采用sevage试剂、DEAE纤维素色谱柱纯化茵陈多糖,采用苯酚－硫酸法显色,紫外一可见分光光度法对其含量进行测定。结果用Sevage试剂除蛋白的方法是可行的,纯化后的茵陈多糖中多糖含量为63．35％,平均回收率为100．00％,RsD为O．15％（n=6）。结论此方法简单、准确、重现性好,可用于茵陈多糖的提取纯化和含量测定。     

重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达、纯化和鉴定

目的:表达与纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(rhCⅡ250-270),鉴定并确认rhCⅡ250-270多肽与预期的相符。方法:在E.coli BL 21中表达rhCⅡ250-270多肽,使用亲和层析法分离纯化。用限制性酶切、聚合酶链式反应(PCR)、基因序列测定、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹等方法在基因和蛋白水平上对rhCⅡ250-270多肽进行鉴定。结果:纯化的rhCⅡ250-270多肽,大小约43 kD,纯度为89.3%。E coRⅠ和SalⅠ双酶切法和PCR法鉴定测得DNA大小约为500bp和650bp,核苷酸序列测定证实基因DNA序列与设计的完全相符。SDS-PAGE显示rhCⅡ250-270多肽目的蛋白条带的大小约为43 kD,W estern B lotting证实GST融合蛋白上存在CⅡ片段。结论:表达和纯化rhCⅡ250-270多肽与预期的相符,并发现此多肽具有较强的免疫原性。     

海带多糖的提取工艺研究

目的本研究选用超声波方法来提取海带多糖。方法对影响超声波提取多糖的4个因素进行考察,即：温度、时间、超声功率、物料比。在3个水平上进行研究。结果通过数据分析获得超声波提取多糖的最佳方法,即：A2B1C3D3。结论利用超声提取的方法可以节省时间和能源。     

桑叶多糖PMP12的分离纯化及结构初步分析

目的:从桑叶中分离纯化获得均一多糖PMP12,并研究其组成及初步结构.方法:桑叶经热水提取乙醇分级沉淀,脱蛋白、脱色,经DEAE-纤维素和Sephadex G-100凝胶柱层析,得到一个均一多糖组分PMP12,采用气相(GC)、高效液相(HPLC)、红外(IR)、核磁(NMR)、Smith 降解和糖醛酸还原等方法分析其组成和初步结构.结果:PMP12由鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)和葡萄糖醛酸(GluA)组成,其摩尔比为Rha:Ara:Gal:GluA=1:1.56:1.57:1.08;PMP12主链主要是以β-1→3糖苷键连接的鼠李糖,侧链主要是以β-1→2糖苷键及β-1→4糖苷键连接的阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖醛酸.结论:测定分析了桑叶多糖PMP12的组成和初步结构,为桑叶多糖的进一步研究提供依据.     

佛手叶总黄酮超声提取工艺优化及其抗氧化活性研究

【目的】优化佛手叶总黄酮提取工艺,探讨其抗氧化活性,为佛手叶综合开发提供科学依据。【方法】采用超声提取技术提取佛手叶中的总黄酮,以紫外分光光度法测定总黄酮含量,并利用响应面法建立乙醇体积分数、液料比、超声时间与总黄酮得率之间的数学模型,筛选佛手叶总黄酮超声提取的最佳提取工艺参数;同时采用清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子和羟基自由基能力方法 ,评价佛手叶最佳工艺所得总黄酮的抗氧化活性。【结果】超声提取佛手叶总黄酮的最佳工艺条件为乙醇体积分数55%,液料比65∶0.5(m L/g),提取时间42 min,在此条件下佛手叶总黄酮得率为46.89 mg/g,提取的佛手叶总黄酮具有较好的清除DPPH自由基、超氧阴离子和羟基自由基的能力,半数抑制浓度(IC50)分别为(0.061±0.004)g/L、(0.990±0.018)g/L、(5.970±0.170)g/L。【结论】该提取工艺简便、稳定,适用于佛手叶总黄酮的提取;佛手叶具有较好抗氧化活性。     

东北菱粗多糖的提取和纯化方法的评价

目的:研究提取东北菱多糖的最佳溶剂,比较4种多糖纯化方法对东北菱粗多糖的纯化效果。方法:将东北菱粗提物分为3份,分别用甲醇、乙醇和丙酮作为溶剂提取粗多糖。分别采用Sevag法、三氯乙酸法、盐酸法和活性炭法对东北菱粗多糖进行脱蛋白处理。用比色法检测东北菱提取物中多糖水平和纯化后样品中多糖水平和蛋白质水平,比较纯化效果。结果:3种提取物中,以丙酮为溶剂的东北菱提取物中多糖水平最高,为33.69%,蛋白质水平为5.51%。经Sevag法、三氯乙酸法、盐酸法和活性炭法处理后的溶液中多糖水平分别为46.53%、43.44%、41.24%和36.66%;蛋白水平分别为5.64%、5.41% 、5.41%和5.51%。结论:丙酮为提取东北菱粗多糖的最佳溶剂。4种纯化方法各有优缺点,Sevag法对于多糖水平的提高效果明显,适合东北菱粗多糖的提取。     

人源抗HBS-Fab-IFN-α融合蛋白制备和纯化

目的:用生物发酵方法大量制备含重组质粒pBAD/HBs-Fab-IFN-α的Topl0大肠杆菌,用金属亲和层析方法纯化大肠杆菌表达产物,获得大量高纯度的人源抗HBS-Fab-IFN-α融合蛋白。方法:选取含重组质粒pBAD/HBs-Fab-IFN-α的Topl0大肠杆菌单克隆菌落,通过制备一级及二级种液,按比例加入5L发酵罐中进行发酵,发酵过程中在菌体起始密度、诱导剂加入时机、诱导时间以及诱导温度等条件探索成熟的基础上,采用50L大型发酵罐进行批量发酵。所获菌体蛋白通过饱和硫酸铵粗提和Ni-NTA金属螯和层析获得较纯的表达产物,比较表达量,鉴定纯化后蛋白的抗原活性及生物学活性。结果:用5L及50L发酵罐能获得较高蛋白产量的大肠杆菌,经饱和硫酸铵粗提及Ni-NTA金属螯和层析纯化后可获得抗原性及生物学活性较好的抗体片段。结论:发酵罐发酵大肠杆菌,产量高,所获蛋白含量活性较稳定,为批量生产作了准备。     

~1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。