尿酸盐对血管内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)mRNA的影响

目的观察不同浓度或不同时间范围内尿酸盐对人血管内皮细胞（endothelial cell of vessels,ECV）血管细胞粘附分子（VCAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人血管内皮细胞,分别用710μmol／L、1070μmol／L、1430μmol／L（低、中、高）等不同浓度的尿酸盐刺激,用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术测定血管内皮细胞VCAM-1的mRNA表达;尿酸盐终浓度为1070μmol／L,分别孵育细胞8h、16h、24h、48h后用RT-PCR技术测定血管内皮细胞VCAM-1的mRNA表达。结果（1）低、中、高浓度尿酸盐刺激组细胞VCAM-1的mRNA表达均较空白对照组显著提高（P〈0．01）,以中浓度尿酸盐刺激组表达为最高。（2）内皮细胞在中浓度尿酸盐刺激下,8h、16h、24h、48h VCAM-1的mRNA表达均较空白对照组显著升高（P〈0．01）,但其表达于16h达到峰值。结论尿酸盐能直接作用于人的血管内皮细胞,诱导炎症分子的超表达,这也可能是其促进动脉粥样硬化斑块形成的重要机制之一。     

丹皮酚对脂多糖诱导的大鼠血管内皮细胞VCAM-1、TNF-α释放及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的观察丹皮酚(Paeonol,Pae)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)释放血管内皮细胞黏附因子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及Toll样受体-4(toll-like receptor,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路的影响,以阐明Pae抑制VECs黏附功能的分子机制。方法组织块预消化贴壁法分离培养VECs,采用LPS诱导VECs炎性损伤;健康大鼠灌胃给予Pae制备含药血清,反相高效液相色谱法测定血清Pae的含量;RT-PCR法检测TLR4mRNA的表达;凝胶迁移试验检测NF-κB蛋白的表达;免疫组织化学检测VCAM-1的表达;放射免疫法检测TNF-α的表达。结果 Pae含药血清(2.5,5,10μg/mL)作用于LPS诱导的VECs 24h,可抑制VECs中TLR4mRNA和NF-κB蛋白表达,以及VCAM-1和TNF-α分泌,呈现一定的剂量依赖性,其中Pae 10μg/mL的抑制作用均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pae降低TNF-α的释放和VCAM-1水平,可能是通过下调LPS诱导的TLR4/NF-κB信号通路的活化而实现的。     

尿酸利仙含药血清对H2O2所致内皮细胞损伤的影响

目的:观察尿酸利仙含药血清对浓度为100μmol/L(简写为μM)H2O2诱导的人血管内皮细胞(Endothelial cell of vessels,ECV)损伤的影响.方法:用MTT法测定终末浓度为100μMH2O2对不同浓度的尿酸利仙含药血清及正常人血清预处理的ECV存活力的影响.结果:与同浓度正常人血清预处理的H2O2组相比,1%、5%浓度的含药血清加H2O2组能减轻100μMHO诱导的损伤,而10%浓度的含药血清加H2O2组能基本消除H2O2的损伤.不同浓度的合药血清组对未与H2O2接触的ECV存活力无影响.结论:尿酸利仙含药血清能拮抗H2O2对ECV的损伤,起保护ECV的作用.     

妊娠高血压综合征患者胎盘组织中VCAM-1和TNF-α的表达及其意义

目的:探讨妊娠高血压综合征(Pregnancy-induced Hypertension Syndrome,PIH)患者胎盘组织中血管细胞黏附分子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule,VCAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化法检测49例PIH患者和23例正常妊娠产妇胎盘组织中VCAM-1、TNF-α的表达.结果:VCAM-1主要表达于胎盘滋养细胞和血管内皮细胞胞膜、胞质,其中PIH组患者血管内皮细胞中VCAM-1的表达较对照组明显升高(P＜0.01),而滋养细胞中VCAM-1的表达较对照组低(P＜0.01);TNF-α主要表达于血管内皮细胞、合胞体滋养细胞等,PIH患者胚胎组织中TNF-α表达水平较对照组明显升高(P＜0.01).结论:VCAM-1和TNF-α可能在PIH的发生、发展中发挥重要作用.     

脂联素对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞黏附因子mRNA表达的影响

目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVCEs)分泌黏附因子的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、TNF-α刺激组和脂联素干扰组.用PCR方法检测脂联素对人脐静脉内皮细胞VCAM-1,ICAM-1和E-selectin mRNA表达的影响.结果 HUVECs经TNF-α刺激6 h后其VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA表达较对照组相比明显增强(P<0.05);当HUVECs在TNF-α刺激之前首先与不同浓度的脂联素共同孵育一段时间后,其VCAM-1、ICAM-1和E-selectin mRNA表达与单纯给予TNF-α刺激相比明显减弱(P<0.05),并呈现剂量依赖性.结论 脂联素可以通过抑制血管内皮细胞黏附因子的表达水平来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎,抗动脉粥样硬化的作用.     

Effect of resveratrol on TNF-α-induced vascular endothelial inflammation in vitro

目的 观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制.方法 不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中slCAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10 μmol/L)预处理24h后,再用TNF-α( 10 ng/ml)处理24h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平.结果 高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P＜0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7％;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P＜0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P＜0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P＜0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强.结论 白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤.     

白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。     

PI3K/Akt信号通路在转录水平调控VCAM-1表达

目的 探讨PI3K/Akt信号通路是否调控脂多糖诱导的人内皮细胞VCAM-1表达及机制.方法 脂多糖(LPS) 10μg/mL刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)0、6、12、24 h,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VCAM-1蛋白表达,刺激0、4、8、12 h行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA;LPS(10μg/mL,后同)刺激HUVEC 0、30、60、120 min后,Western blot检测PI3K(磷脂酰肌醇-3激酶)、磷酸化PI3K (p-PI3K)、Akt、磷酸化Akt (p-Akt)表达;PI3K抑制剂LY294002(10、50 μmol/L)、Akt抑制剂A6730(2、10 μmol/L)预处理细胞1h后LPS刺激12 h,Western blot检测VCAM-1蛋白表达,刺激8h行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA;加或不加抑制剂,LPS刺激8h加入放线菌素D抑制转录,于0、1、2、3、4h收细胞行RT-PCR检测VCAM-1 mRNA,计算mRNA半衰期.结果 LPS刺激HUVEC(6、12、24 h)后VCAM-1蛋白表达增加(P＜0.05),12h达峰值,VCAM-1 mRNA在刺激后也增加(P＜0.05),8h达峰值;LPS刺激HUVEC后p-PI3K、p-Akt增加,p-PI3K在刺激30 min达峰值(P＜0.05),以后逐渐下降,120 min与0h接近(P＞0.05),p-Akt在刺激30 min明显增加,60 min达峰值,120 min仍高于0 h(P＜0.05);LY294002下调了p-Akt表达(P＜0.05),同时降低VCAM-1蛋白、mRNA合成(P＜0.05);Akt抑制剂也抑制VCAM-1蛋白、mRNA(P＜0.05);PI3K、Akt抑制剂均不影响VCAM-1 mRNA稳定性(P＞0.05).结论 PI3K/Akt信号途径在转录水平调控VCAM-1表达.     

三棱、莪术含药血清对培养的人脐静脉血管内皮细胞生长和VEGF表达的影响

目的 探讨三棱、莪术含药血清对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的血管内皮细胞增殖和VEGF表达影响.方法 以三棱、莪术含药血清作用于VEGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell-1,HUVEC-1),倒置相差显微镜观察细胞形态学改变,MTT法观察细胞增殖情况,Western blot和RT-PCR方法分别检测内皮细胞VEGF蛋白和mRNA的表达.结果 三棱、莪术5.0 g·kg-1·d-1、2.5 g·kg-1·d-1大鼠含药血清可使正常人脐静脉血管内皮细胞排列紊乱,明显梭形化.5.0 g·kg-1·d-1大鼠10%、5%、2.5%含药血清组和2.5 g·kg-1·d-1大鼠10%含药血清组HUVEC-1细胞的增殖显著低于空白血清相同浓度组(P＜0.05).5.0 g·kg-1·d-1、2.5 g·kg-1·d-1大鼠5%的含药血清使HUVEC-1细胞VEGF蛋白、VEGF mRNA表达均显著降低.结论 三棱、莪术含药血清可抑制VEGF诱导的血管内皮细胞增殖,其机制与抑制血管内皮生长因子表达密切相关.     

丙丁酚对晚期糖化终产物刺激的微血管内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的 研究丙丁酚对晚期糖化终产物（AGEs)诱导的微血管内皮细胞血管细胞粘附分子1（VCAM-1）表达的影响及作用机制。方法 采用流式细胞仪测定AGEs刺激及丙丁酚作用后小鼠心脏微血管内皮细胞VCAM-1的表达，采用放射免疫法测定培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。结果 AGEs刺激后VCAM-1表达增加，TNF-α水平升高；丙丁酚干预组VCAM-1表达降低，TNF-α水平下降并具有剂量依赖性。结论 丙丁酚能抑制AGEs诱导的微血管内皮细胞VCAM-1的表达，TNF-α的介导是可能的机制之一。     

化痰祛瘀中药抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的观察化痰祛瘀中药对小鼠主动脉和血管内皮细胞(VEC)微小核糖核酸126(miR-126)及其下游信号表达的调控,研究中医药抑制动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法在细胞实验中,将血管内皮细胞随机分为4组,即对照组、模型组、中药高剂量(86.4 g/kg)含药血清组、中药低剂量(21.6 g/kg)含药血清组。不同组别的血管内皮细胞分别经不同含药血清干预后,观察细胞增殖和凋亡情况,采用RT-PCR和Western blot检测血管内皮细胞中miRNA-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达;体内实验采用HE染色检测各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,采用RT-PCR和Western blot检测主动脉miRNA-126、RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达。结果体外实验结果显示,干预后,与对照组相比,模型组、高剂量组和低剂量组的VEC凋亡率均明显升高(P<0.05),增殖率均明显降低(P<0.05),miR-126 mRNA表达均明显降低(P<0.05),RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05);而与模型组相比,高剂量组和低剂量组的VEC凋亡率均明显降低(P<0.05),增殖率均明显升高,miR-126 mRNA表达均明显升高(P<0.05),RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);与高剂量组相比,低剂量组VEC的凋亡率和增殖率无统计学差异(P>0.05),miR-126 mRNA表达无统计学差异(P>0.05),RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。体内实验结果显示,对照组小鼠主动脉血管管径厚薄均匀,内膜光滑平整,无动脉粥样硬化病灶;模型组小鼠血管管径厚薄不均匀,斑块形成明显,血管管壁厚度、AS斑块截面积显著大于其他各组;中药高剂量组和低剂量组小鼠主动脉各层结构正常,炎性细胞浸润较轻,病变轻,AS斑块较小,病变程度明显轻于模型组。干预后,与对照组相比,模型组、高剂量组和低剂量组主动脉中miR-126 mRNA表达均明显降低(P<0.05),RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,高剂量组和低剂量组主动脉中miR-126 mRNA表达均明显升高(P<0.05),RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);与高剂量组相比,低剂量组主动脉中miR-126 mRNA表达无统计学差异(P>0.05),RGS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1 mRNA和蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论化痰祛瘀中药抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用机制可能与调控miRNA-126,影响其下游信号GRS16、CXCL12、CXCR4、VCAM-1表达有关。     

补肾益精法对系统性硬皮病血管内皮间质转化的影响

目的:探讨补肾益精法中药复方对系统性硬皮病血管内皮细胞内皮间质转化(endothelial to mesenchymal transition,End MT)的影响及机制。方法:采用博莱霉素建立硬皮病小鼠模型,造模同时补肾益精方软皮汤2号方(中药复方)进行干预,4周后HE染色观察小鼠皮肤组织病理、免疫组化法检测α-SMA表达水平;体外构建TGF-β1诱导的血管内皮细胞End MT模型,用补肾益精法含药血清处理48 h后,采用细胞免疫荧光方法检测血管内皮细胞α-SMA表达,Western Blot方法检测血管内皮细胞CD31、FSP1、Snail-1表达水平。结果:HE染色结果显示,模型组小鼠皮肤纤维化区域中,胶原纤维明显增多、胶原间隙变窄、毛细血管明显少于正常皮肤组织;与模型组比较,中药复方组小鼠皮肤胶原纤维较少、间隙较宽、血管数量较多;免疫组化染色检测结果显示,模型组小鼠皮肤组织中血管内皮细胞α-SMA表达高于正常对照组,中药复方组α-SMA阳性表达明显减少。免疫荧光检测结果显示,经TGF-β1诱导成功建立End MT模型,End MT模型组细胞α-SMA高表达,内皮细胞发生间质转化,经含药血清处理后,α-SMA表达明显减少。Western Blot检测结果显示,End MT模型组中Snail-1、FSP1均明显高于对照血清组,CD31明显低于对照血清组;含药血清处理组Snail-1、FSP1表达明显低于End MT模型组,CD31表达高于End MT模型组(P0.05)。结论:补肾益精法对系统性硬皮病血管的保护作用,可能与通过某些途径拮抗Snail介导的End MT所参与的纤维增生性闭塞性血管损伤有关。     

血管软化丸调控miRNA-467b抗动脉粥样硬化的作用与初步机制研究

目的 探讨中药复方血管软化丸通过miRNA-467b靶向脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase,LPL）调控巨噬细胞,减少白细胞介素（interleukin,IL）-6,IL-1β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）等炎症因子分泌和巨噬细胞脂质蓄积,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用与初步机制。方法 将RAW264.7巨噬细胞随机分为5组,即对照组、模型组、miR-467b mimic组、中药高剂量含药血清组、中药低剂量含药血清组;经干预后,采用RT-PCR检测巨噬细胞中pri-miR-467b和LPL mRNA表达;采用高效液相色谱法检测巨噬细胞内胆固醇水平。连续4周高脂饲料（含脂肪21%、胆固醇0.15%）饲养ApoE-/-小鼠复制动脉粥样硬化模型,模型复制成功后,中药高、低剂量组每日分别灌胃血管软化丸86.4、21.6 g/kg,连续给药12周;对照组、模型组每日灌胃0.9%生理盐水86.4 g/kg 。采用免疫组织化学法检测主动脉LPL蛋白表达水平,RT-PCR检测主动脉pri-miR-467b和LPL mRNA表达水平;采用ELISA法检测血清IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1水平。结果 与对照组比较,模型组巨噬细胞pri-miR-467b mRNA表达水平和巨噬细胞内游离胆固醇（free cholesterol,FC）水平均明显降低（P＜0.05）,巨噬细胞内LPL mRNA及其蛋白表达水平以及总胆固醇（total cholesterol,TC）、胆固醇酯（cholesterol ester,CE）水平均明显升高（P＜0.05）。血管软化丸能够无剂量依赖性地升高巨噬细胞pri-miR-467b mRNA表达水平和巨噬细胞内FC水平（P＜0.05）,降低巨噬细胞中LPL mRNA及其蛋白表达水平以及TC、CE水平（P＜0.05）。血管软化丸能够升高主动脉pri-miR-467b mRNA表达水平（P＜0.05）,降低主动脉中LPL mRNA及其蛋白表达水平以及血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、 MCP-1水平（P＜0.05）。结论 血管软化丸抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用机制可能与调控miRNA-467b靶向LPL调控巨噬细胞,减少IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1等炎症因子分泌和巨噬细胞脂质蓄积相关。     

脂联素对TNF-α介导的血管炎症反应的影响及意义

目的:探讨脂联素对TNF-α引起的血管内皮细胞炎症反应的影响.方法:体外培养HUVEC,随机分为正常组、单纯TNF-α刺激组和脂联素与TNF-α联合刺激组;HUVEC与脂联素联合孵育一段时间后再给予TNF-α刺激与单纯TNF-α刺激做对照,观察其N0、NOS、ET-1及MCP-1的表达情况.结果:HUVEC经TNF-α(10ng/ml)刺激6～12个小时后其NO、iNOS、ET-1及MCP-l的表达明显增加(p＜0.01);HUVEC在TNF-α刺激之前与脂联素共同孵育一段时间后,血管内皮细胞NO、iNOS、ET-1及MCP-1的表达明显降低(p＜0.01).结论:在体外,脂联素可以通过抑制某些炎症因子的表达水平来调节血管内皮细胞的炎症反应.     

乌司他丁拮抗炎性因子致血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨乌司他丁(UTI)拮抗重度子痫前期血清及其肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞损伤的效应及机制,为UTI治疗重度子痫前期提供依据.方法 重度子痫前期孕妇10例,均留取血清冷藏备用.人脐静脉血管内皮细胞培养后分组:(1)空白对照组:不给予干预;(2)5％、10％、15％、20％血清组:血管内皮细胞中分别加入5％、10％、15％、20％重度子痫前期患者血清;(3)100U/ml、200 U/ml TNF-α组:在血管内皮细胞中分别加入100 U/ml、200 U/ml TNF-α;(4) UTI联合血清组(UTI+血清组):在20％血清组中分别加入50 U/ml、100 U/ml、500 U/ml、1 000 U/mlUTI;(5) UTI联合TNF-α组(UTI+ TNF-α组):在200 U/ml TNF-α组中分别加入50 U/ml、100 U/ml、500 U/ml和1 000 U/ml UTI.每组设6个复孔,分别干预12、24 h.采用噻唑蓝比色法检测血管内皮细胞增殖活性;采用流式细胞术检测血管内皮细胞凋亡及线粒体跨膜电位的变化.结果 (1)血管内皮细胞增殖活性:干预12 h、24 h时,15％、20％血清组OD值均低于空白组(P＜0.05);干预24 h时,100 U/ml TNF-α组、200 U/ml TNF-α组的OD值均低于空白组(P＜0.05).(2)血管内皮细胞凋亡:干预12 h、24 h时,20％血清组的细胞早期凋亡率、晚期凋亡率均高于空白组(P＜0.05);干预24 h时,500 U/ml、1 000 U/ml UTI组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率均低于20％血清组(P＜0.05).50 U/ml、100 U/ml UTI联合TNF-α组的细胞早期凋亡率、晚期凋亡率与200 U/ml TNF-α组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而500 U/ml、1 000 U/ml UTI联合TNF-α组的细胞早期凋亡率、晚期凋亡率低于200 U/ml TNF-α组(P＜0.05).(3)血管内皮细胞线粒体跨膜电位:50 U/ml、100 U/ml UTI干预组的细胞凋亡率与20％血清组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而500 U/ml、1 000 U/ml UTI组的细胞凋亡率低于20％血清组(P＜0.05);50 U/ml、100 U/ml UTI联合TNF-α组的细胞凋亡率与200 U/ml TNF-α组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而500 U/ml、1000 U/ml UTI联合TNF-α组的细胞凋亡率低于200 U/ml TNF-α组(P＜0.05).结论 乌司他丁可降低TNF-α和重度子痫前期患者血清导致的血管内皮细胞凋亡率,可能与其维持线粒体的跨膜电位平衡有关,提示UTI可作为拮抗妊娠期高血压疾病炎性反应的候选药物.     

TNF-α或mmLDL对人脐静脉内皮细胞PAI-1的影响及其机制

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)或弱氧化修饰低密度脂蛋白(mmLDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PAI-1活性和mRNA表达的影响及其分子机制。方法用发色底物法测定HUVECs培养液中PAI-1的活性。用Northern印迹分析法检测PAI-1基因mRNA的表达情况,并分别用蛋白激酶C穴PKC雪或促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂干预上述诱导实验。结果TNF-α或mmLDL作用HUVEC后,PAI-1活性和mRNA基因表达均明显增加。促分裂原活化蛋白激酶-激酶穴MAPKK雪的抑制剂PD98059(60μmol/L)能明显阻断TNF-α穴100U/ml雪或mmLDL穴50μg/ml雪对PAI-1活性和mRNA的诱导,但PKC的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)和H7(15μmol/L)无显著阻断作用。结论(1)TNF-α或mmLDL能增强血管内皮细胞PAI-1活性与mRNA表达;穴2雪PAI-1活性提高与其mRNA表达增加有关;(3)MAPK途径可能在TNF-α或mmLDL诱导血管内皮细胞PAI-1表达中起重要作用。     

子痫前期血清对血管内皮细胞凋亡及细胞因子表达的影响

目的 探讨子痫前期患者血清诱导血管内皮细胞核因子-κB(NF-κB)活性及血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的结果.方法 对血管内皮细胞株进行体外培养,分别加入正常妊娠及子痫前期患者血清.2 h后Western blot法测定细胞胞浆NF-κB抑制因子(I-κB)和胞核NF-κB活性;48 h后流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫法测定VCAM-1的表达.结果 子痫前期患者血清培养的血管内皮细胞胞浆I-κB含量明显低于正常妊娠血清培养组(P＜0.05),胞核NF-κB 含量以及VCAM-1的表达明显高于正常妊娠血清培养组(P＜0.05).结论 子痫前期患者血清可促进血管内皮细胞VCAM-1的表达、NF-κB的活性以及血管内皮细胞的凋亡;NF-κB在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡及VCAM-1的表达过程中可能起重要作用.     

脂联素对TNF-α介导的血管炎症反应的影响

目的:探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)引起的血管内皮细胞炎症反应的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC).随机分为对照组,TNF-α刺激组和脂联素 TNF-α刺激组.HUVEC与脂联素联合孵育一段时间后再给予TNF-α刺激与单纯TNF-α刺激做对照,分别采用化学法,放免法及ELISA法检测脂联素对血管内皮细胞NO,iNOS,ET-1及MCP-1蛋白表达的影响.结果:HUVEC经TNF-α刺激6～12 h后其NO,iNOS,ET-1及MCP-1蛋白的表达(607.7±7.6,42.2±2.2,199.3±11.9,167.7±15.9)与对照组(543.5±2.2,23.8±2.0,148.4±5.3,128.0±8.4)相比明显增强(P＜0.05);当HUVEC在TNF-α刺激之前首先与脂联素共同孵育一段时间后,则血管内皮细胞NO,iNOS,ET-1及MCP-1蛋白的表达(565.7±13.0,36.5±2.7,170.8±8.3,142.6±5.6)与单纯给予TNF-α刺激相比明显减弱(P＜0.05).结论:脂联素可以通过抑制血管内皮细胞某些炎症因子的表达水平来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎,抗动脉粥样硬化的作用.     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白刺激下脂肪细胞TNF-α表达的影响

目的观察高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)刺激下3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 3T3-L1脂肪细胞促分化成熟后,oxLDL刺激脂肪细胞,给予不同浓度的HDL(10～100μg/ml),及H-89(10μmol/L)+HDL(100μg/ml)干预,收集细胞,测定脂肪细胞TNF-αmRNA表达水平,IκB蛋白浓度及核因子-κB(NF-κB)活性。结果 OxLDL刺激使3T3-L1脂肪细胞TNF-αmRNA表达及NF-κB活性明显增强。HDL浓度依赖性抑制TNF-αmRNA表达、NF-κB活化和IκB降解。与oxLDL刺激组比较,100μg/ml HDL使TNF-αmRNA表达降低64.5%,NF-κB活性减少49%,并明显增加IκB蛋白水平。HDL的这些抗炎效应能被蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89部分抑制。结论HDL能抑制oxLDL诱导的3T3-L1脂肪细胞TNF-αmRNA表达,PKA-IκB-NF-κB信号通路是其中作用途径之一,该效应不需要HDL与oxLDL的直接接触作用。     

三磷酸腺苷结合盒转运体G1表达上调降低肿瘤坏死因子-α诱导的血管内皮细胞损伤

目的 探讨三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)在肿瘤坏死因子-oα (TNF-α)引起内皮细胞损伤中可能的保护作用.方法 TNF-α(10 ng/mL)及LXR(liver X receptor)激活剂T0901317(2.5μg/mL和5.0μg/mL)干预人脐静脉内皮细胞0、12和24 h后,荧光实时定量RT-PCR法检测血管内皮细胞ABCG1mRNA的表达,硝酸还原酶法检测培养上清一氧化氮(NO)浓度,微量脂质氧化测定细胞内丙二醛(MDA)含量及CDCFHDA-AM荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)的水平.结果 10 ng/mL TNF-α时间依赖性地降低血管内皮细胞ABCG1 mRNA的表达,并降低培养上清NO含量,同时增加细胞内的氧化应激水平;使用LXR合成配体T0901317,能显著诱导内皮细胞ABCG1 mRNA的表达,并能部分逆转TNF-α引起的NO降低及细胞内的氧化应激.结论 促进ABCG1表达可能有助于防止由TNF-α引起的氧化应激及内皮功能损伤.