无醛固定液与甲醛固定液对DNA保存效果比较

正随着分子生物学技术的不断发展及疾病相关基因研究的不断深入,分子病理学检测已经成为病理诊断的重要辅助手段,广泛运用于临床实践。特别是近几年随着靶向治疗的发展需要对肿瘤基因分型,分子生物学技术中要求使用甲醛固定、石蜡包埋的组织块作为检测的主要对象。但甲醛固定组织会导致基因组DNA断裂。甲醛与蛋白质的广泛交联阻碍核酸的定量分析并局限了DNA片段的PCR扩增产物的长度~([1])。而且随着时间的推移,这种交联会越来越严重,影     

显示DNA含量的快速Feulgen染色技术及应用

细胞的DNA含量分析对判断肿瘤的良恶性及预后有重要参考价值[1 3 ] ,然而传统的Feulgen染色操作时间较长 ,无法应用于冷冻切片、快速石蜡切片或组织印片等快速病理制片过程。我们尝试了应用微波处理的快速Feulgen染色 ,大大缩短了染色时间 ,并取得了良好效果 ,满足了快速病理诊断的要求。一、材料和方法1.材料 :复旦大学华山医院近期外科手术切除的各 5例乳腺纤维腺瘤及乳腺癌标本 ,例 1～ 5为纤维腺瘤 ,例 6～ 10为腺癌 ,均分别制成印片、冷冻切片、快速石蜡切片各 2份。2 .试剂及仪器设备 :常规配制的Schiff试剂、0 .5 %偏重亚硫酸钠溶…     

放射自显影与Feulgen反应结合法

放射自显影与Ｆｅｕｌｇｅｎ反应结合法阎国和，古德全，粟永萍（第三军医大学防原教研室．重庆６３００３８）制作放射自显影标本，以住一般都用苏木素或伊红作对比染色，其结果对比度较差，定位困难．为解决这个问题，我们应用Ｆｅｕｌｇｅｎ反应显ＤＮＡ的方法，作放射...     

四种固定液对小鼠视网膜固定效果的比较

正眼球内各种组织软硬度相差较大,各层次之间连接性较差,视网膜在受到震动或外力作用下尤其易发生脱落断裂或细胞层次紊乱。固定液是影响病理切片质量的直接因素,为优化眼球组织病理学观察的条件,需要相对简便、实用和可靠的固定液。本实验选择四种常见的固定液处理小鼠眼球并对眼球的固定和制片效果进行分析比较,现介绍如下。     

比较三种不同固定液对淋巴结冷冻切片染色质量的影响

<正>淋巴结活检的主要作用是对恶性肿瘤淋巴转移进行分级,明确肿瘤转移的具体范围,减少不必要的手术及术后并发症^[1]。术中冷冻切片能在较短时间内获得淋巴结的病理诊断结果,对手术治疗方式和手术范围具有较高的指导作用,因此越来越受到临床医师的青睐。淋巴结组织由于其细胞丰富,质地较脆,外围常有脂肪包绕,在日常冷冻切片工作中较难获取高质量切片。     

四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的　以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。 方法　取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。 结果　经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察：细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。 结论　四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。     

比较4种不同复合固定液对小鼠视网膜的固定效果

背景：在各种实验与临床病理研究中,需要一种能够较好固定视网膜并且避免固定液性视网膜脱离的眼球固定液。 目的：比较4种不同复合固定液对小鼠视网膜的固定效果。 方法：40只昆明小鼠处死后,立即摘除眼球,并将其随机分为4组,每组20只眼球。分别浸泡在固定液1 (多聚甲醛4 g,加入0.1 mol/L磷酸缓冲液80 mL,加热至60 ℃左右,持续搅拌,使粉末完全溶解,加少许1 mol/ L NaOH 澄清。待冷却后,加冰醋酸5 mL、丙酮10 mL,用0.1 mol/L磷酸缓冲液补足至100 mL),固定液2(5%重铬酸钾40 mL、体积分数为10%甲醛10 mL、冰醋酸10 mL、三氯醋酸10 mL、10%醋酸钠10 mL);固定液3(冰醋酸10 mL、体积分数为40%甲醛溶液20 mL、生理盐水70 mL、体积分数为75%乙醇10 mL混合);固定液4(无水乙醇60 mL、体积分数为40%甲醛溶液10 mL、冰醋酸10 mL、氯仿20 mL)。固定24 h进行常规脱水、石蜡包埋固定、苏木精-伊红染色。 结果与结论：经过固定液4固定的视网膜组织可以清晰看到视网膜各层,而且罕见固定液性视网膜脱离。由于固定液4中加入能与乙醇、冰醋酸互溶的氯仿,有效地促进了固定液的眼球渗透,故降低了固定液性视网膜脱离,效果比其他几种固定液好。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

不同固定液、染色法显示结缔组织肥大细胞效果的比较

本研究用6种固定液、4种染色法,观察对显示小鼠耳廓、舌和背皮肤结缔组织肥大细胞的影响。结果表明:一种固定液固定的组织,用不同的染色法染色或不同固定液固定的组织,用一种染色法染色,显示肥大细胞的效果不同。这可能是由于固定液能影响肥大细胞颗粒对染料的亲合力。本文对不同部位的结缔组织肥大细胞对固定液的反应有差异这一现象,进行了讨论。     

甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的三种提取方法比较

为了寻找最佳的自普通10％甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,取我院2000年手术切除的10％甲醛固定石蜡包埋的食管癌标本10例,分别以蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法和不同pH值下加热提取法提取其DNA,然后进行电泳和PCR扩增分析。结果显示,蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法所得DNA产量和质量均高于不同pH值下加热提取法。从而认为蛋白酶K消化氯化钠盐析法简便快捷,不用接触有毒的化学药品,是理想的DNA提纯方法。     

FineFix固定液与福尔马林固定液对组织保存及固定的比较

随着石蜡切片、免疫组化、特殊染色以及分子遗传学分析在病理诊断上的普遍应用,对标本组织处理要求越来越严格.固定是标本处理过程中的重要环节,如果固定液选择不当、浓度不均、固定时间与温度不合适以及固定液过少等均会使组织固定不良而影响制片质量、免疫标记及分子生物学检测结果,从而影响病理诊断.福尔马林是一种有毒、致敏及致癌物,废液处理成本较高,经其固定的组织抗原蛋白的氨基与醛基交联形成羧甲基封闭抗原决定簇,使免疫组化着色效果减弱[1].本实验采用FineFix固定液(以下简称FF)与福尔马林液固定的组织进行对比,经FF固定的组织形态结构完整,尤其在提取DNA和RNA的质和量上具有明显的优越性[2].     

不同固定液对甲状腺冷冻切片固定效果的比较

正甲状腺疾病是内分泌系统的一种常见病,发病率呈逐年上升趋势,治疗主要采用手术切除。而术前的各种辅助检查仍不能完全判断肿瘤的性质,术中一般均要求行快速冷冻病理诊断。由此可见制作一张优质的甲状腺冷冻切片对临床的意义重大,然而影响甲状腺冷冻切片质量的因素众多,其中固定液的选择至关重要。下面选取5种不同的固定液来进行比较实验,通过HE染色观察各自固定液的固定效果,从而筛选出一种甲状腺冷冻切片的最佳固定液。     

5种固定液对冷冻切片免疫组织化学显色效果的比较

冷冻切片免疫组织化学在科研及临床方面应用得越来越多,它具有操作简单,实验过程较短,对抗原保存较好等优点,并且认为是评估和确定新抗体的金标准,目前还有很多抗体只能用冷冻切片,石蜡切片则做不出结果;但它也有不利于保存和进行回顾性研究、组织结构较模糊,清晰度不够好,抗原弥散等缺点[1].     

无醛固定液与甲醛固定液对组织形态学保存效果比较

组织固定是组织处理过程中最重要的环节,在病理诊断学中,10%中性缓冲福尔马林以其低成本、易配制和固定后组织保持优异的组织形态学特点而成为具有悠久传统的国际通用组织固定液。近年来,随着人们环保意识的提高,甲醛的危害性逐渐动摇了其作为病理学界固定“金标准”的地位,病理工作人员长期暴露于甲醛严重超标的环境中,对身体健康造成严重危害[1]。国外发达国家已经推广应用环保型固定液取代甲醛固定液。本实验通过配制3种无醛固定液来进行组织固定,通过 HE染色、组织化学染色(特殊染色),并以NBF作为对照来比较不同固定液对组织形态学方面的影响,试图建立新的高质量的组织固定液。     

两种脱钙液对骨髓穿刺组织DNA质量的影响比较

<正>骨髓穿刺组织是病理科常见的标本,随着精准医学的发展和个体化治疗需求的增加,除了进行常规HE染色和免疫组化检测外,还需辅助分子生物学检测。良好的DNA质量是分子生物学检测的前提,脱钙液的选择对DNA质量有重要影响^[1],因此进行分子生物学检测前需要评估脱钙后骨髓穿刺组织DNA质量。混合酸脱钙液和EDTA脱钙液是本科室两种常用的骨髓穿刺组织脱钙液,在常规组织学染色方面已经取得良好的效果,但其对DNA质量的影响尚不清楚。本实验通过提取两种脱钙液脱钙骨髓穿刺组织的DNA,从浓度、纯度、片段长度及RT-PCR检测Ct值比较两种脱钙液对DNA质量的影响,取得较好效果,现报道如下。     

两种染色方法对脑垂体三种嗜色细胞显示效果的比较

脑垂体由腺垂体和神经垂体两部分组成,其中腺垂体内有3种类型细胞：嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。在常规的苏木精-伊红染色切片中,脑垂体3种嗜色细胞显示的效果一直不甚理想,学生在显微镜下进行观察辨认比较困难,为了更清晰地显示脑垂体3种嗜色细胞,我们采用不同的染色方法对脑垂体进行染色,经过多次实验显示,采用Mallory氏法染色,获得了较满意的染色效果,现介绍如下：     

三种内固定器械固定中足损伤的生物力学比较

目的　评价新型镍钛记忆合金三角固定器在治疗中足损伤中的固定稳定性,通过比较3 种内固定在中足外侧柱移位性损伤中对前足足底压力分布的影响并对其生物力学进行分析,为选择内固定提供实验参考。 方法　取6只成人下肢尸体冷冻标本。制成第4、5跗跖关节骨折脱位模型,对4、5跗跖关节进行记忆合金三角固定器固定,H型接骨板固定,2.0 mm克氏针固定,克氏针分别从4、5跖骨打入骰骨。经加载600 N 后,通过Tekscan压力传感器,测量前足足底压力的变化,应用ElectroForce®3510高精度生物材料试验系统机进行轴向压缩力学测试,分别计算刚度值,并进行统计学分析。 结果　第4、5跗跖关节分别用三角固定器、钢板、克氏针固定后,第4、5跖骨头下的峰值压力则较骨折脱位状态有所增大,第2、3跖骨头下的峰值压力较骨折脱位状态下都有所减小,差异有统计学意义（P<0.05）。三角固定器组第4、5跖骨头下压力峰值与正常组相近。钢板固定组、记忆合金三角固定器、克氏针固定组组对外侧柱脱位固定后与正常组相比足部总体压缩刚度值无显著差异（P>0.05）,疲劳试验后克氏针固定组静态压缩刚度较疲劳试验前明显减少,差异有统计学意义。 结论　记忆合金三角固定器治疗跗跖关节外侧柱损伤其恢复足底压力的能力及生物力学稳定性良好,为镍钛记忆合金三角固定器内固定器的临床应用提供生物力学依据。     

比较两种固定液过度固定乳腺癌组织对FISH法检测HER2基因的影响

<正>FISH技术常用于检测和定位染色体上特定的DNA序列^[1],有利于病理鉴别诊断^[2]、指导临床靶向用药^[3]和监测肿瘤的复发^[4]。组织标本的前处理对确保临床检验结果的准确性尤为重要,固定是组织处理中最重要的环节,也是整个制片过程中最无法补救的一步^[5],组织过度固定或固定不足均会对检测结果造成影响^[6]。乳腺癌穿刺样本,在离体后即加入固定液中保存,由于周末节假日等原因,部分样本未能及时送至病理科,穿刺组织体积较小易出现固定过度,在制片中常存在消化难和杂交背景亮等问题。     

不同固定液对肾穿刺活检组织固定及染色差异的比较

肾穿刺活检是诊断肾脏疾病的重要手段。目前开展肾脏病理的医院寥寥无几。山东省交通医院自2010年3月与济南齐鲁医学检验所合作接收来自全省的肾穿刺活检远程邮寄病理检验标本以来,截至2013年12月共接收3216例,前后选择4种固定液用于光镜标本的固定,对其染色结果进行比对分析如下。