四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的　以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。 方法　取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。 结果　经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察：细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。 结论　四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。     

单宁酸—氯化铁法媒染肾上腺血管的观察

用２％多聚甲醛、２％戊二醛、２％单宁酸配制的媒染固定液灌流大鼠，取肾上腺做冰冻切片放入２—３％氯化铁溶液中呈色，成功地显示了肾上腺皮质、髓质血窦的形貌。高倍镜下可见血窦呈空心管道状，其管壁为细纤维丝状结构编织而成，具有较强立体感。     

单宁酸—金属盐联用媒染脑血管的研究

用２％多聚甲醛，２％戊二醛配伍不同浓度的单宁酸媒染固定液灌流大鼠，取服切片，放入２％氯化铁溶液中呈色，成功地显示了脑内各级血管及毛细血管网的形貌。高倍镜下可见各级血管呈空心管道状，基僻赤多条细纤维丝状结构编织或呈同心圆状排列而成，具有较强的立体感。     

卡氏肺囊虫滋养体和包囊形组合染色

自从作者于1983年发现用Lendrum氏荧光桃红/肼黄法(1947)能很好显示卡氏肺囊虫滋养体以来,经过一段时期摸索。与Gomori—Grocott氏PASM法(经过Mowry,1959年改良)进行组合染色。获得形态图象清晰、色彩对比突出的卡氏肺囊包囊和滋养体。材料和方法卡氏肺囊虫肺炎尸解病例,10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片不厚于5μm。染色程序1、石蜡切片脱蜡入水如常。如组织成分中存在福尔马林色素,必须在染色前用苦味酸无水酒精饱和液除去。2、0.5%高碘酸液氧化10分钟,流水洗2分钟。     

EDTA在HE染色中的应用

正苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色是病理技术中最基本的染色方法,染色理想状态是在镜下见细胞核与细胞质蓝红相映,对比明显;核膜及核染色质颗粒清晰可见。实际工作中因组织干涸、固定脱水不足、脱钙等原因会造成切片染色困难,细胞核染色淡或出现局部灰染,给临床病理诊断带来困扰。经过大量实验,本科室对处理不好的组织切片染色前用EDTA抗原修复液进行高压修复,使染色质量得     

间变性大细胞性淋巴瘤--浆细胞样小细胞变型

1　临床资料患者男 ,2 7岁。临床表现为左腹股沟包块伴皮肤破溃 ,查体发现 1 2ｃｍ× 0 8ｃｍ× 0 5ｃｍ的包块 ,在当地医院体检未发现明显异常 ,切除包块并送病检。标本经常规 10 %福尔马林液固定 ,石蜡包埋 ,切片 ,分别进行ＨＥ染色及免疫组织化学染色。病理诊断 :“高度疑为淋巴浆细胞性淋巴瘤” ,后来我院病理科会诊。2　病理检查2 .1　镜检　低倍镜下表现为淋巴结结构不清、完全破坏 ,瘤细胞侵犯淋巴结周围组织 ,瘤细胞呈弥漫性、浸润性、破坏性生长 ,局部区域出现大片坏死。高倍镜下见大部分瘤细胞排列疏松。细胞间缺乏粘附 ,局部区…     

胸腺实质内存在肥大细胞

胸腺是T淋巴细胞分化和发育的重要器官。胸腺被膜和小叶间隔的结缔组织内存在着肥大细胞已有许多报道,由长期培养的胸腺细胞中可分化出肥大细胞也有报道,但是在胸腺实质内是否存在肥大细胞,至今尚未见有肯定的报道。我们将胸腺组织经Carnoy液固定、石蜡切片或经骤冷制成冰冻切片,采用Alcian Blue-Safranin(ABS)染色、甲苯胺蓝染色、天青A染色、氯     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],由于骨组织致密、坚硬,并含有骨胶等成分,所以要制作一张高质量的切片(和软组织相比)有一定的困难[2].近年来出现的塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术尚不够成熟和稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,制作时采用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当.而将皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下.     

改良快蓝焦油固紫染色法

改良快蓝焦油固紫(Luxol Fast Blue—CresylViloet)染色是根据Diamond法改良而建立的联合染色方法.可以同时在一张切片上观察神经细胞、神经胶质细胞和髓等结构.该方法具有两个突出优点:(1)使用冰冻切片法,制作时间周期短.染色方法简便,切片不易破碎.可制直径>2厘米的连续切片,对脑切片尤为适宜,便于科研工作中的连续观察.(2)集神经细胞,神经胶质细胞和髓鞘于一体.结构清晰,容易分辨.可使用于中枢神经系统的研究和教学中.1 方法1.1固定10%福尔马林液灌注或直接固定.10%盐水福尔马林用碳酸镁饱和液再固定14～20天.中间更换新固定液一次.1.2 冲洗 组织流水冲洗1小时,入20%蔗糖内至组织块下沉.1.3 切片 冰冻切片20～40μm.收集切片于20%酒精溶液中,便于展平切片.     

铺片在结膜杯状细胞研究中的应用

眼结膜杯状细胞对维持视觉功能起着十分重要的辅助作用。由于结膜受损 ,尤其是其中的杯状细胞减少或缺乏 ,将导致干眼症 ,甚至失明。目前 ,有关结膜杯状细胞的研究报道很少。为了解结膜杯状细胞的分布规律和正常生理变化 ,我们采用结膜切片、铺片和特殊染色方法 ,对结膜杯状细胞进行了初步研究。材料与方法 :标本取材于不同年龄的胚胎和成人尸体 ,处理如下 :1切片 :在球结膜和穹窿结膜的四个区域 (鼻、颞、上、下侧 )及上、下睑各取 1～ 3个组织块 ,分别用 1 0 %甲醛和 Carnoy固定液固定 ,常规石蜡包埋 ,切片厚 6 μm,分别用 HE、阿利新蓝…     

家兔主要淋巴器官肥大细胞的分布特征

目的：探讨家兔主要淋巴器官肥大细胞（MC）的分布特征与组织化学特点。方法：将家兔脾脏及圆小囊用Camoy液和（或）4％中性甲醛溶液（NBF）固定,进行常规甲苯胺蓝染色或长时间甲苯胺蓝染色（LTB）,光镜观察。结果：家兔的圆小囊MC主要分布于黏膜上皮或黏膜下层结缔组织中,脾脏MC则主要分布于红髓淋巴细胞间,两者非胸腺依赖区的淋巴滤泡中均无MC,Carnoy液固定的家兔组织染色效果更佳,采用LTB染色可不同程度的增加MC的着染性。结论：MC都具有胸腺依赖性或T细胞依赖性,淋巴器官MC与T淋巴细胞位置关系密切。不同固定液和不同时间染色方法所获得的MC数量不同。     

应用Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞

应用Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞,并与Grimelius嗜银法和M-H亲银法进行了比较研究.结果表明,Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞优于Grimelius嗜银法,其所显示的胃肠内分泌细胞的形态及胞质嗜银颗粒清晰可辨,背景浅染,反差明显.此法特异性强,结果可靠,简便省时,不失为神经内分泌细胞研究与教学的一种简便可行的方法.1材料和方法(1)标本制备与处理 采用5～6个月新鲜胎儿与成年大鼠的胃和小肠,分别固定于下述固定液中,10%甲醛钙液、Bouin液、4%多聚甲醛磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.2)、Carnoy液和IFAA液.然后,分别制备8μm厚的恒冷箱连续冰冻切片和7μm     

用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片

组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],通常由于骨组织致密,坚硬,并含有骨胶等成分,所以要切好一张高质量的切片(和软组织相比),有一定的困难[2].近年来推出了塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术,但目前尚不够成熟稳定[2].我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,我们在制作此标本时,用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当,用于教学效果良好.而连着皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少.现将我们的经验报道如下(图1～4).     

应用单宁酸-金属盐法媒染脾血管的实验研究

用媒染固定液（２％戊二醛、２％多聚甲醛、２％单宁酸混合液配制）灌流大鼠,取脾做２０－４０μｍ的冰冻切片,蒸馏水复温清洗后入２－３％氯化铁溶液内呈色,１％明胶封片,光镜观察结果：低倍镜示染小动、静脉各级分支以及毛细血管管壁均被染成蓝黑色,脾小结处毛细血...     

Mallory三色法在小肠染色上的应用

本法主要是显示肌纤维、血细胞、结缔组织纤维和神经纤维等结构。原来我们将此法用在垂体染色上 ,现在我们用来染小肠、皮肤及含有结缔组织的器官等 ,可供教学及科研定性、定量分析 ,效果好 ,较传统的 H.E染色可更清晰地分辨各种结构。1 .组织固定 :取一小段用 Bouin氏液固定 2 4hr,常规包埋、切片、脱蜡。 2 .染色液的配制 :磷钨酸 5 g,橘红 G lg,苯胺蓝 0 .5 g,酸性复红 1 .5 g,蒸馏水 1 0 0 ml。先使磷钨酸溶于水内 ,逐次将染料加入 (要在前一染料完全溶解后 ,再加次一染料 )将三种染料混在一起用。 3.染色方法如下 :( 1 )常规方法脱蜡…     

微波二次固定提高肿瘤组织冰冻切片及苏木素—伊红染色质量的研究

冰冻切片质量的好坏直接关系到能否准确及时地作出病理诊断,以指导手术治疗方式,近年来,国内外学者对如何提高冻冻切片及染色质量做了大量工作,但仍然存在着组织结构被冰晶破坏,对比染色差,细胞核着色不清晰等缺点,我们应用微波加热固定液对组织块进行预固定,切片后再次固定的“二次固定技术”处理肿瘤组织,获得了比单纯脱脂固定切片更好的效果.1 材料与方法1.1 材料 选用我院1994～1995年外科送检需要急诊冰冻的乳腺、胃、肠、卵巢、甲状腺及脑等处的肿瘤组织,取材2cm×1.5cm×0.5cm数块.YWY781A型医用微波炉为浙江临安爱迪电子仪器厂产品,有8个功率选择开关,最大输出功率为500W.1.2 方法(1)将肿瘤组织分为不处理和处理组,处理组分别用生理盐水,10%甲醛和Bouin液在80℃恒温水浴固定5min,用微波2档(输出功率250W)固定1min.(2)将上述肿瘤组织用恒冷切片机切成5μm厚的冰冻切片数张,贴片稍于后分成不固定组和固定组,固定组分别用酒精-冰醋酸-甲醛固定液(AAF).改良的     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

二氧化碳激光对免疫器官的影响

将雄性成年豚鼠18只分为3组,正常组2只,激光组与手术刀组各8只。分别用激光与手术刀作胃切割手术。术后第3、5、7、14天取脾、淋巴结、胸腺,固定于冷Carnoy液,10％福尔马林中,石蜡切片,HE染色,Csaba法染肥大细胞,甲绿-哌喏宁稀释法显示细胞的RNA含量(含量多少以+、++表示),光镜下观察。观察结果:1.脾(1)激光组:术后第3天,脾小体生发中心大淋巴细胞的胞质中RNA为++,在脾小体外周可见浆细胞,其胞质中RNA为++。白髓外周有较厚的环形网状组织层。脾索的结构与环形网状组织基本相同,其中有少量血细胞,偶见     

大鼠视网膜标本石蜡切片的固定方法

目的探讨制备大鼠视网膜石蜡切片的固定方法。方法将大鼠眼球固定于4%多聚甲醛(PFA)和不同浓度(1%、5%、10%、20%)甲醇组成的混和固定液中并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果经4%PFA+不同浓度甲醇固定的眼球外形均无明显变形和收缩。用添加1%和5%甲醇固定液固定的标本未见明显的视网膜脱离,而用添加10%和20%甲醇固定液的眼球的周边部视网膜出现轻度脱离。显微镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。相反,采用福尔马林固定的视网膜发生严重脱离。结论 4%PFA+甲醇的固定方法即可保持视网膜结构完整,无脱离,又能提高抗原保存性,效果优于福尔马林固定液,是适合大鼠眼球,尤其是视网膜固定的一种有效方法。     

介绍一种冷冻切片快速染色方法

制作优质的冷冻切片,以缩短染色时间、提高染色细胞的核浆清晰度最为重要。我们试将苏木精。伊红按比例配成混合液使整个染色过程在1min内完成,且不必经过盐酸乙醇分化,染色鲜艳而稳定,现介绍如下。1材料和方法1．1染液配制（1）冷冻固定液：85％乙醇85ml,4％甲醛10ml,冰醋酸5ml。（2）苏木精伊红混合染色液：沉淀酸化伊红Y乙醇应用液1份,哈雷苏木精液3份混合供染色用。1．2切片制作取手术新鲜组织置恒冷式切片机载物台上,－20℃冷冻后6μm切片,玻片附贴切片后即刻用冷冻固定液固定10S,水稍洗,滴加苏木精伊红混合染色液至液体覆…