基于5组分测定和6波长高效液相色谱指纹谱的双标定量指纹法建立六味地黄丸对照指纹图谱动态技术标准研究

目的 建立双标定量指纹法精确恢复对照指纹图谱(RFP)理论和方法,实现动态指纹图谱标准的校正和复原.方法 用RP-HPLC法对LWDHW中5组分进行定量分析和建立其6波长定量指纹图谱研究.结果 利用HPLC-DAD在最大吸收波长处同时测定了没食子酸、5-羟甲基糠醛和丹皮酚含量,结合等吸收双波长消去法对色谱峰完全重叠的芍药苷和马钱苷进行同时定量测定,建立210、230、246、265、280和310 nm LWDHW-HPLC指纹谱,用均值法整合6波长HPLC定量指纹谱.以5组分测定和6波长指纹谱鉴定结果分别聚类分析比较不同厂家产品质量差异,结果以后者更为准确可靠,在此基础上建立LWDHW双标定量指纹法技术标准.结论 基于多指标定量分析和平行多波长高效液相色谱指纹谱的双标定量指纹法能够找到产生RFP的标准制剂和实现实时随行定量检测LWDHW指纹图谱.这一方法再现了中药指纹图谱标准,为中药指纹图谱工业化整体定量控制中药质量建立了可行技术方法,是中药指纹图谱评价方法发展历程中的一次技术飞跃.     

一种评价多波长中药色谱指纹图谱新方法-均谱法

目的建立一种评价多波长中药色谱指纹图谱的新方法-均谱法(MFM),以桂附地黄丸(Guifu Dihuang Wan,GFDHW)平行五波长(PFW)高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的均谱为基础,依据系统指纹定量法(SQFM)鉴定桂附地黄丸整体质量。方法采用反相RP-HPLC法,以丹皮酚(POL)为参照物峰,于210、230、246、265、280 nm紫外波长下检测,分别确定了54、58、47、47和44个共有指纹峰,用S1~S3和S5~S9等8批样品的HPLC指纹图谱生成对照指纹图谱,建立GFDHW的PFW-HPLC指纹图谱,并评价12批样品的质量。将同一样品的5个波长下HPLC指纹图谱的信号加和后求平均值作为该样品的均谱,用S1~S3和S5~S9等8批样品HPLC均谱按平均值法生成对照指纹均谱来综合评价12批样品均谱。结果 12批样品用MFM鉴定的结果与用PFW结合SQFM所鉴定的结果一致。结论 MFM能最大限度保留指纹峰,实现化学指纹信息最大化,同时能有效改善指纹信号质量,是HPLC-DAD三维指纹图谱的简化代表,因此可作为综合定量鉴定中药质量的有效、可靠和简便方法。     

三波长定量指纹谱结合4种化合物定量测定银翘解毒丸对照指纹图谱标准

目的建立双标定量指纹法精确恢复银翘解毒丸对照指纹图谱（RFP）标准,以实现动态指纹图谱标准的校正和复原。方法用RP-HPLC法对银翘解毒丸（YQJDP）中绿原酸、咖啡酸、连翘苷和牛蒡苷4组分进行定量分析。建立228、265和280 nm下YQJDP-HPLC指纹图谱,采用均值法整合三波长下定性定量全信息,应用六级系统指纹定量法对其进行评价。选择绿原酸和牛蒡苷为双参照物峰（双标）,采用双标定量指纹法恢复YQJDP-RFP。结果三波长整合指纹图谱评价结果如下：S3、S4、S6和S8质量为极好（1级）,S2、S5、S7和S9质量为很好（2级）,DS1质量中（5级）,S1、DS3、DS4、WS1和WS2质量次（7级）,DS2质量劣（8级）。含量测定结果与指纹图谱评价结果很一致。在此基础上建立YQJDP双标定量指纹法技术标准。结论基于多指标定量分析和多波长HPLC指纹谱的双标定量指纹法能够找到产生RFP的标准制剂和实现实时随行定量检测YQJDP指纹图谱。     

桂附地黄丸的毛细管电泳指纹图谱研究

目的建立了桂附地黄丸(Guifu Dihuang Wan,GFDHW)毛细管区带电泳指纹图谱(capillary electropeore-sis fingerprint,CEFP),为其质量控制提供依据。方法以50 mmol.L-1硼砂为背景电解质(BGE)溶液,采用未涂层石英毛细管(75 cm×75μm,有效长度75 cm),以色谱指纹图谱分离量指数RF为目标函数优化试验条件,紫外检测波长230 nm,运行电压12 kV。结果以没食子酸(GA)峰为参照物峰,确定18个共有指纹峰,建立了GFDHW-CEFP。通过对12批样品聚类分析确定用其中10批生成对照CEFP(RCEFP),以此RCEFP为标准用系统指纹定量法鉴别12批桂附地黄丸质量。鉴定出7批质量合格,2批含量明显偏低,3批含量明显偏高,且分布比例不合格。结论所建立的毛细管电泳指纹图谱具有较好的精密度和重现性,为全面控制和评价桂附地黄丸的质量提供了一种新的方法。     

五波长高效液相指纹谱与紫外指纹谱联用评价六味地黄丸质量均一性研究

目的建立浓缩六味地黄丸（CLWDHP）五波长高效液相色谱指纹图谱,测定紫外定量指纹图谱和其一阶导数定量指纹图谱。方法先将五波长HPLC指纹图谱整合,再分别和2种紫外指纹图谱整合,基于系统指纹定量法综合评价其质量均一性。采用RP-HPLC法,记录203、236、274、300、326 nm 5个波长下色谱图,以马钱苷为参照物峰来确立共有指纹峰。以系统指纹定量法全面鉴定其质量,将五波长指纹图谱按均值法生成对照指纹图谱评价样品质量,再按方均开方法整合五波长下S m和P m及α,并重新评价22批CLWDHPs质量。用紫外定量指纹谱和一阶导数定量指纹谱基于系统指纹定量法进行质量评价,最后把HPLC和紫外指纹谱整合。计算各整合方法下质量均匀度。结果 HPLC-FP和UV-FP整合后鉴定S2、S10、S12、S13、S14、S19和S22质量极好（1级）,S1、S4、S5、S6、S7、S15、S16和S17质量很好（2级）,其余7批质量好（3级）。各方法所得宏定性相似度均匀度K值均〈10,宏定量相似度均匀度K值均〈20。结论 22批六味地黄丸（浓缩丸）质量均一性很好,采用五波长指纹谱和紫外指纹谱联用可准确评价中药复方质量均一性。     

基于双波长HPLC指纹谱和其融合谱的系统指纹定量法鉴定甘草质量

目的建立甘草双波长HPLC指纹图谱及其融合谱,用系统指纹定量法鉴定其质量。方法采用RP-HPLC法,运用双波长融合谱技术分别对10批产地甘草提取具有代表性和互补性的203和254nm的局部色谱图,融合生成对照指纹图谱（RFP）。用系统指纹定量法通过对双波长谱及其融合谱的评价,实现对10批不同产地甘草真实质量的鉴别。并对甘草化学指纹进行破坏性试验考察。结果基于203nmHPLC指纹谱与融合谱的系统指纹定量法评价结果基本一致,用主成分分析和F值证明了融合谱优于此双波长HPLC指纹图谱可用于甘草药材质量控制。结论203和254nm及融合谱的含量相似度Pm有一定波动是由于不同波长谱反映的化学成分的信号大小有一定的差异,导致评价的结果有出入。基于此双波长融合谱的系统指纹定量法的评价结果反映化学指纹信息全面、真实可靠,可清晰准确鉴别甘草真实质量。     

愈康降糖胶囊五波长高效液相色谱数字化定量指纹图谱研究

目的建立愈康降糖胶囊(YKJTC)五波长HPLC指纹图谱,同时测定尿囊素、马钱苷、葛根素、丹酚酸B、小檗碱、人参皂苷Rb_1含量。方法采用RP-HPLC法建立15批愈康降糖胶囊203、236、250、280和320 nm五波长HPLC指纹图谱,以葛根素为参照物峰来确立共有指纹峰,以9级系统指纹定量法全面评价其质量,将五波长指纹图谱按均值法生成对照指纹图谱评价样品质量,再按均值法整合五波长下的宏定性相似度(Sm)、9级宏定量相似度(P9)和指纹均化性变动系数(α),重新评价15批YKJTC的质量。采用均值法、色谱指纹图谱指数权重和信息熵权重对五波长评价结果进行整合,以及HPLC法同时测定7组分含量。结果 236 nm波长下确定了46个共有指纹峰,建立了YKJTC数字化指纹图谱。用9级系统指纹定量法鉴定15批YKJTC中1批为质量极好(1级),1批为很好(2级),5批为好(3级),1批为良好(4级),3批为中(5级),4批为一般(6级)。采用均值法、色谱指纹图谱权重和信息熵权重对五波长评价结果进行整合。除了S03、S04、S05和S06等级稍差,整合前后样品质量等级均在5级以内,无异常样品检出。结论 15批YKJTC质量均一性良好,采用五波长指纹图谱法可准确评价中药复方质量均一性。     

HPLC等吸收双波长法同时测定桂附地黄丸中5种成分的含量

目的建立同时测定桂附地黄丸中没食子酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、芍药苷和丹皮酚5种成分的反相高效液相色谱分析方法。方法色谱柱为Scienhome Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为体积分数为0.1%的磷酸溶液、B为体积分数为0.1%的磷酸甲醇溶液,梯度洗脱,柱温(30.00±0.15)℃,检测波长为190～400 nm DAD检测。结果没食子酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、芍药苷和丹皮酚分别在0.06～1.60、0.06～1.60、0.05～0.60、0.05～0.60和0.12～3.20 g.L-1内峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。5种成分的平均回收率分别为98.7%、101.2%、99.0%、98.5%和99.6%。结论该方法可用于桂附地黄丸的质量控制。     

牡丹皮炒制前后UPLC特征指纹图谱比较

目的:建立牡丹皮炒制前后的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并进行比较。方法:采用UPLC法。色谱柱为Acquity UPLC BEH C18,流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈(梯度洗脱),柱温为30℃,流速为0.4 ml/min,检测波长为254 nm,进样量为2μl。以丹皮酚为参照峰分别测定10批牡丹皮、丹皮炭的特征指纹图谱,并采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》对所建立的指纹图谱进行评价。结果:牡丹皮炒制前后特征指纹图谱有明显差异,其中以5-羟甲基糠醛和芍药苷的变化最为显著。结论:该方法能快速、有效地反映出牡丹皮炒制前后的成分变化。本研究所建立的指纹图谱可为牡丹皮饮片的炒制工艺与质量评价提供科学依据。     

线性指纹定量法评价苦碟子注射液三波长融合指纹图谱

目的建立以线性指纹定量法(余弦法)评价苦碟子注射液三波长高效液相色谱融合指纹图谱,同时结合5组分定量鉴别苦碟子注射液质量的分析方法,并分析指纹图谱与体外抗氧化活性的相关性,综合提高注射剂质量控制。方法建立苦碟子注射液三波长融合指纹图谱和测定5组分含量,用5组分定量结果和定量指纹图谱共同评价30批苦碟子注射液质量,并考察30批苦碟子注射液对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力,探寻指纹图谱与体外抗氧化活性之间的谱-效关系。结果建立了苦碟子注射液三波长高效液相色谱融合指纹图谱,以线性指纹定量法(余弦法)评价30批样品全部合格,体外抗氧化试验显示326 nm下17个共有指纹峰中,11个共有峰面积和抗氧化活性正相关。结论三波长高效液相色谱融合指纹图谱可以全面揭示苦碟子注射液特征吸收波长下的指纹信息,该方法为科学评价与有效控制苦碟子注射液的质量提供了参考。     

用HPLC指纹图谱对复方甘草片信息化质量控制研究

目的采用双定性双定量相似度等46参数作为评价的信息参量,以建立复方甘草片（CLTs）HPLC指纹图谱的信息质量控制方法。方法采用反相HPLC法以Century SIL C18 BDS柱（200mm×4．6mm,5μm）;流动相为0．1％磷酸水-乙腈低压梯度洗脱,紫外检测波长203nm,柱温（30．00±0．15）℃,进样量5μL。以21批CLTS的HPLC指纹图谱按平均值法计算生成对照指纹图谱（RFP）,以此RFP为标准计算21批CLTs的双定性双定量相似度的均值,据此进行宏观定性定量质量评价;以色谱指纹图谱指数F等42个信息参量进行超信息特征评价。结果以苯甲酸（SB）为参照物峰,确定29个指纹峰,建立了CLTs的HPLC指纹图谱。用双定性相似度和双定量的均值评价15批样品的化学成分数量、分布比例和含量都合格,1批含量明显超标,其他5批含量都明显偏低。结论在OTC中随机选择的26批CLTS,用HPLC指纹图谱鉴定完全合格品15批,不合格品6批,发现假药5批。因此所建立的CLTS的HPLC指纹图谱可用于CLTs生产质量控制。本研究证明用中药色谱指纹图谱技术结合多变量参数控制中药复方制剂的质量的信息质量控制方法可行且准确可靠。     

系统指纹定量法评价益脑宁片的整体质量和化学指纹归属度及药效物质工艺收率

目的建立益脑宁片（YNNT）HPLC指纹图谱并测定其化学指纹归属度和药效物质工艺收率。方法采用反相高效液相色谱法,以系统指纹定量法的Sm和Pm等参数对自制样品、市售YNNT及其各单味药指纹进行定性定量分析。结果以丹参素峰为参照物峰,确定45个共有指纹峰,以5批制剂按平均值法生成对照指纹图谱（RFP）;就紫外吸收成分来说,该法评价出S14丹参为YNNT的君药,S15赤芍和S5党参为臣药;评价出5批市售YNNT药效物质工艺收率约为50%。结论系统指纹定量法能够客观、准确地定量描述单味药对复方制剂化学指纹的贡献大小和定量评价中药复方药效物质的工艺收率。     

系统指纹定量法评价牛黄解毒片质量

建立牛黄解毒片（Niuhuangjiedu tablets,NHJDT）HPLC指纹图谱,以系统指纹定量法评价其质量。采用RP-HPLC法,以黄芩苷为参照物峰,确定53个共有指纹峰,建立了NHJDT-HPLC指纹图谱。以宏定性相似度S_m和宏定量相似度P_m为参量对15批NHJDT进行聚类分析,确定用其中10批生成对照指纹图谱 (RFP), 以此RFP为标准用系统指纹定量法鉴别评价15批NHJDT质量。鉴别出9批质量合格,1批均化系数相对偏差明显偏高,5批含量明显偏低。系统指纹定量法是对系统化学指纹的整体定性分析和整体定量分析的密切整合, 是评价中药质量的便捷有效方法。

     

用高效液相色谱数字化指纹图谱鉴定木香顺气丸质量

目的用HPLC数字化指纹图谱鉴定木香顺气丸（Muxiangshunqi pill,MXSQP）质量。方法采用RP—HPLC法,以色谱指纹图谱指数F为目标函数优化选择指纹图谱试验条件。用MXSQP-HPLC指纹图谱的多维数字化参数评价指纹图谱和鉴别其质量,并用系统指纹定量法鉴定16批MXSQPs的质量。同时,计算MXSQP统一化色谱指纹图谱（NCFP）的定点指数和定信号指数并进行评价,通过破坏性试验对木香顺气丸的化学指纹稳定性进行考察。结果以橙皮苷峰为参照物峰,确定60个共有指纹峰,建立了MXSQP—HPLC数字化指纹图谱。以5m和Pm为指标进行聚类分析,确定用其中11批生成对照指纹图谱（RFP）,以此RFP的16个数字化指数的±10％为标准鉴定出5批样品不合格。用系统指纹定量法鉴定出12批样品质量为良好以上,1批质量中等,3批次劣品。结论MXSQP-HPLC数字化指纹图谱能够真实有效地控制其质量。     

苦苣菜HPLC数字化指纹图谱研究

目的 建立苦苣菜的HPLC数字化指纹图谱。方法 用CenturySIL DS色谱柱（200mm×4．6mm，5μm），流动相为1％醋酸水和1％醋酸甲醇，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1检测波长为265nm，柱温为（30±0．15）℃，进样量为5μL。用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统3．0”软件计算10批苦苣菜HPLC指纹图谱的色谱指纹图谱指数F和色谱指纹图分离量指数RF等42个参数进行潜信息特征数字化评价。以双参照物体系结合定量结构-性质相关（QSPR）原理标定指纹峰的表观分子量、峰位、洗脱动量数δ、折合相对积分函。结果以绿原酸为参照物峰，确定32个共有峰，建立了10批苦苣菜HPLC数字化指纹图谱，并以双定性双定量相似度评价10批苦苣菜的质量。结论本方法可清晰地揭示苦苣菜HPLC指纹图谱的超信息特征，为苦苣菜质量控制提供了参考依据。     

用HPLC指纹图谱对佩兰的信息质量控制研究

目的建立佩兰HPLC数字化指纹图谱，采用双定性双定量相似度等46个参数作为评价的信息参数，对佩兰进行信息质量控制。方法采用RP-HPLC色谱法，以CenturySIL C18 AQ（20cm×4．6mm，5μm）色谱柱，1％醋酸水-1％醋酸乙腈为流动相进行低压梯度洗脱，检测波长为265nm，柱温：（30±0．15）℃，进样量：5μL，测定不同产地佩兰药材的HPLC指纹图谱。以10批佩兰的HPLC指纹图谱按平均值法计算生成对照指纹图谱（RFP），以此RFP为标准计算10批佩兰的双定性双定量相似度的均值，据此进行宏观定性定量质量评价；并以色谱指纹图谱指数F等42个信息参数进行超信息特征评价。结果以香豆素峰为参照物峰，确立了27个共有峰，建立了佩兰HPLC数字化指纹图谱，用双定性双定量相似度的均值评价了10批样品的化学成分数量和分布比例相似性较好，但含量差异很大。结论在选取的14个产地的佩兰药材中4批与其他相比化学成分分布比例差异较大，不建议使用，推荐使用定性定量相似度均很高的S2广东清平、S4江苏东台市等产地的佩兰药材。本研究对使用佩兰药材生产制剂具有宏观质控意义，证明了中药色谱指纹图谱技术结合多变量参数控制中药质量的信息质量控制方法具可行性及实用性。     

用HPLC指纹图谱对复方丹参片的信息质量控制研究

目的采用双定性双定量相似度等46个参数作为评价的信息参量，以建立复方丹参片（CSMTs）HPLC指纹图谱的信息质量控制方法。方法采用反相HPLC法以Century SIL C18 BDS柱（200mm×4．6mm，5μm）；以1％醋酸水1％醋酸甲醇为流动相梯度洗脱，紫外检测波长290nm，柱温（30．00±0．15）℃，进样量5μL。以双定性相似度为参量通过对20批CSMTs进行系统聚类分析确定用其中10批生成CSMT对照指纹图谱（RFP），以此RFP为标准计算20批CSMTs的双定性双定量相似度，据此进行宏观定性定量质量评价；以色谱指纹图谱指数F等42个信息参量进行信息质量特征评价。结果以丹酚酸B（SAB）为参照物峰，确定40个指纹峰，建立了CSMTs的HPLC指纹图谱。用双定性和双定量相似度评价8批样品的化学成分数量、分布比例和含量都合格，5批双定性相似度不合格，其他7批含量都明显偏低。结论在OTC中随机选择的20批CSMTs，用HPLC指纹图谱鉴定完全合格品8批，双定性相似度不合格品5批及双定量相似度不合格品7批。因此所建立的CSMTs的HPLc指纹图谱可用于CSMTs生产质量控制。本研究证明用中药色谱指纹图谱技术结合多变量参数控制中药复方制剂质量的信息质量控制方法可行且准确可靠。