细胞FLICE样抑制蛋白通过抑制程序性坏死减轻心肌缺血-再灌注损伤北大核心CSCD

目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径,探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein,cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,通过结扎左前降支30 min/再灌注3 h构建大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion,I/R)模型,使用CCK-8检测各组心肌细胞活力,使用DAPI/PI双染色检测各组心肌细胞坏死率变化,使用STRING数据库预测cFLIP的蛋白互相作用网络,使用TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积,使用Western Blot检测cFLIPL、cFLIPS、p-RIPK1、p-RIPK3以及p-MLKL的蛋白表达或活化水平。结果在心肌细胞H/R损伤和心肌组织I/R损伤过程中,cFLIPL和cFLIPS的蛋白表达均被显著下调,而程序性坏死的相关蛋白RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平均显著上升。上调cFLIP的蛋白表达可明显地减轻心肌细胞H/R损伤、降低H/R诱导的细胞坏死率并缩小I/R导致的心肌梗死面积。STRING数据库结果显示cFLIP与RIPK1和RIPK3存在直接蛋白相互作用,在心肌细胞H/R损伤模型和心肌组织I/R模型中过表达cFLIP均可显著抑制了RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平。结论过表达cFLIP可显著抑制RIPK1/RIPK3/MLKL介导程序性坏死发生,从而减轻心肌细胞损伤并缩小心肌梗死面积。     

δ阿片受体激动剂对失血性休克大鼠血流动力学的影响

目的探讨δ阿片受体激动剂D-Ala~2-D-Leu~5-enkephalin(DADLE)对失血性休克大鼠血压和心功能的影响。方法36只健康SD大鼠,随机分成假手术组、休克对照组和DADLE组(1 mg/kg组和5 mg/kg组),休克对照组和DADLE组大鼠放血使MAP降至40 mmHg,维持低血比状态(MAP=40 mmHg)60 min后,用生理盐水或DADLE复苏,观察复苏后3 h内动脉血压(SAP、DAP和MAP)和心功能指标(LVSP、±dp/dt_(max))的变化。结果休克对照组复苏后各时点动脉血压和心功能指标呈逐渐下降趋势。DADLE组复苏后5 min动脉血压和心功能指标开始升高,30 min达高峰,复苏后同一时点各项指标均显著高于对照组(P＜0．01),其中1 mg/kg组和5 mg/kg组没有显著差异。结论DADLE能改善失血性休克大鼠的血流动力学指标。     

DADLE对急性全脑缺血再灌注大鼠心脏及脑caspase-3的影响

目的研究大鼠心脏在急性全脑缺血再灌注时的病理改变及脑组织凋亡蛋白天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(Caspases)的表达情况。方法健康雌性SD大鼠50只(180~220 g)随机分为5组:假手术组(Sham,n=10):只暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组(I/R组,n=10):实验选用大鼠构建动物模型,以二血管阻断加低血压法,建立急性全脑缺血再灌注模型,缺血时间持续15 min,之后解除双侧颈总动脉的夹闭进入再灌注期;δ阿片受体激动剂脑啡肽乙酸酯(DADLE)处理组分为2 mg/kg组(A组,n=10)、DADLE 3 mg/kg组(B组,n=10)、DADLE 5 mg/kg组(C组,n=10):在I/R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE。灌注120 min后开胸取心脏,Masson特殊染色,开颅取大脑采用western blot技术检测caspase-3的含量。结果 MASSON染色结果显示,I/R组可见部分的绿色胶原纤维,排列紊乱、疏松;而Sham组未见绿色胶原纤维,细胞排列整齐、紧密、无萎缩;DADLE处理组间无显著差异,未见绿色胶原纤维,心肌细胞排列较I/R组整齐、致密。Sham组Caspase-3蛋白表达显著低于其他各组(P0.05),DADLE处理组与I/R相比,Caspase-3表达显著降低(P0.05),其中B、C组Caspase-3表达显著低于A组(P0.05),B、C两组间无显著性差异(P0.05)。结论大鼠急性全脑缺血再灌注时,脑组织凋亡蛋白Caspase-3表达水平上调同时伴有心肌细胞不同程度损害;而通过施加DADLE可以有效地减缓心、脑的缺血缺氧损伤,对器官发挥保护作用。     

休克及复苏后不同组织能量代谢与组织损伤的差异性

背景休克后不同的组织器官循环和代谢存在一定的差异,损伤后反映也不一致,但其确切机制尚不十分清楚.目的从能量代谢的角度探讨肠组织与心肌、骨骼肌等肠外组织在休克及复苏后组织损伤的差异性.设计随机分组对照实验研究.地点和对象实验在解放军第二炮兵总医院骨科和第三军医大学完成,研究对象为健康Wistar大鼠48只,雌雄不拘,体质量(198±32)g,由解放军第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供.干预采用大鼠休克复苏模型,高效液相色谱法测定三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)含量;生化及比色法测定黄嘌呤氧化酶(XO),丙二醛(MDA)和超氧化歧化酶(SOD)水平.主要观察指标休克及复苏后ATP,ADP,AMP,XO,MDA和SOD水平.结果休克后肠组织、心肌和骨骼肌ATP含量明显低于对照组,分别为对照的26.3%,30.7%和62.8%;复苏后,心肌,骨骼肌ATP含量明显高于休克组,肠组织ATP含量则略高于休克组.休克及复苏后,肠组织XO活化及MDA含量均明显高于对照组,SOD活力则明显低于对照组,其脂质过氧化程度较心肌和骨骼肌严重.结论休克及复苏后不同组织能量代谢变化及组织损伤程度存在差异性,肠组织能量代谢障碍及损伤程度重于心肌、骨骼肌等肠外组织.     

细胞FLICE样抑制蛋白通过抑制程序性坏死减轻心肌缺血-再灌注损伤

目的基于RIPK1/RIPK3/MLKL介导的程序性坏死途径, 探讨细胞FLICE样抑制蛋白(cellular FLICE-like inhibitory protein, cFLIP)对心肌缺血再灌注损伤的调节作用。方法通过缺氧4 h/复氧12 h构建心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)模型, 通过结扎左前降支30 min/再灌注3 h构建大鼠心肌缺血-再灌注(ischemia reperfusion, I/R)模型, 使用CCK-8检测各组心肌细胞活力, 使用DAPI/PI双染色检测各组心肌细胞坏死率变化, 使用STRING数据库预测cFLIP的蛋白互相作用网络, 使用TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积, 使用Western Blot检测cFLIPL、cFLIPS、p-RIPK1、p-RIPK3以及p-MLKL的蛋白表达或活化水平。结果在心肌细胞H/R损伤和心肌组织I/R损伤过程中, cFLIPL和cFLIPS的蛋白表达均被显著下调, 而程序性坏死的相关蛋白RIPK1、RIPK3以及MLKL的磷酸化水平均显著上升。上调cFLIP的蛋白表达可明显...     

夏枯草提取物对缺氧/复氧诱导心肌细胞氧化应激损伤保护作用及抗凋亡的机制

目的:观察不同浓度的夏枯草提取物(Prunellae Spica extract,PSE)对心肌细胞H9c2缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R模型。实验分为对照组、H/R组、H/R+PSE 20μg/mL组、H/R+PSE 40μg/mL组和H/R+PSE 80μg/mL组。采用CCK-8法检测H9c2心肌细胞存活率。检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(creatine phosphate kinase,CPK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,H/R组H9c2细胞的存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加,AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平显著增加,SOD水平显著降低(均P<0.05)。与H/R组相比,PSE能够显著促进细胞存活,抑制细胞凋亡,降低AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平,提高SOD水平(均P<0.05),并呈浓度依赖性。蛋白质印迹法检测显示:与对照组相比,H/R组H9c2细胞Bax和cleavedcaspase-3蛋白的表达显著增加(均P<0.05),Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达显著降低(均P<0.05);与H/R组相比,PSE能够显著抑制Bax和cleaved-caspase-3蛋白的表达(均P<0.05),促进Bcl-2、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达(均P<0.05)。结论:PSE对H9c2心肌细胞的H/R损伤具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

休克及复苏后不同组织能量代谢与组织损伤的差异性

背景：休克后不同的组织器官循环和代谢存在一定的差异，损伤后反映也不一致，但其确切机制尚不十分清楚。目的：从能量代谢的角度探讨肠组织与心肌、骨骼肌等肠外组织在休克及复苏后组织损伤的差异性。设计：随机分组对照实验研究。地点和对象：实验在解放军第二炮兵总医院骨科和第三军医大学完成，研究对象为健康Wistar大鼠48只，雌雄不拘，体质量(198&;#177;32)g，由解放军第三军医大学野战外科研究所实验动物中心提供。干预：采用大鼠休克复苏模型，高效液相色谱法测定三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)含量；生化及比色法测定黄嘌呤氧化酶(XO)，丙二醛(MDA)和超氧化歧化酶(SOD)水平。主要观察指标：休克及复苏后ATP，ADP，AMP，XO，MDA和SOD水平。结果：休克后肠组织、心肌和骨骼肌ATP含量明显低于对照组，分别为对照的26．3％，30．7％和62．8％；复苏后，心肌，骨骼肌ATP含量明显高于休克组，肠组织ATP含量则略高于休克组。休克及复苏后，肠组织XO活化及MDA含量均明显高于对照组，SOD活力则明显低于对照组，其脂质过氧化程度较心肌和骨骼肌严重。结论：休克及复苏后不同组织能量代谢变化及组织损伤程度存在差异性，肠组织能量代谢障碍及损伤程度重于心肌、骨骼肌等肠外组织。     

DADLE模拟冬眠对休克大鼠血流动力学的影响

目的：探讨DADLE（冬眠诱导触发物类似物）对失血性休克大鼠血压和心功能的影响。方法：36只健康雄性SD大鼠,随机分成假手术对照组、休克对照组和DADLE实验组（分成1mg/kg组和5mg/kg组）,制成失血性休克大鼠模型,监测复苏后3小时内各时点动脉血压（MAP）和心功能指标（±dp/dtmax）。结果：DADLE实验组（包括1mg/kg组和5mg/kg组）复苏后5分钟MAP和±dp/dtmax开始升高,30分钟达高峰,复苏后同一时点各项指标均显著高于休克对照组（P〈0.05）,其中1mg/kg组和5mg/kg组没有显著差异。结论：DADLE能改善失血性休克大鼠的血压和心功能。     

PolyCHb携氧复苏液影响失血性休克大鼠EPO表达的初步分析

目的采用PolyCHb携氧复苏液救治失血性休克大鼠,观察复苏效果并研究其对血浆EPO含量以及肾组织EPO,EPOR mRNA表达的影响,为休克复苏后氧供恢复状态及HBOCs制品开发提供评价依据。方法采用大鼠重度失血性休克-复苏模型,将64只成年雄性SD大鼠随机分为:1)假手术组:仅进行大鼠股动/静脉插管;2)PolyCHb组:大鼠股动/静脉插管,制备失血性休克模型,用PolyCHb复苏液进行复苏;3)红细胞组:用红细胞复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同;4)白蛋白组:用5%白蛋白复苏液进行复苏,其余操作与PolyCHb组相同。在放血前(基础值)、休克时、复苏液回输完成(复苏后0 h)观察大鼠血压、心率变化,并进行血细胞计数;复苏后24 h和72 h分别取32只大鼠腹主动脉血,离心取血浆,测定血浆EPO含量;取大鼠肾组织,应用实时荧光定量PCR检测24h与72 h组织中EPO与EPOR mRNA的表达情况。结果 PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组复苏后0 h MAP(mmHg)分别为(122.27±17.25)vs(98.38±18.70)、(90.93±11.58)(P0.001);Hb(g/L)含量分别为(78.33±3.61)、(88.50±0.71)vs(64.83±9.72)(P0.05);红细胞(1012/L)数量为(3.21±0.30)vs(4.78±0.38)vs(3.23±0.40)(P0.05);复苏后24 h PolyCHb组、红细胞组组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量(ng/m L)分别为(7.04±0.51)vs(2.86±0.60)vs(10.4±0.86)(P0.05);肾组织EPO mRNA表达值分别为(32.43±3.25)vs(21.69±5.03)(P0.01)vs(35.17±17.10)(P0.05);肾组织EPOR mRNA表达值分别为(0.20±0.04)vs(0.16±0.02)vs(0.24±0.05)(P0.05);复苏后72 h PolyCHb组、红细胞组和白蛋白组血浆EPO蛋白含量(ng/m L)分别为(1.88±0.30)vs(0.79±0.19)vs(3.10±0.51)(P0.05);肾组织EPO mRNA表达值分别为(9.76±2.50)vs(7.59±1.48)(P0.05)、(15.27±1.67)(P0.05);肾组织EPOR mRNA表达值分别(0.32±0.06)vs(0.29±0.07)vs(0.30±0.15)(P0.05)。结论PolyCHb用于复苏重度失血性休克大鼠,通过给缺氧组织供氧,使血浆EPO水平及肾组织EPO mRNA表达降低,但对肾组织EPOR mRNA表达无明显影响。PolyCHb可能可作为1种新型携氧体,早期纠正急性失血性休克大鼠氧供平衡。     

高渗盐羟乙基淀粉液对失血性休克犬中性粒细胞Fas表达的影响

目的观察高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液(HSCH)对早期严重失血性休克复苏前后中性粒细胞(PMN)Fas表达的影响,探讨其对早期严重失血性休克救治的特殊用途及其机制。方法采用修订的Wiggers犬失血性休克模型,分离中性粒细胞,流式细胞仪法测定Fas表达。结果失血性休克后PMNFas表达下调,与生理盐水复苏组比较,HSCH复苏组PMNFas表达明显增加。结论HSCH可对抗创伤失血性休克后PMN的凋亡延迟,减轻由于PMN的过度活化而导致的过度炎症反应,提高创伤失血性休克的复苏成功率。     

ROS对糖尿病大鼠血脂代谢及肾脏组织中VEGF的影响

目的探讨地黄寡糖(ROS)对糖尿病大鼠血脂代谢及肾脏组织中血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法将40只SPF级大鼠按照随机数字表法分为健康组、DM组、ROS组及药物对照组,每组10只。DM组、ROS组及药物对照组大鼠均建立糖尿病模型。ROS组及药物对照组分别采用200 mg/(kg·d)的ROS及二甲双胍灌胃,剩余两组灌胃等体积生理盐水,治疗22 d。治疗结束后,检测血脂代谢指标、肾脏重量、肾脏病理组织切片、肾脏组织中VEGF阳性率及蛋白。结果与健康组比较,DM组、ROS组、药物对照组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低,经药物干预后,ROS组、药物对照组TC、TG明显低于DM组,HDL-C明显高于DM组,且ROS组TG明显低于药物对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与健康组比较,ROS组、药物对照组大鼠肾脏重量及肾脏指数均明显增加,药物干预后,与DM组比较,ROS组及药物对照组肾脏重量及肾脏指数明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。健康组大鼠肾脏结构完整,肾小球基质分布清晰,未见增生及肥大;DM组大鼠肾小球基质模糊,毛细血管增厚,炎性反应浸润严重,肾小球出现肥大;经药物干预的ROS组及药物对照组上述病理情况均好转,症状减轻。健康组、DM组、ROS组及药物对照组大鼠肾脏组织中VEGF蛋白相对表达量分别为1.00±0.15、3.03±0.33、1.45±0.27、1.50±0.30,组间比较,差异有统计学意义(F=109.100,P<0.001)。DM组VEGF蛋白相对表达量明显高于健康组,差异有统计学意义(t=17.880,P<0.001)。ROS组及药物对照组VEGF蛋白相对表达量明显低于DM组,差异有统计学意义(t=11.870、10.990,P<0.001)。结论灌胃ROS能够改善糖尿病大鼠血脂代谢指标,降低肾脏重量,这与抑制VEGF表达具有相关性。     

miR-873-5p靶向调控VDAC1保护大鼠癫痫样神经细胞的作用机制探讨

目的:研究微RNA-873-5p(miR-873-5p)靶向调控电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)对大鼠癫痫样神经细胞的影响及作用机制。方法:通过无镁培养基诱导构建大鼠癫痫样海马神经细胞模型,将大鼠神经细胞分为对照组、模型组、miR-con组及miR-873-5p组。对照组采用正常培养大鼠神经细胞;模型组采用低镁细胞...     

肺癌患者转录辅助因子过氧化物酶增殖体激活受体γ辅助因子1、电压依赖性阴离子通道1表达及临床意义

目的探讨肺癌患者转录辅助因子过氧化物酶增殖体激活受体γ辅助因子1(PGC1α)、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)表达及临床意义。方法 2017年4月至2019年5月在我院就诊的肺癌患者156例(肺癌组),另收集94例肺部良性病患者(对照组),采用免疫组织化学法(SP)检测肺部组织中的PGC1α、VDAC1表达,并分析其与临床病理特征和生存预后的关系。结果肺癌组PGC1α、VDAC1的高表达率高于肺部良性疾病组(P<0.05); PGC1α、VDAC1高表达与TNM分期、淋巴结转移、远处转移呈正相关(P<0.05);生存曲线分析显示所有患者3年生存率为68.59%。PGC1α及VDAC1高表达患者3年生存率均低于低表达患者(P<0.05);肺癌组织中PGC1α表达与VDAC1表达呈正相关(P<0.05)。结论 PGC1α和VDAC1在肺癌中高表达,可作为肺癌不良预后的标志物。     

单磷酰脂A和缺血预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡 Bcl-2 Bax蛋白表达的影响

目的 研究单磷酰脂A预处理(MLA-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因 Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法 复制I/R损伤模型,采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果I/R组凋亡细胞较多,MLA-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P<0.01)。Bcl-2和Bax蛋白表达在I/R组均较多,MLA-P组及IP组Bcl-2表达明显高于I/R组(P<0.01),而Bax蛋白表达明显低于I/R组(P<0.01)。MLA-P组与IP组各指标均无显著性差异(P>0.05)。结论 MLA-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。MLA-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达影响的作用相近。     

别嘌呤醇对家兔低血容量性休克-再灌注损伤的防治作用

目的探讨别嘌呤醇对家兔血容量性休克—再灌注损伤的保护作用。方法制备家兔低血容量性休克模型,随机分为非保护组（n＝10）和别嘌呤醇保护组（n＝10）,并检测血浆和心、肺等组织黄嘌呤氧化酶（XO）活性、丙二醛（MDA）含量及平均动脉压（MAP）值。结果休克前两组动物XO、MDA及AIAP均无统计学差异。休克90分钟时两组动物MAP均显著下降,XO及MDA均明显升高。休克—再灌注后,保护组XO及MDA均逐渐下降,休克—再灌注3小时后接近休克前水平,明显低于休克90分钟时和非保护组同时相水平;保护组MAf,逐渐上升,休克—再灌注3小时后接近休克前水平,明显高于休克90分钟时及非保护组同时相水平。此外,别瞟吟醇保护组心、肺、肝、肾、肠道组织XO及MDA均明显低于非保护组XO及MDA值。结论别嘌呤醇通过抑制黄瞟吟氧化酶活性、减少氧自由基生成可减轻组织休克—再灌注损伤。     

二维斑点追踪超声心动图观察脓毒性休克患者左心室心肌功能的变化

目的通过分层二维斑点追踪显像技术评价脓毒性休克患者长期预后心肌分层应变的变化趋势。 方法选择2016年1月至2017年2月苏北人民医院重症监护室38例脓毒性休克存活患者（作为脓毒性休克组）进行长期随访跟踪,并选取35例正常对照者作为健康对照组,应用GE vividE9和Echopac工作站的分层斑点追踪技术,比较其左心室总体及左室心肌内膜、中层、外膜的心肌纵向、环向应变结果。 结果（1）与健康对照组比较,脓毒性休克组心率无明显变化,差异无统计学意义（F=1.668,P=0.177）;脓毒性休克组治疗后1个月左心室射血分数（LVEF）无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）,治疗后3、6个月明显降低,差异具有统计学意义（均P<0.05）;治疗后6个月左心室舒张末期容积（LVEDV）明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗后1、3、6个月舒张早期二尖瓣血流峰值速度/舒张早期二尖瓣环峰值速度（E/Em）明显升高,差异具有统计学意义（均P<0.05）。（2）脓毒性休克组各时间节点组内比较,心率、E/Em无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后6个月LVEF、GLS绝对值、GRS绝对值、GCS绝对值明显降低,LVEDV明显升高,差异具有统计学意义（均P<0.05）。（3）脓毒性休克组心内膜下、中层、心外膜下心肌的纵向应变及环向应变均低于健康对照组,差异具有统计学意义（均P<0.05）。 结论脓毒性休克患者左室心肌内膜、中层、外膜三层心肌收缩功能均减弱,分层斑点追踪技术可以发现其心肌收缩功能的改变。且为脓毒性休克患者评估心功能不全提供了无创参数体系,从而指导临床诊疗,改善脓毒性休克患者的预后。