溶瘤病毒dl1520体外对肝癌细胞杀伤作用的研究

目的:探讨E1B缺陷溶瘤腺病毒dl1520体外对肝癌细胞Hep3B的杀伤作用。方法:通过细胞病变效应(CPE)观察d l1520对肝癌细胞株的杀伤作用;MTT法测定对肝癌细胞生长抑制作用,并通过空斑法测定病毒增殖,探讨其杀伤机理。结果:d l1520在肝癌细胞株Hep3B中可复制增殖并导致明显细胞病变效应,显著抑制癌细胞的生长。结论:d l1520体外可在肝癌细胞Hep3B中复制并裂解杀伤肿瘤细胞。     

E1B缺陷腺病毒dl1520联合化疗药物DDP体外对鼻咽癌细胞杀伤及诱导凋亡作用

目的探讨E1B-55KDa缺陷腺病毒dl1520与DDP联合体外对鼻咽癌细胞的杀伤及诱导凋亡作用。方法采用MTT法体外测定细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果MOI(感染复数)=0.032、0.16、0.8、4、20、100时dl1520对CNE-2细胞的生长抑制率分别为2.78%、7.41%、10.19%、24.07%、45.37%、67.59%,而dl1520+DDP的抑制率分别为29.63%、32.41%、40.74%、52.78%、66.67%、74.07%,P<0.01;1.5μg/mlDDP24h诱导CNE-2细胞凋亡的比例为1.7%,dl1520在MOI=0.1、1、10、100时诱导的凋亡比例分别为1.2%、1.3%、14.1%、2.7%,而当dl1520与DDP联合后诱导的凋亡比例分别为1.8%、3%、18%、3.2%。结论dl1520与DDP联合可显著增强DDP对CNE-2细胞的杀伤及诱导细胞凋亡作用。     

E1B蛋白缺陷型溶瘤腺病毒对乳腺癌干细胞的作用

目的研究E1B蛋白缺陷型溶瘤腺病毒(E1B--OLV)对乳腺癌干细胞的作用。方法E1B--OLV感染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞(实验组),常规培养MCF-7细胞作为对照组。两组细胞分别行流式细胞仪(FCM)分析CD44 CD24-细胞的表型比例。两组细胞同时行微球体培养,观察微球体形成的大小及数量,计算微球体形成率(MFE),用FCM分析微球体CD44 CD24-细胞的比例。结果实验组MCF-7细胞的CD24-、CD44 和CD44 CD24-比例分别为43.90%、63.26%和22.19%,对照组为6.74%、88.30%和2.30%。实验组中微球体成球时间早于对照组,球体体积大于对照组,MFE高于对照组(1.26%和0.9%);实验组和对照组微球体中CD44 CD24-细胞的比例分别为38.08%和23.35%。结论ElB--OLV在短期内杀死MCF-7细胞,但主要是乳腺癌分化细胞,可能促进了乳腺癌干细胞的生长,加快了其自我更新和分化速率。     

E1B蛋白缺陷型溶瘤腺病毒对乳腺癌干细胞的作用

目的 研究E1B蛋白缺陷型溶瘤腺病毒(E1B-- OLV)对乳腺癌干细胞的作用. 方法 E1B- OLV感染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞(实验组),常规培养MCF-7细胞作为对照组.两组细胞分别行流式细胞仪(FCM)分析CD44+CD24-细胞的表型比例.两组细胞同时行微球体培养,观察微球体形成的大小及数量,计算微球体形成率(MFE),用FCM分析微球体CD44+CD24-细胞的比例. 结果 实验组MCF-7细胞的CD24-、CD44+和CD44+CD24-比例分别为43.90%、63.26%和22.19%,对照组为6.74%、88.30%和2.30%.实验组中微球体成球时间早于对照组,球体体积大于对照组,MFE高于对照组(1.26%和0.9%);实验组和对照组微球体中CD44+CD24-细胞的比例分别为38.08%和23.35%. 结论 ElB-- OLV在短期内杀死MCF-7细胞,但主要是乳腺癌分化细胞,可能促进了乳腺癌干细胞的生长,加快了其自我更新和分化速率.     

E1B缺陷腺病毒dl1520预感染CNE-2细胞对其致瘤性的影响

目的探讨E1B-55KDa缺陷腺病毒dl1520预感染鼻咽癌细胞CNE-2对其致瘤性的影响。方法10MOI(感染复数)的dl1520感染CNE-2细胞后,按5%、20%的比例将感染细胞和未感染细胞混合后做裸鼠皮下注射,观察肿瘤生长情况并采用免疫组化检测腺病毒六邻体抗原,分析dl1520在肿瘤内的复制及分布情况。结果5%、20%组均可见肿瘤生长明显抑制,抑瘤率分别为30.59%、76.60%,P<0.01。免疫组化证实瘤内有大量病毒复制且20%组比5%组分布更广泛。结论dl1520预感染CNE-2细胞后对其裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,进一步证实dl1520具有一定的抗肿瘤作用且病毒在瘤内的分布情况可影响抗肿瘤的效果。     

LMPs特异性T淋巴细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用

目的:研究树突状细胞负载EB病毒潜伏膜蛋白(latent membrane proteins,LMPs)介导生成的LMPs特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)LMPs-CTL的生物学特性,观察其对LMPs阳性鼻咽癌细胞SUNE的杀伤作用?方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞,采用贴壁分离及白细胞介素(interleukin,IL)-4?粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)等细胞因子诱导成熟树突状细胞(dendritic cell,DC),通过DC细胞负载LMPs多肽抗原并递呈给同源T淋巴细胞,制备LMPs-CTL?CCK8法检测LMPs-CTL对SUNE细胞的杀伤作用;ELISA和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxy fluoroscein succinimidyl ester,CFSE)染色法检测LMPs-CTL分泌IFN-γ及其增殖?结果:LMPs-CTL对SUNE细胞的杀伤率在12 h和24 h分别为(43.47 ± 1.93) %和(77.15 ± 3.18) %,显著高于对照组的(11.45 ± 3.06) % 和(24.27 ± 13.20)%(P < 0.05)?SUNE细胞刺激后,LMPs-CTL增殖能力较对照组有明显增强,IFN-γ分泌量达到(613.40 ± 121.77) pg/ml,显著高于对照组(86.90 ± 3.70) pg/ml(P < 0.05)?结论:通过DC细胞负载LMPs混合多肽可诱导生成LMPs-CTL,对LMPs阳性鼻咽癌细胞有较强的杀伤作用?     

携带lipocalin 2基因的溶瘤腺病毒对胰腺癌细胞生长的体外抑制作用

目的构建携带人lipocalin 2基因且删除E1B55基因的溶瘤腺病毒,研究其体外对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法利用RT-PCR技术获得lipocalin 2基因并克隆至pCA13质粒,构建pCA13-lipocalin 2。用BglⅡ从pCA13-lipocalin 2酶切出包含CMV启动子及lipocalin 2的表达框,将该表达框亚克隆入质粒pZD55,获得pZD55-lipocalin 2。将pZD55-lipocalin 2与pBHGE3共转染293个细胞,重组产生携带lipocalin 2的溶瘤腺病毒ZD55-lipocalin 2。经PCR和Western blot鉴定正确后,体外采用结晶紫染色和MTT法,观察其对胰腺癌细胞生长的抑制作用。结果ZD55-lipocalin 2能在PANC-1细胞中增殖复制并表达lipocalin 2蛋白,结晶紫染色和MTT法观察到该溶瘤腺病毒能明显抑制PANC-1细胞生长。结论成功构建了携带人lipocalin 2的溶瘤腺病毒,其能明显抑制胰腺癌细胞生长,为胰腺癌治疗提供新策略。     

WT1抗原负载的DC联合CIK对鼻咽癌细胞的体外杀伤活性研究

目的：探讨WT1抗原负载的树突状细胞（DC）诱导多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对鼻咽癌细胞（CNE）的体外杀伤效应。方法采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,常规法诱导DC、CIK细胞;流式细胞技术分析测定细胞表型;MIT法分别测定在4个不同效靶比时CIK、DC＋CIK和WT1抗原负载的DC＋CIK三组效应细胞对鼻咽癌细胞（ CNE）的杀伤活性。结果在4个不同效靶比时WT1抗原负载的DC诱导CIK对鼻咽癌细胞的体外杀伤效应明显高于CIK、DC＋CIK。结论 WT1抗原负载的DC诱导CIK对鼻咽癌细胞（ CNE）的体外杀伤效应增强,为肿瘤临床生物免疫治疗提供了实验室基础。     

溶瘤腺病毒在肿瘤治疗中的作用

溶瘤腺病毒是继手术、放疗、化疗后治疗肿瘤的新式方法,它能特异性识别并感染肿瘤细胞,最终导致细胞溶胀而摧毁肿瘤细胞,但无法在正常机体细胞内复制而不具有杀伤作用,理论上具有更高的抗肿瘤效应和更低的副作用。目前溶瘤腺病毒Onxy-015（dl 152）已进入Ⅲ期临床试验,文章就溶瘤腺病毒治疗肿瘤的国内外研究进展进行综述。     

溶瘤病毒联合丝裂霉素对膀胱癌细胞体内外杀伤的实验研究

目的 探讨溶瘤病毒与丝裂霉素联合应用对膀胱癌T-24细胞体内外生长的抑制效应和机制.方法 将溶瘤病毒不同的感染复数或与丝裂霉素（0.1 mg/L）联合应用,通过细胞生长抑制实验及裸鼠皮下移植瘤模型,观察其对膀胱癌T-24细胞的作用及其机制.结果 与单独应用相比,溶瘤病毒与低剂量的MMC联合可明显抑制T-24细胞体外生长,诱导T-24细胞凋亡,裸鼠体内肿瘤发生时间延迟,4周后肿瘤体积与单独应用时相比,差异有显著性（P＜0.05）.与体外处理结果一致.结论 溶瘤病毒与MMC联合应用可显著增强MMC对T-24细胞的杀伤作用,进一步提高膀胱癌的疗效.     

动物肠道溶瘤病毒的提纯

本文通过对Ecco-18株病毒的提纯,摸索出了动物肠道溶瘤病毒的较佳提纯方案。     

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人类乳腺癌细胞及其干细胞的溶瘤作用

 【目的】 通过体外实验观察溶瘤性单纯疱疹病毒(HSV)载体G47Δ对人类原代乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞毒效应,探讨其对人乳腺癌的治疗作用。【方法】 选取6例浸润性导管癌组织,体外培养人原代乳腺癌细胞及人原代乳腺癌干细胞,将G47Δ按不同感染复数(MOI),即MOI=0.01和MOI=0.1加入各实验组中,观察每天细胞的生长情况。G47Δ含有LacZ基因,其表达产物可被X-gal染色检测。 【结果】 G47Δ病毒在乳腺癌细胞中可复制和传播通过X-gal染色法得以证实。 G47Δ对人原代乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞都具有杀伤作用,对乳腺癌细胞更加敏感。在MOI=0.01组及0.1组中,感染病毒后第4 d,人原代乳腺癌细胞被杀灭的比例分别是91%及96%,乳腺癌干细胞被杀灭的比例分别是43%及78%;感染病毒后第6天,两组中人原代乳腺癌细胞接近全部被杀灭,乳腺癌干细胞被杀灭的比例分别是92%、98%。 【结论】 G47Δ可有效杀灭人乳腺癌细胞及其干细胞;乳腺癌细胞比乳腺癌干细胞对G47Δ更具有敏感性。     

抗感冲剂体外抗流感病毒作用实验研究

目的：研究抗感冲剂体外抗甲型流感病毒的作用。方法：在体外用MTT法和CPE法观察抗感冲剂体外对甲型流感病毒感染的预防作用、直接杀伤作用以及对流感病毒生物合成的抑制作用。结果：抗感冲剂对于阻断流感病毒侵入、直接杀伤病毒及抑制病毒穿入后增殖皆有效果,其治疗指数分别为12.76,10.29,7.95。结论：抗感冲剂有明显的抗甲型流感病毒作用,呈剂量效应关系。     

Experimental Study on the Antitumor Effect of Chicken Anemia Virus vp3 Gene against Liver Carcinoma In Vivo

In order to testify the antitumor effect, especially its effect against liver carcinoma in vivo,of VP3 protein, one kind of protein coded by chicken anemia virus, recombinants pcDNA-vp3 con-taining chicken anemia virus vp3 gene, and control vector pcDNA3 were mixed with murine liver car-cinoma cell lines H22 respectively. The mixture was injected subcutaneously into Balb/C mice. Somedays later, the mice were killed and the solid tumor weighed. The antitumor efficiency was evaluat-ed. The manners of VP3 protein in vivo inducing tumor cell death were identified by using TUNELassay. All the results suggested that the injection of pcDNA-vp3 and H22 mixture resulted in a sig-nificant reduction of tumor growth in mice when compared with the results of control groups.TUNEL assay revealed that VP3 induced apoptosis in vivo. All these indicated that CAV vp3 mightbe a potential new gene in reducing the growth rate of tumor cells in liver carcinoma or in other kindof solid tumors in vivo.     

动物肠道溶瘤病毒实验治疗荷瘤小鼠的非瘤器官光镜及电镜观察

用动物肠道溶瘤病毒(Ecco-18)实验治疗荷瘤小鼠(P_(615))时,对其非瘤器官进行了光镜和电镜观察。结果发现,荷瘤小鼠各脏器均未查到病毒颗粒或病毒性物质。各脏器的超微结构与对照组相比未见病理改变。     

热毒清注射液对人类免疫缺陷病毒体外抑制作用的研究

为探讨清热解毒制剂热毒清注射液对人类免疫缺陷病毒（HIV）在细胞内复制的影响,以MT-4细胞为靶细胞,并转染HIV-1,从热毒清对靶细胞的亚毒性浓度始作对倍稀释,观察不同浓度热毒清对HIV诱导细胞病变程度的影响。结果表明,热毒清亚毒性浓度（SC）为6.25mg/ml,50%有效浓度（EC50）为0.473mg/ml,在0.781～6.25mg/ml剂量范围内,能明显抑制HIV-1在MT-4细胞内的复制。结果提示热毒清注射液具有较强的抗HIV-1的作用。     

乙肝病毒感染肝星状细胞的体外研究

目的初步研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)能否体外感染人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),以期为阐明慢性乙肝的致病机制提供新的实验依据。方法体外培养人肝星状细胞株(LX-2),用不同浓度HBV感染者的血清进行感染,HBV DNA终浓度分别为104、105、106、107拷贝/mL,在感染24、48和72h收取细胞。荧光定量多聚酶链反应(polymerase chain reaction,FQ-PCR)方法测定细胞内的总HBV DNA和共价闭合环状DNA(cccDNA);Southern blotting及Northern blotting方法测定细胞内是否存在HBV复制中间体及mRNA。结果在HepG2.2.15细胞中,分别检测到2.58拷贝/细胞和0.86拷贝/细胞的HBV DNA和cccDNA。在少量LX-2细胞中,可以检测到HBVNA,均在0.05拷贝/细胞以下,在所有LX-2细胞中未检测到cccDNA;用Southern blotting和Northern blotting方法未检测到LX-2细胞中存在HBV复制中间体及mRNA;而在HepG2.2.15细胞中检测到阳性条带。结论在体外实验中,未发现HBV感染肝星状细胞的证据。