Bcl-2基因增强表达对TNF诱导U937细胞凋亡的效应

目的：探讨Ｂｃｌ－２基因增强表达对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）诱导的Ｕ９３７细胞凋亡的生物学效应。方法：用磷酸钙沉淀法将Ｂｃｌ－２基因转染到Ｕ９３７细胞，用Ｇ４１８筛选稳定转染子，用不同剂量ＴＮＦ处理后观察转染与未转染细胞的存活率。结果：用Ｂｃｌ－２稳定转染的Ｕ９３７细胞经ＴＮＦ处理，存活率明显高于未转染细胞。结论：Ｂｃｌ－２基因增强表达阻抑ＴＮＦ诱导的Ｕ９３７细胞凋亡     

核转录因子在肿瘤坏死因子-α所致内皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）是否通过信号传导系统－核转录因子（ＮＦ－ｋＢ）的激活,导致诱导型一氧化氮合酶表达增加,引起内皮细胞凋亡。方法 体外培养牛肺动脉内皮细胞,观察ｉＮＯＳ抑制剂一氨基胍,以及ＮＦ－ｋＢ抑制剂－吡咯烷二硫氨基甲酸盐（ＰＤＴＣ）对ＴＮＦα所致内皮细胞凋亡的影响,观察细胞形态学变化,用ＤＮＡ电泳及ＤＮＡ断裂百分率确定细胞凋亡情况;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析内皮细胞经ＴＮ     

Bcl—2基因增强表达对TNF诱导U937细胞凋亡的效应

目的：探讨Ｂｃｌ－２基因增强表达对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）诱导的Ｕ９３７细胞凋亡的生物学效应。方法：用磷酸钙沉淀法将Ｂｃｌ－２基因转染到Ｕ９３７细胞，用Ｇ４１８筛选稳定转染子，用不同剂量ＴＮＦ处理后观察未转染细胞的存活率。结果：用Ｂｃｌ－２稳定转洒的Ｕ９３７细胞经ＴＮＦ处理，存活率明显高于未转染细胞，结论：Ｂｃｌ－２基因增强表达阻抑ＴＮＦ诱导的Ｕ９３７细胞凋亡。     

转录因子NF-kB在肿瘤坏死因子α介导的胰岛β细胞凋亡中的作用

目的 探讨肿瘤坏死因子(17NFα)是否可引起胰岛B细胞凋亡以及转录因子核因子kB(NF—kB)在TNFα诱导的β细胞凋亡中所起的作用。方法培养INS-1胰岛β细胞,采用DNA重组、转染和再感染技术获得可表达NF—kB的特异性抑制物：IkBα的突变体IkBα△N的INS-1／IkB△N细胞。应用DNA片段分析技术和kB—luc报告基因荧光分析技术观察NF—kB活性和β细胞的凋亡情况。结果IL—Iβ可诱导INS-1细胞的NF—kB激活,但在INS-1／IkB△N细胞则无此作用。将细胞与IL-1β(10μg/L)、TNFα(100μg/L)以及IFNγ(100000U／L)一道培养48h后显示,TFNFα与IFNγ合用可诱导INS-1细胞发生凋亡,而在INS-1／IkB△N细胞未见此现象。单用IL—Iβ或IFN-γ或IL—IB加IFNγ均未能诱导INS-1细胞凋亡。结论凋亡是TNFα导致B细胞死亡的方式之一,NF—kB在TNFα介导的β细胞凋亡中具有重要作用,抑制NF—kB激活可能保护β细胞免于TNFα诱导的凋亡。     

乙型肝炎病毒对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导凋亡的影响及其机制

目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）转染后,细胞对肿瘤坏死因子（TNF）相关的凋亡诱导配体（TRAIL）诱导 的凋亡的敏感度变化及作用机制。通过人肝癌细胞HepG2及转染了HPV全基因组的HepG2.2.15细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度研究,探讨HBV感染对细胞凋亡的影响及其机制。方法：流式细胞仪检测TRAIL诱导的凋亡反应和细胞表面TRAIL蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中分泌型TRAIL蛋白质的表达,半定量逆转录聚合酶链反应检测TRAIL受体和其转导通路中凋亡拮抗分子FLIP的表达。结果：HepG2和HepG2．2．15对TRAIL诱导的凋亡率分别为51．60％和9．12％。与HepG2相比,HepG2．2．15细胞表面TRAIL蛋白质及其受体的表达都有不同程度的下调,而抵抗细胞凋亡的分子－FLI的表达却显著上调（P＜0．01）,两细胞系上清中分泌型TRAIL的表达量差异无显著意义（P＞0．05）。结论：HBV转染可以抵抗TRAIL诱导的细胞凋亡,可以下调细胞表面TRAIL蛋白质及其受体的表达,但使FLIP的表达显著上调。这能从一定程度上解释HBV感染逃逸机体免疫监视,持续存活,导致相应病理变化的机制。     

凋亡蛋白Bax在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞耐药中的调节作用

目的探讨凋亡蛋白Bax在恶性淋巴瘤细胞对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）凋亡抵抗中的调节作用,为临床克服肿瘤耐药提供治疗靶点。方法分别采用500彬LTRAIL和／或10nmol／L蛋白酶体抑制剂PS-341处理恶性淋巴瘤细胞（CRL）和正常对照细胞（HRC）。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。荧光显色技术检测细胞半胱氨酸蛋白水解酶-8酶活性。Western印迹检测细胞中Bax蛋白表达水平。免疫沉淀技术（IP）检测Bax蛋白的活性及构象变化。结果与HRC细胞比较,CRL细胞对TRAIL存在显著抵抗,24h凋亡指数仅为21％,前者为32％,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;同时在TRAIL作用过程中CRL细胞中Bax表达呈下降趋势,24h表达量仅为正常量的5／17。当联合使用PS-341后,可有效抑制Bax蛋白降解,6h表达量为正常量的1．2倍,显著增加活性;同时增加半胱氨酸蛋白酶．8酶活性,6h为26．5μmol·L^-1·h^-1·mg^-1蛋白,从而增加细胞凋亡,6h凋亡指数达54％,与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论促凋亡蛋白Bax的下调表达参与恶性淋巴瘤细胞对TRAIL耐药性。合理的使用蛋白酶体抑制剂可通过抑制蛋白降解,增加其活性来有效克服肿瘤耐药。     

放疗诱导宫颈癌细胞凋亡与c-myc蛋白表达

目的 :探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞凋亡与c myc蛋白表达的关系 .方法 :对 4 8例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 2 0Gy/ 2wk取活检 ,石蜡包埋 .应用原位缺口末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡 ,应用免疫组化SP法对c myc蛋白进行检测 .结果 :4 8例宫颈癌患者放疗前、放疗 2 0Gy ,凋亡阳性率分别为 6 7%和 85 % ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;宫颈鳞癌患者病理分级增高 ,临床分期越晚凋亡阳性率均有降低 ,但无显著性差异 .放疗前c myc蛋白阳性表达率为 86 % ,放疗2 0Gy其表达率为 4 3% ,显著性降低 (P <0 .0 1 ) ;放疗 2 0Gy,c myc蛋白表达与凋亡有明显相关 .结论 :c myc蛋白表达与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关     

内毒素诱导的肝细胞及枯否细胞凋亡与肝脏损伤的关系

目的探讨内毒素、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在诱导枯否细胞及肝细胞凋亡过程中的作用及其与肝脏损伤的关系。方法采用细胞死亡ＥＬＩＳＡ法分别检测枯否细胞,以及和肝脏细胞联合培养时,对不同浓度的内毒素,在不同时相点两种细胞的凋零密度,同时观察培养上清中丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）,乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量变化。结果枯否细胞的凋亡数量随着培养时间的延长（３～２４小时）和内毒素浓度的增加（０～１０μｇ／ｍｌ）明显增加。而枯否细胞与肝细胞联合培养时,在内毒素浓度大于１μｇ／ｍｌ时,细胞凋亡数显著上升。ＴＮＦ单克隆抗体可阻断内毒素诱导的枯否细胞及肝细胞凋亡。ＬＤＨ及ＡＬＴ含量在内毒素浓度高于１μｇ／ｍｌ,且培养６小时后,有明显升高,晚于凋亡出现。结论ＴＮＦ介导了内毒素所致的枯否细胞及肝细胞的凋零。而且细胞凋亡早于细胞损伤的出现。大量凋零细胞的出现,使枯否细胞对内毒素的灭活作用降低进而可能导致肝细胞的凋零及损伤。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与死亡受体结合后,可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物,但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肝癌细胞凋亡

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL是近年来发现的极具潜力的抗肿瘤药物,尽管TRAIL对大多数肿瘤细胞表现出强大的诱导凋亡作用,但几乎所有的肝细胞肝癌(HCC)细胞系均对TRAIL表现出不同的耐药性。c-FLIP的过度表达及Caspase-8低表达可能是HCC细胞系耐受TRAIL的主要机制,NF-κB途径的激活及死亡受体的表达不足也参与了这一耐受过程。化疗药物及其他一些生物制剂联合TRAIL可以改变HCC细胞对TRAIL的敏感性,大大提高了TRAIL应用于肝癌临床治疗的可能性。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL是近年来发现的极具潜力的抗肿瘤药物,尽管TRAIL对大多数肿瘤细胞表现出强大的诱导凋亡作用,但几乎所有的肝细胞肝癌(HCC)细胞系均对TRAIL表现出不同的耐药性。c-FLIP的过度表达及Caspase-8低表达可能是HCC细胞系耐受TRAIL的主要机制,NF-κB途径的激活及死亡受体的表达不足也参与了这一耐受过程。化疗药物及其他一些生物制剂联合TRAIL可以改变HCC细胞对TRAIL的敏感性,大大提高了TRAIL应用于肝癌临床治疗的可能性。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织神经细胞凋亡与Bcl-2、Bcl-xl蛋白检测

目的：探讨Bcl-2、Bcl-xl与神经细胞凋亡在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织中的表达。方法：栓线法阻断健康雄性大鼠大脑中动脉(MCA)血流2h后再灌注,分别于再灌注0．5h,3h,6h,12h,24h和48h断头取脑,在前联合处连续切片,分别进行TUNEL染色及Bcl-2、Bcl-xl蛋白免疫组化染色。以假手术组作对照。结果：①脑缺血区部分神经细胞发生凋亡,再灌注0．5∽48h,凋亡细胞逐渐增多,凋亡指数随再灌注时间的延长而逐渐升高。至48h时达高峰。②Bcl-2、Bcl-xl蛋白在脑缺血再灌注早期开始表达,36∽h达到高峰,24h开始逐渐降低,至48h时与对照组差异无统计学意义。③凋亡细胞,Bcl-2及Bcl-xl蛋白均分布在脑缺血梗死灶的周边,梗死中心区及正常区无表达。结论：局灶性脑缺血再灌注损伤过程中神经细胞凋亡起着重要的作用,而Bcl-2及Bcl-xl抑制神经细胞的凋亡。     

Bcl-2、Bax在胃癌及胃癌前病变中的表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨胃癌及胃癌前病变组织中Bcl-2、Bax的表达情况及其与细胞凋亡的相互关系.方法 采用免疫组织化学SP法分别检测10例正常胃黏膜、60例慢性萎缩性胃炎伴肠化生、30例异型增生、50例胃癌中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL法）检测组织切片中细胞凋亡的情况.结果 慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生、胃癌中Bcl-2蛋白表达阳性率分别为31.7％,43.3％,62.0％,均显著高于正常胃黏膜（P＜0.01）.慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生中Bax蛋白阳性率分别为55.0％,30.0％,其阳性率均显著高于胃癌（P＜0.01,P＜0.05）.Bcl-2蛋白表达阳性慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和胃癌中凋亡细胞指数（AI）显著低于Bcl-2蛋白阴性组（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达阳性率与AI值呈负相关.Bax蛋白表达阳性慢性萎缩性胃炎伴肠化生、异型增生和胃癌中AI显著高于Bax蛋白阴性组（P＜0.05）,Bax蛋白表达阳性率与AI值呈正相关.结论 胃黏膜癌变过程中,AI、凋亡调控基因Bcl-2和Bax的比值逐渐增加,说明它们在胃癌演变过程中可能起重要作用.     

苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

缺血预适应对再灌注性心肌细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 :研究体外循环 (CPB)中缺血预适应 (IPC)对心肌细胞凋亡及其 Bcl- 2和 Bax蛋白表达的影响。 方法 :建立猫CPB模型并随机均分成 3组 :对照组 (n=30 )不阻断升主动脉 (ACC) ,仅作 CPB转流 ;缺血再灌注组 (IR组 ,n=30 )于 CPB开始 4 5 min后 ACC6 0 m in,开放主动脉使心脏恢复再灌注 ;IPC组 (n=30 )于 ACC前进行 IPC(ACC5 min后开放 1 0 min,并重复 3次 ) ,余同 IR组。应用 TUNEL 法观察 CPB过程中各组心肌细胞凋亡发生的情况 ,应用免疫组化 SABC法观察 Bcl- 2和Bax蛋白的表达 ,并结合流式细胞术定量检测心肌细胞凋亡率和 Bcl- 2、Bax蛋白的表达率。 结果 :各组在 CPB缺血期间及再灌注早期 ,均未检出凋亡心肌细胞 ;IR组和 IPC组在心肌再灌注 90 m in时 ,可检测到一定数量的凋亡心肌细胞 ,凋亡率分别为 (6 .932± 0 .6 38) %和 (3.0 2 1± 0 .2 5 4 ) % ,组间差异显著 (P<0 .0 5 ) ;与对照组相比 ,IR组的 Bcl- 2蛋白表达阳性率明显下降(P<0 .0 5 ) ,Bax蛋白表达阳性率则明显上升 (P<0 .0 5 ) ;而 IPC组的 Bcl- 2蛋白表达阳性率高于 IR组 (P<0 .0 5 ) ,Bax蛋白表达阳性率低于 IR组 (P<0 .0 5 )。 结论 :CPB中缺血再灌注可影响心肌细胞凋亡相关基因 Bcl- 2和 Bax蛋白的表达水平 ;IPC可以通过上调 Bcl- 2     

应用载体介导的RNAi技术抑制Bcl-2的表达

目的　应用载体介导的RNAi技术特异地干扰抗凋亡基因bcl 2在HeLa细胞中的表达。方法　构建利用H1启动子转录功能性siRNA的载体 ;在H1启动子下游分别插入含不同bcl 2基因特异性序列的 64nt寡核苷酸片段 ;将构建的质粒转染HeLa细胞 ,以间接免疫荧光和免疫印迹检测转染后细胞中Bcl 2的表达水平。结果　 3种含不同bcl 2特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在细胞中的表达 ,但干扰的效果存在差异 ,从 45 %～ 83 5 %。结论　本研究建立的载体介导的RNAi技术可成功地用于干扰Bcl 2在HeLa细胞中的表达     

Bcl-2及Bag-1基因产物在肾癌组织中的表达及意义

目的：讨论基因Bcl-2和Bag-1在肾癌组织中的表达及相互关系，了解肿瘤增殖与凋亡的特点。方法：采用免疫组化SABC法对41例肾癌与10例正常肾组织的石蜡标本切片对照，进行产物表达的统计研究，结果：Bcl-2在肾癌组织中阳性表达主为75．6％，与正常肾组织30．0％相比，有显著性差异（P＜0．05），但其表达与不同病理细胞类型，病理分级及临床分期无关（P＞0．05），Bag-1在肾癌组织中表达率为61．0％，正常肾组织10．0％，表达，Bag-1与肿瘤分级，分期及预后密切相关（P＜0．05），随肾癌恶性程度增加，其表这强度也增加，Bcl-2与Bag-1的表达正相关（r=0.438）。结论：肾癌组织中Bag-1表达可作为预后指标，Bcl-2可能参与肾组织由良性向恶性转化的过程，但与癌细胞恶性分化程度无关。     

磷酸氯喹诱导U937细胞凋亡机制的研究

目的 将磷酸氯喹作用于白血病细胞株U937,观察其对白血病细胞凋亡的影响;并研究磷酸氯喹是否通过逆转凋亡相关基因PNAS-2蛋白在白血病细胞中异常的亚细胞定位,从而促进细胞凋亡的机制.方法 将不同剂量的磷酸氯喹加入体外培养至对数生长期的白血病细胞株U937培养液中.MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡,同时观察磷酸氯喹对U937细胞中PNAS-2蛋白亚细胞定位的影响.结果 50 μg/mL磷酸氯喹可显著促进U937细胞发生凋亡,并使白血病细胞中PNAS-2蛋白的异常亚细胞定位发生改变.结论 磷酸氯喹对白血病细胞株U937有促进凋亡的作用,其凋亡机制可能是使PNAS-2蛋白在白血病细胞中异常的亚细胞定位恢复正常,对于临床治疗白血病的具有潜在的应用价值.     

银杏叶黄酮提取工艺及对Hela细胞Bcl-2 mRNA表达的影响

目的银杏叶黄酮提取工艺优化及抗肿瘤作用的研究。方法采用碱液法、乙醇法、丙酮法3种不同的提取方法,设定不同的固液比、提取时间,优化出最佳条件,用于银杏叶黄酮类化合物的提取。无血清培养Hela细胞,以银杏叶黄酮提取物为诱导剂,24h后用RT-PCR方法检测Hela细胞中癌基因Bcl-2的表达情况。结果70％乙醇、固液比1：3、回流时间为2h的条件下,提取银杏叶黄酮类化合物得率最高。采用RT-PCR方法检测显示,银杏叶黄酮类化合物作用Hela细胞24h后,Bcl-2 mRNA表达水平下降。结论70％乙醇、固液比1：3、回流时间为2．5h,为银杏叶黄酮提取最佳条件。银杏叶黄酮能下调癌基因Bcl-2 mRNA表达水平,从而可能有抗肿瘤作用。     

脑室内注射胰岛素对大鼠全脑缺血后海马CA1区Bcl-2蛋白表达及神经元凋亡的影响

目的　观察胰岛素对全脑缺血后海马 CA1区神经元凋亡及 Bcl- 2蛋白表达的影响 ,探讨胰岛素对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用的机制 .方法　利用 4-VO法制作大鼠全脑缺血模型 .造成脑缺血 15 min后行再灌注 ,于再灌注后即刻经脑室注入 1U胰岛素 ,利用免疫组化及原位标记法分别于全脑缺血后 1和 3d观察海马 CA1区Bcl- 2蛋白表达及神经元凋亡的情况 .结果　全脑缺血后 1d,缺血组及胰岛素治疗组鼠海马 CA1区未见原位标记阳性细胞 .治疗组鼠海马 CA1区可见呈阳性表达的 Bcl- 2蛋白 ,而缺血组鼠海马 CA1区 Bcl- 2蛋白的表达则呈阴性 .全脑缺血后 3d,缺血组鼠海马 CA1区 Bcl- 2蛋白的表达仍呈阴性 ,海马 CA1区原位标记阳性细胞计数为 143.5± 11.6 .治疗组鼠海马 CA1区 Bcl- 2蛋白呈阳性表达 ,海马 CA1区原位标记阳性细胞计数为 75 .6± 6 .7.结论　全脑缺血后脑室内注入胰岛素可促进海马 CA1区 Bcl- 2蛋白表达 ,减少神经元的凋亡 ,这可能是其对全脑缺血后海马 CA1区神经元产生中枢直接保护作用的主要机制之一 .