糖尿病大鼠肾小球产生转化生长因子β的研究

本文检测糖尿病大鼠肾小球产生的转化生长因子β的水平，并探讨体外高糖环境对系统膜细胞产生ＴＧＦβ的影响，建立ＳＴＺ诱发的糖尿病大鼠模型，４周后肾小球分泌的总量及活性ＴＧＦβ均比对照组明显增加，其中活性ＴＧＦβ增加为明显，体外高糖培养后的系膜细下降，而活性ＴＧＦβ却有上升。结果表明高糖环境下肾上球和系膜细胞确实存在着ＴＧＦβ分泌和激活的异常ＴＧＦβ分泌和激活的异常，ＴＧＦβ可能与了糖尿病肾病系膜区扩张     

NF-κB活化在IL-1β诱导的小鼠肾小球系膜细胞表达IL-6中的作用

目的：研究NF-κB在rhIL-1β刺激引起的体外培养的鼠肾小球系膜细胞表达IL-6中的作用。方法： NF-κΒ活性检测采用电泳迁移率改变法(EMSA),IL-6 mRNA表达采用逆转录/聚合酶链反应(RT/PR)检测,培养上清IL-6蛋白含量采用ELISA检测。结果：rhIL-1β刺激肾小球系膜细胞时,在上调IL-6蛋白和基因表达的同时亦激活NF-κB,而且这种上调作用可被NF-κB特异性抑制剂PDTC所阻抑。结论： IL-1β诱导鼠肾小球系膜细胞表达IL-6是通过NF-κB调控,NF-κB可能参与肾小球肾炎的免疫炎症反应。     

EGR-1基因转染对环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响

目的:观察EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响,探讨EGR-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,采用LipofectamineTM2000瞬时转染EGR-1质粒,于培养12、24、48小时末,应用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,EGR-1基因转染后上述变化较高糖组更加显著。结论:EGR-1可上调TGF-β及PDGF-B表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

IL-13对肾小球系膜细胞NF-κB的抑制作用

为了观察IL 13对肾小球系膜细胞核因子 κB (NF κB )活性的影响 ,探讨IL 13抑制免疫及炎症反应的分子机制。体外培养的大鼠系膜细胞经LPS激活及不同浓度IL 13处理后 ,利用凝胶电泳迁移率试验 (EMSA )检测系膜细胞NF κB的活性。在含 5 %FCS的RPMI 1640培养状态下的肾小球系膜细胞存在一定的NF κB活性 ;LPS激活后系膜细胞NF κB活性显著增高 ;IL 13可抑制基础状态及LPS激活的系膜细胞NF κB活性。结果表明 ,IL 13可抑制体外培养系膜细胞的NF κB活性。从而抑制NF κB参与调控的细胞因子的表达而最终对系膜细胞炎症效应产生调节作用。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧和TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧(ROS)和转化生长因子β1，(TGF-β1)表达的影响及茶多酚的干预作用。方法 培养人肾小球系膜细胞，分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组，培养0、12、36h后，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用半定量RT-PCR和免疫细胞化学法检测细胞内TGF-β1，mRNA和蛋白表达的变化。结果 高糖导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量升高，上调TGF-β1，mRNA和蛋白表达，随时间延长更为明显；茶多酚干预可拮抗高糖时系膜细胞的上述改变。结论 高糖能促进人肾小球系膜细胞ROS产生增加，上调TGF-β1 mRNA和蛋白表达，茶多酚能抑制高糖对系膜细胞的作用。     

氯沙坦延缓肾小球系膜细胞衰老及可能机制

目的检测氯沙坦作用衰老系膜细胞后衰老指标及STAT蛋白表达变化,探讨氯沙坦在肾小球系膜细胞衰老过程中的作用及可能机制。方法细胞分三组:对照组、衰老组(10~(-6)molL~(-1)AngⅡ刺激细胞72h)和氯沙坦组(AngⅡ加入前1h加入10~(-5)molL~(-1)氯沙坦,培养72h)。MTT法检测细胞增殖情况,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色法检测衰老细胞百分率,流式细胞仪检测细胞周期,倒置显微镜及透射电镜下观察细胞形态及超微结构改变。Western blot检测各组STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3蛋白的变化。结果应用氯沙坦后细胞存活率较衰老组明显增加,SAβ-gal阳性率较衰老组明显下降,氯沙坦阻滞于G0-G1期细胞较衰老组明显减少,氯沙坦使肾小球系膜细胞体积增大、多型核、双核等衰老改变的细胞明显减少,细胞核内陷及染色质边集等衰老现象有所改善。衰老细胞内STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3表达水平明显增加,应用氯沙坦治疗后STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3表达水平均下降,且p-STAT1、p-STAT3下降更明显。结论 JAK2/STAT通路的激活参与了系膜细胞衰老过程,氯沙坦延缓系膜细胞衰老可与下调STAT1、p-STAT1、STAT3及p-STAT3的表达水平相关。     

Ⅲ型胶原肾小球病的形态学观察

目的了解Ⅲ型胶原肾小球病的形态学改变,并对Ⅲ型胶原可能的细胞来源进行初步探讨。方法对3例肾活检组织进行光镜、免疫荧光、电镜和Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及d平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的免疫组织化学染色(SP法)观察。结果2例患者临床表现为肾病综合征,其中1例伴高血压,第3例表现为肾功能不全和肾性高血压。3例均无肾病家族史。光镜检查可见肾小球基膜内和系膜区弥漫性过碘酸-希夫反应阳性物质沉积,系膜细胞无明显增生。电镜检查在基膜内疏松层和系膜区可见大量胶原纤维沉积,系膜细胞胞膜下平行排列的束状微丝明显增加。免疫组织化学显示这些胶原纤维为Ⅲ型胶原,Ⅰ型和Ⅳ型胶原阴性,同时系膜区多数系膜细胞α-SMA阳性。结论Ⅲ型胶原肾小球病光镜、电镜及免疫组织化学上都有其特殊的病理改变。肾小球内激活的系膜细胞可能是Ⅲ型胶原的来源。     

rhIL-1受体拮抗剂对大鼠肾小球系膜细胞增殖和合成细胞外基质-胶原的影响

采用肾小球系膜细胞(GMC)培养、~3H-TdR掺入及羟脯氨酸测定的方法,首次观察了重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的大鼠GMC增殖和合成细胞外基质-胶原的影响。结果表明:rhIL-1Ra能拮抗hIL-1β诱导的GMC的增殖和胶原的合成;其拮抗增殖的剂量是rhIL-1β的2～50倍,拮抗胶原合成者为rhIL-1β的25～50倍。提示:rhIL-1Ra有望用于治疗由IL-1参与、介导的以系膜细胞增殖和系膜基质扩大为主要病理改变的肾小球肾炎。     

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞降低高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化倾向及糖基化终末产物聚集的体外研究

为探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)联合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对高糖条件下肾小球系膜细胞纤维化及糖基化终末产物(advanced glycation end product,AGE)聚集的影响,将体外高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞分为6个组:正常组、损伤组、MSC组、MSC+PTX 0.1mmol/L组、MSC+PTX 0.3mmol/L组和MSC+PTX 1mmol/L组。MSC组将MSC和肾小球系膜细胞共培养。MSC+PTX 3组在MSC和肾小球系膜细胞共培养时分别加入0.1、0.3和1mmol/L的PTX。采用ELISA检测各组肾小球系膜细胞AGE水平,Western blotting检测各组肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、果蝇抗同源序列蛋白3(drosophila mothers against decapentaplegic 3,SMAD3)、SMAD7及转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)的表达。结果显示,与正常组比较,损伤组肾小球系膜细胞的AGE水平显著升高(P <0.01)。与损伤组比较,MSC组、MSC+PTX 0.1 mmol/L组、MSC+PTX0.3mmol/L组和MSC+PTX 1mmol/L组肾小球系膜细胞的AGE水平显著降低(P <0.01),加入PTX后肾小球系膜细胞的AGE水平降低得更为显著,且呈现一定的浓度依赖性。与正常组比较,损伤组CTGF、SMAD3及TGF-β的蛋白表达量显著升高(P <0.01),SMAD7表达量显著降低(P <0.01)。MSC+PTX 0.1mmol/L组、MSC+PTX 0.3mmol/L组和MSC+PTX 1mmol/L组的CTGF、SMAD3和TGF-β蛋白表达量显著低于损伤组(P <0.05),但SMAD7蛋白表达量显著高于损伤组(P <0.01),且呈现PTX浓度依赖性。提示PTX联合MSC可能具有通过降低共培养肾小球系膜细胞中AGE的聚集以及多靶点抑制TGF-β/SMAD信号通路来抑制细胞纤维化的潜能,且呈现PTX浓度依赖性。     

NLRP1炎性体促进高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡

目的研究含pyrin结构域NOD样受体家族1(NLRP1)炎性体对高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡(pyroptosis)的调控作用。方法将培养的人肾小球系膜细胞(HRMC)分为4.5 mg/m L葡萄糖处理的高糖组和10μg/m L胰岛素处理的高胰岛素组,分别处理0、12、24、48、72、96 h。在各时间点,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞焦亡,实时定量PCR检测HRMC的NLRP1、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和胱天蛋白酶1前体(pro-caspase-1)的mRNA水平,Western blot法检测NLRP1、IL-1β、TNF-α、caspase-1的蛋白水平;高糖高胰岛素培养的HRMC中转染NLRP1小干涉RNA(si NLRP1),采用以上方法检测上述指标的变化情况。结果高糖高胰岛素处理48 h后,HRMC增殖能力下降、焦亡细胞数目显著增加,NLRP1、pro-IL-1β、TNF-α和pro-caspase-1 mRNA和NLRP1、IL-1β、TNF-α和caspase-1蛋白水平均显著增加;si NLRP1下调HRMC中NLRP1水平后,高糖高胰岛素培养的HRMC细胞焦亡减少,IL-1β、TNF-α和caspase-1表达显著降低。结论高糖高胰岛素处理促进NLRP1的激活从而增加肾小球系膜细胞焦亡和炎症反应,下调NLRP1的表达可抑制高糖高胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡和炎症反应。     

实验性糖尿病肾小球的超微结构及其病变分级

目的:探讨糖尿病肾病的形态学特点及其变化规律.方法: 采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.采用透射电子显微镜,对比观察14、30、60d肾病变.结果: 糖尿病模型组在14d时,肾小球等结构未见明显异常变化;在30d时,可见少数肾小球有系膜基质灶性增多;在60d时,少部分肾小球有系膜细胞增生,系膜基质灶性增多.透射电镜观察可见,糖尿病模型组在14d时,肾小球毛细血管基底膜不均匀,个别足突相互融合;在30d时,肾小球毛细血管基底膜节段性增厚,足突细胞部分足突融合,系膜区出现灶性电子致密物沉积.在60d时,肾小球毛细血管基底膜节段性增厚,部分基底膜的3层结构变得不清晰,部分系膜区增宽,可见灶性电子致密物沉积.结论: 链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型可出现肾病变,随着病程进展,可将糖尿病肾病变分为5级(DN0～DN4).     

HGF抑制肾小球硬化作用机制的研究进展

肾小球硬化是多种原因导致肾小球损伤和病变的共同结局,也是肾功能衰竭的主要病理基础。从形态学来看,肾小球硬化表现为肾小球细胞的丧失和细胞外基质(extracel-lular matrix,ECM)的积聚。机械因素(如肾小球高压、高滤过)、代谢因素(如糖尿病、高脂血症)以及多种调节分子(如细胞因子、生长因子)等都与肾小球硬化的发生发展密切相关。近年来研究表明,减少ECM的积聚,拮抗细胞因子的不良作用,抑制系膜细胞(mesangial cell,MsC)的增殖活化已成为防治肾小球硬化、延缓肾小球疾病进展中的重要环节[1,2]。肝细胞生长因子(hepatocyte growth fac…     

大鼠肾小球和系膜细胞产生转化生长因子β的研究

用标准的生物学方法检测了肾小球和系膜细胞培养上清中转化生长因子(TGF_s)的水平。结果显示:肾小球和系膜细胞均可产生一定量的TGF_s;肾小球产生的THF_s无活性,而系膜细胞产生的TGF_s大约10％有活性。鉴于TGF_s在调节细胞生长和细胞外基质代谢中的独特作用,肾小球和系膜细胞来源的rGF_s可能在维持正常肾小球结构和功能中起重要作用。     

Wnt/β-catenin通路参与脂肪间充质干细胞对大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSC)经Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法以大鼠ADSC的条件培养基作用于HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞,通过流式细胞术分析细胞周期、RNA干扰、实时定量PCR和Western blot等技术分析HBZY-1细胞增殖能力、Wnt信号通路中相关基因和蛋白表达水平的变化。结果在ADSC条件培养基作用下,HBZY-1细胞增殖受到明显抑制,dickkopf WNT信号通路抑制物1(DKK1)mRNA表达水平明显升高,而纤连蛋白(fibronectin)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达显著降低,同时系膜细胞的β-catenin和Bcl-2蛋白的表达受到明显抑制。ADSC中DKK1 mRNA表达水平显著高于HBZY-1细胞,利用小干涉RNA敲低ADSC的DKK1表达后,其β-catenin蛋白的表达水平显著升高。将干扰后的ADSC条件培养基作用于HBZY-1细胞,可重新增加HBZY-1细胞Wnt信号通路中β-catenin和Bcl-2的蛋白水平。结论 Wnt/β-catenin信号通路可能参与ADSC对HBZY-1肾小球系膜细胞增殖的调控。     

丙二醛通过抑制Nrf2/ARE促进肾小球系膜细胞凋亡

目的探索丙二醛(MDA)对糖尿病肾病的影响机制。方法用终浓度为0、1、5、10和50μmol/L的MDA处理肾小球系膜细胞(GMC),MTT法检测细胞活性,Annexin V-FITC法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot法检测Nrf2,HO-1和γGCL表达。结果 MDA剂量依赖的抑制肾小球系膜细胞的活性。MDA浓度为5μmol/L可诱导细胞内大量活性氧(ROS)产生(P0.05),抗氧化剂t BHQ可缓解MDA诱导的细胞活性的下降。MDA抑制了抗氧化反应原件(ARE)HO-1和γGCL的表达,以及Nrf2的表达水平(P0.05)。结论 MDA可通过抑制Nrf2/ARE来调控ROS生成,抑制肾小球系膜细胞的活性。     

大黄酸可影响高糖培养SD大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：含有大黄的复方中药消可宁能有效防治早期糖尿病肾病。 目的：观察大黄酸对髙糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。 方法：以20,40,80 μmol/L浓度的大黄酸刺激髙糖培养的肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。 结果与结论：苏木精-伊红染色及DAPI染色结果显示大黄酸可促进髙糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡,且与浓度与时间成正相关。各组肾小球系膜细胞的细胞凋亡率差异有显著性意义(P < 0.05),表明大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞凋亡产生影响且与浓度及时间成正相关。     

肿瘤坏死因子与肾小球系膜细胞的关系

目的研究肾小球系膜细胞的肿瘤坏死因子的自分泌功能,肿瘤坏死因子对肾小球系膜细胞作用的机制。方法利用体外培养的人和大鼠的肾小球系膜细胞,通过逆转录－多聚酶链反应、原位杂交和免疫组化方法,探讨它们之间的关系。结果肾小球系膜细胞既可产生肿瘤坏死因子,又有肿瘤坏死因子受体。结论肾小球系膜细胞是肿瘤坏死因子作用的靶细胞,肿瘤坏死因子通过旁分泌和自分泌两种途径作用于肾小球系膜细胞。     

大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号：200410064899X)。 目的：观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。 方法：用20,40,80 μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。 结果与结论：苏木精-伊红染色及4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P < 0.05)。提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关。     

NF-κB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拮抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL)-1β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用不同浓度的LXA4预刺激,再加入TNF-α共同孵育;或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β、IL-6蛋白表达量;用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)测定核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性。结果发现,LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达,抑制NF-κB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-κB的DNA结合活性,拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

醛固酮对肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1基因表达的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物l(PAI-1)基因表达的影响.方法:(1)以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)刺激肾小球系膜细胞72 h后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.(2)以10-7 mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72 h)后,用半定量RT-PCR法检测该细胞中PAI-1 mRNA的表达.结果:半定量RT-PCR结果显示,ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1mRNA的表达,且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点.结论:ALD促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA的表达,从而抑制细胞外基质的降解,促进肾小球疾病进展.