白细胞介素22的研究进展

白细胞介素 - 2 2 (IL- 2 2 )起初系在鼠 T淋巴细胞中经 IL- 9诱生而获得的 ,并因此被命名为 IL- TIF(IL-10 - related- derived inducible factor) ;鉴于其与 IL- 10的结构相似性 ,其受体是一个已建立的细胞因子受体家族的新成员 ,以及其在白细胞内的产物和作用的确认 ,2 0 0 0年由 Xie等提出将其重命名为一个新的人类细胞因子白细胞介素 - 2 2 (IL- 2 2 )。实验证明 IL- 2 2上调肝细胞急性期产物 ,参与炎症反应。借助 IL- 9或 CD3抗体和刀豆蛋白 A的激活 ,T细胞、肥大细胞、胸腺和脑均可表达 IL- 2 2 ,表明这个因子在免疫系统内外可能显示多效的活性。在抗体免疫应答中 ,其对来自 TH2 T细胞的 IL- 4产物有适当的抑制作用 ,对于哮喘有潜在的治疗作用。在信号转导途径中 ,IL- 2 2能介导 STAT1、STAT3和 STAT5的激活     

白芨多糖上调溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜紧密连接蛋白occludin的表达

目的 探讨白芨多糖(BSP)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用及其对肠黏膜紧密连接occludin蛋白的影响.方法 将小鼠随机分为对照组、DSS模型组(自由饮用2.5％DSS溶液7 d)、柳氮磺吡啶(300 mg/kg)阳性对照组以及BSP低(125 mg/kg)和高(250 mg/kg)剂量...     

高活性的人白细胞介素-3突变体的构建与表达

目的:在大肠杆菌中构建表达高活性的人白细胞介素-3(hIL-3)突变体。方法:通过定点突变的方法构建hIL-3突变体K116V和K116W的表达载体,并实现hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达。对所得包涵体蛋白依次溶解、纯化、透析复性。用Westernblot检测hIL-3突变体的特异性。单溶液细胞增殖(MTS)测定hIL-3突变体的生物学活性。结果:hIL-3在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上,主要以包涵体的形式存在。将包涵体溶解在8mol/L脲中,经Ni-NTA-Sepharose柱纯化后纯度达90%以上。MTS法测定hIL-3突变体K116V的活性为野生型的5倍,K116W的生物学活性也有所增加。结论:获得了高活性的hIL-3突变体K116V,有望成为hIL-3的替代品,也证明了hIL-3第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的生物学活性很重要。     

紧密连接蛋白-1、闭锁蛋白、白细胞介素-18在急性重症心肌炎心脏粘膜中的表达

目的 观察急性重症心肌炎大鼠心脏粘膜紧密连接蛋白(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)及白细胞介素(IL)-18的表达变化,探讨急性重症心肌炎时心脏屏障功能损伤的机制.方法 选择SD大鼠60只,随机分为三组,分别为对照组、假手术组、心肌炎组,每组各20只.心肌炎组制作急性重症心肌炎模型,假手术组大鼠麻醉后手术进腹,仅翻动心脏组织.对照组不进行腹部手术.术后24h处死各组大鼠,取心脏组织.光镜下观察心脏组织病理学改变,免疫组化检测各组心脏粘膜ZO-1、Occludin、IL-18蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测各组心脏粘膜ZO-1、Occludin、IL-18 mRNA的表达.结果 光镜下可见心肌炎组心脏黏膜绒毛上皮坏死脱落,血管充血扩张,大量中性粒细胞浸润.对照组、假手术组、心肌炎组ZO-1阳性率分别为85％、70％、15％,心肌炎组ZO-1阳性率低于对照组及假手术组(P＜0.05).对照组、假手术组、心肌炎组Occludin阳性率分别为75％、65％、20％,心肌炎组Occludin阳性率低于对照组及假手术组(P＜0.05).对照组、假手术组、心肌炎组IL-18阳性率分别为15％、15％、80％,心肌炎组IL-18阳性率高于对照组及假手术组(P＜0.05).心肌炎组ZO-1、Occludin mRNA表达水平均低于对照组及假手术组(P＜0.05);,IL-18高于对照组及假手术组(P＜0.05).结论 急性重症心肌炎时,紧密连接相关蛋白Z0-1、Occludin表达降低,IL-18表达增加,可能共同参与了急性心肌炎心脏粘膜屏障功能损伤的病理过程.     

STAT3在溃疡性结肠炎患者肠黏膜的表达及活化增强

目的 检测溃疡性结肠炎（UC）患者结肠黏膜STAT3、pSTAT3蛋白及STAT3 mRNA的表达及与UC疾病活动度的关系。方法 47例UC患者根据内镜及临床活动度进行分级，收集正常对照结肠黏膜标本13例；用免疫组织化学法检测STAT3、pSTAT3在结肠黏膜的定位；用Western blot及RT-PCR法检测STAT3、pSTAT3蛋白及STAT3 mRNA在结肠黏膜的表达。结果 ⑴ STAT3为胞质着色；pSTAT3主要为胞核着色，胞质中也有表达，二者均主要表达于大量浸润的单个核细胞，且二者在UC患者黏膜的阳性细胞数及染色强度均有随病变的加重逐渐增加的趋势；⑵UC患者肠黏膜STAT3、pSTAT3蛋白的表达量高于对照者，且随着病变分级逐渐增加。⑶UC患者肠黏膜STAT3 mRNA的表达与蛋白表达一致。结论 UC患者结肠黏膜中STAT及pSTAT3的表达随病变程度逐渐增加，在一定程度上可以反映疾病的活动度。     

人白细胞介素-3基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

目的:克隆人白细胞介素-3(hIL-3)基因cDNA,构建其真核表达质粒pcDNA3/hIL-3。方法:从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IL-3基因cDNA,通过T/A克隆法,首先构建pUCm-T/hIL-3,然后构建其真核表达型载体pcDNA3/IL-3。结果:pUCm-T/hIL-3内插入片段序列与hIL-3基因序列一致;pcDNA3/IL-3经酶切鉴定与预期结果一致。结论:成功完成了hIL-3基因克隆和pcDNA3/IL-3真核表达质粒的构建。     

人白细胞介素-3突变体的构建及在大肠杆菌中表达的研究

目的：为了在大肠杆菌中高效表达ｈＩＬ－３ｃＤＮＡ,获得ｈＩＬ－３蛋白,拟对天然型ｈＩＬ－３进行构建以获得新的突变体,同时进行了活性测定,以便深入了解ｈＩＬ－３的结构与功能之间的关系。方法：利用ＰＣＲ技术对天然型ｈＩＬ－３ Ｎ末端第３位蛋氨酸（Ｍｅｔ３）和Ｃ末端第１７位蛋氨酸（Ｌｙｓ１１６）进行定点突变,获得突变体ＭｈＩＬ－３和ＭＶｈＩＬ－３。结果：经Ｓｕｇｅｒ双脱氧法测序证实突变体ＭｈＩＬ－３ｃＤ     

溃疡性结肠炎患者外周血IL-22及相关CD4+ T细胞亚群的表达

目的 通过检测溃疡性结肠炎(UC)患者外周血中IL-22及相关CD4+T细胞亚群的表达,探讨其在UC发病机制中的可能作用.方法 以我院住院治疗的35例UC患者及35例健康对照者为研究对象,应用ELISA法检测外周血血浆中IL-22的含量,采用流式细胞术检测Th1、Th17、Th22细胞亚群的比例,并分析其与疾病活动度的关系.结果 UC组患者血浆中IL-22的含量为(354.12±104.22) pg/ml,显著高于对照组(P＜0.05),其中重度患者增高明显;UC组患者外周血Th17细胞比例[(2.36±0.94)％]显著高于对照组(P＜0.05),其中,中、重度患者增高明显;UC组患者外周血Th22细胞比例[(2.27±0.87)％]显著高于对照组(P＜0.05),其中,重度患者增高明显;而UC组患者Th1细胞比例与对照组比较尤明显差异.结论 UC患者外周血中IL-22水平、Th17、Th22细胞比例明显升高,且与疾病活动度密切相关.     

IL-22对Hp感染的UC模型小鼠的影响

目的探究白细胞介素-22(IL-22)对幽门螺旋菌(Hp)感染的溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠的影响。方法无特定病原级雌性Balb/c小鼠80只,依次分为空白对照组(自由饮用蒸馏水7 d,于第1、3、5天注射0.9%氯化钠溶液)、Hp感染组(灌服Hp菌液,自由饮用蒸馏水7 d,于第1、3、5天注射0.9%氯化钠溶液)、Hp+DSS组[灌服Hp菌液,自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7 d,于第1、3、5天注射0.9%氯化钠溶液]、IL-22干预组(灌服Hp菌液,自由饮用3%DSS溶液7 d,于第1、3、5天注射重组小鼠IL-22),每组20只,分别重复上述1～3个周期。每日观察小鼠一般情况、收集粪便做大便隐血实验、采用疾病活动指数(DAI)评分判断疾病活动指数;均于建模成功7 d后采用断头法处死小鼠,免疫组化染色/Western blot法检测肠黏膜中紧密连接蛋白occludin、STAT3表达,透射镜下观察结肠上皮细胞间连接程度,苏木素-伊红(HE)染色检测评估UC炎症程度,提取结肠蛋白检测肠道屏障功能指标二胺氧化酶(DAO)、血浆D-乳酸(D-Lacc)。结果空白对照组第3、7、21天DAI评分低于Hp感染组低于Hp+DSS组低于IL-22干预组(P0.05),空白对照组第7、21天体质量百分比高于Hp感染组高于Hp+DSS组,高于IL-22干预组(P0.05)。IL-22干预组小鼠较Hp+DSS组小鼠结肠黏膜上皮完整、管壁增厚,腺体和隐窝结构基本正常、排列完整,炎性细胞浸润更少;空白对照组组织病理学评分低于IL-22干预组,低于Hp+DSS组,低于Hp感染组(P0.05)。空白对照组occludin蛋白表达量高于Hp感染组,高于Hp+DSS组,高于IL-22干预组(P0.05),空白对照组和Hp感染组STAT3蛋白表达量低于Hp+DSS组,低于IL-22干预组(P0.05)。透射电镜结果显示,IL-22干预组小鼠较Hp+DSS组和Hp感染组小鼠有更完整屏障功能。空白对照组D-Lac含量低于IL-22干预组,低于Hp+DSS组,低于Hp感染组(P0.05),空白对照组和Hp感染组DAO含量低于Hp+DSS组,低于IL-22干预组(P0.05)。结论 IL-22干预后Hp感染的UC模型小鼠受损的肠道黏膜上皮细胞得到改善,肠道杯状细胞及紧密连接蛋白增加,考虑IL-22可作为一种新的治疗靶点。     

Notch-芳香烃受体-白细胞介素-22通路在急性特发性血小板减少性紫癜中的作用

目的观察Notch信号通路对特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者CD4+T淋巴细胞分泌白细胞介素(interleukin-22,IL-22)的影响,初步阐释Notch-IL-22通路在ITP发病中的作用。方法收集2015年11月至2018年1月在我科就诊的急性ITP患者31例和慢性ITP患者36例,另收集14例健康志愿者作为健康对照者。分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)和血浆,分选急性ITP患者CD4+T细胞,加入Notch信号通路抑制剂GSI刺激培养,应用实时定量PCR法检测Notch受体和Notch信号通路相关分子mRNA的相对表达量,应用流式细胞术检测CD3+CD4+IL-22+的Th22细胞比例,应用酶联免疫吸附试验检测血浆和培养上清中的IL-22水平,应用CCK-8法检测细胞增殖,应用Western blot检测Notch信号通路相关分子蛋白和磷酸化的水平。结果急性ITP患者Notch1、Notch2、Notch3 mRNA相对表达量显著...     

外源性白细胞介素-10对梗阻性黄疸大鼠Th17细胞相关因子表达及STAT3蛋白活化的影响

目的探讨外源性白细胞介素-10(IL-10)对梗阻性黄疸大鼠Th17细胞相关因子表达及STAT3蛋白活化的影响。方法SD大鼠30只,采用随机数字表法将其均分为3组:假手术对照组(S组)、梗阻性黄疸模型组(OJ组)和IL-10干预组(IL-10组)。OJ组建立梗阻性黄疸模型,IL-10组于建模后每天腹腔给予IL-104μg/kg;于术后7d分别分离肠组织,HE染色观察组织学变化;分别用ELISA和Western-blot检测肠黏膜中IL-17A、TGF-β、IL-23和P-STAT3含量及表达变化。结果 S组肠黏膜完整无损,组织连接完整;OJ组大鼠肠黏膜萎缩,顶端上皮脱落破溃,绒毛稀疏凌乱;IL-10组黏膜略排列规则,上皮连续性良好,绒毛变长。OJ组肠黏膜中IL-17A、TGF-β、IL-23和P-STAT3的含量及表达水平均明显高于S组(P<0.05),经IL-10干预后,各指标的含量及表达变化均低于OJ组(P<0.05)。结论IL-10对梗阻性黄疸的治疗作用可能与抑制炎症分子表达和STAT3蛋白的活化相关。     

白细胞介素9通过激活信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路促进胰腺癌细胞的增殖和迁移北大核心CSCD

目的探讨白细胞介素9(IL-9)促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的作用及机制。方法体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,实验组予(5、10、20)ng/m L IL-9处理24 h,对照组不予处理。采用实时定量PCR检测PANC-1细胞白细胞介素9受体(IL-9R)的m RNA水平,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,TranswellTM实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测细胞中信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。STAT3抑制剂AG490预处理前后,进行IL-9处理,再采用以上方法检测细胞增殖情况以及细胞中STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果 IL-9处理后,PANC-1细胞IL-9R m RNA水平增高、细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,且这种促进作用随着IL-9剂量的升高而增强,但细胞凋亡率无明显改变。与对照组相比,IL-9处理后PANC-1细胞中的p-STAT3蛋白水平显著增加,但STAT3蛋白水平无明显改变。使用AG490预处理后,IL-9对PANC-1细胞增殖的促进作用减弱,且p-STAT3表达水平显著降低。结论 IL-9促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移与STAT3通路激活有关。     

白细胞介素-24基因重组表达载体的构建及原核表达

目的：构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。方法：用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24 cDNA片段，并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中，实现插入基因的融合表达。用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性。结果：酶切结果证实，成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体，并在大肠杆菌中获得稳定的表达，表达产物的相对分子质量(M1)同预期值相-致。GST-IL-24融合蛋白能够抑制THP-1细胞的生长。结论：成功地构建了重组表达载体pGEx-KG-IL-24，并在E．coli BL21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白，为下-步研究人IL-24的功能奠定了基础。     

白细胞介素-12促进氧化应激参与干燥综合征肝脏病变

目的：探讨白细胞介素-12(IL-12)对干燥综合征小鼠肝脏病变及氧化应激通路的影响,阐明干燥综合征肝脏病变的可能机制。方法：分别检测NOD、IL-12基因敲除（IL-12KO）NOD和C57BL/6(B6)小鼠的唾液流率、肝功能、肝脏病理、IL-12水平等。取不同浓度IL-12及JAK2、TYK2抑制剂作用于小鼠肝癌细胞。测定各组小鼠血清及细胞培养上清的氧化应激指标。结果：与其他两组小鼠相比,NOD小鼠GOT和GPT显著升高（P<0.05）,血清GSH-PX、SOD和CAT降低（P<0.05）。不同浓度IL-12处理后,小鼠肝癌细胞CAT、GSH、GSH-PX和SOD有下降趋势,MDA增加。JAK2/TYK2抑制剂能逆转IL-12对肝癌细胞SOD、GSH和MDA的调节（P<0.05）。结论：IL-12可能通过促进干燥综合征肝脏细胞的氧化应激,进而参与干燥综合征肝脏病变过程。     

小鼠白细胞介素-12融合蛋白编码基因的构建与表达研究

目的 构建小鼠白细胞介素－１２的融合基因,并进行初号表达,方法 通过重叠序列引物的设计与多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术,将小鼠ＩＬ－１２的４０ｋＰａ多肽链基因与３５ｋＤａ多肽链基因,以甘氨酸接头（Ｇｌｙ４Ｓｃｒ）３序列连接成为晤蛋白编码基因,构建融合蛋白表达载体现,转染小鼠成纤维细胞ＳＶＴ２,表达具有生物学活性的融合蛋白型ＩＬ－１２。结果 构建的小鼠ＩＬ－１２表达载体经测序无突变发生。以Ｇ４１８筛选转     

小鼠白细胞介素5融合蛋白在大肠杆菌的表达

将质粒ｐＢＶ－ｍＩＬ－５的小鼠白细胞介素５（ｍＩＬ－５）的ｃＤＮＡ插入表达载体ｐＥＸ３１ｂ，转化大肠杆菌ＲＲＩ，经热诱导获得高效表达，表达的重组蛋白占菌体总蛋白的４０％。该融合蛋白由大肠杆菌ＭＳ２聚合酶的９９个氨基酸和ｍＩＬ－５的１１３个氨基酸组成，在菌体中以包涵体的形式存在，用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００、尿素洗涤包涵体，初步纯化的重组蛋白纯度达９０％，已用于制备抗ｍＩＬ－５的单克隆抗体。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ证实ｍＩＬ－５重组蛋白能与抗ｍＩＬ－５多克隆ＩｇＧ特异结合。     

白细胞介素-22、β-防御素-2与呼吸系统的免疫调节及哮喘关系的研究进展

白细胞介素(IL)-22是一种有活性的细胞因子,具有抗炎和促炎两种活性,其受体在呼吸道上皮细胞高度表达,参与呼吸道的固有免疫.人类β-防御素有6种,其中人β-防御素-2是最早被发现的具有诱导性表达的防御素,主要来源于呼吸系统,与呼吸系统疾病的发生发展密切相关.IL-22及β-防御素-2在呼吸道均具有免疫调节作用,在一定程度上参与哮喘的发生发展.     

白细胞介素-18对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞早期凋亡信号Caspase-3表达的影响

系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)发病与淋巴细胞凋亡紊乱有关。白细胞介素-18(IL-18)可以选择性地激活FasL介导的Th1细胞反应,与T、B细胞凋亡密切相关。活化的Caspase酶裂解许多细胞内酶,引发凋亡细胞的特征性形态改变。这一过程的核心是Caspase-3的活化。本研究检测44例SLE患者外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocyte,PBL)在IL-18刺激培养后Caspase-3酶的表达变化,以探讨IL-18在SLE患者的免疫异常与细胞凋亡及其调控间的作用。     

白细胞介素-17参与固有免疫应答的研究进展

白细胞介素(IL)-17是一类重要的细胞因子,通常认为IL-17主要由Th17细胞分泌,参与机体的适应性免疫应答.近年来大量研究表明,在肺、胃肠黏膜及皮肤等屏障组织中存在多种固有免疫细胞可以分泌IL-17,作为的机体免疫系统第一道防线的重要成员,一方面通过模式识别受体迅速感知外来抗原的刺激,趋化募集到损伤部位,不经克隆扩增即可发挥清除病原,参与炎症、应激或者超敏反应的作用.另一方面,分泌IL-17的固有免疫细胞能够与慢性炎症的记忆细胞相互作用,启动适应性免疫应答,发挥调节机体免疫稳态的功能.