TLR4抑制剂TAK-242对高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗的干预作用

目的建立高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型,探讨干预Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对高脂饮食诱导的小鼠胰岛素抵抗状态的影响。方法首先建立高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型。选取出生21 d的雄性C57BL/6小鼠36只,随机分为2组,正常对照组12只,以普通基础饲料喂养(low fat diet,LFD),高脂饮食实验组24只,给予高脂饲料喂养(high fat diet,HFD)。待2组小鼠体质量出现显著差异时,进行葡萄糖耐量实验(glucose tolerance test,GTT)和胰岛素耐量实验(insulin tolerance test,ITT)观察小鼠胰岛素抵抗的发生。小鼠胰岛素抵抗模型建立后,观察TLR4抑制剂TAK-242对小鼠胰岛素抵抗状态的作用。LFD组小鼠继续以基础饲料喂养(即作LFD对照组);HFD组小鼠随机分为2组,每组12只小鼠,均继续以高脂饲料喂养,其中一组HFD小鼠腹腔注射TLR4抑制剂TAK-242,以0.5 mg TAK-242/kg体质量的计量给予,每周2次(即给予TAK-242的高脂饮食实验组,HFD-T组);另一组HFD小鼠作为单纯高脂饮食的胰岛素抵抗空白对照组(HFD-C组),只给予等体积的溶媒-二甲基亚砜(DMSO)。给予小鼠TLR4抑制剂5个月,进行GTT和ITT后,处死小鼠。采用EDTA-K2抗凝管收集血液标本,立即分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和血浆。应用Western blot技术检测PBMC TLR4蛋白表达水平。采用全自动生化分析仪测定血浆葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平。结果在小鼠胰岛素抵抗模型建立期间,与对照组相比,高脂饮食组小鼠体质量增长较快,喂养至第20周体质量出现显著差异(P0.05);持续高脂饮食7个月,GTT和ITT结果显示,高脂饮食组小鼠对糖的调节能力受损、对胰岛素的降糖作用减低,说明高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗成功。出现胰岛素抵抗的小鼠,在给予TLR4抑制剂TAK-242 5个月后,对葡萄糖的调节能力和对胰岛素的敏感性均有所改善。血浆生化指标结果显示,与对照组比较,单纯高脂组和给予TAK-242的高脂饮食干预组小鼠血浆TG、TC、LDL-C浓度均显著升高(P0.05),GLU、HDL-C、ALT水平均有升高趋势,但无统计学意义(P0.05)。单纯高脂组和TAK-242干预组比较,血浆GLU、TG、TC、LDL-C、HDL-C、ALT水平在2组之间不存在显著性差异(P0.05)。Western blot实验结果发现,正常对照组小鼠PBMC未见TLR4蛋白表达,单纯高脂饮食组小鼠PBMC有高水平的TLR4蛋白表达,给予TAK-242的高脂饮食小鼠PBMC TLR4蛋白虽有表达,但表达量明显低于单纯高脂饮食组小鼠,结果提示TAK-242部分抑制了高脂饮食喂养小鼠PBMC TLR4蛋白的表达。结论高脂饮食成功诱导了小鼠产生胰岛素抵抗,抑制TLR4蛋白的表达可以改善小鼠胰岛素抵抗状态。该研究结果丰富了胰岛素抵抗发生的机制,为进一步深入研究TLR4及其信号通路在胰岛素抵抗中的作用提供了实验依据。     

高脂饲养致小鼠胰岛素抵抗对脂肪肝形成的影响

目的:探讨高脂饲养致小鼠脂肪肝形成的机制。方法:随机将8周雄性C57BL/6J小鼠分成高脂饲养组(给予含60%卡路里的高饱和脂肪酸饲养)和正常对照组,饲养12周。监测体重、肝重、血甘油三酯、血总胆固醇、血糖和血胰岛素水平,通过高胰岛素正葡萄糖钳夹实验反映胰岛素敏感性,HE染色、苏丹IV染色及肝脂含量反映肝组织脂质沉积情况,确定高脂饲养致小鼠脂肪肝的形成。通过Western blot法检测磷酸化胰岛素受体底物1(IRS1)和蛋白激酶B(Akt)水平反映胰岛素信号通路激活情况,检测固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平反映肝内脂质合成的情况。结果:高脂饲养组小鼠体重及肝重较正常对照组小鼠明显增加。与正常对照组相比,高脂组血和肝组织内甘油三酯和总胆固醇含量显著升高,血清胰岛素水平升高,葡萄糖输注率减少,磷酸化IRS1和Akt水平降低。肝组织HE染色可见高脂组肝细胞胞浆内充满大量脂肪空泡,苏丹IV染色可见肝细胞内存在大量大小不一的红色脂滴;SREBP-1和FAS蛋白水平明显升高。给予外源性油酸干预原代正常肝细胞48 h,磷酸化IRS1和Akt水平呈浓度依赖性减低,而SREBP-1和FAS蛋白表达明显升高。结论:高脂饲养导致小鼠肝脏发生胰岛素抵抗,并通过激活SREBP-FAS脂肪合成途径,促进肝脏脂质沉积,从而诱发脂肪肝。     

短期高脂喂养诱导脂肪肝的肝胰岛素敏感性和炎性因子变化

目的 探讨短期(3日)高脂饮食对小鼠肝脏三酰甘油(TG)含量、肝胰岛素敏感性及肝脏炎性通路的影响.方法 雄性C57BL/J6小鼠分为对照组及高脂组,经喂养3d后处死小鼠,测定空腹血糖、血TG及血清谷丙转氨酶(AST),应用GPO-PAP法测定各组肝脏TG含量,应用Western blot法测定磷酸化Akt/总Akt、磷酸化GSK-3α/β/总GSK-3α/β以及JNK途径(磷酸化-JNK/总JNK)和IKKα/β-NF-κB(磷酸化-IKKα/β/总IKKα/β,NF-κB)途径的蛋白表达.结果 喂养3日后,高脂组小鼠的空腹血糖、血TG、血AST较对照组无明显变化;高脂组的肝TG含量较对照组显著增加,分别为11.03±0.29和24.92±2.98 (mmol/g)(P＜0.01);高脂组小鼠胰岛素刺激后磷酸化Akt/总Akt和磷酸化GSK-3α/β/总GSK-3α/β比值较对照组减少(P＜0.01);高脂组的磷酸化-JNK/总JNK的蛋白表达较对照组显著增加(P＜0.01).结论 肝脏JNK炎性通路介导了高脂喂养诱导早期脂肪肝和胰岛素抵抗的发生发展.     

Effect of diets with different fat content on metabolic syndrome of rats and mice

目的 探讨不同脂肪含量的高脂纯化配方饲料对大、小鼠体重、血糖、血胰岛素、血脂、脂肪肝及白蛋白尿的影响.方法 雄性SD大鼠及C57BL/6小鼠随机分为MD10％、MD45％和MD60％脂肪含量饲料组,喂养3个月,检测动物体重、血糖、血胰岛素水平、血脂和蛋白尿水平,以及主要脏器重量及肝脏脂质含量.结果 与正常组(MD10％脂肪含量)相比,高脂组(MD45％和MD60％脂肪含量)动物体重显著增加,出现明显的糖耐量异常、胰岛素抵抗和血脂水平升高,同时伴有肝脏脂质含量和蛋白尿水平的增加,并且以MD45％高脂组体重增加及胰岛素抵抗更加显著.结论 MD45％和MD60％高脂配方饲料均可在大、小鼠较好地诱导代谢综合征的发生,而且前者优于后者.     

姜黄素活化肝细胞Nrf2抗氧化系统效应及缓解胰岛素抵抗作用机制研究

目的探讨姜黄素对HepG2细胞Nrf2信号功能的调控作用与其改善胰岛素抵抗的效应关系,并进一步研究高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗时姜黄素干预对肝脏Nrf2系统功能及糖异生作用的影响。方法在人肝癌细胞HepG2上分别用葡萄糖氧化酶（GO）或长期胰岛素处理,分别制成氧化应激和高胰岛素血症胰岛素抵抗模型;用蛋白印迹方法（WB）检测姜黄素对Nrf2抗氧化系统的作用。另外,对细胞进行短时胰岛素刺激,观察胰岛素信号（PKBSer473磷酸化水平）变化。为研究姜黄素的整体动物药物作用,在高脂诱导的胰岛素抵抗小鼠模型用姜黄素进行干预（雄性C57BL/6J小鼠,给予高脂饲料加上3%的姜黄素）,在第25周进行丙酮酸耐量实验,并于第27周取肝脏组织检测Nrf2系统功能变化。结果姜黄素可明显激活HepG2细胞Nrf2系统,并对抗GO氧化应激所致的PKB磷酸化损害。在高脂饲喂小鼠胰岛素抵抗模型,姜黄素可改善丙酮酸耐量,提示其增强胰岛素作用（抑制肝脏糖异生）,从而缓解肝脏糖代谢异常;姜黄素还明显激活高脂肥胖小鼠肝脏受抑制的Nrf2信号功能。结论姜黄素通过增强内源性Nrf2系统功能对抗氧化应激,是其缓解肝细胞胰岛素抵抗的重要药理机理。     

高脂饮食诱导胰岛素抵抗小鼠胰岛IRc/IRS-1低表达

目的:观察高脂饮食诱导的胰岛素抵抗模型小鼠胰岛上胰岛素受体(IRc)/胰岛素受体底物-1(IRS-1)表达的变化。方法:20只雄性昆明小鼠随机分为高脂饲料模型组和普通饲料对照组,每组各10只。喂养20周后,观察两组小鼠大体情况,称量体重(BW),酶法测空腹血糖(FBG),酶联免疫法测空腹胰岛素(FIns)浓度,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察胰岛组织学变化;免疫组织化学染色分析胰岛IRc/IRS-1的表达。比较两组各检测指标的统计学差异。结果:模型组FBG、HOMA-IR明显高于对照组(P均0.01);胰岛边界欠完整,内部结构紊乱,伴炎性细胞浸润;IRc/IRS-1的表达较对照组明显降低(P均0.05)。结论:高脂饮食可成功诱导小鼠外周胰岛素抵抗,且胰岛上IRc/IRS-1的表达降低。     

骨钙素通过抑制脂肪组织炎症改善肥胖小鼠胰岛素敏感性

目的:为探讨骨钙素改善肥胖相关胰岛素抵抗的机制,我们观察了骨钙素对饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中炎症的影响。方法:C57BL/6小鼠以高脂饮食喂养12周后,对肥胖小鼠每日腹腔注射骨钙素(30 ng/kg或3 ng/kg),对照组以等体积的生理盐水处理。测定各组小鼠体重、体脂、血清甘油三酯和血清游离脂肪酸的变化;进行葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验;免疫组化染色观察巨噬细胞向脂肪组织的浸润程度及巨噬细胞标志物CD68的蛋白表达量;实时荧光定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP4)及CD68的mRNA表达。结果:骨钙素(30 ng/kg或者3 ng/kg)处理4周,能降低HFD小鼠的体重、体脂量、空腹胰岛素水平,改善其糖耐量异常和胰岛素抵抗。此外在骨钙素(30 ng/kg)治疗肥胖小鼠脂肪组织巨噬细胞的浸润减少,脂肪组织中MCP4与CD68 mRNA表达明显降低。结论:骨钙素(30 ng/kg)通过下调CD68和MCP-1表达,抑制肥胖小鼠脂肪组织巨噬细胞聚集及MCP4分泌,降低小鼠体重和体内脂肪含量,改善了肥胖小鼠的胰岛素敏感性。     

观察炎症状态和高脂状态对mTOR/S6K/IRS1-Ser和IRS1-Tyr信号通路表达的影响

目的观察在体内外炎症状态下哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-70S核糖体蛋白S6激酶(S6K)-胰岛素受体底物1(IRS1)信号传导通路异常磷酸化表达对胰岛素抵抗的影响。方法体外实验,将HepG2分为4组:对照组、高脂组[给予100 mg/L低密度脂蛋白(LDL)处理]、炎症介入组[给予20μg/L肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理]、联合干预组(给予20μg/L TNF-α+100 mg/L LDL处理)。采用实时定量PCR和Western blotting方法检测mTOR、S6K和IRS1 mRNA及蛋白表达水平;体内实验,8周龄c57BL/6J小鼠随机分为4组(正常饮食组、正常饮食加炎症组、高脂饮食组和高脂饮食加炎症组),分别给予隔日皮下注射生理盐水和酪蛋白建立炎症模型,8周后将实验小鼠于深度麻醉下处死并检测其肝脏组织中mTOR、S6K和IRS1 mRNA及蛋白表达水平。结果体内外实验均显示与对照组相比,炎症组与高脂组mTOR、S6K和IRS1-Ser mRNA及蛋白表达增加,而联合干预组表达明显增高,IRS1-Tyr mRNA及蛋白表达下降,联合干预组表达明显降低。结论炎症及高脂状态激活mTOR/s6k/IRS1-Ser信号通路,而抑制IRS1-Tyr信号通路,从而加重胰岛素抵抗。     

氧化苦参碱改善高脂诱导ApoE~(-/-)小鼠的胰岛素抵抗

目的:观察氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗小鼠的作用并初步探讨可能机制。方法:Apo E~(-/-)小鼠高脂喂养16周,分为胰岛素抵抗组以及氧化苦参碱25、50、100 mg/kg组,C57BL/6J小鼠设为对照组,每组10只。灌胃给药8周后,进行小鼠葡萄糖耐量实验;测定血清空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)和空腹胰岛素(FINS)的含量;实时荧光定量PCR测定肝组织胰岛素受体(INSR)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)和葡萄糖转运子2(GLUT_2)的mRNA表达;Western blot法测定肝组织GLUT_2、INSR、IRS-2、p-INSR、p-IRS-2、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)和p-AKT的蛋白水平。结果:氧化苦参碱能不同程度降低FBG、TG、TC、FFA和FINS水平,改善胰岛素抵抗;氧化苦参碱组INSR、IRS-2和GLUT_2的mRNA表达比胰岛素抵抗组升高(P0.05),p-INSR/INSR、p-IRS-2/IRS-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和GLUT_2的蛋白水平也升高(P0.05)。结论:氧化苦参碱能通过PI3K/AKT通路,改善高脂诱导小鼠的胰岛素抵抗。     

FAT/CD36在高脂喂养小鼠脂肪组织炎症中的作用

目的:探讨脂肪酸转运酶/白细胞分化抗原36(fatty acid translocase/CD36,FAT/CD36)在高脂饮食诱导的小鼠脂肪组织炎症中的作用。方法:将6周龄雄性C57BL/6J小鼠分别随机分为普通饮食组和高脂饮食组,喂养14周后,ELISA测定血清游离脂肪酸(FFA)含量,应用荧光实时定量PCR和Western blotting检测脂肪组织中FAT/CD36及炎症/趋化因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1)mRNA和蛋白的表达,免疫组织化学染色检测脂肪组织巨噬细胞浸润,比较高脂喂养14周的野生型小鼠和CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症反应情况。结果:与普通饮食组相比,高脂饮食能增强C57BL/6J小鼠脂肪组织的FAT/CD36及炎症/趋化因子的表达,促进巨噬细胞在脂肪组织的浸润。与高脂饮食喂养的野生型小鼠相比,CD36基因敲除小鼠的脂肪组织炎症因子、趋化因子表达明显降低,脂肪组织巨噬细胞浸润减少。结论:高脂饮食通过上调脂肪组织FAT/CD36的表达激活了脂肪组织炎症。     

胰岛素抵抗小鼠脂肪组织肿瘤坏死因子α和脂联素mRNA表达与有氧运动的影响

背景：有研究表明有氧运动可通过调节脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ及其相关脂肪因子进而影响胰岛素敏感性,但其影响结果及作用机制至今少有报道。 目的：观察有氧运动后,胰岛素抵抗C57BL/6小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ、肿瘤坏死因子α和脂联素 mRNA及蛋白表达水平的变化,分析有氧运动对胰岛素抵抗小鼠影响的作用机制。 方法：C57BL /6 小鼠经高脂饮食喂养10周后建立胰岛素抵抗动物模型,建模后将小鼠随机分为安静组与运动组。运动组进行为期6周,75% VO2max强度跑台运动;安静组同等条件下饲养不运动。使用RT-PCR 和Western blot法检测两组脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ,脂联素、肿瘤坏死因子α mRNA和蛋白表达。 结果与结论：6周有氧跑台运动对小鼠脂肪组织过氧化物酶体激活物增殖受体γ表达差异无显著性意义(P > 0.05),但可显著增加小鼠脂肪组织脂联素的表达(P< 0.01),降低肿瘤坏死因子α的表达(P < 0.05);并且可显著降低血液中三酰甘油、游离脂肪酸水平(P < 0.05, P < 0.01)。结果提示有氧运动可能通过调节过氧化物酶体激活物增殖受体γ相关脂肪因子-脂联素和肿瘤坏死因子α的表达来间接调节脂肪组织对胰岛素的敏感性。有氧运动可以显著增加机体组织对胰岛素的敏感性,从而改善C57BL/6 小鼠胰岛素抵抗的症状。     

T淋巴细胞对高脂饮食引起的肠道炎症的影响

目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色直接观察肠道形态,检测肠道肌层厚度,同时通过免疫组织化学技术(IHC)观察肠道组织中免疫细胞的浸润情况。结果:高脂饮食饲喂小鼠16周后,小鼠体重明显增加。qRT-PCR检测显示,与正常饮食的野生型小鼠组相比,高脂饮食的野生型小鼠结肠组织中IL-1β(P0. 01)、IL-5(P0. 05)、TNF-α(P0. 05)、IFN-γ(P0. 05)以及IL-6(P0. 05)表达水平明显上调; HE染色显示高脂饮食组结肠肌层明显变薄,同时免疫组化的结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润增强。以高脂饮食野生型小鼠为对照,高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠的结肠组织中IL-1β(P0. 01)、IL-6(P0. 05)、IFN-γ(P0. 05)、IL-5(P0. 05)以及TNF-α(P0. 01)基因水平下调; HE染色显示高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠结肠肌层增厚,同时免疫组化结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润减少。结论:T淋巴细胞对高脂饮食导致的肠道炎症有促进作用。     

谷氨酰胺对高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖和胰岛素抵抗的影响

目的:探讨谷氨酰胺(L-glutamine,Gln)对高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导小鼠肥胖和胰岛素抵抗的影响。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组、HFD组、HFD+丙氨酸(Lalanine,Ala)组和HFD+Gln组,每组15只。每周记录小鼠体重,给药16周后禁食不禁水12 h测定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),处死后剖腹取附睾脂肪垫并称重。采用酶联免疫法检测小鼠胰岛素(insulin,INS)、瘦素(leptin,LEP)、脂联素(adiponectin,APN)和胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI)和胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI)。结果:与NC组比较,HFD组小鼠体重和附睾脂肪垫重量明显升高,FBG、INS、IRI和LEP水平均明显升高,ISI和APN水平明显降低(P0.05);与HFD组比较,HFD+Gln组小鼠体重明显下降,FBG和LEP水平明显降低,IRI明显减小(P0.05)。4组小鼠血清的GLP-1水平差异无统计学显著性。结论:谷氨酰胺减轻高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重和胰岛素抵抗。     

褪黑素受体激动剂改善高糖高脂喂养大鼠脂联素敏感性

目的 观察褪黑素受体激动剂(NEU-P11)对高糖高脂饲养大鼠脂联素敏感性的影响.方法 将30 只SD大鼠随机分为对照组(CD组),高糖高脂组(HFSD组),褪黑素组(Mel组),褪黑素受体激动剂组(NEU-P11组).CD组饲以正常饲料;其余3组饲以高糖高脂饲料.6个月后,给药治疗2个月.治疗期间,Mel组每天注射Mel(4 mg/kg);NEU-P11组每天注射NEU-P11(10 mg/kg);CD组以及HFSD组注射生理盐水(5 ml/kg).测定糖脂代谢指标并做口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerant test,OGTT),Western印迹检测脂联素(adiponectin,APN)在脂肪组织及脂联素受体(AdipoR)在骨骼肌组织中的表达变化.结果 高糖高脂饮食可诱导SD大鼠产生胰岛素抵抗,脂联素表达增加.Neu-P11治疗后,胰岛素敏感性增强,脂联素表达降低至正常水平.结论 Neu-P11能提高胰岛素敏感性,改善脂联素抵抗.     

高脂诱导肥胖小鼠视网膜变性的形态学改变

目的 探讨高脂饮食建立的C57BL/6小鼠肥胖模型的视网膜变性的超微结构改变.方法 高脂饲料喂养19周后,小鼠分为肥胖抵抗(DIO-R)组和肥胖倾向(DIO)组,同时对照组小鼠给予基础饲料喂养.应用光镜,透射电镜及TUNEL法检测三组小鼠视网膜超微结构的改变及凋亡情况.结果 与对照组及DIO-R组比较,DIO组小鼠视网...     

奥贝胆酸对高脂喂养的C57BL/6J小鼠糖脂稳态的影响

目的 研究奥贝胆酸(OCA)对高脂喂养C57BL/6J小鼠糖脂代谢的影响。方法 给C57BL/6J小鼠喂高脂饮食(HFD)12周后，将其随机分为模型组(model)和OCA干预组(10 mg/kg,连续灌胃6周),每组10只。喂12周正常饲料的C57BL/6J小鼠作为对照组(control),模型组和对照组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)。实验期间开展口服葡萄糖耐量和胰岛素耐量实验。实验结束后，测定血清中肝功能相关指标，记录肝脏质量，测定肝脏中脂质相关指标，并对肝脏进行苏木精-伊红(HE)染色；RT-qPCR检测肝脏中脂质代谢相关基因表达。结果 糖负荷和注射胰岛素后，模型组各个时间点血糖和曲线下面积(AUC)明显高于对照组(P<0.01),OCA干预组能缓解模型组小鼠糖耐量异常(P<0.05),提高胰岛素敏感性(P<0.05);模型组血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白总胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平明显高于对照组(P<0.01),高密度脂蛋白总胆固醇(HD...     

不同强度累积和持续运动对胰岛素抵抗小鼠肠黏膜通透性的影响

背景:胰岛素抵抗与小肠黏膜通透性的关系可能与脂肪过多、炎症和氧化应激等有关。目前不同种类的运动对该关系的影响尚不清楚,还需要进一步进行相关机制研究。目的:以高脂饲料诱导胰岛素抵抗小鼠模型,观察不同形式的长期运动(持续运动和累积运动)对胰岛素抵抗小鼠肠黏膜通透性的影响,并比较不同运动强度的效果差异,以评价累积运动的健康促进效应。方法:采用4周龄雄性C57BL/6J小鼠,以高脂饲料诱导胰岛素抵抗小鼠模型,造模成功的小鼠随机分为5组,分别为高脂胰岛素抵抗组、普食胰岛素抵抗组、中强度持续运动组、中强度累积运动组、高强度累积运动组,其中高脂胰岛素抵抗组饲以高脂饲料,其余各组饲以普通饲料。各运动组接受8周的不同形式的跑台训练:中强度持续运动组小鼠进行50 min,速度为11 m/min的运动;中强度累积运动组小鼠进行每天4次,每次12.5 min(次与次间隔3 h),速度为11 m/min的运动;高强度累积运动组小鼠进行每天4次、每次7.5 min(次与次间隔3 h),速度为19 m/min的运动。末次运动48 h后取材,检测各组小鼠血清中的脂多糖和右旋乳酸含量,采用苏木精-伊红染色观察回肠组织病理变化,通过Western blot法检测肠道紧密连接蛋白的表达,ELISA法测定血液和回肠组织中的炎症因子白细胞介素10、肿瘤坏死因子α及肠道黏膜分泌性免疫球蛋白A的表达。结果与结论:①高脂膳食诱导的胰岛素抵抗小鼠伴有体质量增加、血清内毒素和右旋乳酸水平显著升高、血清和小肠组织促炎因子肿瘤坏死因子α水平显著增加等表现;长期规律性的累积运动和持续运动均可降低胰岛素抵抗小鼠的体质量,并明显改善糖代谢功能,纠正或改善胰岛素抵抗症状;②长期规律性的累积运动和持续运动均可提高肠黏膜组织中紧密连接蛋白的表达量并增加分泌性免疫球蛋白A分泌量,从而改善肠黏膜通透性,增强肠道免疫功能,降低血清中内毒素脂多糖的含量,进而降低循环血和肠组织中的促炎症因子表达,最终发挥对胰岛素抵抗小鼠肠黏膜屏障的保护作用;③等运动量的高强度累积运动与中强度累积运动、中强度持续运动相比,在降低胰岛素抵抗小鼠的体质量、改善胰岛素抵抗症状、保护肠黏膜屏障方面效果更明显。     

高脂饲养C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎性反应的评估

目的评估高脂饲养C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎性反应。方法将小鼠随机分为对照组(control组,n=6)和高脂饲养组(HFD组,n=6)。用RT-qPCR检测肾周脂肪组织中TNF-α、CD11c、IL-1β、IL-10、TGF-β1、CD206等mRNA的表达;免疫组织化学法检测肾周脂肪组织及肾实质F4/80、CD68、LCA的水平。结果与对照组比较,HFD组小鼠肾周脂肪组织TNF-α、IL-1β等mRNA相对含量升高(P0.05);HFD组的肾周脂肪巨噬细胞标志物F4/80,CD68及炎细胞广谱标志物LCA的表达均呈高表达(P0.05)。结论高脂饲养的C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织确实存在明显的炎性反应。     

Nutlin-3a通过抑制CIDEC的表达调控小鼠脂肪功能

目的 探讨小鼠双微体同源基因2(MDM2)抑制剂Nutlin-3a对小鼠脂肪脂代谢功能的影响。方法 建立C57BL/6J小鼠高脂饮食诱导肥胖(DIO)模型,随机分为对照组：腹腔注射DMSO,实验组：腹腔注射顺式咪唑啉类似物3a (Nutlin-3a)。实验期间进行葡萄糖耐量(GTT)以及胰岛素耐量(ITT)实验。实验结束后,分离小鼠附睾脂肪组织(eWAT)、皮下脂肪组织(iWAT)与棕色脂肪组织(BAT),对白色脂肪组织进行苏木精-伊红(HE)染色,观察脂肪细胞形态变化;RT-qPCR和Western blot检测eWAT中脂代谢相关基因表达。结果 与对照组相比,给予小鼠Nutlin-3a处理,增加DIO小鼠的体质量(P<0.001);对葡萄糖耐量和胰岛素敏感性没有影响;脂肪细胞体积减小;下调白色脂肪中脂滴结合蛋白诱导细胞凋亡DFF45样效应因子C(CIDEC)的表达。结论 Nutlin-3a通过下调白色脂肪组织中CIDEC的表达抑制脂滴的形成。     

脂联素抑制脂肪组织MHC Ⅱ表达及对糖脂代谢的影响

目的:探讨脂联素是否通过影响脂肪组织主要组织相容性复合物Ⅱ类(MHCⅡ)的表达调节糖脂代谢。方法:脂联素基因敲除小鼠(KO)和C57BL/6小鼠(WT)分别给予高脂饲料或普通饲料,24周后,测量小鼠体重、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态胰岛素评价指数(HOMA-IR)、血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);行肝脏组织病理形态学评价;检测脂肪组织MHCⅡ反式激活因子(CIITA)、小鼠MHCⅡ抗原Eβ(H2-Eb1)、MHCⅡ恒定链(CD74)mRNA及MHCⅡ相关蛋白质表达水平。用siRNA沉默3T3-L1脂肪细胞中MHCⅡ的表达及用过表达载体升高3T3-L1脂肪细胞中的脂联素和(或)MHCⅡ的表达,检测脂联素对MHCⅡ蛋白水平的影响。结果:高脂饲料或普通饲料喂养的KO小鼠体重、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、肝脂肪变性、脂肪组织中CIITA、H2-Eb1、CD74 mRNA和MHCⅡ蛋白表达水平均高于WT小鼠。在脂肪细胞中,抑制脂联素能够在一定程度上逆转siRNA干扰所引起的MHCⅡ表达降低,过表达脂联素后脂肪细胞中MHCⅡ的表达降低。结论:脂联素可以通过抑制脂肪组织中MHCⅡ的表达改善糖脂代谢。