Cyclopamine对LN229细胞Nurr1基因表达的影响

目的　探讨环巴胺(Cyclopamine)对恶性胶质瘤细胞株LN229帕金森相关基因Nurr1表达的影响。 方法　在脂多糖(LPS)刺激LN229细胞的条件下,运用实时定量PCR检测SHH通路基因PTCH、Gli1及Nurr1基因 mRNA含量,Western Blotting检测LPS对LN229细胞Nurr1蛋白表达的影响。进一步在Cyclopamine阻断Sonic Hedgehog (SHH)信号通路的条件下,实时定量PCR及Western Blotting检测Nurr1的mRNA含量及其蛋白的表达及下游炎症因子IL-1β mRNA的含量。 结果　LPS刺激下LN229细胞SHH通路相关基因mRNA,及Nurr1 mRNA升高,Western Blot结果进一步证明LPS可以促进Nurr1蛋白表达。Cyclopamine阻断组与对照组比较,在转录水平和翻译水平明显促进了Nurr1基因表达升高,及下游炎症因子IL-1βmRNA的含量。 结论　Cyclopamine对LN229细胞Nurr1表达的影响可能与帕金森发病过程中胶质细胞的活化有关。     

异柠檬酸脱氢酶1突变对胶质瘤细胞增殖的影响

目的:观察异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变对人胶质瘤U87细胞增殖和蛋白激酶B(Akt)信号分子表达的影响。方法:分别用野生型(IDH1)和突变型(mut IDH1)重组慢病毒感染U87细胞,CCK8和平板克隆形成实验检验细胞增殖能力; Western Blot检测IDH1突变型基因和磷酸化Akt(p-Akt1/2/3)的蛋白表达量; TCGA数据库分析Akt在高级别胶质瘤(GBM)和低级别胶质瘤(LGG)中的表达情况;免疫组化检测Akt和p-Akt在GBM和LGG中的表达和定位。结果:IDH1和mut IDH1重组慢病毒成功感染U87细胞,CCK8实验表明mut IDH1组细胞活性减弱;平板克隆形成实验显示mut IDH1组细胞集落形成能力低于IDH1组; TCGA数据库分析显示,Akt在GBM和LGG中的表达高于正常脑组织;免疫组化显示Akt和p-Akt1/2/3在GBM和LGG中呈高表达; Western Blot显示mut IDH1组中Akt表达低于IDH1组。结论:IDH1突变能够减弱胶质瘤细胞的增殖,抑制Akt信号分子磷酸化活化。     

异柠檬酸脱氢酶1与突变体重组慢病毒的制备及表达

目的:制备异柠檬酸脱氢酶1野生型(IDH1)和RI32H突变型(muIDH1)基因重组慢病毒,感染人胶质瘤来源的细胞系U87细胞并观察目的基因的表达。方法:利用基因克隆技术构建IDH1和mulIDH1基因重组慢病毒载体pLVX-IDH1-mCMV-ZsGreen-PCK Puro和pLVX-mutIDH1-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro,转染293T细胞,进行慢病毒包装,获得慢病毒颗粒;慢病毒颗粒感染HEK293细胞,采用逐孔稀释滴度测定法测慢病毒滴度;IDH1和mutIDH1基因重组慢病毒感染U87细胞,观察感染效率,WesternBlot检测IDH1和mutIDH1基因在U87细胞的表达。结果:成功制备IDH1和mutIDH1基因重组慢病毒颗粒,病毒滴度均为1.0×10^8TU/ml;感染U87细胞,Westerm Blot结果显示:/DHI组中IDH1蛋白水平高于muIDH1组和空载体对照组;mutIDH1组中mu-tIDH1蛋白条带清晰,表达量高,IDH1组和对照组均不表达mutIDHl蛋白。结论:成功制备IDH1和mutIDH1基因重组慢病毒,感染U87细胞后能使目的基因表达。     

Longdaysin通过抑制CSNK1A1表达对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究Longdaysin对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用及可能机制。方法 将胶质瘤LN229细胞分为对照组（Control组）、 Longdaysin组、 Longdaysin+空载体组（Longdaysin+Vector组）和Longdaysin+CSNK1A1组,CCK-8实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;qRT-PCR检测细胞CSNK1A1 mRNA表达;Western blot检测细胞CSNK1A1蛋白表达。结果 Longdaysin抑制LN229细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CSNK1A1mRNA和蛋白表达,过表达CSNK1A1逆转Longdaysin对LN229细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 Longdaysin抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其抑制CSNK1A1表达有关。     

索拉菲尼对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探究索拉菲尼对人脑神经胶质瘤LN229细胞增殖和凋亡的影响,为临床应用提供一定的理论基础。方法体外培养LN229细胞,用CCK8法检测LN229细胞增殖、TUNEL法检测LN229细胞凋亡,Western blot技术检测Cyclin D1、caspase-3、p-ERK1/2、ERK1/2表达。结果索拉菲尼可以明显降低人脑神经胶质瘤LN229细胞活力,降低Cyclin D1和pro-caspase-3表达水平,提高TUNEL阳性率,抑制ERK1/2磷酸化。结论索拉菲尼抑制LN229细胞增殖可能与调节MAPK信号通路相关。     

芪莲益髓清毒颗粒对低危骨髓增生异常综合征的疗效及其对TET2和IDH1基因的作用

目的:观察芪莲益髓清毒颗粒对低危骨髓增生异常综合征(MDS)患者的疗效,及其对甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)和异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因表达及甲基化的影响。方法:选取2018年01月～2019年10月就诊于山东中医药大学附属医院血液病科的IPSS-R低危MDS患者60例,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组各30例。观察组患者给予芪莲益髓清毒颗粒及最佳的支持治疗,对照组患者仅给予最佳的支持治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效、中医证候积分、骨髓单个核细胞TET2和IDH1基因的表达水平及甲基化情况。采用液相色谱质谱联用技术筛选芪莲益髓清毒颗粒中相关化学组分。结果:治疗后观察组治疗的总有效率显著高于对照组。观察组中医证候积分的改善优于对照组(P0.05)。观察组和对照组治疗前TET2和IDH1 mRNA的表达水平较正常对照组降低(P0.05);观察组治疗后的TET2和IDH1 mRNA表达水平均显著高于治疗前(P0.05)。对照组治疗后的TET2 mRNA显著高于治疗前(P0.05),而IDH1 mRNA表达水平则与治疗前无显著差异。治疗后,观察组TET2基因甲基化阳性率由30%下降为6.7%,IDH1基因甲基化阳性率由16.7%下降为6.7%。芪莲益髓清毒颗粒中鉴定出了与甲基化相关的21种化合物成分。结论:芪莲益髓清毒颗粒可提高支持治疗对MDS的效果,其机制可能与调控TET2和IDH1基因有关,其中包括去甲基化作用。芪莲益髓清毒颗粒治疗MDS是有效的。     

胆管癌中异柠檬酸脱氢酶基因突变潜在靶基因的鉴定

目的鉴定胆管癌中异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因突变的潜在靶基因。方法下载TCGA胆管癌项目的DNA甲基化、转录组数据。将IDH突变型肿瘤与IDH野生型肿瘤进行比较,分别通过limma和DESeq2进行差异甲基化位点和差异表达分析。对差异表达基因的表达量进行标准化处理并与相应差异甲基化位点的甲基化水平进行Spearman相关性分析。筛选出高甲基化、低表达且两者呈负相关的基因进行富集分析以探究其功能。构建蛋白质互作网络并通过MCODE筛选出核心模块。结果分析得到11605个差异甲基化位点,其中10427个位点高甲基化;而735个差异表达基因中有651个基因下调,其中的143个基因与328个高甲基化位点形成330对强负相关组合。上述143个基因富集于表皮生长因子受体信号通路、细胞外渗及细胞分裂的调控,通过构建蛋白质相互作用(PPI)网络筛选出核心模块的10个基因,分别参与了上皮细胞的分化发育、细胞蛋白质定位等生物学过程。结论本研究通过整合TCGA胆管癌DNA甲基化和转录组数据,得到了IDH突变所影响的潜在靶基因并确定其PPI网络核心模块,为阐明IDH突变在胆管癌发生发展中的作用提供了新的线索。     

Raf-1基因可能与口腔上皮癌细胞多药耐药性发生机制有关

目的 通过检测Raf-1基因在口腔上皮癌多药耐药细胞株(KBV)及敏感细胞株(KB)中表达的差异,探讨Raf-1基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用. 方法 体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株,通过RT-PCR技术及免疫荧光技术、免疫印迹技术检测Raf-1基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异,通过MTT法及流式细胞检测技术(FCM)检测KB及KBV细胞对长春新碱(VCR)敏感度的差异.结果 KB组细胞株在Raf-1基因转录和翻译水平均非常显著地低于KBV组(P<0.01);MTT法检测结果显示,KBV组细胞对长春新碱的耐药性是KB组的16.5倍;流式细胞术检测结果显示,KB组细胞凋亡率显著高于KBV组(P<0.01).结论Raf-1基因可能参与口腔上皮癌耐药性的发生过程,成为引起肿瘤细胞耐药的重要原因之一.     

SENP1在人神经胶质瘤细胞中的重要作用

目的 探讨小泛素相关修饰物（SUMO）特异性蛋白酶-1（SENP1）对神经胶质瘤细胞的生长和侵袭能力的影响.方法 采用腺病毒感染方法敲除胶质瘤细胞LN229的SENP1基因,然后用双染法检测基因敲除后对细胞增殖和细胞凋亡的影响,并用Tanswell小室法检测基因敲除后胶质瘤细胞迁移能力的改变.结果 敲除SENP1后的LN229细胞增殖与对照组相比明显被抑制,双染实验发现SENP1敲除可以促进肿瘤细胞凋亡.且进一步功能实验表明SENP1敲除后的肿瘤细胞的迁移能力明显下降.结论 SENP1可以促进细胞增殖,降低细胞凋亡率,并影响肿瘤细胞侵袭基因的表达,在神经胶质瘤发病和进展过程中发挥着十分重要的作用.     

突变型异柠檬酸盐脱氢酶1(IDH1)水平与人脑胶质瘤细胞增殖和血管增生正相关

目的研究人胶质瘤中异柠檬酸盐脱氢酶1突变体(IDH1R132H)表达水平与肿瘤细胞增殖活性和血管形成之间的关系。方法采用测序法和免疫组织化学染色法检测IDH1突变情况和IDH1(R132H)表达水平,采用免疫组织化学染色法分析胶质瘤Ki-67标记指数,采用CD34免疫组织化学染色分析人胶质瘤组织中的血管数量,通过统计学方法,分析胶质瘤中IDH1(R132H)表达水平与肿瘤Ki-67标记指数和血管数量的相关性。结果 IDH1在Ⅱ级、Ⅲ级胶质瘤及继发性胶质母细胞瘤中突变率较高,且IDH1(R132H)表达水平与胶质瘤Ki-67和微血管密度存在明显的正相关。结论 IDH1在Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤和继发胶质母细胞瘤中表达水平高,且突变型IDH1(R132H)的表达水平可能在胶质瘤的增殖和血管形成中发挥重要作用。     

下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响

目的探讨下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响及其机制。方法培养子宫内膜癌细胞株,构建Snail-shRNA表达载体,建立下调Snail基因表达的子宫内膜癌细胞株;用CCK-8法检测子宫内膜癌细胞株(Ishikawa)的增殖能力。用Transwell小室结合基质胶(Matrigel)法比较子宫内膜癌细胞株与相应的瞬时转染细胞株在细胞迁移能力及侵袭能力的差异。结果通过下调Snail基因在细胞内的表达,体外观察子宫内膜癌细胞增殖能力空白对照组高于细胞转染组;迁移与侵袭能力空白对照组高于细胞转染组。结论 Snail基因在子宫内膜癌中表达下调;与抑制子宫内膜癌的增殖和侵袭转移相关,其可能机制与逆转肿瘤的上皮细胞-间质转化过程和共同抑制下游转移靶基因相关。     

miR-7977、NR4A1在狼疮性肾炎患者中的表达及相关性

目的探究微小RNA-7977(miRNA-7977)、细胞核受体(NR4A1)在狼疮性肾炎(LN)患者中的表达,以及miR-7977、NR4A1与LN发生及病情的相关性。方法选择2017年8月至2019年8月我院收治的98例狼疮性肾炎患者为LN组,50例系统性红斑狼疮(SLE)患者为SLE组,50例体检健康人群为对照组,比较三组外周血中miR-7977、NR4A1表达水平,比较不同病情严重程度LN患者外周血中miR-7977、NR4A1表达水平,采用Spearman相关分析miR-7977、NR4A1与LN发生及病情严重程度的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-7977、NR4A1对LN的预测价值。结果SLE组外周血中miR-7977、NR4A1表达水平显著低于对照组(P<0.05);LN组外周血中miR-7977、NR4A1表达水平显著低于SLE组(P<0.05);活动期LN患者外周血中miR-7977、NR4A1表达量显著低于稳定期LN患者(P<0.05);miR-7977、NR4A1与LN发生及病情严重程度呈负相关(P<0.05);NR4A1对LN的预测价值明显优于miR-7977(P<0.05);miR-7977、NR4A1联合检测对LN预测价值明显优于各指标单项检测(P<0.05)。结论miR-7977、NR4A1在狼疮性肾炎患者外周血中呈低表达,与狼疮性肾炎发生及病情相关,有望成为预测狼疮性肾炎发病及进展的分子标志物。     

Tiam1对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Tiam1(Tlymphomainvasionandmetastasis)对结直肠癌细胞株生物学特性的影响。方法用逆转录聚合酶链反应方法检测Tiam1基因在结直肠癌细胞株中的表达,筛选Tiam1不表达的细胞株;将Tiam1/C1199HAcDNA导入内源性不表达Tiam1基因的人结直肠癌HT29细胞株中,G418筛选抗性克隆,免疫组织化学和Western蛋白印迹法鉴定转染后Tiam1基因在细胞中的表达,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Tiam1对细胞增殖的影响,体外侵袭实验检测Tiam1对结直肠癌侵袭转移的影响。结果Tiam1基因在高转移的LoVo和SW620中高表达,在低转移的HT29中不表达,在SW480和HCT116细胞表达相应较低。通过7d的连续比较,HT29/mock和HT29/Tiam1两组的细胞增殖能力差异有统计学意义(F=10.512,P=0.003)。Tiam1基因的导入使结直肠癌细胞的增殖能力明显增强,体外侵袭转移能力显著增加,HT29/Tiam1穿过细胞为(88.6±9.2)个/200倍视野,HT29/mock为(46.8±3.4)个/200倍视野,二者的差异具有统计学意义(t=9.54,P<0.01)。结论Tiam1基因具有促进结直肠癌细胞增殖的能力,Tiam1与结直肠癌的侵袭转移密切相关,Tiam1表达可作为结直肠癌侵袭转移过程中一个有价值的指标。     

胶质瘤中IDH1突变和血栓形成的关系

<正>IDH1基因突变在胶质瘤中很常见,同时产生D-2-羟戊二酸(D-2-HG)。IDH1突变对胶质瘤的生物学行为和肿瘤微环境的具体影响尚不清楚。作者收集的169例WHOⅡ~Ⅳ级的胶质瘤和148例已验证病例,分析IDH1突变、肿瘤内微血栓和静脉血栓栓塞(VTE)。作者还分析了癌症基因组图谱计划中的430例胶质瘤中凝血相关基因的m RNA,评估了95例组织芯片中的组织因子蛋白表达。在IDH1突变或     

IDH1R132H在中枢神经系统胶质瘤中的表达及其鉴别诊断意义

目的 探讨异柠檬酸盐脱氢酶1基因(isocitrate dehydrogenase 1 gene,IDH1)突变的表达产物IDH1R132H在人中枢神经系统胶质瘤中的表达及其在鉴别诊断中的意义.方法 应用免疫组织化学EnVision法检测不同级别胶质瘤75例(包括WHOⅡ级33例,Ⅲ级20例和Ⅳ级22例)与各种原因造成的胶质增生性脑组织中IDH1R132H的表达情况,并与p53的表达情况进行比较分析.结果 IDH1R132H在WHOⅡ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤的表达阳性率分别为57.6%(19/33)、40.0%(8/20)和27.3%(6/22),差异有统计学意义(P=0.024).IDH1R132H的具体表达部位在胶质瘤细胞的胞质、突起以及部分细胞核.除肿瘤主体部分密集增生的肿瘤细胞呈阳性表达以外,包括皮质和白质在内的肿瘤周边区域单个或散在的肿瘤细胞也呈强阳性表达.IDH1R132H阳性病例有额叶受累为主的倾向.胶质增生组织、毛细胞型星形细胞瘤均为阴性表达.另外,p53在WHOⅡ级、Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤的表达阳性率分别为42.4%(14/33)、65.0%(13/20)和77.3%(17/22).IDH1R132H的表达与p53的表达之间没有明确的相关性(P=0.766).结论 IDH1R132H在各级别胶质瘤中均有表达,且随着肿瘤级别的增高呈表达下降趋势.IDH1R132H可以作为鉴别低级别胶质瘤和胶质增生性病变的一个有用的分子标志物.

Abstract：

Objective To investigate the immunohistochemical expression of isocitrate dehydrogenase 1 gene ( IDH1 ) R132H in glioma and its diagnostic utility. Methods Immunohistochemical study of IDH1R132H expression was performed on formalin-fixed paraffin-embedded tissue samples of 75 gliomas, including 33 cases of grade Ⅱ , 20 cases of grade Ⅲ and 22 cases of grade Ⅳ tumors. Six cases of pilocytic astrocytoma and 12 cases of gliosis were used as controls. Results Nineteen in 33 cases of grade Ⅱ (57.6%), 8 in 20 cases of grade Ⅲ (40. 0% ), 6 in 22 cases of grade Ⅳ (27. 3% ) showed positive cytoplasmic staining of IDH1R132H. Scattered invasive glioma cells at the tumor periphery also expressed IDH1R132H. Gliomas involving the frontal lobe showed more strong IDH1R132H staining. In contrast, none of the pilocytic astrocytomas and gliosis showed IDH1R132H staining. Moreover, the rate of p53 immunopositivities were 42. 4% ( 14/33 ) in grade Ⅱ , 65.0% (13/20) in grade Ⅲ and 77.3% (17/22) in grade Ⅳ gliomas. There were no statistic correlations between expression of IDH1R132H and p53.Conclusion IDH1R132H tends to express preferentially in low-grade gliomas, and it thus may serve as a valuable marker in distinguishing low grade gliomas from gliosis.     

Survivin特异性siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 观察survivin特异性siRNA对胰腺癌细胞株Panc-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外构建Survivin特异性siRNA表达载体p-Survivin-siRNA,转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞系,RT-PCR和Western印迹法检验其对胰腺癌细胞株Panc-1细胞的RNA干扰(RNAi)效果.采用MTT法分析其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.同时,采用Western印迹法检测半胱氨蛋白酶 3(caspase 3)的表达变化.结果 p-survivin-siRNA表达质粒高效而特异地剔降胰腺癌细胞株Panc-1细胞中survivin的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断胰腺癌细胞株Panc-1细胞在G1期.随着survivin基因被沉默,caspase 3表达升高(P<0.01).结论 靶向survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制胰腺癌细胞株Panc-1细胞增殖,促进细胞凋亡.     

异柠檬酸脱氢酶1对肝内胆管细胞癌中炎性反应的影响

目的研究肝内胆管细胞癌(ICC)中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1) 132位点核苷酸突变与炎性反应的关系,探讨IDH1突变对ICC发生的影响。方法收集ICCs标本131例。采用Sanger法分析IDH1突变位点; HE观察ICC炎性反应发生情况。用Cre-LoxP系统,构建IDH1 R132H肠道组织特异性基因突变小鼠;分离小鼠肝脏内胆管,HE观察小鼠肝内胆管及胆道炎性反应情况。用突变型IDH1代谢产物2-羟基戊二酸(2-HG)对巨噬细胞系THP-1进行干预;收集培养液上清,ELISA检测上清中M1型巨噬细胞标志物肿瘤坏死因子(TNF-α)和M2型标志物白介素-10(IL-10)的浓度。结果 131例ICC标本中IDH1(R132H)突变率为15. 3%(20/131)。与IDH1野生型组相比,IDH1(R132H)突变组标本中炎细胞浸润明显增多(P0. 01);在肠道组织特异性突变小鼠模型中也得到一致结果(P0. 05)。2-HG能够诱导M2型巨噬细胞标志物IL-10表达增多(P0. 01),而M1型标志物TNF-α变化没有统计学意义。结论 IDH1突变能够诱发胆管发生炎性反应,并促进THP-1巨噬细胞系向M2型极化,为进一步明确IDH1突变与肝内胆管细胞癌发生的关系以及靶向治疗提供依据。     

EGFR敏感突变肺腺癌患者纵膈淋巴结转移相关基因的检测与分析

目的本研究采用转录组测序和生物信息学分析等方法,以期筛选出肺腺癌淋巴结转移相关基因。方法分别检测伴和不伴纵膈淋巴结转移的EGFR敏感突变肺腺癌临床标本转录组表达谱,筛选出差异表达基因(DEGs);对这些DEGs进行相关生物信息分析,探索这些基因在淋巴结转移进程中可能发挥的作用。q-PCR法验证高表达基因在PC9细胞株(EGFR敏感突变细胞株)中的表达情况。结果共检测了10例肺腺癌标本的转录组表达谱,通过差异基因表达分析筛选出169个DEGs,其中,68个在肺腺癌样本中表达上调、101个基因表达下调。q-PCR结果显示:高表达基因在PC-9细胞中,ZNF572、BRPF3、MMACHC等7个基因的表达量为中丰度,SMOC1、A1BG、BARX1等9个基因为低丰度,其余均为高丰度。结论 TFF3及DUSP6等多个差异表达基因可能涉及肺腺癌纵膈淋巴结转移进程。     

乳腺癌层粘连蛋白受体表达与微血管密度和转移及复发的关系

目的 :探讨乳腺癌层粘连蛋白受体 (LN R)与间质微血管密度和肿瘤转移、复发的关系及意义。方法 :应用免疫组化LSAB法检测 73例乳腺癌LN R、FⅧAg的表达 ,并对 2 8例病人进行随访分析。结果 :LN R的表达程度与乳腺癌淋巴结转移存在正相关 (P <0 0 0 0 1) ,与病理分级无关 (P >0 0 5 ) ,与乳腺癌间质微血管密度 (MVD)存在正相关 (P <0 0 0 0 1)。淋巴结转移阳性组其MVD值明显高于阴性组 (P <0 0 0 1)。随访 2 8例病人中 ,复发组的LN R表达增强比率及MVD值明显高于未复发组 (P <0 0 5 )。结论 :LN R的表达程度及MVD值均可作为判断乳腺癌病人转移及复发的独立指标