Tranilast对人眼小梁细胞胶原合成的抑制

目的 观察tranilast对体外培养人眼小梁细胞胶原合成的影响。方法 体外培养第3～5代牛眼小梁细胞经0μg/ml(对照组)、12.5、25和50μg/ml tranilast处理后,采用~3H-脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术观察tranilast对体外培养人眼小梁细胞胶原合成的影响。结果 12.5、25和50μg/ml tranilast处理组~3H-脯氨酸掺入率分别为(187±21)％,(127±18)％,(66±12)％,与对照组的(317±48)％比较有极显著差异;同时,~3H-脯氨酸掺入率随tranilast质量浓度增加而减少,呈剂量依赖性。结论 tranilast明显抑制小梁细胞胶原的合成。利用tranilast防治原发性开角型青光眼的可能性值得进一步研究。     

NF-κB对人眼小梁细胞MMP-3及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的研究NF-κB对人眼小梁细胞基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）及组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteihase-1，TIMP-1）mRNA表达的影响。方法采用原代培养的人眼小梁细胞，通过脂质体转染的方法，将P65表达质粒转染小梁细胞，24h后通过RT-PCR方法检测MMP-3及TIMP—1 mRNA的表达。结果P65转染后MMP-3 mRNA的表达明显增高，与正常对照组相比差异有显著性（P〈0．05），TIMP—1 mRNA的表达与正常对照组相比无明显改变（P〉0．05）。结论NF—κB的活化可激活MMP-3的表达，提示NF-κB信号通路参与了小梁网外引流通道的调控。     

NF-κB活性对TNF-α调节小梁细胞表达MMP-3和MMP-9的影响

目的探讨核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）是否参与肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）调节人眼小梁细胞（human trabecular cells，HTCs）表达基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3，MMP-3）和基质 金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases-9，MMP-9）的过程。方法采用RT-PCR法和酶谱分析法（zymography）检测体外培养的人眼小梁细胞经0ng／ml（对照组）、lng／ml、10ng／ml、25ng/ml TNF-α处理24h后，细胞表达MMP-3、MMP-9的量；运用NF-κB的特异抑制剂二硫氨基甲酸吡啶（pyrrolidine dithocarba-mate，PDTC）抑制NF-κB的活化，观察TNF-α对体外培养的HTCsMMP-3，MMP-9表达影响的改变。结果运用RT-PCR法和酶谱分析法研究均发现经浓度为1ng／ml、10ng／ml、25ng／ml的TNF-α处理的细胞在mRNA和上清液中活性蛋白水平均能增加MMP-3、MMP-9的表达，各组mRNA／β-actin吸光度比值和条带酶解量与对照组相比差异均有显著性（P〈0．05）。提前30min加入PDTC，MMP-3、MMP-9的表达量分别较未加入PDTC组表达量明显减少．差异有显著性（P〈0．05）。结论TNF-α可上调MMP-3及MMP-9的表达。PDTC能够下调TNF-α对小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达，因此推测NF-κB可能参与MMP-3和MMP-9转录的启动．     

人眼小梁细胞体外培养及传代实验

目的探索体外培养人眼小梁细胞的方法,为进一步研究原发性开角型青光眼的发病机理提供实验的依据。方法用器官培养及组织块培养两种方法,进行人眼小梁细胞的原代培养和传代实验,并同时对照培养人眼巩膜成纤维细胞,对二者从形态学上进行比较。结果（１）器官培养较单纯组织块培养更易获得原代小梁细胞;（２）传３～５代人眼小梁细胞处于最稳定阶段,可利用此阶段细胞进行多种体外实验。结论体外培养人眼小梁细胞可获得生长形态及特征稳定的小梁细胞。     

人眼小梁细胞体外培养与细胞鉴定

建立人眼小梁细胞体外培养方法和确定该细胞的鉴定要点。方法：小梁网和我巩膜组织来源于除眼部疾患以外各种原因死亡的６岁以下儿童，在２４小时内取材的３４人６８只正常眼球。组织块原代培养和细胞传代培养。用光镜和电镜观察培养细胞，用免疫组织细胞化学Ｓ－Ｐ法染色培养细胞的细胞外基质包括纤粘连蛋白，层粘连蛋白和Ⅳ型胶原。     

核转录因子NF-κB与青光眼关系的研究进展

核转录因子NF-κB是一种多功能转录因子家族,它广泛存在于人体组织和细胞中,参与到机体炎症反应、免疫反应、氧化反应、细胞凋亡等细胞的生理、病理过程中。本文从小梁网、视网膜神经节细胞和视乳头损害3方面着手,对近年来核转录因子NF-κB与青光眼关系的研究进展作一综述。     

米非司酮对培养的人眼小梁细胞外纤维连接蛋白表达的影响

目的　探讨糖皮质激素受体拮抗剂米非司酮对培养的人眼小梁细胞外纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)表达的影响。方法　按组织块培养法进行人眼 (8只眼 )小梁细胞体外培养 ,在传 3代的小梁细胞培养液中分别先后加入不同浓度的地塞米松和米非司酮 ,应用免疫组织化学联合计算机图像分析的方法 ,检测细胞外染色区域的吸光度 (A值 )。结果　根据培养细胞的生长特性和形态特征及细胞外基质染色特点等 ,确定培养的细胞为人眼小梁细胞。含有不同浓度地塞米松和米非司酮的小梁细胞培养组与对照组比较 ,FN变化所对应的A值排列顺序为 :1 0 - 6 mol/L地塞米松 (1 2d) >1 0 - 7mol/L地塞米松 (1 2d) >1 0 - 7mol/L地塞米松 (5d) >对照组≈ 1 0 - 7mol/L地塞米松 (5d) +1 0 - 8mol/L米非司酮 (7d)。结论　地塞米松能促进体外培养的人眼小梁细胞分泌与合成FN(A值升高 ) ,米非司酮可在受体水平拮抗并逐步逆转地塞米松引起的小梁细胞外FN的过度表达 (A值下降 )。糖皮质激素受体 (glucocorticoidrecepter,GR)拮抗剂米非司酮的降眼压作用尚有待在体内环境得到证实     

尿激酶对组织培养人眼小梁细胞的影响

为检验尿激酶在临床应用时对小梁细胞有无不良影响。本研究应用组织培养人眼小梁细胞，观察不同浓度尿激酶对细胞形态的影响，并测定其对细胞DNA合成时氚（标胸腺嘧啶核着（3H-TdR）掺入的量，来判断药物对细胞增殖功能的影响。结果示5000u／ml浓度作用6小时细胞即出现胞突回缩、胞体皱缩等变化，至48小时细胞死亡；5000和500u／ml浓度均显著抑制DNA合成。提示在应用尿激酶冲洗前房积血时，一定要冲洗干净残留药物，以免对小梁细胞造成损害。     

肿瘤坏死因子-α对人眼小梁细胞增殖及NO合成的影响

目的研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对体外培养的人眼小梁细胞增殖及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养人眼小梁细胞,采用细胞计数法及MTT法比较不同浓度TNFα对细胞增殖能力的影响。采用硝酸还原酶法检测不同浓度TNFα对细胞合成NO的影响。结果TNFα浓度在10×103IU·L-1以上可以抑制人眼小梁细胞增殖,呈浓度依赖性,并可以增加人眼小梁细胞NO合成,在浓度100×103IU·L-1达到最大促进程度。结论TNFα可以抑制人眼小梁细胞增殖,增加NO合成,可能在青光眼发病过程中发挥重要作用。     

Tranilast抑制TGF-β2对人眼小梁细胞胶原合成的促进作用

目的 :观察tranilast对转化生长因子 -β2 (Transforminggwowthfactor -β2 ,TGF -β2 )促进体外培养人眼小梁细胞胶原合成作用的影响。方法 :采用3 H -脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术观察 0 μg·ml-1(对照组 )、 12 5 μg·ml-1、 2 5 μg·ml-1和 5 0 μg·ml-1tranilast对3 2ng·ml-1TGF -β2 促进体外培养人眼小梁细胞胶原合成作用的影响。结果 :12 5 μg·ml-1(q′ =4 2 6,P <0 0 5 )tranilast处理组3 H -脯氨酸掺入量为 62 0 3 3± 80 46,与对照组的 817 3 7± 12 4 2 1比较有显著差异 ;2 5 μg·ml-1(q′ =4 81,P <0 0 1)和 5 0 μg·ml-1(q′ =8 62 ,P <0 0 1)tranilast处理组3 H -脯氨酸掺入量为5 94 5 8± 88 13、 418 64± 67 90 ,与对照组比较有极显著差异 ;同时 ,3 H -脯氨酸掺入量随tranilast浓度增加而减少 ,呈现明显的量效关系。结论 :Tranilast明显抑制TGF -β2 对体外培养人眼小梁细胞胶原合成的促进作用。利用tranilast防治原发开角型青光眼的可能性值得作进一步研究。     

肿瘤坏死因子-а对人眼小梁细胞增殖及NO合成的影响

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养人眼小梁细胞增殖及一氧化氮(NO)合成的影响.方法体外培养人眼小梁细胞,采用细胞计数法及MTT法比较不同浓度TNF-α对细胞增殖能力的影响.采用硝酸还原酶法检测不同浓度TNF-α对细胞合成NO的影响. 结果 TNF-α浓度在10×103 IU·L-1以上可以抑制人眼小梁细胞增殖,呈浓度依赖性,并可以增加人眼小梁细胞NO合成,在浓度100×103 IU·L- 1达到最大促进程度. 结论 TNF-α可以抑制人眼小梁细胞增殖,增加NO生成,可能在青光眼发病过程中发挥重要作用.     

CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响

目的观察CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞增生与凋亡的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼发病过程中可能的作用。方法采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞。MTT法观察CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞增生的影响。流式细胞仪检测CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达对人眼小梁细胞凋亡的影响。结果3种浓度的CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞的增生起抑制作用且呈浓度依赖性,浓度越高抑制作用越强,但对小梁细胞的凋亡起促进作用,浓度越高促凋亡作用越明显。结论CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞增生作用受到抑制,小梁细胞的凋亡增加。黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞的增生与凋亡过程参与了原发性开角型青光眼发病过程。     

体外培养人眼小梁细胞吞噬乳胶微粒的研究

原发性开角型青光眼及某些继发性开角型青光眼的病理改变与覆盖在小梁柱表面的小梁细胞功能改变有关［１］;小梁细胞具有增殖、移行、吞噬及合成分泌细胞外基质、激素或酶的功能。其中小梁细胞的吞噬功能在清除异物、保持房水滤道通畅方面具有重要作用［２,３］。我们采用体外培养的人眼小梁细胞,观察其吞噬乳胶微粒的过程。一、资料和方法１小梁细胞原代和传代培养：取各种原因死亡８ｈ的新生儿眼球,按王林等［４］报道的方法进行组织块培养。无菌显微镜下操作,取出小梁组织,剪成１ｍｍ×２ｍｍ组织块,置入培养瓶内,待贴壁后加入…     

地塞米松对小梁细胞生长周期的影响

目的：探讨地塞米松对小梁细胞生长周期的影响。方法：按常规方法培养人眼小梁细胞,然后分为二组：常规DMEM培养液及含10^-7M地塞米松的DMEM培养液组,培养3d、5d、7d后,应用流式细胞仪检测细胞周期各阶段G1、S、G2期情况。结果：在正常未用地塞米松处理组,G2期细胞为2．0％;地塞米松处理3、5、7d后,G2期细胞比例各为8．0％、16．3％、19．87％,其差异有显著性意义。结论：地塞米松可使小梁细胞生长周期中G2期的比例增加,提示这种作用可能与激素性青光眼的发病 有关。     

氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞增生及凋亡的影响

背景 氯离子通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对家兔心肌细胞缺血-再灌注损伤时的细胞凋亡有促进作用,而小梁细胞上也存在ClC型氯离子通道及容积敏感性氯离子通道,但NPPB究竟会对小梁细胞的形态和功能产生什么影响尚不清楚. 目的 探讨氯离子通道阻滞剂NPPB对人眼小梁细胞增生及细胞周期、细胞凋亡的影响.方法 将处于对数生长期的永生株人眼小梁细胞进行培养并以1×106个/ml的密度接种于96孔培养板,将不同浓度(10、50、100 μmol/L)的NPPB分别加入小梁细胞培养基中,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组小梁细胞的增生情况以吸光度(A)值表示;采用流式细胞术测定小梁细胞的细胞周期.将100 mg/L 5-氟尿嘧啶(5-FU)加入培养的细胞中,而另一组培养的细胞中加入100 mg/L 5-FU+100μmol/L NPPB,用Annexin V-PI法检测各组小梁细胞的凋亡情况;罗丹明123法检测细胞线粒体膜电位(△ψm),分别评估各浓度NPPB对培养的人小梁细胞生长和存活的影响.结果 3种不同浓度的NPPB与小梁细胞共同孵育48 h后4个组小梁细胞的增生率差异有统计学意义(F=7.230,P=0.006),50 μmol/L、100μmoL/L NPPB作用后小梁细胞的A值明显低于10 μmol/L NPPB组,50 μmol/L NPPB组、100μmol/LNPPB组与空白对照组比较差异均有统计学意义(t=1.610,P=0.025;t=12.270,P=0.001).小梁细胞培养基中加入NPPB 48 h后,G0/G1期的细胞比例增多,S期细胞比例减少,各细胞周期小梁细胞的比例与未加NPPB的组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).用5-FU作用24 h及48 h后,100 mg/L 5-FU组和100 mg/L5-FU+100μmol/L NPPB组的细胞凋亡率均较其各自空白对照组增加(t24h=2.130,P=0.023;t48h=4.810,P=0.011);100 mg/L 5-FU+100 μmol/L NPPB组细胞凋亡率明显高于100 mg/L 5-FU组,差异均有统计学意义(t24h=1.980,P=0.037;t48h=1.290,P=0.028),小梁细胞线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(t24h=1.580,P=0.029;F48h=6.200,P=0.015).结论 氯离子通道阻滞剂NPPB可抑制小梁细胞增生,抑制小梁细胞通过G1/S期限制点进入S期;NPPB对5-FU诱导的小梁细胞凋亡有促进作用,与内源性线粒体凋亡通路相关.     

反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的：观察反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响,探讨黏附分子CD44在原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma, POAG)发病过程中可能的作用。 方法：采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸,通过脂质体介导转染体外培养的人眼小梁细胞,免疫组织化学染色观察CD44反义寡核苷酸对小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白的影响,放射免疫法观察CD44反义寡核苷酸对小梁细胞合成透明质酸的影响。 结果：CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白起促进作用,且呈浓度依赖性,浓度越高促分泌作用越强,但对小梁细胞合成透明质酸起抑制作用,浓度越高抑制作用越明显。 结论：CD44反义寡核苷酸封闭CD44基因表达后人眼小梁细胞合成胶原蛋白Ⅰ型、层黏附蛋白增加而合成透明质酸减少。黏附分子CD44可能通过影响小梁细胞合成细胞外基质功能参与了POAG发病过程。     

氯离子通道2对压力应激状态下人眼小梁细胞功能的影响

目的 探讨分布于小梁细胞上的氯离子通道2(ClC-2)与小梁细胞数量及功能之间的关系,以进一步了解原发性开角型青光眼的形成机制.方法 首先分别利用反转录聚合酶链反应、台盼蓝染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测不同压力,以及不同压力作用时间下小梁细胞C1C-2 mRNA表达、小梁细胞活力及凋亡情况的变化;再利用RNAi技术抑制CIC-2 mRNA的表达,观察一定压力及作用时间下小梁细胞活力、凋亡情况的变化.结果 与0 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)、20 mm Hg相比,30 mm Hg及40mm Hg时,随压力作用时间的增加,CIC-2 mRNA的表达明显增高,差异有统计学意义;表达最高点为24 h;60mm Hg时,各时间点下C1C-2 mRNA的表达较30 mm Hg、40 mm Hg时明显降低,差异有统计学意义,且随时间延长,C1C-2 mRNA的表达逐渐下降.当40 mm Hg及60 mm Hg的压力持续作用一段时间后,小梁细胞活力明显降低,凋亡指数明显增加,差异有统计学意义.抑制C1C-2 mRNA表达后,压力应激状态下小梁细胞活力下降及凋亡增加更显著,差异有统计学意义.结论 压力应激条件下,C1C-2表达的变化与小梁细胞的活力及凋亡有一定的相关性,提示C1C-2对小梁细胞存在保护作用.(中国眼耳鼻喉科杂志,2012,12:26-29)     

人眼小梁细胞在滤膜上的生长及其水流传导功能研究

目的探讨人眼小梁细胞（ｈｕｍａｎｔｒａｂｅｃｕｌａｒｃｅｌ,ＨＴＣ）在滤膜支持物上生长的可能性,为研究小梁细胞在体内的滤过功能提供可靠的实验模型。方法将传３代ＨＴＣ接种于尼龙滤膜上,在滤过模型中测定不同灌注液流经滤膜的速率Ｌｐ值［μｌ／（ｍｉｎ·ｍｍＨｇ·ｃｍ２）］。结果ＨＴＣ可连续生长于滤膜上,正常ＨＴＣ的Ｌｐ值为１０．４５μｌ／（ｍｉｎ·ｍｍＨｇ·ｃｍ２）,用含肾上腺素及地塞米松的灌注液分别进行灌注时,相同生长时间的ＨＴＣ的Ｌｐ值明显高于正常组,但经过地塞米松作用一段时间后的ＨＴＣ滤过功能明显下降。结论（１）ＨＴＣ的滤过模型可为研究体内ＨＴＣ的水流传导功能和药物作用提供良好的信息;（２）肾上腺素可明显改善ＨＴＣ的滤过功能,地塞米松在作用的早期可促进ＨＴＣ对灌注液的渗透,但随着作用时间的延长将逐渐抑制ＨＴＣ的滤过功能。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的 探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法 采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。结果 0.001、0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白的合成(P<0.05),而促进透明质酸的合成(P<0.05)。0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅳ型胶原(P<0.05),而0.001mg/ml维拉帕米无此作用(P>0.05)。结论 维拉帕米可通过抑制细胞外基质在小梁网异常沉积,减少房水外流阻力,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼。