原位杂交检测骨肉瘤中MDM2和P~(53)基因表达及其临床意义

目的 :从基因水平研究 MDM2和 P5 3 基因在骨肉瘤中的表达 ,观察其在骨肉瘤发病中的作用及与临床病理和预后间的关系。方法 :用地高辛标记原位杂交技术研究 40例骨肉瘤 MDM2和 P5 3表达 ,并分析两种基因表达间的相互关系。结果 :MDM2及 P5 3表达阳性率分别为 77.5 % (31/ 40 )、6 7.5 % (2 7/ 40 )。 MDM2与 P5 3基因表达呈显著正相关(P<0 .0 5 )。表达阳性率及表达强度与肿瘤分化程度、转移与否及生存率差异显著 (P<0 .0 5 )。结论 :MDM2和 P5 3基因改变是骨肉瘤的常见现象 ,参与骨肉瘤的发生和发展。其阳性检出率有助于判断骨肉瘤的恶性程度及预测肿瘤的转移及预后。     

人类胰腺癌Ki—67基因表达的研究

目的 应用原位杂交结合免疫组化分析胰腺癌Ｋｉ－６７基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译,研究该基因结构和功能表达的关系。方法 胰腺癌４０例,正常胰腺及良性病变９例;扁桃体组织及Ｈｅｌａ细胞作为阳性对照。通过地高辛标记的Ｋｉ－６７ｃＲＮＡ探针原位杂交和Ｋｉ－６７等效单克隆抗体的免疫组化分析该基因的ｍＲＮＡ转录和蛋白翻译。结果正常胰腺及良性病变Ｋｉ－６７ 指数均小于２０％;胰腺主分化腺癌、低分化腺癌各２０例,     

肝外胆管癌组织中HBx mRNA的原位检测和临床病理意义

目的 检测肝外胆管癌和癌旁胆管组织中乙型肝炎病毒X基因(HBx)mRNA的表达,了解HBV感染与胆管癌发生间的关系,明确HBx蛋白和基因在胆管癌发生中的意义。方法酶切质粒凝胶回收HBx基因片段,地高辛标记HBx DNA探针,原位杂交检测胆管癌及癌旁胆管石蜡标本中HBx mRNA的表达,并与临床病理资料进行相关分析。结果71例肝外胆管癌组织中HBx mRNA表达阳性率为61％(43／71);而39例癌旁胆管组织中的HBx mRNA表达阳性率仅为18％(7／39),且阳性信号全部见于伴有中重度不典型增生的胆管上皮细胞内。统计分析显示胆管癌组织中HBx mRNA表达和分布与临床病理参数无相关性,但HBx蛋白和基因的表达呈正相关。结论 肝外胆管癌组织中可以检测到HBx mRNA表达,HBV感染及其基因整合在胆管癌发生中有一定意义。     

Insulinlike growth factor gene expression in human fracture callus

Summary The effects of insulinlike growth factors on bone and cartilage-derived cells in culture have been extensively investigated, but there is little information on their rolein vivo in bone, especially in fracture healing. This study investigated insulinlike growth factor (IGF) I and II mRNA expression in normally healing human fractures byin situ hybridization. Endothelial and mesenchymal cells at the granulation tissue stage expressed IGF-II mRNA. At the stage of bone and cartilage formation, osteoblasts and nonhypertrophic chondrocytes expressed mRNA for both IGF-I and II. Some osteoclasts were positive for IGF-II mRNA at the stage of bone remodeling. The greater time span of IGF-II expression relative to IGF-I reflects the predominance of IGF-II in human bone matrix. Taken together with the known effects of IGFs on bone and cartilage cellsin vitro, these findings support a role for IGFs in local cellular regulation in human fracture healing.     

四种中药对骨愈合过程中相关基因表达的影响

目的:探索中药水蛭、海螵蛸、阿胶、骨碎补在骨折愈合过程中的干预作用,了解它们各自的调节靶点,探索建构其基因组学的途径。方法:通过在大鼠胫骨打孔的方法建立单因素干扰模型,并将300只大鼠随机分为正常组、模型组和给药组(分别用4种中药给药),每组50只,分别在实验的第4、7、14、21、28天不同时间点采用原位杂交方法对各类mRNA的变化进行动态观察,分析骨愈合过程中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA、转化生长因子TGF-β1mRNA、骨形态发生蛋白BMP-2mRNA以及血管内皮生长因子VEGF-mRNA的表达情况。结果:不同中药对不同基因的作用不同,作用的时间点不同,作用强度也存在差异。其中海螵蛸在骨折早期对Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA、VEGF-mRNA、BMP-2mRNA的表达升高,后期Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平下降,VEGF-mRNA、TGF-β1mRNA表达量维持于较高水平;骨碎补组较模型组在BMP-2mRNA、TGF-β1mRNA、Ⅰ型前胶原mRNA的表达上差异有显著性统计意义;阿胶对骨愈合早、中期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和TGF-β1mRNA的表达与模型组比较差异存在显著性统计意义;水蛭对VEGF-mRNA的表达具有一定的促进作用。结论:海螵蛸、水蛭对血管形成有促进作用,阿胶、骨碎补和海螵蛸对骨折软骨形成早期具有促进骨诱导的作用,并对成骨细胞的增殖及合成活性有较大影响。     

四种中药对骨愈合过程中相关基因表达的影响

目的:探索中药水蛭、海螵蛸、阿胶、骨碎补在骨折愈合过程中的干预作用,了解它们各自的调节靶点,探索建构其基因组学的途径。方法:通过在大鼠胫骨打孔的方法建立单因素干扰模型,并将300只大鼠随机分为正常组、模型组和给药组(分别用4种中药给药),每组50只,分别在实验的第4、7、14、21、28天不同时间点采用原位杂交方法对各类mRNA的变化进行动态观察,分析骨愈合过程中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA、转化生长因子TGF-β1mRNA、骨形态发生蛋白BMP-2mRNA以及血管内皮生长因子VEGF-mRNA的表达情况。结果:不同中药对不同基因的作用不同,作用的时间点不同,作用强度也存在差异。其中海螵蛸在骨折早期对Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA、VEGF-mRNA、BMP-2mRNA的表达升高,后期Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平下降,VEGF-mRNA、TGF-β1mRNA表达量维持于较高水平;骨碎补组较模型组在BMP-2mRNA、TGF-β1mRNA、Ⅰ型前胶原mRNA的表达上差异有显著性统计意义;阿胶对骨愈合早、中期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和TGF-β1mRNA的表达与模型组比较差异存在显著性统计意义;水蛭对VEGF-mRNA的表达具有一定的促进作用。结论:海螵蛸、水蛭对血管形成有促进作用,阿胶、骨碎补和海螵蛸对骨折软骨形成早期具有促进骨诱导的作用,并对成骨细胞的增殖及合成活性有较大影响。     

5α-还原酶I型同功酶基因在人睾丸、附睾和输精管组织中的表达

我们对人５α－还原酶Ｉ型同功酶基因在正常人睾丸、附睾及输精管组织细胞内的定位表达进行了初步的研究。采用非同位素地高辛标记ｃＲＮＡ探针对人睾丸、附睾和输精管组织冰冻切片进行原位杂交。结果：人睾丸Ｓｅｒｔｏｌｉ和Ｌｅｙｄｉｇ细胞胞浆、附睾和输精管上皮的主细胞及假复层柱状上皮细胞的胞浆中均有较强的杂交信号；细胞核中未见杂交信号；睾丸生精细胞及基底膜、附睾和输精管上皮的基底膜、间质和肌层也未见杂交信号。证明人与灵长类和大鼠的５α－还原酶基因表达及其分布基本一致。本结果对深入研究５α－还原酶及其产物在人类生殖中的作用具重要意义。     

腰椎间盘纤维性主胶原基因表达的观察

目的探讨腰间盘组织主要胶原成分－Ｉ型Ⅱ型胶原在细胞中基因表达的规律，作为今后的基因调控工作的基础。方法 利用核酸分子的原位杂交技术，分别以Ⅰ型、Ⅱ型胶原基因的ｃＤＮＡ探针对胎儿，成人和病理椎间盘组织切片中椎间盘细胞的胶原ｍＲＮＡ进行原位杂交，观察不同阶段胶原基因表达的水平。以胶原的特异性天狼星红染色进行不同阶段的胶原蛋白水平的观察。结果 Ｉ型胶原ｍＲＮＡ的阳性杂交信号集中于纤维环的外层，Ⅱ型胶原基     

端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织中的表达及其意义

目的 研究端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织的表达及其意义。方法 应用核酸原位杂交技术对51例男性睾丸肿瘤组织和10例正常睾丸组织中端粒酶hTRT基因的表达进行检测和定位，并应用HRIAS－1000高清晰度图像处理对hTRT阳性信号进行图像分析。结果 端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织吸极高的表达，其阳性率为92．16％（47／51），端粒酶hTRT基因表达强度与肿瘤细胞的分化程度显著相关，睾丸良性肿瘤与睾丸恶性肿瘤间差异有显著性（P＜0．05）， 在睾丸肿瘤组织和癌旁组织及正常睾丸组织中的表达强度差异有非常显著性（P＜0．01），并且其强阳性表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致。结论 端粒酶hTRT有可能成为睾丸肿瘤诊断的新标志物及治疗的新靶点。     

端粒酶mTERT基因在不同年龄SD鼠睾丸组织内的表达及其意义

目的　研究端粒酶mTERT基因在不同年龄SD鼠睾丸组织内的表达及其意义。方法　应用原位分子杂交技术 ,对 11个年龄组 (每组 5只 )健康雄性SD鼠睾丸组织中端粒酶mTERT基因进行检测和定位 ,并运用图像分析系统对mTERT表达水平进行研究。结果　端粒酶mTERT基因在SD鼠睾丸组织内的阳性表达率为 98% (5 4/ 5 5 ) ,其阳性信号表达于A、B型精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞的胞浆内 ,A型精原细胞的表达水平最高 ,与其他类型细胞相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;在间质细胞、支持细胞等非生殖细胞和精子中均无端粒酶mTERT基因的表达。结论　本研究提示端粒酶mTERT基因的表达与雄性生殖细胞的端粒酶活性表达一致 ,其能否成为雄性生殖调控的新的基因靶点尚待进一步研究。     

AxCA-脑源性神经营养因子转染大鼠损伤坐骨神经后基因表达的检测

目的观察携带小鼠脑源性神经营养因子（BDNF）cDNA表达片段的非依赖辅助复制缺陷型重组腺病毒载体（AxCA）-BDNF转染大鼠坐骨神经后基因表达情况。方法成年大鼠随机分成A组（坐骨神经缺损＋硅胶管＋AxCA-BDNF原液8μl）；B组（坐骨神经缺损＋硅胶管＋BDNF溶液8μl）；C组（坐骨神经缺损＋硅胶管＋空白病毒稀释液8μl）三组。应用原位杂交和免疫组织化学检测方法，从BDNF mRNA和蛋白水平，进行坐骨神经损伤后BDNF基因表达的定性和半定量分析测定。结果伤后腺病毒介导的BDNF基因转移组，在3、7、14d、1个月，4个时相点，近、远端神经干和脊髓（L3-6）中BDNF mRNA水平均远远高于其他两组，BDNF的水平也远远高于作为对照的单纯硅胶管套接组。结论通过腺病毒介导转染的BDNF基因在大鼠坐骨神经SCs内得到了有效表达，并通过轴突逆行转运到了相应的脊髓神经元。     

nm23-H1基因与恶性及半恶性骨肿瘤相关性的初步报告

目的探讨ｎｍ２３Ｈ１基因与恶性及半恶性骨肿瘤相关性。方法以３０例骨肿瘤手术切除组织为标本，分别进行ｎｍ２３Ｈ１ｍＲＮＡ原位杂交及单克隆抗体的免疫组化研究。结果ｎｍ２３Ｈ１基因的表达在骨巨细胞瘤４例原发者中为阳性，３例复发者中为阴性；在８例骨肉瘤中６例阳性；在Ｅｗｉｎｇ瘤、恶性纤维组织细胞瘤及转移癌中表达基本为阴性；在４例软骨肉瘤中３例阴性。结论ｎｍ２３Ｈ１的表达可能与骨巨细胞瘤的复发有一定相关性，而在骨肉瘤的研究中未发现其相关性。     

人骨肉瘤中p21^wafl／cipl基因的表达

目的 探讨ｐ＾２１ｗａｆｌ／ｃｉｐｌ基因在人骨肉瘤中的作用，了解其在骨肉瘤，骨软骨瘤和正常骨组织中的表达。方法 应用免疫组化ＬＳＡＢ法和原位杂交方法，检测ｐ６２１ｗａｆｌ／ｃｉｐｌ蛋白及；ｐ＾２１ｗａｆｌ／ｃｉｐｌ基因在４０例肌肉瘤，２０例骨软骨瘤和２０例正常骨组织中的表达。并通过近４年的临床随访，观察了骨肉瘤患者ｐ＾２１ｗａｆｌ／ｃｉｐｌ表达水平与临床预后之间的关系。结果 骨催瘤组织中Ｐ＾２１Ｗ     

细菌性颅内动脉瘤72-和92-KDa IV型胶原酶及其组织抑制因子mRNA的原位杂交

目的　探讨细菌性颅内动脉瘤 (BIAs)的发病机理。方法　用地高辛标记的 72 和92 KDaIV型胶原酶 (MMP 2和MMP 9)及其组织抑制因子 (TIMP) 1、TIMP 2反义RNA探针与BIAs(n =2 )和正常脑动脉组织 (n =6 )进行原位杂交 ,定位产生它们的细胞。并用正义RNA探针进行阴性对照。结果　 2份感染性颅内动脉瘤标本中均见MMP 9mRNA阳性杂交信号。且在内膜 ,尤其是相当于内弹力层部位 ,阳性杂交信号密集存在。动脉瘤壁内弹力层消失。阳性杂交信号定位于单核细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞。正常脑动脉标本中未发现MMP 9mRNA阳性杂交信号。在BIAs和正常脑动脉组织中未发现MMP 2、TIMP 1和TIMP 2的mRNA阳性杂交信号。结论　感染因素引起炎性细胞浸润 ,表达MMP 9mRNA增多 ,导致内弹力层断裂、消失 ,甚至动脉壁全层结构的破坏 ,从而引发BIAs形成。     

端粒酶hTERT基因在男性不育症病人睾丸组织中的表达及其意义

目的 :研究端粒酶hTERT基因在男性不育症病人睾丸组织中的表达及其意义。　方法 :应用核酸原位杂交技术检测 4 7例男性不育症病人和 10例正常睾丸组织中端粒酶hTERT基因的表达和定位 ,并应用HPIAS 10 0 0高清晰度图像处理系统对hTERT阳性信号进行图像分析。　结果 :端粒酶hTERT基因阳性表达与生殖细胞 (精原细胞、精母细胞、精子细胞 )的分布定位一致 ,并且其表达强度与男性不育症病人睾丸组织中的生殖细胞的数量和密度显著相关 ,在唯Sertoli细胞综合征病人睾丸组织中无端粒酶hTERT基因的表达。　结论 :端粒酶活性的缺乏可能是生殖细胞发育停滞的原因之一     

In situ localization of collagen production by chondrocytes and osteoblasts in fracture callus

An experimental model of fracture-healing was used to study the production of types-I and II collagen by in situ hybridization. The distribution of cartilage matrix in callus was determined by histochemical staining. Messenger RNA (mRNA) for cartilage-specific type-II collagen was detectable as early as the fifth day in a small number of cells that had acquired a chondrocyte phenotype but that also contained type-I collagen mRNA, suggesting an ongoing change in the expression of collagen genes. The location of the first chondrocytes, which were adjacent to cortical bone, suggested that they originated from cells that had derived from the periosteum by differentiation. On the seventh day of callus formation, the presence of both type-I and type-II collagen mRNA in chondrocytes of expanding cartilage suggested that most growth occurred by differentiation of mesenchymal cells and less by proliferation of differentiated chondrocytes. Expansion continued until the tenth to fourteenth day, after which the cartilage was replaced by woven bone. This was characterized by the presence of osteoblasts that were active in the synthesis of type-I collagen.     

Type I procollagen gene expression in normal and early healing of the medial collateral and anterior cruciate ligaments in rabbits: an in situ hybridization study

The purpose of this study was to compare the levels of procollagen type I messenger RNA (mRNA) in normal and healing medial collateral ligament (MCL) and anterior cruciate ligament (ACL) in a rabbit model. Our method of injury involved a surgical model with identical partial lacerations in the midsubstance of the MCL and ACL. Paraffin sections of normal ligaments, and ligaments 3, 7, 14, and 28 days postlaceration were studied by in situ hybridization to compare and follow the level of type I procollagen mRNA in the two ligaments. A complementary DNA (cDNA) probe corresponding to alpha 1(I) procollagen mRNA was labeled with [32P]d-CTP. After hybridization, autoradiography, and staining of the sections, the level of procollagen mRNA was assessed by microscopic examination. A higher level of procollagen mRNA was consistently detected in normal MCL than in normal ACL, suggesting higher collagen synthetic activity in the MCL. At the injury sites of the MCL and ACL, the levels of type I procollagen mRNA increased at all post-laceration periods, reaching its highest level at 14 days postsurgery. The MCL healing site had a considerably higher level of procollagen mRNA than the ACL healing site (i.e., injury site) at all postoperative intervals. The results demonstrate that procollagen mRNA levels in MCL tissue are higher than those in ACL tissue under normal conditions, as well as in response to injury. The differences in the procollagen mRNA levels of MCL and ACL may reflect the synthesis of collagen in these tissues, and may contribute to the differences in their healing capacities.     

原位杂交检测孕酮受体mRNA在周期子宫内膜的表达

应用地高辛标记的探针进行原位杂交，检测周期内膜各组分的孕酮受体（ＰＲ）ｍＲＮＡ的表达。内膜取自子宫肌瘤患者，子宫全切术后即取内膜及部分肌层，储于液氮。据月经史及形态表现将内膜分为三期：增殖、分泌早期及中晚分泌期。结果显示，ＰＲｍＲＮＡ在子宫内膜的表达有明显的组织／细胞差异。基质细胞普遍表达ＰＲｍＲＮＡ，增殖期与分泌期比较无明显差异。中晚分泌期内膜腺体细胞ＰＲｍＲＮＡ的表达极低甚至不表达，且无明显的表浅及深层的表达差异。提示子宫内膜孕酮受体至少在腺体上可能存在转录水平的调节。     

中医骨折三期治疗对家兔骨折骨膜组织中VEGF及VEGF mRNA表达的影响

目的:研究中医骨折三期治则对家兔桡骨骨折愈合过程中内外骨膜及骨髓组织VEGF及VEGFmRNA表达的影响,探讨中药治疗骨折的分期治疗的合理性。方法:140只雄性新西兰白兔,无菌状态下手术,在家兔双侧桡骨下1/3段,造成3mm完全骨质缺损的骨折愈合模型。采用计算机产生随机数字的方法,将家兔随机均分为4组:中药三期治疗组、中药一期治疗组、阳性药物对照组以及模型对照组,分别给予三期治疗、一期治疗、阳性药物治疗以及等量蒸馏水。于术后3、6、9、14、28、42、56d每组随机处死5只家兔,取左侧桡骨标本作为观察对象,采用免疫组化和原位杂交方法检查外骨膜、内骨膜和骨髓组织中VEGF及VEGFmRNA表达,通过图像分析测量各种组织中VEGF及VEGFmRNA表达强度。结果:各中药治疗组对于术后骨折端外骨膜、内骨膜和骨髓组织VEGF和VEGFmRNA表达均有促进作用,三期治疗组有高于其他三组的趋势(P0.05)。结论:中药分期治疗对骨折愈合过程中外骨膜、内骨膜和骨髓组织VEGF及VEGFmRNA表达的促进作用更加明显,骨折分期治疗是必要的。