大鼠胆汁中木犀草素和芹菜素HPLC测定方法的建立及应用

目的:建立大鼠胆汁中木犀草素和芹菜素浓度测定的HPLC方法,并考察大鼠经口给予菊花提取物(CME)后,木犀草素和芹菜素在胆汁中的排泄情况。方法:胆汁样品经葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶酶解后测定,以SB-C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm)为分离柱,流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(52∶48,v/v),流速为1.0mL·min~(-1),检测波长为350nm。结果:本法木犀草素、芹菜素分离良好,线性范围分别为0.1745～6.986μg·mL~(-1)(r=0.9998)和0.3693～11.08μg·mL~(-1)(r=0.9999),绝对回收率为84.6%～106.2%,方法回收率为80.1%～106.9%,日内和日间精密度RSD小于14%。大鼠灌胃给药CME后36h内,胆汁中木犀草素和芹菜素的累积排泄量占给药量的2.05%和6.34%。结论:本法可以准确、灵敏地同时测定大鼠胆汁中木犀草素和芹菜素的浓度,两者经胆汁排泄证明存在肝肠循环。     

高效液相色谱法测定人血浆中万古霉素质量浓度

目的建立测定血浆样品中万古霉素浓度的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为菲罗门双子星C18柱（150mm×4．6mm,5μm）,流动相为50mmol／L磷酸二氢钾溶液-乙腈（91．0：9．0）,流速为1．0mL／min,检测波长为230nm,柱温30℃。结果万古霉素质量浓度在5,0～100．0μg／mL范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9998）,最低检测质量浓度为0．2μg／mL;日内、日间精密度RSD分别为3．1％～3．6％和3．5％～5．6％（n=5）;低、中、高3种质量浓度净化回收率分别为64．9％,66．3％,65．6％（n=3）,方法回收率分别为100．6％,100．2％,98．9％（n=5）。结论HPLC法快速、简便,结果准确,可用于万古霉素血药浓度监测及体内药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定麻氟滴鼻液中两组分的含量

目的建立测定麻氟滴鼻液中盐酸麻黄碱和地塞米松磷酸钠含量的方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为Hypersil BDS C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为0.025mol／L磷酸二氢钾（加入0．5％三乙胺，用磷酸调节pH值至3．5）-甲醇-乙腈（52：38．4：9．6），流速为0．9mL／min，检测波长为257nm，柱温为40℃。结果盐酸麻黄碱质量浓度在100～600μg／mL范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9998），平均回收率为100．54％，RSD=1．0％（n=6）；地塞米松磷酸钠质量浓度在10～60μg／mL范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9998），平均回收率为100．20％，RSD=1．2％（n=6）。结论HPLC法专属性好，操作简便、快速，结果准确，可用于麻氟滴鼻液的质量控制。     

头孢妥仑测定方法的建立及胆汁排泄机制研究

目的：建立高效液相色谱内标法测定大鼠血浆、胆汁、尿液中头孢妥仑含量,阐明多药耐药相关蛋白2（Mrp2）是否与头孢妥仑胆汁排泄有关。方法：用4-二甲氨基安替比林作内标。色谱柱为Capcellpak C18 UG120（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为0．1％醋酸铵-甲醇（67：33,V/V）,流速为0．8mL／min,进样量为25皿;用肝灌流法探讨头孢妥仑是否经Mrp2转运。设立对照组（头孢妥仑1μmol／L）和实验组（头孢妥仑1μmol／L加Mrp2抑制剂丙磺舒20μmol／L）,在设定时间点于灌流的大鼠肝脏收集出口灌流液和胆汁样品,高效液相色谱法测定样品中头孢妥仑含量,考察实验组和对照组中肝摄取率和胆汁累积排泄率的差异。结果：血浆样品中头孢妥仑在0．1～4μg／mL范围内、胆汁样品中头孢妥仑在0．1～5μg／mL范围内、尿液样品中头孢妥仑在0．1～5μg／mL范围内线性关系良好。回收率为85％～115％,日内、日间RSD均小于13．5％。实验组和对照组相比,肝摄取率变化无统计学意义上的差别;实验组中,肝灌流25min后,头孢妥仑胆汁累积排泄率减少至对照组的40．0％。结论：本方法经济、简单、灵敏、快速,可用于头孢妥仑血浆、胆汁、尿液样品中药物浓度检测和药物代谢动力学研究;头孢妥仑是Mrp2的底物,Mrp2与头孢妥仑的胆汁排泄有关。     

高效液相色谱法测定人血浆中苯巴比妥浓度

目的：建立测定人血浆中苯巴比妥浓度的高效液相色谱法。方法以 DiamonsilTM C18反相柱（150mm ×4．6mm，5μm）为色谱柱，流动相为50mmol? L－1醋酸铵－甲醇（15∶85 V／V）；流速：1．0mL? min －1；检测温度：30℃；检测波长：230nm。提取剂为乙酸乙酯与二氯甲烷（90∶10 V／V）。结果苯巴比妥的低、中、高（4．0，16．0，48．0μg? mL－1）3个浓度点平均相对回收率均大于95％，提取回收率大于75％；日内、日间相对标准偏差（RSD）均低于15％（n＝5）；分析方法的检测限1．0μg? mL －1；苯巴比妥在2．0～64．0μg? mL －1范围内线性关系良好，r＝0．9998（n ＝7）。线性方程：Y＝3．182X＋1．06。结论该方法灵敏、准确、简单、快速，可用于苯巴比妥临床血药浓度监测和药动学研究。     

高效液相色谱法测定大七厘散中血竭素含量

目的建立血竭素的含量测定方法，控制大七厘散的质量。方法采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为Hyper Clone BDS C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-0．05mol／L磷酸二氢钠溶液（35：65），检测波长440nm，柱温35℃，流速1mL／min。结果血竭素高氯酸盐质量浓度在2．96—14．80μg／mL范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9998），平均加样回收率为98．54％。RSD=1．36％（n=6）。结论HPLC法方便、快速、准确，可用于大七厘散的质量控制。     

罗通定在唾液和皿浆中浓度的测定及相关性分析

目的建立大鼠唾液和血浆中罗通定浓度的HPLC测定方法,研究单次静脉注射后大鼠唾液及血浆中罗通定浓度的相关性。方法色谱柱为Diamonsil（R）C18柱（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为甲醇：水（70：30,V/V）;流速1．0mL·min^-1;柱温30℃;检测波长281nm。测定唾液和血浆中的罗通定浓度,并对腮腺、颌下腺唾液浓度与对应血浆质量浓度进行Pemarson相关分析。结果罗通定的唾液和血浆浓度在0．1-20．0mg·L^-1和0．5．40．0mg·L^-1内线性关系良好,在唾液和血浆中的最低定量限和相对回收率分别为0．1mR·L^-1、100．97％-107．50％和0．5mg·L^-1、98．30％～111．20％,日内、日间精密度（RSD）均〈10％;静注给药后,腮腺和颌下腺唾液浓度与对应血浆浓度呈正相关,Pearson相关系数（R）分别为0．9,37（P〈0．01）和0．985（P〈0．01）。结论首次建立了同时适用于唾液和血浆中微量罗通定分析的HPLC方法;唾液和血浆中的罗通定浓度具有良好的相关性,在罗通定的药动学研究及临床药物浓度监测时可以考虑以唾液代替血浆样本进行分析,     

氨咖黄敏胶囊中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度测定

目的建立高效液相色谱（HPLC）法，测定氨咖黄敏胶囊中马来酸氯苯那敏含量及含量均匀度。方法采用Agilent C18柱（150mm×4．6mm，5μm），以甲醇-0．01mol／L磷酸二氢钾-0．02mol／L庚烷磺酸钠（58．5：35．5：6）为流动相，流速为1mL／min，检测波长为215an]，柱温为25℃。结果马来酸氯苯那敏质量浓度在11．99—47．98μg／mL（r=0．9998）范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99．17％，RSD=0．2％（n=6）。结论HPLC法简便、快速，重现性良好。     

头孢妥仑测定方法的建立及胆汁排泄机制研究

目的：建立高效液相色谱内标法测定大鼠血浆、胆汁、尿液中头孢妥仑含量,阐明多药耐药相关蛋白2（Mrp2）是否与头孢妥仑胆汁排泄有关。方法：用4-二甲氨基安替比林作内标。色谱柱为Capcell pak C18 UG120（4．6mm×250mm,5μm）,流动相为0．1％醋酸铵-甲醇（67：33,V／V）,流速为0．8mL/min,进样量为25μL;用肝灌流法探讨头孢妥仑是否经Mrp2转运。设立对照组（头孢妥仑1μmol／L）和实验组（头孢妥仑1μmol／L加Mrp2抑制剂丙磺舒20μmol／L）,在设定时间点于灌流的大鼠肝脏收集出口灌流液和胆汁样品,高效液相色谱法测定样品中头孢妥仑含量,考察实验组和对照组中肝摄取率和胆汁累积排泄率的差异。结果：血浆样品中头孢妥仑在0．1～4μg／mL范围内、胆汁样品中头孢妥仑在0．1～5μg／mL范围内、尿液样品中头孢妥仑在0．1～5μg／mL范围内线性关系良好。回收率为85％～115％,日内、日间RSD均小于13．5％。实验组和对照组相比,肝摄取率变化无统计学意义上的差别;实验组中,肝灌流25min后,头孢妥仑胆汁累积排泄率减少至对照组的40．0％。结论：本方法经济、简单、灵敏、快速,可用于头孢妥仑血浆、胆汁、尿液样品中药物浓度检测和药物代谢动力学研究;头孢妥仑是Mrp2的底物,Mrp2与头孢妥仑的胆汁排泄有关。     

高效液相色谱法测定异烟肼片中异烟肼及其杂质的含量

目的建立测定异烟肼片剂中异烟肼及其杂质含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Shim-PackVP-OD柱（150mm×4．6mm,5μm）,流动相为甲醇-0．2％多库酯钠水溶液（40：60）,流速为0．8mL／min,紫外检测波长为216nm。结果异烟肼质量浓度在10～1000mg／L范围内与峰面积线性关系良好（r=0．9998,n=6）,平均回收率为99．19％,RSD=1．99％（n=6）;异烟酸质量浓度在4～24mg／L范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0．9994,n=6）。结论该法快速、简便、准确、重现性好。     

大鼠体内槲皮素的血药浓度测定及其药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中槲皮素浓度的高效液相色谱法,并应用于药代动力学研究。方法10只大鼠(雌雄各半)灌胃给予槲皮素50 mg/kg。采用高效液相色谱法测定槲皮素的血药浓度,以山柰酚为内标,流动相为甲醇-缓冲液(0.1 mol/L NH4AC+0.3 mmol/LEDTA-Na2)-乙酸=(60∶40∶1,V/V),色谱柱为迪马ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),测定波长为370 nm,进样量为20μL,流速为1 mL/min,柱温为35℃。结果槲皮素血药浓度线性范围是0.01～50μg/mL(r=0.999 9),定量下限为0.01μg/mL。低、中、高(0.05,5,25μg/mL)3个质量浓度的回收率为97.2%～103.4%,日内、日间精密度的RSD均小于10%。大鼠灌胃给予槲皮素50 mg/kg后的最大血药浓度为(2.033±0.41)μg/mL,达峰时间为0.5 h,t1/2ke为(4.17±0.64)h,0-∞药时曲线下面积为(6.77±0.80)μg/(h.mL)。结论方法专属性高,准确、灵敏,可为今后槲皮素的药代动力学研究提供方法学依据。     

不同血浆样品制备方法对芍药苷血液药物浓度测定的影响

目的比较乙腈法、高氯酸法和磷酸二氢钠酸化法三种不同的血浆样品处理方法对芍药苷血液药物浓度测定的影响,优选最佳的血浆样品处理方法。方法高效液相色谱法测定血浆样品中不同浓度的芍药苷,比较三种方法对样品中芍药苷的回收率、检测的灵敏度以及实验结果可重复性等方面的影响。结果用乙腈和高氯酸处理芍药苷浓度>50μg/ml的血浆样品时,均能得到较高的回收率;但对于芍药苷浓度<50μg/ml的血浆样品,仅高氯酸处理的样品才能得到较高的回收率;并且高氯酸处理血浆能检测的最低芍药苷血液药物浓度为0.5μg/ml,具有较好的灵敏度。结论对于检测芍药苷的血液药物浓度,用高氯酸处理血浆样品最为适合。     

改良HPLC法测定大鼠血浆芍药苷浓度

目的:改良高效液相色谱(HPLC)法测定大鼠血浆芍药苷浓度。方法:采用乙酸乙酯提取法处理血浆,选咖啡因为内标物进行测定;色谱柱为Hypersil ODS2RP-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(16∶84,V/V),紫外检测波长为231nm,流速为1mL·min-1。结果:采用乙酸乙酯提取比用沉淀法处理的血浆内源性干扰物质少,在HPLC系统条件下,芍药苷和内标咖啡因均不受血浆内源性物质干扰,保留时间分别为6.8min和4.1min左右,定量下限为0.08μg·mL-1,芍药苷检测浓度在0.08～5.12μg·mL-1(r=0.9994)范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。分析一个样品只需要7min,平均回收率为69.09%,低、中、高浓度(0.16、0.64、2.56μg·mL-1)的日内精密度和日间精密度分别为12.77%、4.47%、1.10%和8.39%、3.82%、4.27%。结论:本法简便、快速,可用于大鼠血浆芍药苷浓度的分析。     

LC-MS/MS快速测定大鼠血浆中HHY-002浓度

目的：建立用于测定治疗慢性心律失常药物HHY-002的大鼠血浆测定法。方法：流动相为乙腈-0．1％甲酸（65：35）,流速0．200mL／min,色谱柱Phenomenex LunaC18柱（150mm×2．00mm,5μm,5micron）,进样量为10μL,柱温35℃,以地西泮为内标。结果：HHY-002在1．98～1013．50ng／mL的范围内呈良好的线性关系（r=0．998）,最低定量限达1．98ng／mL,绝对回收率高于80％,日内和日间误差小于10％,方法回收率大于（81．4±4．5）％,符合生物样品分析要求。结论：建立的LC—MS／MS方法专属性强,灵敏度高,可用于HHY-002的体内定量分析。     

炎琥宁在大鼠体内血药浓度测定方法及其药动学研究

目的:建立以高效液相色谱(HPLC)法测定大鼠血浆中炎琥宁含量的方法,并对其药动学进行研究。方法:色谱柱为VP-ODS C18 Column(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-1%醋酸-三乙胺(65∶35∶0.02),内标物为安定,流速为1.0mL·min-1,检测波长为251nm,温度为40℃。用甲醇沉淀蛋白后取上清液过0.45μm微孔滤膜进样分析,采用DAS1.0软件进行药动学参数估算。结果:炎琥宁进样浓度分别在0.05～1.0μg·mL-1(r=0.9999)和1.0～10.0μg·mL-1(r=0.9998)范围内与各自峰面积积分值之比呈良好线性关系;平均回收率为90.12%,RSD=0.508%(n=3)。大鼠静脉注射4mg·kg-1炎琥宁后,其tmax、Cmax、t1/2α和AUC0～240分别为(5.03±1.2)min、(1.09±7.5)mg·L-1、(0.95±4.4)min和(18.14±1.1)mg·min·L-1。结论:炎琥宁在大鼠体内的药动学过程符合二室模型。     

利奈唑胺在Beagle犬体内的药动学研究

目的建立测定Beagle犬血浆中利奈唑胺质量浓度的高效液相色谱法,研究其在Beagle犬体内的药物代谢动力学特征。方法5只Beagle犬灌胃给予利奈唑胺50mg／kg,于给药前及给药后0．083,0．17,0．33,0．66,1．0,1．5,2．0,4．0,6．0,8．0,12．0,24h采集血样,用高效液相色谱法测定血浆中利奈唑胺的质量浓度,血浆样品用10％三氯乙酸沉淀蛋白,流动相为甲醇-乙腈-水（20：20：60,V／V／V）,检测波长25411In。采用DAS3．0程序计算药物代谢动力学参数。结果利奈唑胺质量浓度线性范围是0．20～40．0μg／mL（r=0．9993）,平均绝对回收率为90．50％～95．20％,日内和日间RSD均小于12％。利奈唑胺在犬体内的主要药动学参数值,达峰浓度（Gmax）为（25．36±9．65）μg／mL,半衰期（t。,2）为（3．72±1．06）h,0～24h药时曲线下面积（AUCo-24）为（144．65±39．85）mg·h／L,0-∞药时曲线下面积（AUCo-∞）为（146．98±45．18）mg·h／L。结论该方法简便、快速,适用于体内利奈唑胺的测定及药动学研究。利奈唑胺在犬体内符合一室模型,消除较快,分布较广。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆及组织中多柔比星含量

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠血浆及组织样品中多柔比星的含量,并研究其在大鼠体内的分布特征。方法：生物样品经过液-液萃取后,采用HPLC-FLD法,色谱柱为Zorbax SB-C1（8150mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈和0.01mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液（pH2.3）,梯度洗脱,流速为1mL·min-1,柱温为35℃;荧光检测器,激发波长为237nm,发射波长为555nm。结果：该法测定血浆中多柔比星的线性范围为2.5-500ng·mL-1,r=0.9991。其他组织的分析方法也均满足生物样品的测定要求。静脉给予5mg·kg-1多柔比星,结果显示其在大鼠体内分布广泛且持久,肾脏和脾脏及毒性靶器官心脏中浓度较高。结论：该方法准确度、灵敏度高,可以测定72h内多柔比星在主要组织中的分布,可用于研究心脏毒性与多柔比星＂量＂之间相关性。     

委陵菜黄酮在大鼠体内的药动学研究

目的：建立测定血浆中委陵菜黄酮的分析方法,初步对该化合物在大鼠体内的经时过程进行考察。方法：建立委陵菜黄酮的HPLC测定方法,考察大鼠iv委陵菜黄酮（10、20、40mg/kg）后血药浓度-时间曲线。结果：大鼠尾iv3个剂量委陵菜黄酮后,血浆药时曲线符合三室模型,药时曲线下面积AUC0-180分别为346.05、455.74和1655.14μg/（mL·min）,分布相半衰期t1/2α分别为103.90、15.59和9.49min,消除相半衰期t1/2β分别为30580.98、2045.70和894.84min。结论：iv给药后,委陵菜黄酮血浆药时曲线符合三室模型,在大鼠体内迅速分布,但消除速率较慢。