色素痣脱细胞真皮基质制备方法的实验研究

目的 通过对色素痣组织的脱细胞处理,制备一种能够避免异种和同种异体脱细胞真皮基质缺点的自体脱细胞真皮,为自体组织回植修复组织缺损提供实验依据.方法 将手术切除的1例患者的色素痣组织,切取2cm×2cm大小的色素痣25块,置于0.25% DispaseⅡ试剂中,室温下消化24h,去除表皮后,随机分成5个组,分别置于0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%Triton X-100试剂中室温下消化.于不同的作用时间,取标本进行光镜、扫描电镜、透射电镜等检测.结果 色素痣组织在0.25%DispaseⅡ室温下作用24h,去除表皮,再分别用不同浓度的Triton X-100处理48～72h,可有效地去除色素痣组织中的痣细胞及其他所有细胞成分.光镜下胶原纤维粗细均匀,排列规整,无明显变性.扫描电镜观察可见起伏的皮肤纹理及天然毛孔结构,胶原纤维完整而连续,呈规律排列,相互交织成疏松立体网状结构.透射电镜观察胶原纤维粗细均匀,结构清晰,排列规整,可见细胞脱除后留下的腔隙,未见任何细胞碎片的残留.结论 用Triton X-100处理经DispaseⅡ消化去表皮的色素痣组织,当Triton X-100浓度超过0.5%以及Triton X-100作用时间超过48h,可有效地去除色素痣组织中的痣细胞及其他所有细胞成分,进一步增加Triton X-100浓度和脱细胞时间对脱细胞的效果无明显影响.     

异种脱细胞真皮基质抗原性的实验研究

目的　观察不同方法制备的异种脱细胞真皮基质 (Xeno -ADM )埋植物的抗原性差异。　方法　将猪断层中厚皮片采用胰蛋白酶 +tritonX 10 0等处理 ,制成Xeno -ADM ,分为戊二醛交联的Xeno ADM1组、网状交联的Xeno ADM2 组、未交联的Xeno ADM3 组、动物先用Xeno ADM蛋白致敏后再移植交联的Xeno ADM4组和未交联的异体兔Allo ADM对照组。分别将移植物埋植于 5组共计 2 5只日本白兔的耳部和背部皮下 ,术后 2～ 32周检测兔血清抗ADMs抗体效价 ,并观察移植物大体和组织学变化。　结果　Xeno ADM4埋植物组血清抗Xeno ADM蛋白抗体效价最高 ;排除致敏因素的影响 ,Xeno ADM各组血清抗体滴度依次为 :Xeno ADM3 组 >Xeno ADM2 组 >Xeno ADM1组 (P<0 .0 5～ 0 .0 0 1) ;在Allo ADM组中 ,有 4 0 %的血清样本呈现出抗Allo ADM蛋白抗体阳性。组织学上 ,Xeno ADM移植部位有激烈而持久的炎症反应 ,明显强于Allo ADM异体埋植对照组 ;ADM被降解吸收的程度依次为 :Xeno ADM3 >Xeno ADM2 >Xeno ADM4>Xeno ADM1>Allo ADM (P <0 .0 5～ 0 .0 0 1) ,在交联型ADM组易产生异物巨细胞反应。　结论　Xeno ADM的免疫原性强于Allo ADM ,诱导宿主产生IgG限制的免疫反应 ;大张变性的ADM埋植物能降低抗原 抗体反应 ,减缓炎症免疫反应导致的ADM     

脱细胞异种(猪)真皮基质作为填充材料的初步研究与应用

目的：为临床修复体表凹陷畸形寻求良好的填充材料。方法：用自制脱细胞异种（猪）真皮基质，植入兔皮下，定时进行测量，并进行光镜及电镜观察。临床应用2例。结果：脱细胞异种（猪）真皮基质植入后观察1年，仅在4周内有极轻微的炎性反应，无排斥反应，2周左右有成纤维细胞及毛细胞血管长入，吸收率低于对照组。2例临床应用填充效果较满意，质地较软，无破溃、外露。结论：脱细胞异种（猪）真皮基质组织相容性好，吸收率低，质地软，是一种有良好前景的软组织填充材料。     

异种(猪)脱细胞真皮基质移植后炎症免疫反应的实验研究

目的：研究异种（猪）脱细腻真皮基质与薄自体皮复合移植后炎症反应的变化规律及对Th1/Th2细胞因子的影响。方法：将异种（猪）脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植于大鼠，分别于移植后1，2，3，4，8，12，16周取标本，采用组织学观察及RT-PCR技术动态检测异种（猪）脱细胞真皮基质复合移植后炎症反应及Th1/Th2细胞因子的变化，同时以单纯薄自体皮移植作对照。结果：异种（猪）脱细胞真皮与薄自体皮复合移植后早期存在炎症反应，并随着创面愈合的进行而逐渐消失，Th2细胞因子的表达明显高于对照组。结论：异种（猪）脱细胞真皮基质仍具有一定的免疫原性，Th2细胞因子的高表达说明机体对异种（猪）脱细胞真皮基质的免疫反应主要以体液免疫为主，也可能是异种（猪）脱细胞真皮基质移植后未被排斥的原因之一。     

十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 探讨十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度及作用时间.方法 取临床截肢患者废弃的皮肤,分成90块,随机分成6组,每块约1 cm×1 cm,分别置于0.1%、0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%十二烷基硫酸钠溶液中脱细胞,每隔8 h取材一次,分别取材15次.取材标本行大体和组织学观察.结果 肉眼观察十二烷基硫酸钠作用8 h后,0.25%组可将表皮与真皮完整分离;光镜检查显示0.25%十二烷基硫酸钠在作用40 h后,能将真皮内的细胞及细胞碎片脱净,形成脱细胞真皮基质.制备的脱细胞真皮基质,主要由胶原纤维网架构成,其他组作用120 h也无法形成真正的脱细胞真皮基质.结论 十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度为0.25%,最佳时间为40 h.与其他方法比较,具有简便、快捷、有效、价廉、宜推广等特点,可为临床急诊的修复争取宝贵的时间.     

十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的探讨十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度及作用时间。方法取临床截肢患者废弃的皮肤,分成90块,随机分成6组,每块约1cm×1cm,分别置于0.1%、0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%十二烷基硫酸钠溶液中脱细胞,每隔8h取材一次,分别取材15次。取材标本行大体和组织学观察。结果肉眼观察:十二烷基硫酸钠作用8h后,0.25%组可将表皮与真皮完整分离;光镜检查显示:0.25%十二烷基硫酸钠在作用40h后,能将真皮内的细胞及细胞碎片脱净,形成脱细胞真皮基质。制备的脱细胞真皮基质,主要由胶原纤维网架构成,其他组作用120h也无法形成真正的脱细胞真皮基质。结论十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度为0.25%,最佳时间为40h。与其他方法比较,具有简便、快捷、有效、价廉、宜推广等特点,可为临床急诊的修复争取宝贵的时间。     

脱细胞真皮基质的研究进展

烧伤或皮肤组织缺损的创面修复多采用自体中厚或全厚皮片移植 ,供皮区损伤较重易形成疤痕 ,影响外观及功能。而早期自体薄厚皮片 (autologeus thin split- thickness skin,auto- TTS)或刃厚皮移植 ,则往往由于皮片薄、缺少有效的真皮成分和引导性组织再生的作用 ,皮片成活后常形成不同程度的瘢痕增生和挛缩畸形 ;在关节等功能部位更易造成功能障碍 ,影响患者生活质量。近年来脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)作为一种新型真皮替代物不但受到烧伤与整形外科界的重视 ,也引起了整个美容医学的兴趣。本文对其综述如下 :1　 ADM…     

异体脱细胞真皮基质的研究与应用

脱细胞真皮基质 (ａｃｅｌｌｕｌａｒｄｅｒｍａｌｍａｔｒｉｘ ,ＡＤＭ)是异体皮经特殊处理 ,去除其细胞成分后得到的一种真皮替代品。由Ｌｉｖｅｓｅｙ[1] 开发研制 ,Ｌｉｆｅｃｅｌｌ公司生产 ,商品名为ＡｌｌｏＤｅｒｍ ,已获美国ＦＤＡ批准应用于临床 ,近几年在烧伤和整形外科领域中得到了广泛的应用和发展。1　脱细胞真皮基质的制备方法ＡＤＭ的制备包含去表皮、脱真皮细胞及冷冻干燥处理 3个基本步骤 ,有两种方法。一是尸体皮经高渗盐水和 12烷基硫酸钠 (ＳＤＳ)处理 ,形成ＮａＣｌ ＳＤＳＡＤＭ[1,2 ] ;二是经ＤｉｓｐａｓｅⅡ处理…     

异种(猪)脱细胞真皮基质在瘢痕整形中的应用

目的 探讨异种(猪)脱细胞真皮基质在切除瘢痕后做为真皮替代物的临床作用.方法 采用DR脱细胞猪皮和大张自体刃厚皮复合移植(一步法和二步法)覆盖切除瘢痕后的创面.结果 对47例瘢痕患者中的22例进行异种(猪)脱细胞真皮基质移植7 d左右,再植大张自体刃厚皮的二步法复合移植,其中在脂肪层上复合移植成活率(88.3±3.7)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(89.7±3.4)%.25例采用异种(猪)脱细胞真皮基质+自体刃厚皮同时复合移植的一步法,在脂肪层上复合移植成活率(92.5±4.1)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(93.2±5.2)%.复合移植成活后,创面颜包淡红,表面平坦光滑,柔韧性好.最长随访时间90 d,复合区皮肤近似正常,皮肤结实、光滑、平整,可捏起,仅见移植边缘有少许轻微瘢痕增生,功能好.结论 一步法复合移植比二步法成活率高,且脂肪层上的复合移植皮比深筋膜上的复合移植皮肤弹性较好,也更柔软、丰满,两者在功能上则无区别.异种(猪)脱细胞真皮基质是覆盖瘢痕切除后创面的较理想的真皮替代物.     

脱细胞猪小肠黏膜下层与猪脱细胞真皮基质作为真皮支架的对比研究

目的：应用脱细胞猪小肠黏膜下层与猪脱细胞真皮基质作为真皮替代物与SD大鼠自体刃厚皮片进行复合移植,修复SD大鼠全层皮肤缺损,比较两者优劣性,为临床提供更理想的真皮替代物。方法：以36只SD大鼠为动物模型,随机区组法随机分为两组,每组18只,在其背部造成2.5 cm×2.5 cm的全层皮肤缺损,实验组应用脱细胞猪小肠黏膜下层+自体刃厚皮移植修复,对照组应用猪脱细胞真皮基质+自体刃厚皮移植修复,移植后2周对移植皮片成活率分析研究,移植后4周、8周、12周取材进行一般观察、组织学观察和收缩率的计算。结果：术后2周,实验组植皮存活率大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。于术后4周、8周、12周动态观察,实验组植皮区收缩率较对照组低,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色组织学观察,术后4周,两组植入材料与移植皮片融合度均很好,植入材料内及其周围均有大量的成纤维细胞和新生毛细血管长入,并有炎症细胞浸润;术后8周,两组植入材料内及其周围均有成纤维细胞和新生毛细血管长入,炎症细胞较术后4周时少,两组植入材料的原有胶原纤维结构尚清晰,出现疏松;术后12周,两组植入材料...     

猪脱细胞真皮基质修复兔腹壁缺损的实验研究

目的研究猪脱细胞真皮基质修复兔腹壁缺损的效果,探讨异种脱细胞真皮基质应用的可行性。方法健康小白猪1头,取背部及两侧皮肤制备脱细胞真皮基质。26只日本大耳白兔,雌雄不限,体重2.2～2.3 kg,随机分为对照组(n=6)和实验组(n=20)。对照组制备5.0 cm×0.5 cm腹壁缺损,单纯缝合关闭缺损。实验组制备5.0 cm×2.5 cm腹壁缺损,用同样大小的猪脱细胞真皮基质补片(简称"补片")修复,补片基底膜面朝向肠管。术后观察是否有疝形成,比较两组腹腔内脏器粘连情况,以及对照组腹壁肌筋膜单纯缝合处和实验组补片-腹壁肌筋膜吻合处的最大张力,组织学观察补片是否有纤维血管组织长入及其在体内的生物学转归。结果实验动物均无疝形成。术后5周,实验组补片和腹壁融为一体,补片皮肤面和脏器面均有纤维血管组织长入,补片处于新生组织掺入重建过程。实验组1只动物补片和腹腔内脏器粘连较重(2级),5只发生了轻微粘连(1级),12只无粘连(0级);对照组1只轻微粘连(1级),5只无粘连(0级);两组粘连分级比较差异无统计学意义(Z=—0.798,P=0.425)。术后5周,实验组补片-腹壁肌筋膜吻合处的最大张力为(13.0±5.5)N,对照组腹壁肌筋膜单纯缝合处为(13.6±4.0)N,差异无统计学意义(t=—0.410,P=0.683)。组织学观察显示,术后5周,实验组补片中有大量小血管,并有中性粒细胞及淋巴细胞为主的炎性浸润,补片边缘偶见巨噬细胞,补片-腹壁肌筋膜吻合处由纤维结缔组织连接;术后6个月,补片及周围炎性反应消退,胶原纤维结构发生了改建,补片和肌筋膜层由有纤维结缔组织愈合。结论补片修复兔腹壁缺损取得了较好效果,补片-腹壁肌筋膜层愈合,其吻合处的力学强度达到了自体腹壁单纯缝合吻合的力学强度,补片胶原纤维结构发生了改建。     

不同浓度猪脱细胞真皮基质诱导小鼠毛囊角质细胞迁移的实验研究

目的:探讨不同浓度猪脱细胞真皮基质(pADM)对小鼠毛囊角质细胞迁移的诱导作用.方法:在Transwell实验和细胞划痕实验中,分别将0、2、10、20、40 mg pADM配制成5个浓度梯度,分别作用于小鼠毛囊角质细胞.Transwell实验分组pADM浓度为0、4、20、40、80 μg/μl;细胞划痕实验中pAD...     

激光微孔猪脱细胞真皮基质制备及创面移植的观察

目的 制备激光微孔猪脱细胞真皮基质（PADM），寻找其与自体刃厚皮复合移植的最佳孔间距。方法 采用胰蛋白酶法制备PADM，用激光加工机打孔，制备孔间距为0．8、1．0、1．2、1．5mm的激光微孔PADM。在144只SD大鼠背部制作全层皮肤缺损创面，分为微孔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，依次采用前述4种孔间距的激光微孔 PADM＋自体刃厚皮移植；网状组采用网状PADM＋自体刃厚皮移植；对照组单纯移植自体刃厚皮。每组24只大鼠。观察移植后2、4、6周各组创面愈合情况，计算移植物成活率和创面收缩率，并行组织学观察。结果 移植后2、4周，微孔Ⅰ、Ⅱ组移植物成活率均低于对照组（P〈0．05），但与网状组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；移植后6周，微孔Ⅰ、Ⅱ组成活率明显高于网状组（P〈0．05）。移植后4、6周微孔Ⅰ、Ⅱ组创面收缩率较对照组显著降低（P〈0．05），移植后6周[（16．0±2．6）％、（15．1±2．4）％]明显低于网状组[（19．3±2．4）％，P〈0．05]。组织学观察见各微孔组上皮化良好，胶原纤维排列整齐，基底膜结构完整。结论 孔间距为0．8mm或1．0mm的激光微孔PADM与自体刃厚皮复合移植可提高创面修复质量，其中孔间距1．0mm效果最佳。     

异种(猪)脱细胞真皮基质微粒注射填充研究

目的：探讨一种新型的注射填充材料，方法：将异种（猪）脱细胞真皮基质微粒（简称ADM微粒）注入兔耳背皮下并形成皮丘，定时对植入物进行测量，光镜及电镜观察，临床应用于4例面部凹陷畸形整复。结果：ADM微粒注射后从外围向中央细胞化及血管化，12周左右体积基本稳定，48周时吸收率为26．93％左右，临床应用结果满意。结论：ADM微粒安全性好，吸收率低、使用方便，微创。     

脱细胞真皮基质与自体刃厚皮片复合移植的临床及组织学观察

目的 观察异体脱细胞真皮基质与自体刃厚皮片复合移植修复创面的中、长期临床效果,并做组织学观察.方法 选取23例接受异体脱细胞真皮基质加自体刃厚皮片复合移植的患者,于术后3、6、12、18个月进行临床随访,并作组织学观察.结果 移植后3、6、12、18个月,复合皮表面平滑,无明显瘢痕增生及色素沉着现象,柔软有弹性,关节部位活动自如.组织学观察接近正常皮肤形态.结论 异体脱细胞真皮基质与自体刃厚皮片复合移植后愈合创面表面光滑,平整柔软,无明显挛缩,关节活动自如,未见明显排汗现象,可作为修复创面的良好选择.     

复合型脱细胞真皮基质的研究进展

脱细胞真皮基质作为一种良好的组织修补材料,现已在多学科领域得到广泛应用,但单纯脱细胞真皮基质却很难很好的满足多学科领域的不同要求.复合型脱细胞真皮基质是在脱细胞真皮基质结构基础上研发的新型生物材料,具有更加优良的特性,可以更好的满足不同的移植环境.本文对近几年复合型脱细胞真皮基质的研究进展作一综述.     

烧伤变性脱细胞真皮基质可再生利用的实验研究

目的 探讨烧伤变性脱细胞真皮基质(DADM)作为真皮替代物用于创面修复的可行性. 方法 (1)取12只Wistar大鼠,其中9只背部造成深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)创面,分别于伤后1、2、3d(每时相点3只)取创面全厚皮肤,用2.5 g/L胰蛋白酶-体积分数0.5％ Triton X-100行脱细胞处理制成DADM,相应称为DADM-1 d、DADM-2 d、DADM-3 d;余下3只大鼠不致伤,同法制备ADM作为对照.对ADM和各DADM行大体、组织学观察及微生物学和生物力学检测(极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率、应力-应变关系).(2)另取64只Wistar大鼠,按随机数字表法分为ADM组、DADM-1d组、DADM-2 d组、DADM-3d组,每组16只.于各大鼠背部制作一2.0 cm×1.8 cm大小皮瓣,将前述ADM和DADM-1 d、DADM-2d、DADM-3 d切制成1.8cm×1.5 cm大小后分别埋植于皮瓣下.术后1、3、5、9周,每组每时相点取4只大鼠,肉眼观察创面愈合情况及埋植物的变化,并对埋植物行组织学观察.对数据行单因素方差分析及t检验. 结果 (1)新鲜制备的各DADM呈乳白色,质地柔软有弹性,韧性较ADM弱.光学显微镜下见ADM和各DADM中均无上皮结构和细胞存在,DADM胶原纤维增粗程度不均匀,排列紊乱,嗜伊红性增强.各DADM微生物学检测结果均为阴性.DADM-1d、DADM-2 d、DADM-3 d之间极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率和应力-应变关系比较,差异均无统计学意义(F值为0.088～3.591,P值均大于0.05);其中DADM-3d此4项指标值最高,分别为(13.0±2.4) MPa、(61 ±4)N、(173±7)％、(45 7±2.0)％.ADM此4项指标各为(19.0±2.6) MPa、(95±4)N、(201±5)％、(62.5±2.2)％,与3种DADM两两比较均偏高(t值为6.424 ～17.125,P值均小于0.01).(2)埋植术后1周,各组大鼠创面无渗出或红肿,埋植物未收缩或卷曲;创面有炎性细胞浸润并有Fb及毛细血管长入.术后3周时,DADM-1d、DADM-2 d、ADM组埋植区毛发生长正常,DADM-3 d组埋植区毛发较稀疏;各组炎性细胞减少,Fb增多,有新生小血管长入,DADM-3 d组炎性细胞减退稍延迟.术后第5周,各组埋植区毛发恢复正常,埋植物收缩、变薄,表面纤维膜包裹紧密,有较大血管束长入;各组真皮基质与周围正常组织融合.术后第9周,ADM和DADM均为薄、软白色组织片,与皮瓣内面连接紧密;各组无炎性细胞浸润,胶原纤维排列规则、致密,与正常胶原组织融合. 结论 烧伤DADM无明显免疫原性,生物相容性好,经离体改造有望成为创面修复治疗中的真皮替代物.     

异种(猪)脱细胞真皮基质与自体皮复合移植的临床应用

目的：观察基底良好的深度创面用异种（猪）脱细胞真皮基质与自体皮复合移植的临床疗效。方法：2000年1月-2002年2月用异种（猪）真皮基质与自体薄片复合移植（二步法）修复基底良好的深度创面52例。结果：37例（71.1%）植皮完全成活，15例（28.9%）植皮95%以上成活，无一例补植皮。随访3-6个月复合移植皮肤颜色、质地基本接近于正常皮肤，瘢痕增生不明显。结论：异种（猪）真皮基质可推广应用于修复基底良好的深度创面的复合移植。     

含银异种脱细胞真皮基质的实验研究

目的了解含银异种脱细胞真皮基质(Xeno-ADM)的多项生物学性状,观察其移植效果。方法制备单纯xeno-ADM,再用2 g／L硝酸银浸泡,制成含银xeno-ADM。检测两种xeno-ADM对笔者单位烧伤患者创面常见菌的抑菌效果,并进行组织学观察;测量含银xeno-ADM的Ag+含量。在27只家兔背部制作全层皮肤缺损创面,分为A、B、C组,每组9只。A组移植自体刃厚皮,B组移植单纯xeno-ADM+自体刃厚皮,C组移植含银xeno-ADM+自体刃厚皮。术后2、4、6周取移植部位皮肤标本作形态学观察,并计算创面收缩率;术后2周计算移植皮片(未)成活率,并检测各组家兔淋巴细胞增殖活性。结果(1)含银xeno-ADM对创面常见菌的抑菌效果明显优于单纯xeno-ADM (P<0．05)。两种xeno-ADM中的表皮已完全除去,胶原纤维粗细均匀、排列规则、无明显变性,真皮中无细胞及细胞碎片。含银xeno-ADM的Ag+含量为(2．7±0．7)mg／g。(2)术后6周,A组家兔移植皮片呈暗红色,挛缩明显,易破溃,胶原纤维排列紊乱;B、C组移植皮片颜色接近周围正常皮肤,光滑无瘢痕,质地良好,胶原纤维排列有序,表皮-真皮连接结构和基底细胞桥粒、半桥粒结构以及基底膜重建明显。术后2、4、6周,A组家兔创面收缩率均明显高于B、C组(P<0．05);B、C两组创面收缩率相似(P>0．05)。术后2周,C组皮片完全成活率为91．7％,显著高于A组(77．8％)及B组(80．6％);3组家兔淋巴细胞增殖活性相似(P>0．05)。结论含银xeno-ADM脱除了基质中有免疫原性的细胞成分,保留了组织的基本结构和完整的胶原纤维支架,且具有较好的局部抗菌效果,不失为一种良好的真皮替代物。     

低浓度胰蛋白酶消化加反复冻融法制备猪脱细胞真皮基质

目的建立一种新的制作脱细胞猪真皮基质的方法。方法采用0．5g／L胰蛋白酶消化断层猪皮，去除表皮和真皮中部分细胞成分，然后反复冻融进一步去除真皮内残留的细胞成分。分别行大体观察、组织学观察及免疫组织化学等检测。结果制备的猪脱细胞真皮基质内细胞成分可被完全去除，表面保留完整的基底膜，胶原结构排列紧密。结论低浓度胰蛋白酶消化加反复冻融，是制备异种脱细胞真皮基质较为简便、有效的方法。