探讨小儿肠道病毒（EV）中枢神经系统感染的临床特点

目的：观察分析小儿肠道病毒(EV)中枢神经系统感染的临床特点。方法选取该院2014年2月—2015年2月70例无菌性中枢神经系统感染患儿,检测其脑脊液标本,分析其中49例肠道病毒中枢神经系统感染患儿临床特点。结果共检出EV感染49例(70.00%),17例脑炎,32例脑膜炎;脑炎患儿临床表现为发热、头痛、呕吐,3例柯萨奇病毒B3型脑炎患儿病情危重,治疗后1例康复,2例遗留后遗症;脑膜炎患儿主要表现为发热、呕吐、头痛、腹泻、畏光、乏力、肌痛,治疗后全部康复。结论小儿中枢神经系统感染常见病原体为肠道病毒,脑膜炎和脑炎症状较轻,预后良好,重症脑炎可遗留不同程度后遗症。     

汕头市人群肠道病毒（十四型）中和抗体测定

对１７２份人群血清进行了肠道病毒十四型中和抗体测定。结果各类型病毒中和抗体阳性率和抗体几何平均滴度（ＧＭＴ）分别为：柯萨奇病毒Ｂ１～６型在３．５～１６．９％和５．１２～５．９２之间；埃可病毒６、９、１５、１９、２４、２５、２７型在１７．４～３４．３％和６．０７～９．０３之间；肠道７１型病毒２６．２％和６．６３。不同年龄组间抗体阳性率比较，经ｘ２检验结果：柯萨奇Ｂ２型、埃可６型、２７型和肠道７１型四个型差别无显著性（Ｐ＞０．０５），其余十个型其差别有显著或高度显著性（Ｐ＜０．０５）。     

广东地区新生儿肠道病毒感染的高危因素分析

目的通过对广东地区流行季节的发热新生儿肠道病毒感染临床特点及高危因素探讨,对高危患儿采取有效防治措施。方法以2019年5月—10月广东省妇幼保健院门诊因发热收治入院的诊断为肠道病毒感染28例新生儿为研究对象,回顾性分析这些患儿的临床资料,分析新生儿肠道病毒感染的高危因素。结果因发热收治入院的新生儿检测后肠道病毒感染发病率达38. 3%,热峰高于38. 5℃,发热持续时间大于3 d、细菌培养阴性是新生儿肠道病毒感染的高危因素。结论在肠道病毒流行季节,对发热新生儿均应常规进行肠道病毒检测,肠道病毒感染患儿,经过有效的治疗后,能够取得较好的治疗效果,但需及时控制病毒的传播途径,针对相关危险因素进行有效的控制,从而降低发病率。     

肠道病毒71型疫苗候选株和疫苗标准的研究

肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）属小RNA病毒科肠道病毒属,主要引起手足口病（hand-foot-and-mouth disease,HFMD）和中枢神经系统疾病。1969年在美国加里福尼亚分离出首株EV71[1]。近年来EV71在亚太地区持续流行[2-9],特别是1998年在中国台湾地区大流行后,开始引起人们的重视。我国大陆地区2008—2010年报告的HFMD病例数、严重病例和死亡数呈逐年上升趋势,     

1株肠道病毒71型毒株的分离与鉴定

目的 探讨手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的分离与鉴定方法。方法 采集手足口病疑似病例的咽拭子标本1份接种于人横纹肌肉瘤细胞(rhabdomyosarcoma cell, RD细胞),通过观察病毒的细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)来分析EV71的分离效果。分别利用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹分析(Western Blotting)方法来鉴定EV71病毒特异性核酸和蛋白。扩增EV71VP1区全长基因,对其序列进行同源性比较及遗传进化分析。结果 手足口病疑似病例咽拭子标本接种RD细胞传代至第2代后出现CPE。RT-PCR和Western Blotting检测结果均显示,感染组RD细胞中有EV71病毒特异性条带,暂命名为EV71分离株2016SHYP001。序列分析结果显示,2016SHYP001株病毒的VP1区核苷酸与C型代表株的同源性较高,为93.1%~98.3%;其中与C4a亚型代表株的同源性最高,为98.3%。进化树分析发现本地流行株与深圳地区流行株的亲缘较近。结论 成功分离出一株新的EV71病毒株2016SHYP001,其株型为C4a亚型。     

肠道病毒基因实时定量RT—PCR方法的建立

肠道病毒感染可引发众多疾病 ,并可暴发流行 ,导致死亡 ,严重危害人类健康。该病毒是病毒性心肌炎的主要病原体 ,新近又发现该病毒的持续感染与扩张性心肌病有关[1] 。因此 ,及早发现病毒感染和治疗具有非常重要的意义。本研究建立了肠道病毒的实时、定量ＲＴ ＰＣＲ检测方法 ,制备了肠道病毒ＲＮＡ的检测试剂盒 ,为肠道病毒感染的诊断及随访提供了有效的检测手段。材料和方法材料　ｐＵＣｍ Ｔ克隆试剂盒购自上海博彩公司 ,ｐＳＰ 72载体购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。逆转录酶、Ｔａｑ酶购自ＰＥ公司 ,内切酶购自Ｎｅｂ公司。Ｔｒｉｚｏｌ购自…     

漳州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征分析

目的了解漳州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征。方法对2010年漳州市的5株肠道病毒71型分离株进行VP1区基因全长序列测定,测序结果利用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,并用Mega4．0软件构建系统发生树。结果5株肠道病毒71型分离株的VP1区核苷酸序列全长均为891bp,且与2008年安徽阜阳流行株Fuyang．Anhui．P．R．C-17．08-2的VP1区核苷酸序列同源性和氨基酸序列同源性最高,分别为98．2％-98．8％和99．7％-100．0％。5株肠道病毒71型分离株间的核苷酸序列同源性为97．2％-99．8％．氨基酸序列同源性为99．3％～100．0％。氨基酸在98位和218位这两个位点发生了特异性变异。VP1区基因遗传进化分析表明,漳州市所有分离株均属于C4基因亚型的C4a进化分支。结论5株肠道病毒71型分离株均属于C4基因亚型的C4a进化分支．与2004年以来的中国大陆EV71病毒流行的基因型完全-致。     

肠道病毒感染和克山病病因关系的探讨

先后采用长片段RT-PCR、间接酶联免疫吸附法(ELISA)以及特异性柯萨奇病毒B3RT-PCR对四川省冕宁县、喜德县、德昌县克山病病区潜、慢型克山病患者血清中肠道病毒、血清中CVB1-6.IgM和CVB1-6IgG及血清IgM或IgG阳性者血中的柯萨奇病毒B3分别进行检测.结果显示①肠道病毒检出率较高,为60%;②潜在型、慢型克山病组血清CVB1-6IgM抗体阳性率明显高于健康对照组(33 % v50%,P＜0.05).结果提示病区潜、慢型克山病患者有肠道病毒感染存在,且有反复发作的现象.     

1株肠道病毒71型南京分离株的全基因组序列的测定及遗传进化分析

［摘要］目的: 对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）南京分离株EV71-NJ2012全基因组核苷酸序列进行测定,并与基因库中的代表性序列进行分析比对。方法: 登录基因库,选取不同国家和地区的EV71全基因组序列,设计8对覆盖病毒整个基因组且首尾部分重叠的引物,采用RT-PCR扩增出8个基因片段,通过测序和拼接获得全基因组序列,并与国内外其他EV71分离毒株一起用MEGA 4.0软件进行进化树分析,用DNAStar进行同源性分析。结果： EV71-NJ2012株的基因组长度为 7 404 bp, 其中5′非编码区(UTR)长742 bp, 3′UTR长82 bp,病毒基因组开放阅读框(ORF) 全长6 582 bp, 编码一个含有2 193个氨基酸残基的多聚蛋白。病毒序列在分型上属于C4a基因型,与上海株的核苷酸同源性最近,而与我国台湾、湖北等分离株的核酸序列差异较大。结论： EV71-NJ2012株基因组的组成和结构符合肠道病毒特征,与上海株亲缘关系最近,而与我国台湾、湖北分离株的差异较为明显。EV71-NJ2012株可能与上海株来源于EV71病毒株的同一种系。     

扩张型心肌病心肌组织中肠道病毒感染与趋化因子mRNA表达的关系（摘要）

目的 探讨病毒感染与趋化因子表达的改变在扩张型心肌病发病中的作用。方法 利用RT-PCR方法检测12例原位异体心脏移植的扩张型心肌病受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中Evs-RNA的存在以及趋化因子RANTES、MCP-1、FKN及其受体US28的表达水平。结果 在病理学证实的12例扩张型心肌病心肌组织中有7例Evs-RNA阳性。25％(3／12)心肌组织中MCP-1mRNA的表达明显增高，经DNA同源序列分析，与人JE MCP-1同源性为97％。而正常对照心肌组织中病毒基因及趋化因子检测均阴性。结论 肠道病毒感染可能会改变趋化因子的表达水平，而趋化因子的异常表达在扩张型心肌病发生发展中可能起重要作用。     

广州市5757例手足口病肠道病毒与气候因素的相关性

目的探究气候因素对手足口病肠道病毒感染的影响。方法收集2009～2011年广州市的气候及某医院实验室诊断手足口病病例数据,应用单因素相关、多元线性回归检验气候因素与各肠道病毒报告例数之间的关联,并应用亚组分析探索影响的滞后作用。结果单因素分析结果表明周平均气温、湿度和露点与EV71、Cox A16和其他肠道病毒周报告例数存在正相关性,气压成负相关（P〈0.05）。控制其他气候因素后,湿度、气温分别与EV71、Cox A16和其他肠道病毒例数有显著性联系,且亚组分析证实与2～3周后的例数关联最强（P〈0.05）。结论气候因素,尤其湿度、气温可影响手足口病肠道病毒感染,在高热高湿度的季节,预防控制措施更可减少感染手足口病肠道病毒的危险性。     

2009年肠道病毒71型广州分离株的全基因组序列分析

目的分析2009年肠道病毒71型广州分离株GZHY09的全基因组序列,并与GenBank中的序列进行分析比对。结论从GenBank上选不同地区的EV71全基因组序列,设计相互重叠的覆盖病毒整个基因组序列的12对引物,采用RT-PCR扩增出12个基因片段,通过测序获得全基因组序列,并参考国内外各EV71基因型的分离毒株,用MEGA4软件进行进化树分析,用DNAStar软件中的MegAlign进行同源性分析。结果 12个重叠基因片段序列拼接获得EV71全基因组序列,共7404个核苷酸,同源性分析结果表明在VP1区,GZHY09株与中国大陆的Anhui08、Zhejiang08、Shenzhen08的核苷酸序列同源性比较高,其中以Anhui08最高(97.7%)。结论 GZHY09属EV71病毒的C4亚型,与近年我国大陆地区流行的EV71株在进化上属于同一基因型,与Anhui08、Zhejiang08、Shenzhen08具有高度的同源性。     

抗生素S632A3在体外抗肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV—1）作用的初步研究

目的：体外测定抗生素S632A3抗肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用,为筛选新型抗病毒药物提供参考依据。方法：用不同稀释度的抗生素S632A3抑制3种肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型对Vero细胞的感染作用,48h后观察细胞病变效应,并用MTT法测定细胞活性。结果：抗生素S632A3能明显抑制肠道病毒及疱疹病毒对Vero细胞的致病变作用,使细胞存活率较高。结论：该药物有较显著的抗肠道病毒及单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用,且对细胞的毒性很低,是一种具有潜在开发前景的药物。     

人肠道病毒71型感染致重症手足口病的危险因素分析

目的 探讨肠道病毒71型感染导致重症手足口病的危险因素。方法 选取2015年5月至2017年10月间我院感染科收治的EV71型手足口病患儿140例为研究对象,依据临床分期标准分为普通病例组95例和重症病例组45例,收集并比较两组患儿一般资料、临床表现、实验室指标等,采用多因素Logistics回归分析判断影响手足口病重症化的危险因素。结果 两组患儿的性别、年龄、BMI间比较差异无统计学意义（P>0.05）;两组患儿的ALT、AST、脑脊液葡萄糖浓度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但重症病例组的WBC [（12.65±3.51）×10⁹/L vs （9.16±3.44）×10⁹/L]、CRP[（10.67±4.75）mg/L vs（6.58±3.04） mg/L]、热程[（7.46±2.21）d vs（2.93±1.22）d]、热峰[（38.91±0.35） ℃ vs（38.34±0.45） ℃]、血糖[（8.40±0.78） mmol/L vs（5.96±1.14） mmol/L]、CK-MB[（17.84±1.57）U/L vs（15.75±1.64）U/L]、NP[53.47（31.50~70.22）% vs 46.89（29.44~67.01）%]、肢体抖动（37.78% vs 9.47%）、脑脊液蛋白质浓度[319.63（211.40~463.53）mg/L vs 224.82（172.24~396.91）mg/L]、脑脊液细胞数[（18.74±5.62）×10⁶/L vs （4.87±2.03）×10⁶/L]均较普通病例组显著升高,脑脊液氯化物水平[（117.52±2.84）mmol/L vs （119.75±3.09）mmol/L]较普通病例组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）;多因素Logistics回归分析发现,热程延长（OR=8.812）、热峰升高（OR=682.359）、血清CRP（OR=1.920）、CK-MB水平升高（OR=6.299）以及脑脊液蛋白质浓度升高（OR=1.014）是手足口病重症化的独立危险因素（P<0.05）。结论 EV71感染手足口病重症化与患儿年龄、性别无关,与热程、热峰、CRP、CK-MB、脑脊液蛋白质浓度呈正相关,可作为判断EV71感染手足口病重症化的独立危险因素。     

影响重症肠道病毒71型感染手足口病患儿并发脑炎的相关因素回归分析

目的：探讨影响重症肠道病毒71型（EV71）感染手足口病患儿并发脑炎的相关因素,有利于缓解患儿病情进展程度,改善预后,降低其死亡风险。方法：回顾性分析2015年1月—2022年1月惠州市第一妇幼保健院收治的148例EV71感染手足口病患儿临床资料,以是否并发脑炎,将并发脑炎患儿分为研究组（n=66）,未并发脑炎患儿分为对照组（n=82）。采用logistic回归模型分析患儿并发脑炎与性别、年龄、精神状态、神经反射异常、呼吸道感染、口腔溃疡、白细胞（WBC）计数、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平及淋巴细胞计数的关系。结果：logistic回归分析结果显示,呕吐（OR=3.441）、空腹血糖（升高）（OR=1.811）、体温≥39℃（OR=4.933）、呼吸异常（OR=14.055）、肢体抖动（OR=7.478）、频繁惊跳（OR=10.935）、呼吸道感染（OR=4.845）及淋巴细胞计数升高（OR=5.280）是导致重症EV71感染手足口病患儿并发脑炎的独立危险因素。结论：呕吐、空腹血糖（升高）、体温≥39℃、呼吸异常、肢体抖动、频繁惊跳、呼吸道感染及淋巴细胞计数升高是影响重症EV71感...     

遵义市手足口病危险因素及患儿关联场所的肠道病毒污染状况调查

目的探讨遵义市手足口病发病危险因素及患儿关联的公共场所的肠道病毒污染状况。方法 2012年6月6~12日在遵义市城区的3家医院采用成组病例-对照研究方法现场调查手足口病发病危险因素,资料用SPSS 18.0进行单因素和多因素Logistic回归分析,对患儿关联的公共场所进行涂抹采样,用实时荧光PCR检测人肠道病毒。结果近1周手足口病接触史(OR=11.43,95%CI:1.84~70.84)是手足口病发病的危险因素,看护人便后洗手(OR=0.11,95%CI:0.01~0.94)和看护人护理小孩前洗手(OR=0.11,95%CI:0.02~0.54)是手足口病发病的保护因素。共采集94份涂抹样,7份检出其他肠道病毒,检出率7.45%,其中医院观察室护士手阳性率16.67%(1/6),医院门诊/观察室地面阳性率7.69%(1/13),医院门诊/观察室门把手阳性率33.33%(2/6),医院门诊/观察室椅子阳性率16.67%(1/6),接种医生手阳性率14.29%(1/7),幼儿园桌面阳性率16.67%(1/6)。结论遵义市儿童聚集场所存在肠道病毒污染,接触传播是手足口病主要传播方式之一。应妥善管理传染源,针对婴幼儿看护人开展健康教育,做好儿童聚集场所的消毒,对控制手足口病意义重大。     

肠道病毒71型温度适应性进化对毒株毒力的影响研究

目的 研究EV71病毒温度适应性进化过程中的毒力变异,为相关手足口病的防控提供参考。方法 以EV71姊妹株（谱系#100、#101）亲代株、各温度适应株分别感染Vero细胞,进行噬斑实验验证、CCK-8细胞毒性实验、Vero细胞感染后宿主蛋白质组学研究,确认表型差异、比较不同毒株细胞抑制率,质谱检测并分析宿主细胞差异表达蛋白的功能。结果 确认Vero细胞感染热适应株（谱系#101）后发生噬斑变异;各温度适应株细胞抑制率较亲代株均有增长,但增幅不同。聚类分析与主成分分析显示,Vero细胞感染后宿主蛋白质组表达热适应株与亲代株、冷适应株与常温适应株分别具有相似性,组间差异表达蛋白500种（上调蛋白239种,下调蛋白261种）;其中上调蛋白功能与转录后蛋白修饰等功能有关,下调蛋白则与SRP依赖性共翻译蛋白的膜定位/易位、逆蛋白转运有关。结论 EV71病毒在温度适应性进化中可能伴随毒力变异,其作用机制有待进一步研究。     

木犀草素对肠道病毒71型感染细胞的影响

目的: 探讨木犀草素体外抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染的机制。方法: 分别用0、25、50、100、200、400 μg /mL木犀草素处理人横纹肌肉瘤（RD）细胞,48 h后检测细胞存活率;另将RD细胞分为对照组(常规培养)、木犀草素组(25、50、100 μg/mL)、EV71感染组和木犀草素(25、50、100 μg/mL)+EV71感染组,于病毒感染48 h后,MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测Caspase-3表达,ELISA法检测细胞TNF-α,IL-β,IL-6和IL-10浓度。结果： 与0 μg/mL相比,25、50、100 μg/mL木犀草素对RD细胞存活率无明显影响(P>0.05);25、50和100 μg/mL木犀草素+EV71感染组RD细胞存活率均明显高于EV71感染组(P均<0.05);与EV71感染组相比,木犀草素+EV71感染组细胞凋亡率和Caspase-3表达明显降低,TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10分泌明显减少(P均<0.05)。结论： 木犀草素可能通过抑制细胞凋亡和减少促炎症因子分泌,抑制EV71对细胞的感染。