格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响．方法：MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率,流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达,Western blotting检测蛋白表达．结果：联合应用两种药物后细胞存活率明显下降,凋亡比例略下降,细胞周期阻滞于G0／G1期,cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调．结论：两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降,联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用,进入凋亡途径细胞减少。     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

六亚甲基二乙酰胺的合成及对癌细胞的抑制作用

用化学方法合成了六亚甲基二乙酰胺(HMBA),并观察本品在体外对小鼠粒细胞白血病的抑制和促分化作用。结果表明,HMBA在1～5mmol/L浓度范围内对该细胞有明显的抑制作用,但从形态学观察未见明显的促分化作用。     

六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞增殖的影响

目的：探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对人粘液表皮样癌细胞的增殖抑制作用。方法：用2mmol/L HMBA对培养的粘液表皮样癌细胞体外诱导后,分别采用MTT比色试验、光学显微镜、免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的增殖活性进行检测。结果：MTT比色试验显示,HMBA处理的粘液表皮样癌细胞较未处理的细胞增殖活性明显降低。增殖细胞核抗原（PCNA）的表达HMBA处理组明显低于对照组（P＜0.01)。结论：HMBA能够明显抑制粘液表皮样癌细胞的增殖。     

白血病细胞获得性耐药的干预对策研究

白血病耐药性是白血病治疗中的难点，也是目前白血病治疗研究领域的热点之一。本研究项目以人白血病多药耐药细胞K562／ADM细胞为模型，通过系列系统研究工作，提出和建立了白血病细胞获得性耐药的逆转、分化诱导、促凋亡和预防的综合干预策略，取得了如下主要成果。     

五种抗癌药物对人舌癌细胞株抗增殖作用的研究

口腔颌面部恶性肿瘤的化学治疗是综合治疗手段之一 ,对化疗药物的选择直接影响疗效。由于肿瘤的异质性 ,即使同一组织来源的肿瘤 ,由于不同个体 ,不同部位或病期对药物的反应性也不一样 ［１］,临床选用化疗药物应达到个体化。化疗药物敏感试验有助于临床医生合理用药 ,有效地发挥化疗药物对肿瘤细胞的杀伤力 ,降低肿瘤复发率和延长患者生命。本研究采用ＭＴＴ法、结晶紫染色法通过测定细胞活性／细胞数 ,绘制量效关系图 ,计算细胞增殖抑制率 ,评价紫杉醇、平阳霉素、羟基喜树碱、顺铂和表阿霉素对舌癌细胞株Ｔｃａ８１１３化疗敏感性 ,为最…     

莪术油对白血病细胞株的体外抑制作用

【目的】通过比较莪术油对白血病细胞株HL-60和K562抑制作用的敏感性,评估该药物用于治疗白血病的临床意义及价值。【方法】取HL-60、K562细胞传代接种于96孔板,同时每孔分别加入不同浓度的莪术油液100μL(终浓度分别为400、200、100、50mg/L);空白对照组加入100μL含体积分数为1％吐温80的RPMI-1640培养液。药物和细胞作用24、48、72 h后,每孔加入四氮唑化物(MTT)10μL(5g/L),37℃孵育后于570nm波长处用酶联免疫检测仪测其D值,计算细胞生长抑制率(R_1)。【结果】莪术油对HL-60、K562细胞的生长抑制作用随着作用时间的延长明显增加,24、48、72 h的抑制率之间差异有显著性(P<0.01);莪术油对HL-60、K562细胞的生长抑制作用随着药物浓度的增加而增加,400、200、100、50mg/L的抑制率比较有显著性差异(P<0.01)。但莪术油对HL-60、K562两种细胞的生长抑制作用比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】莪术油对HL-60、K562细胞的生长有抑制作用,且其抑制作用与药物浓度和作用时间相关。     

盐酸聚六亚甲基胍消毒洗手液的亚急性毒性研究

目的对0．3％盐酸聚六亚甲基胍（PHMB）的消毒洗手液进行了哺乳动物的亚急性毒性试验,以研究消毒剂多次接触对实验动物的蓄积毒性作用及其靶器官,并为亚慢性、慢性毒性或致癌试验的剂量设计提供依据。方法试验依据卫生部的《消毒技术规范》（第2002版）消毒产品毒理实验规范,选用SPF级的sD大鼠,进行大鼠急性经口毒性LD50试验、亚急性毒性试验。结果大鼠急性经口毒性试验ID50〉5000mg/kg·BW,属实际无毒级;亚急性毒性试验,一般生理体征无异常,对大鼠生长曲线无明显影响,血常规指标无异常,生化指标无异常,脏体系数无异常,脏器组织病理学检查未发现异常。结论0．3％盐酸聚六亚甲基胍消毒洗手液为实际无毒级,亚急性试验各指标无异常。     

水飞蓟宾对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其机制研究

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,Slybin)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抗增殖作用及其机制.方法 MTT法观察水飞蓟宾对细胞增殖的抑制作用,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布及凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态和超微结构的变化.结果水飞蓟宾可明显抑制HepG2的增殖,经水飞蓟宾作用后PCNA及Ki-67的表达显著减弱(P<0.01);水飞蓟宾可使实验组细胞阻滞于G2/M期,并产生明显凋亡(P<0.05);光镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,电镜可见凋亡及凋亡小体.结论水飞蓟宾可通过下调HepG2中PCNA及Ki-67蛋白的表达,改变细胞周期进程,诱导细胞凋亡来发挥其增殖作用.     

FAM172A蛋白对人胚胎肾细胞凋亡及增殖的影响

目的 研究与糖尿病大血管病变有关的新蛋白FAM172A对人胚胎肾细胞(HEK293细胞)凋亡及增殖的影响.方法 以前期研究工作中所构建的pDrive-FAM172A质粒为模板,通过PCR方法扩增出人FAM172A基因编码框,将扩增产物亚克隆到PDC315真核表达载体,经酶切、测序鉴定,选择插入序列正确的PDC315-FAM172A质粒用脂质体2000转染HEK293细胞,同时用PDC315空质粒作为对照转染HEK293细胞.用噻唑蓝(XTT)法、生长曲线法观察过表达FAM172A基因对HEK293细胞增殖的影响.用碘化丙啶(PI)单染色法、膜联蛋白V/PI双染色法观察过表达FAM172A基因对HEK293细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 成功构建PDC315-FAM172A真核表达载体,经酶切、测序证实插入序列正确.与PDC315质粒转染相比,XTT显示PDC315-FAM 172A质粒转染使细胞增殖增加约52%(A值为0.21±0.07比0.32±0.06,P<0.01);生长曲线显示PDC315-FAM172A质粒转染使HEK293细胞生长速度增快;PI单染色法显示PDC315-FAM172A质粒转染使细胞凋亡减少约38.5%(分别23.79%±1.36%比14.64%±0.95%,P<0.01),同时G0～G1期细胞明显减少(分别66.79%±1.73%比58.16%±0.75%,P<0.01)而S期细胞明显增加(分别22.62%±1.16%比33.56%±0.94%,P<0.01);膜联蛋白V/PI双染色法显示PDC315-FAM172A质粒转染使早期凋亡细胞减少约28%(13.63%±0.56%比9.79%±0.39%,P<0.01),晚期凋亡细胞减少约29%(7.70%±0.29%比5.43%±0.29%,P<0.01).结论 FAM172A蛋白促进HEK293细胞增殖、抑制凋亡、促使细胞进入S期,提示FAM172A蛋白的生理功能之一是参与细胞生长的调控,这为深入研究FAM172A蛋白的生理功能及在糖尿病大血管并发症中的作用提供了线索.     

小白菊内酯对白血病干细胞增殖和细胞周期的调节作用及分子机制探究

目的:研究小白菊内酯对白血病干细胞增殖和细胞周期的调节作用及可能分子机制.方法:培养白血病干细胞,用不同浓度的小白菊内酯处理后检测细胞活力、细胞周期以及相关基因的mRNA含量.结果:(1)细胞活力和周期:小白菊内酯能够剂量依赖性地降低白血病干细胞的MTT值,20 μmol/L小白菊内酯能够增加G2/M期的细胞比例,减少G0/G1期和S期细胞比例;(2)增殖和细胞周期调节基因:小白菊内酯能够剂量依赖性地降低c-myc、bcl-2、cyclinA1、cyclinE的mRNA含量;(3)信号通路:小白菊内酯能够剂量依赖性地降低基质细胞衍生因子1(SDF-1)及配体趋化因子受体CXCR4的mR-NA含量.结论:小白菊内酯能够抑制白血病干细胞的增殖过程并使细胞周期停滞于G2期,可能的分子机制是抑制c-myc、bcl-2、cyclinA1、cyclinE表达以及SDF-1-CXCR4信号通路.     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞生物学影响的体外研究

目的:了解釉基质蛋白对人牙周膜细胞的增殖、矿化、蛋白合成及超微结构的影响。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,茜素红染色进行细胞表型的鉴定;采用细胞增殖试剂盒及流式细胞仪检测釉基质蛋白对人牙周膜细胞增殖及细胞周期的影响;BCA蛋白定量试剂盒分析釉基质蛋白对牙周膜细胞蛋白合成的影响;并用透射电镜观察牙周膜细胞超微结构的改变;免疫组化染色观察釉基质蛋白作用下对牙周膜细胞骨涎蛋白和骨桥蛋白表达的影响。结果:釉基质蛋白可促进牙周膜细胞增殖,促进牙周膜细胞DNA的合成,使牙周膜细胞周期的G1期细胞所占百分比降低,而S期细胞所占百分比升高,并可提高牙周膜细胞蛋白总量,透射电镜观察可见经釉基质蛋白作用后的牙周膜细胞胞浆丰富,与蛋白合成相关细胞器粗面内质网及高尔基体发达,釉基质蛋白可促进牙周膜细胞矿化相关蛋白骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达。结论:釉基质蛋白能促进牙周膜细胞增殖、蛋白合成及矿化相关蛋白骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达,促进牙周组织的再生。     

槲皮素对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的初步研究

目的观察槲皮素对系膜细胞增殖及凋亡的影响。方法用M IT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果在5~30μm o l/L浓度范围内槲皮素能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,可使G0~G1期细胞增多,S期细胞减少,而高浓度的槲皮素能诱导系膜细胞的凋亡。结论槲皮素可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0~C1期;并且槲皮素有诱导系膜细胞凋亡的作用。     

外源性透明质酸酶对人乳癌细胞株体外增殖的影响

目的:探讨外源性透明质酸酶(Hyaluronidase,Hyase)对人乳癌细胞株增殖的影响.方法:应用MTT法和流式细胞仪观察外源性Hyase对人乳癌细胞株增殖率及细胞周期分布的影响.结果:ZR-75-30细胞株实验组A值(0.674±0.221)明显高于对照组(0.563±0.046),P＜0.05;实验组S期细胞百分率(%)为18.36±0.65,对照组为2.19±0.10;实验组G0/G1期细胞百分率(%)为44.49±4.33,对照组为62.14±26.97,两组比较均有显著性差异(P＜0.05).MDA-MB-435细胞株实验组A值(0.694±0.054)明显高于对照组(0.578±0.072),P＜0.05.MDA-MB-231细胞株实验组A值(0.736±0.059)明显高于对照组(0.637±0.046),P＜0.05.结论:外源性Hyase可能具有促进人乳癌细胞株增殖的作用.     

Effect of lumiracoxib on proliferation and apoptosis of human nonsmall cell lung cancer cells in vitro

Background Lumiracoxib is a highly selective cyclooxygenase-2 （COX-2） inhibitor with antiinflammatory, analgesic and antipyretic activities comparable with class specific drugs, but with much improved gastrointestinal safety. No studies have examined lumiracoxib for antitumorigenic activity on human nonsmall cell lung cancer cell lines in vitro or its possible molecular mechanisms. Methods The antiproliferative effect of lumiracoxib alone or combined with docetaxol on A549 and NCI-H460 lines was assessed by 3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay. Drug-drug interactions were analyzed using the coefficient of drug interaction （CDI） to characterize the interactions as synergism, additivity or antagonism. Morphological changes were observed by acridine orange fluorescent staining. Extent of apoptosis was determined by flow cytometry. Results Lumiracoxib （15-240 pmol/L） has an inhibitory effect on the proliferation of A549 and NCI-H460 cell lines in concentration- and time-dependent manners with the ICso values of 2597 pmol/L and 833 pmol/L, respectively. The synergistic effect was prominent when lumiracoxib （15-240 pmoVL） was combined with docetaxol （0.2-2 pmol/L） （CDI 〈1）. Fluorescent staining showed that lumiracoxib could induce apoptosis in A549 and NCI-H460 cells. Lumiracoxib treatment also caused an increase of the sub-G1 fraction in each cell line and resulted in an increase of G0/Gl-phase cells and a decrease of S-phase cells. Conclusions Lumiracoxib had antiproliferative effect on the human nonsmall cell lung cancer cell lines A549 and NCI-H460 and had a significant synergy with docetaxol, which may be related to apoptotic induction and cell cycle arrest.     

Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的研究

目的 探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的机制.方法 用不同浓度(0、1、5、10、50、100、500 nmol/L)的Ruxolitinib处理HEL细胞,其中0nmol/L为对照组.CCK-8法检测细胞活力;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;试剂盒检测Caspase-3/7活性;RT-PCR检测JAK2 mRNA水平;蛋白质印迹法检测p-JAK2、p-ERK、Bcl-2、Bim蛋白表达.结果 不同浓度Ruxolitinib作用HEL细胞48h后,细胞活力分别为(97.0±4.4)％、(92.0±3.9)％、(88.0±3.7)％、(81.0±3.1)％、(64.0±2.9)％、(38.0±2.2)％;Hoechst33342凋亡细胞染色显示100 nmol/L Ruxolitinib处理细胞48 h后,亮蓝色凋亡细胞[(49.21±1.80)％]较对照组[(10.02±1.40)％]增多(P＜o.05);流式细胞术结果显示100 nmol/L Ruxolitinib作用细胞48 h后G0/G1期细胞比率[(73.1±3.6)％]高于对照组[(45.2±3.0)％];1～500 nmol/L Ruxolitinib作用12、24 h后,HEL细胞线粒体膜电位降低,Caspase-3/7活性增强;RT-PCR结果显示,不同浓度Ruxolitinib处理HEL细胞48 h后JAK2 mRNA表达呈剂量依赖性减低;蛋白质印迹检测结果显示,实验组细胞p-JAK2、p-ERK、Bcl-2蛋白表达较对照组降低(均P＜0.01),Bim蛋白表达增加(P＜0.01).结论 Ruxolitinib可能通过抑制JAK2及ERK激酶途径诱导HEL细胞凋亡.     

环孢素对体外培养人系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的 观察环孢素A对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 对体外培养的人肾小球系膜细胞分别加入0.01,0.1,1,2,5 μmol/L的环孢素A,药物作用24 h,48 h,72 h后用MTT法检测细胞增殖,药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,同时每种方法均设立对照组(不加药物干预组).结果 ①环孢素A能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,以72 h抑制作用最为明显;不同药物浓度在作用24 h,48 h,72 h后,系膜细胞增殖与对照相比差异均具有统计学意义(P<0.05);②环孢素A可阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,且随着药物浓度的增加,G0/G1期所占百分比逐渐增高,S期所占百分比逐渐降低,且其差异与对照相比具有统计学意义(P<0.05);③高浓度环孢素A可促进系膜细胞的凋亡.结论 环孢素A可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0/G1期;并且环孢素A有诱导系膜细胞凋亡的作用.     

灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡、侵袭及KDR表达的影响。方法制备灵芝酸A,以人胶质瘤细胞细胞U251细胞为研究对象,根据细胞培养液所含灵芝酸A的不同浓度,将实验分为空白对照组(等量细PBS)、灵芝酸A低浓度组(0.1 mmol/L)和高浓度组(0.5 mmol/L)。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测KDR基因的表达,CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞技术(flowcytometry,FCM)检测各组细胞周期和凋亡情况,TUNEL染色检测各组细胞的的凋亡,细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力。结果 RT-PCR和Western blot显示,灵芝酸A高浓度组和低浓度组较空白对照组的KDR mRNA和蛋白表达都明显下降;灵芝酸A高浓度组和低浓度组细胞的生长速度明显减慢,降低G1期细胞比例,S期和G2/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P0.05);高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制KDR表达的作用更明显(P0.05)。结论灵芝酸A可诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡,抑制其增殖和侵袭能力,并能抑制Kdr DR mRNA和蛋白的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。