知母活性成分ZMR对慢性MPTP损伤小鼠模型的保护作用

目的 研究知母活性成分ZMR对慢性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)损伤小鼠模型黑质纹状体通路多巴胺神经元的影响.方法 C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、ZMR低剂量组和ZMR高剂量组.模型组、ZMR低剂量组和ZMR高剂量组小鼠经皮下注射MPTP及腹腔注射丙磺舒建立慢性MPTP损伤小鼠模型;建模开始1周后,ZMR低剂量组给予ZMR 10 mg·kg-1·d-1, ZMR高剂量组给予ZMR 26 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药60 d.各组小鼠分别进行Rotarod行为学测试,黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察,ELISA法测定纹状体内胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白含量.结果 与模型组比较,ZMR低剂量和高剂组的Rotarod行为学得分分别提高20.6%和23.8% (P<0.05);黑质TH阳性细胞分别增加104.1%和228.8%(P<0.05);纹状体GDNF蛋白水平分别提高99.0%和125.5% (P<0.01),纹状体BDNF蛋白水平分别提高76.8%和80.2%(P<0.01).结论 ZMR提高慢性MPTP损伤小鼠模型纹状体GDNF和BDNF蛋白水平,增加黑质TH阳性细胞数量,改善小鼠运动能力.提示ZMR对慢性MPTP损伤小鼠模型黑质纹状体通路多巴胺神经元具有保护作用.     

经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究

目的 研究经纹状体注射胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neumtrophic factor，GDNF）对帕金森病（Parklnson disease，PD）模型小鼠中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法 利用1-甲基-4-苯基1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）制备成年小鼠PD模型，通过单侧纹状体定位注射GDNF，取中脑黑质节段，做连续冠状石蜡切片，结合免疫组织化学染色方法，观察各组酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）、钙结合蛋白（calbindin D28k，CB）的表达，光镜观察并细胞计数，统计学分析。结果 在模型制备的第4,6天，单侧纹状体定位注射GDNF后，小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量显著多于注射PBS组。结论 经纹状体注射GDNF对成年PD小鼠黑质多巴胺能神经元具有保护作用，且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关。     

MPTP诱导影响亚急性与慢性帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元

目的:探索1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的亚急性与慢性帕金森病(PD)模型小鼠的黑质多巴胺能神经元改变.方法:采用MPTP诱导亚急性与慢性PD小鼠模型,分析小鼠酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目和小鼠行为学悬挂评分.结果:慢性与亚急性PD模型小鼠TH阳性神经元计数分别降至正常水平的21.02％与17.94％;且TH阳性神经元计数下降均早于行为学改变.结论:小鼠慢性模型比亚急性模型更接近帕金森病的病理与病程.     

MPTP对小鼠帕金森病造模条件探讨

目的观察不同剂量1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)对小鼠行为学及脑黑质酪氨酸羟化酶、纹状体多巴胺含量的影响,探讨MPTP致帕金森病(Parkinson′s disease,PD)样小鼠模型的最佳条件。方法C57BL小鼠分别给与MPTP不同剂量处理,测定各组小鼠爬竿时间检测动物运动协调性,应用免疫组化方法和高效液相法观察不同模型组多巴胺能神经元的变化。结果模型组各组均出现不同程度爬竿时间延长,酪氨酸羟化酶阳性细胞数减少和多巴胺含量减少。结论MPTP处理可造成小鼠的帕金森病样症状,在此种动物模型中,应根据科研目的选择MPTP的应用剂量和给药途径。     

氯化锂对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元保护作用的实验研究

目的研究氯化锂（LiCl）对KM小鼠中脑黑质受损伤的多巴胺（DA）能神经元的保护作用。方法利用1-甲基4-苯基1，2．3，6四氢吡啶（MPTP）腹腔注射构建帕金森病（PD）动物模型，将实验动物分为MPTP组、NS组（生理盐水组）、LiCl组、PBS组（磷酸盐生理盐水缓冲液组）。模型动物存活1周后，一部分取其中脑黑质节段，固定、包埋做连续冠状石蜡切片，以免疫组织化学染色方法，显示各组酪氨酸羟化酶（TH）和钙结合蛋白（CB）表达阳性细胞，光镜观察并细胞计数，统计学分析；另一部分取其中脑黑质组织匀浆，行TH、CB的Western blot免疫印迹方法检测．用LabWorks软件分析处理。结果免疫组织化学染色结果显示LiCl组、NS组小鼠黑质致密部TH与CB阳性神经元数量分别显著多于PBS组（P〈0．01）、MPTP组（P〈0．01）；Western blot免疫印迹结果显示LiCl组TH、CB表达水平显著高于PBS组（P〈0．05）。结论LiCl对成年PD小鼠黑质DA能神经元具有保护作用，且这种保护作用可能与细胞内CB表达增加有关。     

Genistein对MPTP致帕金森病去势模型小鼠多巴胺能神经元保护作用及其机制研究

目的研究大豆异黄酮活性成分genistein对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法雌性C57BL6小鼠行双侧去卵巢手术(OVX)后,分为对照组、MPTP组、genistein预处理组和雌激素预处理组。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色以及图像分析等技术分别对黑质致密带(substantial nigra pars compacta,SNpc)多巴胺转运蛋白(dopaminetransporter,DAT)、bcl-2等指标的mRNA及蛋白质的表达水平进行考察。结果 Genistein及雌激素用药组SN内DAT、bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平较MPTP组显著升高(P<0.01),差异有统计学意义。结论 Genistein对MPTP制备的PD模型小鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与抗凋亡有关。     

侧脑室注射腺病毒介导的GDNF基因对帕金森病的保护作用

目的探讨腺病毒介导的神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因脑内转移对帕金森病(PD)的保护作用。方法采用C57Bl/6小鼠1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-henyl-l,2,3,6-tetrahydropyridine,M PTP)法建立PD模型,随机分为重组GDNF腺病毒(Ad-GDNF)实验组和对照组。Ad-GDNF实验组将Ad-GDNF定向注射至侧脑室,对照组将无GDNF基因的腺病毒定向注射至侧脑室,并测量体质量,进行行为学实验评分,行中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色,高压液相色谱-电化学仪(HPLC-ECD)检测纹状体多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)及5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量,采用ELISA、RT-PCR法检测Ad-GDNF在中脑的表达。结果侧脑室注射病毒后2周,Ad-GDNF实验组体质量、行为学实验得分、黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞、纹状体DA含量均显著高于对照组(P<0.05);Ad-GDNF实验组在中脑内有过表达,中脑GDNF含量约是对照组2倍。结论侧脑室注射腺病毒介导的GDNF基因可减轻1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-henyl-l,2,3,6-tetrahydropyridine,M PTP)诱发的小鼠DA能神经元进行性变性,保护DA能神经元,提示这一手段在PD保护性治疗方面具有一定的应用价值。     

人参皂苷Rb1对MPTP诱导的帕金森病模型小鼠神经保护作用的初探

目的:探讨人参皂苷Rb1(GsRb1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病(PD)模型小鼠的神经保护作用及量效关系。方法:将50只C57BL/6小鼠随机分为5组,分别为对照组、MPTP组、GsRb1处理组(低剂量组、中剂量组和高剂量组),每组10只。模型组和处理组使用MPTP(30 mg/kg)连续腹膜腔注射5 d制备PD小鼠模型。处理组每天分别以10 mg/kg、20 mg/kg和40 mg/kg的剂量腹膜腔注射GsRb1;对照组给予等容量生理盐水。给药结束后第2 d,采用转棒实验、爬杆实验、悬挂实验等行为学方法检测小鼠的行为学变化。结果:与对照组相比,MPTP组小鼠掉落潜伏期显著降低(P<0.01),爬杆时间显著升高(P<0.01),悬挂实验评分显著降低(P<0.01)。与MPTP组比较,中、高剂量组掉落潜伏期明显升高(P<0.05);低、中剂量组爬杆时间明显降低(P<0.05);中、高剂量组悬挂实验评分明显升高(P<0.05)。结论:GsRb1对MPTP诱导的PD模型小鼠具有神经保护作用,每天给予20 mg/...     

N-cadherin在小鼠黑质多巴胺能神经元慢性损伤过程中的表达变化

目的 探索神经型钙黏蛋白(N-cadherin)在多巴胺能神经元慢性损伤中的可能作用.方法 采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射建立小鼠黑质多巴胺能神经元慢性损伤模型,采用免疫荧光染色和Western blot方法检测小鼠从实验第1周到第6周黑质酪氨酸羟化酶(TH)和N-cadherin的表达情况.结果 免疫荧光染色结果显示:对照组和MPTP组小鼠黑质的TH免疫阳性神经细胞在各时间点都同时表达N-cadherin.Western blot结果显示:①MPTP组小鼠黑质的TH表达量从第3周开始呈梯度下降(P<0.05);而N-cadherin表达量从第4周开始突然下降(P<0.05),但在第4到6周内的表达量虽有波动但差异无统计学意义(P<0.05).②虽然TH和N-cadherin的表达变化时程曲线似有区别,但相关分析显示两者之间仍存在正相关(r=0.924,P<0.05).结论 本研究证明多巴胺能神经元损伤影响了胞内N-cadherin的表达,影响程度虽与神经元的损伤程度有关,但并不完全一致,其内在关系有待进一步研究.     

Ghrelin 对MPTP小鼠帕金森病模型黑质TH、Bcl-2和Bax mRNA表达的影响

目的探讨Ghrelin对1-甲基-4苯基-1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）造成的黑质（SN）多巴胺能神经元损伤的保护作用及可能机制。方法小鼠随机分为对照组、MPTP组和Ghrelin＋MPTP组。腹腔注射MPTP制备帕金森病小鼠模型；Ghrelin＋MPTP组于MPTP注射前，侧脑室微量注射Ghrelin200ng，共8d；对照组以等量生理盐水取代Ghrelin和MPTP。应用半定量RT—PCR技术检测各组小鼠SN内酪氨酸羟化酶（TH）、Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。结果MPTP导致小鼠SN内TH mRNA的表达明显低于对照组（F=34．77，q=11．91，P〈0．01），Ghrelin预处理小鼠SN内TH mRNA表达量较MPTP组明显增加（q=5．05，P〈0．01）。MPTP导致小鼠SN内Bcl-2／Bax由对照组的1．13±0．03减少至0．47±0．06（F=111．59，q=17．58，P〈0．01），Ghrelin预处理小鼠Bcl-2／Bax明显高于MPTP组（q=18．94，P〈0．01），可恢复至正常水平。结论Ghrelin预处理对于MPTP造成的TH基因表达量减少有改善作用，该作用可能通过抗凋亡途径实现。     

中药知母质量控制方法研究

目的 建立HPLC-DAD同时测定中药知母中芒果苷、知母皂苷BⅡ的方法.方法 采用HPLC法,色谱柱为Hypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.01%磷酸水梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长191 nm和258 nm,柱温:30℃.结果 芒果苷的线性范围在2.944～6.624 μg,r=0.999 8;平均回收率为101.06%,RSD=1.61%(n=6).知母皂苷BⅡ的线性范围在18.080～40.680μg,r=0.9994;平均回收率为103.43%,RSD=1.43%(n=6).结论 3批样品测定结果表明,该方法简便准确,可用于知母中芒果苷、知母皂苷BⅡ2种成分的含量测定.     

知母对阴虚小鼠焦虑行为的影响

目的 观察知母对阴虚小鼠焦虑行为的影响,筛选活性物质并探讨其机制.方法 采用320 mg/kg甲状腺片混悬液对小鼠连续灌胃9d造阴虚模型,以高架十字迷宫和明暗箱装置观察阴虚模型小鼠焦虑行为状态.行为学测试结束后,立即断头处死,取脑,左右脑分别测定GABA和Glu的含量以及GABAAR1和NMDAR1表达.结果 ①小鼠高架十字迷宫实验进入开臂的时间比和次数比,阴虚模型组[(28.83±7.5)%,(24.1±4.0)%,n=10]较地西泮组[(40.6±4.9)%,(33.8±4.2)%,n=10]和醇提物中剂量组[(40.4±0.4)%,(35.0±3.3)%,n=10]显著减少(P<0.05);在明暗箱实验中,阴虚模型组穿箱次数[(17.5±1.6)次,n=10]较地西泮组[(18.7±0.8)次,n=10]和醇提物中剂量组[(18.6±1.4)次,n=10]显著减少(P<0.05).②小鼠脑内GABA含量,阴虚模型组[(24.45±4.96)μg/g,n=10]较地西泮组[(46.59±11.85)μg/g,n=10]和醇提物中剂量组[(48.97±9.14)μg/g,n=10]显著降低(P<0.05);Glu含量,阴虚模型组[(440.6±108.8)μg/g,n=10]较地西泮组[(208.5±77.88)μg/g,n=10]和醇提物中剂量组[(255.6±77.01)μg/g,n=10]显著升高(P<0.05).③与阴虚模型组比较,地西泮组和醇提物中剂量组小鼠脑内GABAAR1平均积分光密度值显著升高(P<0.05)、NMDAR1平均积分光密度值显著降低(P<0.05).结论 知母醇提物具有明显的抗焦虑作用,其机制可能与提高小鼠脑内GABA含量和GABAAR1表达,降低Glu含量和NMDAR1表达有关.     

盐知母HPLC指纹图谱的建立

目的：用HPLC法建立盐知母的指纹图谱,从整体上控制盐知母的质量。方法：采用Kromasil—C18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,以0．033％磷酸水溶液：乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长210nm,流量1．0ml／min,柱温：30℃。结果：建立盐知母的指纹图谱,共有10个共有峰,各色谱峰有较好的分离。结论：该指纹图谱方法简便、重现性好,为有效地控制盐知母的内在质量提供了一定的科学依据。     

知母提取物对地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的影响

目的探讨知母提取物对地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的影响。方法通过建立地塞米松诱发的大小鼠胃肠道机能紊乱动物模型,检测大鼠胃液量、胃液pH值、胃蛋白酶活力及胃壁结合黏液量和小鼠肠推进率及胃内色素残留率等指标考察知母提取物的药理作用。结果知母提取物能显著减轻地塞米松所致小鼠胃排空运动减缓,使给予地塞米松造模的大鼠胃液pH值显著增加,胃蛋白酶活力明显降低,胃壁结合黏液量也有明显增加趋势。结论知母提取物具有改善地塞米松致大小鼠胃肠机能紊乱的作用。     

知母药材的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱研究

[目的] 建立知母药材的高效液相色谱仪-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器联用(HPLC/PDA/ELSD)指纹图谱。[方法] 采用Waters Symmetry Shield^TM RP C18(5 μm,4.6 mm×250 mm )色谱柱,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸,梯度洗脱流速1.0 mL/min,柱温30 ℃,检测波长258 nm,ELSD检测器载气气压30 Psi,漂移管温度80 ℃。[结果] 建立了知母的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱,在HPLC-PDA色谱图中标定了17个共有峰,HPLC-ELSD色谱图中标定了14个共有峰。[结论] 该方法重复性好,可用于知母药材的全面质量控制。     

亳州栽培知母最佳采收期研究

目的考察亳州栽培知母的最佳采收时间。方法采用高效液相色谱-紫外光谱法和高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定不同采收期知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量。测定芒果苷的流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85),流速为0.8ml/min,柱温25℃,检测波长为317nm;测定知母皂苷BⅡ的流动相为乙腈-水(25∶75),流速为1.0ml/min,柱温25℃;蒸发光散射检测器的漂移管温度为60℃,载气压力30N/cm2。结果不同采收期知母药材中芒果苷含量为1.10%~5.28%,知母皂苷BⅡ含量为0.22%~8.68%。结论 11月份是亳州栽培知母的最佳采收期,其芒果苷和知母皂苷含量最高。     

知母水、醇提取液的急性毒性实验研究

[目的] 观察知母水、醇提取液的急性毒性反应。[方法] 选择昆明种小鼠为受试对象,采用急性经口毒性实验测定知母水、醇提取液的的最大耐受量。[结果] 知母水提液的小鼠经口最大耐受量为35.0g/kg。知母80%乙醇提取液的小鼠经口最大耐受量为37.5g/kg。[结论] 知母水、醇提取液的毒性较低,临床给药安全可靠。     

黄芪、苦参、知母配伍方体外抗肿瘤细胞作用研究

目的研究黄芪、苦参、知母3药合用及两两配伍对肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的影响。方法96孔培养板培养肝癌SMMC-7721细胞,分别经中药配伍方作用后,采用MTT法检测药物对肝癌细胞生长的影响;采用流式细胞术检测药物对肝癌细胞凋亡的影响。结果黄芪、苦参、知母3药合用对肝癌SMMC-7721细胞生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;流式细胞术结果显示,黄芪、苦参、知母3药合用能明显诱导肝癌细胞坏死,与对照组比较有统计学意义,中、高剂量药物诱导肝癌细胞坏死差异有统计学意义（P〈0.01）。结论黄芪、苦参、知母配伍方可通过诱导肝癌SMMC-7721细胞坏死发挥其抑制肿瘤细胞生长的作用。