人宫颈癌脱落细胞端粒酶活性检测的意义

目的 研究宫颈上皮内瘤样病变(CIN )和宫颈癌脱落细胞端粒酶激活的意义。方法 采用端粒酶PCR-ELISA法检测13例CIN和17例宫颈癌脱落细胞端粒酶活性,并与相应的组织标本中端粒酶活性相比较,11例正常宫颈脱落细胞作为对照。结果8例(61.54％)CIN、14例(82.35％)宫颈癌脱落细胞表达端粒酶活性,正常宫颈无端粒酶活性,CIN、宫颈癌及正常宫颈脱落细胞端粒酶活性平均值分别为0.328±0.192、1.329±0.259和0.039±0.084,三组间端粒酶表达率和量存在显著差异。CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级之间端粒酶活性无明显差异。CIN及宫颈癌组织中端粒酶活性和相应脱落细胞一致。结论 端粒酶的激活是宫颈癌的早期改变,在宫颈癌发生发展过程中起重要作用;宫颈脱落细胞和组织中端粒酶活性可能成为宫颈癌早期诊断、预后判断和肿瘤浸润的标记物。     

TAp63γ抑制宫颈癌细胞株SiHa端粒酶活性及对细胞生长动力学的影响

目的:探讨TAp63γ的表达对宫颈癌细胞端粒酶活性及生长动力学的影响。方法:通过瞬时转染TAp63γ真核表达载体提高SiHa细胞中TAp63γ的表达水平并经RT-PCR及Western blot验证;通过PCR-ELISA试剂盒检测细胞的端粒酶活性,通过MTT检测细胞增殖及对顺铂的敏感性,通过衰老相关β-半乳糖苷酶染色法检测衰老细胞。结果:与对照组相比,转染TAp63γ的SiHa细胞中端粒酶活性显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖减慢,差异有统计学意义(P<0.05);对顺铂敏感性增强,差异有统计学意义(P<0.05);对照组细胞衰老比例为(8±1.5)%;而转染TAp63γ组的衰老细胞比例为(39±8.6)%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TAp63γ具有抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的作用,可能是针对宫颈癌细胞生长动力学治疗的新靶点基因。     

子宫颈癌及其癌前病变组织端粒酶活性的研究

目的研究宫颈癌及其癌前病变组织中端粒酶激活的意义.方法应用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)及电泳-银染法,对36例宫颈浸润癌及16例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织进行端粒酶活性测定,以吸光度(A)值判断端粒酶活性.同时测定11例正常宫颈、6例慢性宫颈炎症及8例癌旁组织端粒酶活性作为对照.结果CIN、宫颈癌及对照组端粒酶活性A值分别为0.398±0.293、1.580±0.819和0.050±0.012,3组比较,差异有极显著性(P＜0.01).端粒酶活性高低与肿瘤分化程度呈负相关,与淋巴结转移呈正相关;与组织学类型、分期、体积大小无关.结论端粒酶的激活发生在宫颈癌病变的早期,可能成为宫颈癌及癌前病变早期诊断和鉴别诊断的指标.     

端粒酶逆转录酶与子宫内膜癌的研究进展

人端粒酶逆转录酶(hTERT)是端粒酶的核心组分,与包括子宫内膜癌在内的多种肿瘤的发生、发展密切相关。hTERT表达和端粒酶活性增高可以促进肿瘤的发生。检测hTERT表达和端粒酶活性有助于子宫内膜癌的诊断。调控hTERT转录,抑制端粒酶活性有望成为治疗子宫内膜癌的新方法。现将hTERT与子宫内膜癌的研究进展作一综述。     

hTERT对HeLa细胞放疗后细胞周期的影响

目的:研究端粒酶逆转录酶(hTERT)对HeLa细胞放疗后细胞周期的影响。方法:将野生型端粒酶逆转录酶(WT-hTERT)、端粒酶逆转录酶显性负突变体(DN-hTERT)和对照质粒(pBABE)电转染于HeLa细胞中,RT-PCR法检测hTERT表达,TRAP-ELISA检测HeLa细胞端粒酶活性改变,Southern-B lot检测端粒长度改变,各转染组细胞分别经5Gy和10Gy60Co照射,流式细胞仪检测其在照射后0、24、48和72h细胞周期分布和凋亡的情况。结果:转染DN-hTERT后,HeLa细胞端粒酶活性下降,端粒长度显著缩短,而转染WT-hTERT后,HeLa细胞端粒酶活性增强,端粒长度较对照组长;各转染组细胞周期分布相似,经60Co照射24h后,各组细胞G2M峰均升高,并随照射剂量增加得更明显,其中WT-hTERT组G2M峰最高,而DN-hTERT组G2M峰最低,60Co照射48h后各组细胞亚G1峰均升高,其中WT-hTERT组最低,而DN-hTERT组最高,对照组和DN-hTERT组G2M阻滞进一步增加,G1峰下降,而WT-hTERT组G2M下降,G1峰升高。结论:DN-hTERT能抑制HeLa细胞端粒酶活性,进而缩短其端粒长度,增强其对放射线的敏感性,而WT-hTERT通过增强G2M阻滞率促进损伤细胞修复。     

hTERT、HPV与宫颈癌的研究进展

端粒酶活性与恶性肿瘤密切相关，调节端粒酶活性的最主要成分是端粒酶逆转录酶(hTERT)。宫颈癌中端粒酶活性高表达，而高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈癌的主要原因，HPVE6、E7通过整合到宿主细胞，可调节hTERT的转录，激活端粒酶，研究hTERT、HPV的相关性，有助于宫颈癌发病机理的阐明。     

子宫内膜样腺癌与正常子宫内膜中端粒酶hTERT mRNA和端粒酶活性的定量分析

端粒酶表达是癌症细胞逃逸正常细胞衰老的主要机制,对其研究已经成为肿瘤判断预后和诊断性标志物的重要课题。功能件端粒酶全酶由端粒酶RNA(hTR)和催化蛋白亚基(hTERT)组成,前者作为端粒DNA合成的模板引物。hTERTmRNA的表达与端粒酶酶活性的水平呈平行关系,提示诱导hTERT基因表达可调节端粒酶活性。为验证定量测定hTERT     

宫颈癌患者HPV感染与血清STNFR水平的研究

目的 :探讨可溶性肿瘤坏死因子受体 (STNFR)以及人乳头瘤病毒 (HPV)感染与宫颈癌的关系。方法 :采用PCR法检测 6 2例宫颈癌患者癌组织中的HPV ,用双抗体夹心ELISA法检测患者血清中STNFRⅠ、STNFRⅡ ,并与正常 35例对照。结果 :宫颈癌患者癌组织中HPV感染率明显高于正常对照组 (P <0 0 0 1) ;宫颈癌患者血清STNFRⅠ、STNFRⅡ水平较正常对照组明显增高 (P <0 0 0 1) ;在宫颈癌患者中HPV感染阳性组STNFRⅠ、STNFRⅡ水平均高于阴性组 (P <0 0 1) ;宫颈癌患者术后 3月血清中STNFRⅠ和STNFRⅡ明显低于术前 (P <0 0 0 1)。结论 :STNFR与宫颈癌的发生发展有关 ,术后明显降低 ,STNFR水平的增高可能与宫颈癌HPV感染有关 ,其发生原理有待进一步研究。     

hTERT、HPV与宫颈癌的研究进展

端粒酶活性与恶性肿瘤密切相关,调节端粒酶活性的最主要成分是端粒酶逆转录酶(hTERT).宫颈癌中端粒酶活性高表达,而高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈癌的主要原因,HPVE6、E7通过整合到宿主细胞,可调节hTERT的转录,激活端粒酶,研究hTERT、HPV的相关性,有助于宫颈癌发病机理的阐明.     

子宫内膜端粒酶活性的研究

目的　探讨月经周期中各期子宫内膜的端粒酶表达及其在子宫内膜周期性变化中的意义。方法　采用端粒重复序列扩增法 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)方法检测 6 3例正常子宫内膜和 19例子宫内膜癌组织的端粒酶活性。结果　月经周期中不同期的子宫内膜的端粒酶活性表达不同。增殖期阳性率为90 6 % (2 9/ 32 ) ;分泌期阳性率为 4 7 4 % (9/ 19) ,二者之间差异有显著性 (P =0 0 0 0 6 )。绝经期子宫内膜也有5 0 0 % (6 / 12 )表现为阳性 ,子宫内膜癌阳性率为 89 5 % (17/ 19)。增殖期子宫内膜有 5 3 1% (17/ 32 )端粒酶活性为强阳性而分泌期和绝经期子宫内膜的端粒酶活性则没有强阳性。结论　月经周期中子宫内膜细胞的周期性变化 ,端粒酶可能起着重要的调控作用     

人端粒酶逆转录酶在子宫颈癌组织中的表达变化及其意义

目的研究端粒酶在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达,探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)作为宫颈癌早期诊断标志物的可能性。方法采用RTPCR方法测定端粒酶mRNA在3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、38例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中的表达水平;端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法测定端粒酶活性;免疫组化链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法检测3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、21例正常宫颈组织、2例CIN和55例宫颈癌切片中hTERT蛋白的表达水平。结果hTERTmRNA在3株宫颈癌细胞中均表达,而在2株正常的人二倍体细胞中无表达,宫颈癌组织中的阳性表达率为81.6%,高于CIN的37.5%和正常宫颈组织的5.0%,差异有统计学意义(P<0.05);hTERTmRNA的阳性表达率与端粒酶活性有相关性(P<0.01);hTERT蛋白在3株宫颈癌细胞中有表达,2株正常的人二倍体细胞中无表达,正常宫颈组织中阳性表达率为4.8%、CIN为28.0%,均低于宫颈癌组织的65.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织和细胞中hTERTmRNA和蛋白阳性表达率均高于正常宫颈组织,其有可能作为宫颈癌早期诊断的标志物。     

端粒酶催化亚单位在子宫腺肌病组织中的表达及其意义

目的探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)与子宫腺肌病发生、发展的可能机制。方法 2006年1月至2009年8月在山西医科大学第一医院采用免疫组化SP法测定并比较70例因子宫腺肌病切除子宫的患者在位及异位子宫内膜和24例因宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅲ切除子宫的患者在位子宫内膜组织中端粒酶的表达阳性率。结果子宫腺肌病患者在位、异位子宫内膜组织与CINⅢ患者子宫内膜组织hTERT表达阳性率分别为45.7%、70.0%和20.8%,3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。研究组弥漫型与局限型hTERT表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。研究组增殖期与分泌期hTERT表达阳性率分别为90.5%和64.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。hTRET阳性表达率在研究组子宫体积的比较中差异有统计学意义(P<0.05)。研究组有月经改变组和无月经改变组hTERT表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hTERT的高表达与子宫腺肌病及病变进展程度有关。     

应用双向凝胶电泳分析顺铂对人宫颈癌细胞系HCE_1蛋白质表达谱的影响

目的 :分析顺铂对人宫颈癌细胞系HCE1蛋白表达谱的影响。方法 :MTT比色分析确立顺铂处理HCE1细胞的浓度。利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离顺铂处理前后人宫颈癌HCE1细胞的总蛋白质 ,凝胶银染显色 ,用Imagemaster软件行图像分析。结果 :顺铂处理HCE1细胞 30h的IC5 0值为 1.2 μg/ml。获得分辨率和重复性均较好的顺铂处理前后人宫颈癌细胞系HCE1双向凝胶电泳图谱 ,处理组和未处理组各 3块凝胶的平均蛋白质点数分别为 1136± 33和 96 3± 2 6 ,平均匹配率分别为 88.4 %和 87.3%。未处理组和处理组的 3块不同的胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是 0 .6 76± 0 .15 5mm和 0 .86 5±0 .10 7mm ,在SDS PAGE方向上的偏差为 1.2 0± 0 .2 1mm和 1.38± 0 .2 36mm。制得未处理组和顺铂处理组平均胶 ,以平均胶进行匹配 ,匹配率为 81.2 %。筛选出差异蛋白质点 98个 ,其中 36个表达上调 ,37个表达下调 ,12个仅在HCE1未处理组表达 ,13个仅在顺铂处理组表达。结论 :建立了分辨率高且重复性较好的顺铂处理前后的人宫颈癌HCE1细胞系双向凝胶电泳图谱 ,识别到 98个差异蛋白质点 ,对这些差异蛋白质点进一步鉴定将为在蛋白质水平阐明顺铂的抗宫颈癌机制提供实验依据。     

人端粒酶逆转录酶启动子调控下胞嘧啶脱氨酶-胸苷激酶融合基因治疗卵巢癌的体外研究

目的　探讨人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子调控下的融合双自杀基因———胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶 / 5 氟胞嘧啶 更昔洛韦 (CD TK/ 5 FC GCV)系统对人卵巢癌细胞及正常细胞的体外杀伤作用。方法　应用脂质体转染法将hTERT核心启动子报告质粒pBTdel 2 79转染人卵巢癌细胞系3AO、正常卵巢上皮细胞 (NOEC)和人胚肺成纤维细胞株HELF ,用荧光素酶分析检测hTERT启动子活性 ;应用RT PCR技术检测hTERTmRNA的表达水平。应用基因克隆技术分别构建hTERT启动子和巨细胞病毒 (CMV)启动子调控下的CD TK基因真核表达载体pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK ,以及hTERT启动子调控下的TK基因表达载体pBTdel 2 79 TK。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法和流式细胞术检测pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC GCV系统和pcDNA3 CD TK/ 5 FC GCV系统对上述 3种细胞不同的杀伤作用 ;应用RT PCR技术检测pBTdel 2 79 CD TK和pcDNA3 CD TK转染前后 3AO和NOEC细胞中CD和TK基因的表达情况。用扫描电子显微镜观察pBTdel 2 79 CD TK/ 5 FC GCV作用后 3AO细胞的形态变化。结果　卵巢癌细胞系 3AO中hTERT启动子活性增高 ,为 2 4 1% ,RT PCR检测hTERTmRNA为阳性 ,而在正常细胞NOEC和HELF中 ,hTERT启动子活性仅为 0 3%和 0 7% ,hTERTmRNA为阴性。与p     

Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞功能的影响

目的:研究Netrin-1在HeLa细胞的表达及对HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:利用蛋白质印迹法检测Netrin-1在HeLa细胞的表达,并通过MTT、侵袭实验和流式细胞仪分别检测10,50和100ng/mlNetrin-1对HeLa细胞增殖能力、侵袭能力和凋亡的影响。结果:(1)Netrin-1在HeLa细胞有表达,其相对表达量为0.389±0.026;(2)MTT实验结果显示,Netrin-1可以促进HeLa细胞增值,表现为时间和剂量依赖性,与对照组有显著差异(P<0.05或P≤0.01);(3)Netrin-1处理组细胞迁移数分别为314±16,487±15和553±19,均明显多于对照组180±10(P均<0.05);(4)在Netrin-1干预下,HeLa细胞凋亡率呈递减趋势,与对照组比较有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论:HeLa细胞表达的Netrin-1与宫颈癌的侵袭转移有关,Netrin-1促进HeLa细胞增殖和侵袭能力,并抑制HeLa细胞凋亡,可能为未来宫颈癌的治疗提供依据。     

雌、孕激素对人宫颈癌HeLa细胞体外生长影响的研究

目的 :探讨雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖及凋亡的影响。方法 :体外培养人宫颈癌HeLa细胞 ,免疫组化方法 ,测定其雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)的表达 ;不同浓度的E2 、P和E2 +P作用于HeLa细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观测HeLa细胞的增殖 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl 2蛋白的表达 ;光学、电子显微镜检测其形态学和超微结构变化。结果 :HeLa细胞PR表达明显高于ER(P <0 .0 1)。E2 对HeLa细胞有明显促生长作用 (P <0 .0 1) ,P和E2 +P对细胞生长有明显的抑制作用 (P <0 .0 1) ,增殖抑制率与浓度呈正相关 (P <0 .0 5 )。FCM显示E2 组细胞周期S期比例上升 ,凋亡率下降 ,细胞内bcl 2蛋白表达上升 ;P组和E2 +P组G0 /G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,凋亡率上升 ,细胞内bcl 2蛋白表达下降 (P <0 .0 1)。光镜和电镜可见E2 组细胞生长良好 ,P组和E2 +P组可见细胞凋亡的形态学改变。结论 :E2 对宫颈癌HeLa细胞具有促进增殖、抗凋亡作用 ;P则抑制HeLa细胞增殖 ,并诱导其凋亡 ;E2 +P显示了抑制增殖、诱导凋亡的增强作用。足量的P可拮抗E2 对宫颈癌细胞的促增殖作用。