草乌甲素对人肝星状细胞LX-2增殖及凋亡的影响

目的研究草乌甲素(bulleyaconitine A,BLA)对肝星状细胞LX-2增殖、凋亡以及相关凋亡蛋白表达的影响。方法体外培养LX-2细胞,分别给予不同BLA浓度处理24 h后采用CCK8法检测BLA对LX-2细胞的抑制率;流式细胞术检测LX-2细胞凋亡的情况;Western blot法检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达量。结果 BLA对LX-2细胞有明显抑制作用,BLA能使LX-2细胞处于S期、G2/M的细胞明显减少,差异均有统计学意义(t=9.71、4.88,P<0.05),处于G1期的细胞显著增多,差异有统计学意义(t=9.71,P<0.05);使Bax、Caspase-3蛋白表达量增加,Bcl-2表达降低。结论 BLA可能通过促进Bax、Caspase-3表达,抑制Bcl-2表达抑制LX-2细胞增殖,促进其凋亡。     

二甲双胍对肝星状细胞凋亡的调控作用

目的探究二甲双胍对肝星状细胞(HSC)的作用及其可能的抗肝纤维化的作用机制。方法 将人HSC LX-2分为对照组(PBS)、模型组(PDGF-BB)和药物组(PDGF-BB+Met)。将30只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为3组,对照组(n=10,橄榄油)、模型组(n=10,CCl4)和药物组(n=10,CCl4+Met)。用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力,AnnexinV-PE/7-AAD染色法检测细胞凋亡率;Western blot检测α-SMA、Beclin1、PARP、Bax及bcl-2蛋白表达;取小鼠肝脏石蜡包埋,石蜡切片进行Masson染色检测小鼠组织病理学情况。结果 二甲双胍能抑制活化的HSC的增殖(IC50=42.66),细胞流式检测发现,二甲双胍能促进HSC凋亡(C=5 mM,P﹤0.001);与模型组相比,药物组α-SMA表达量减少(P﹤0.001);且药物组PARP、Bax表达量升高(P=0.03,P﹤0.001),Bcl-2表达量明显降低(P﹤0.001);Masson染色发现药物组胶原纤维分泌少于模型组(P=0.03)。结论 二甲双胍促进肝星状细胞的凋亡,从而改善CCl4诱导的肝纤维化。     

冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度冬凌草甲素对SW1900细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测冬凌草甲素作用于SW1900细胞后的凋亡情况;Western blot观察Bcl2-2和Bax表达变化.结果 冬凌草甲素明显抑制SW1900细胞的增殖,诱导SW1900细胞凋亡,具有明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用48 h后.凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调.结论 冬凌草甲素对人胰腺癌Sw1900细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,同时抗凋亡蛋白Bcl2-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调是冬凌草甲素体外诱导胰腺癌SW1900细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡作用及其机制.方法 MTS法检测冬凌草甲素对GBC-SD细胞的生长抑制作用;瑞氏染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、caspase-3活性变化;Western blot检测caspase-9活化情况.结果 冬凌草甲素能显著抑制GBC-SD细胞增殖,呈时间剂量依赖性(P＜0.05).细胞形态学观察可见冬凌草甲素可诱导细胞发生凋亡.流式细胞仪检测结果显示28 μmol/L药物处理GBC-SD细胞24h后,细胞凋亡率为51.28％±2.65％.随着药物浓度增加,GBC-SD细胞线粒体膜电位逐渐下降而caspase-3活性逐渐增强,56μmol/L组caspase-3活性是对照组的11倍.Western blot分析结果显示caspase-9酶原被激活,且活化条带随药物浓度的增加而增强.结论 冬凌草甲素可能通过细胞线粒体膜电位下降激活caspase-3并最终诱导GBC-SD细胞凋亡.     

冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

丹参素对大鼠肝星状细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响

目的 观察丹参素对IL-1β刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的分子机制.方法 用原位-密度梯度离心法提取肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs),以不同浓度的丹参素作用于IL-1β刺激的HSCs,MTT法、AO/EB免疫荧光和Annexin V-FITC/P1分别检测HSCs的增殖和凋亡;免疫细胞化学、ELISA法、Western blot分别检测Ⅲ型胶原的生成、NF-κB核转位及细胞质p-IκBet、细胞核NF-κB p65的表达.结果 与对照组相比,IL-1β刺激组HSCs增殖明显增加(P<0.01),凋亡率明显减低(P<0.05),Ⅲ型胶原的合成和分泌明显增加(P<0.01);不同浓度丹参素作用24 h后HSCs增殖明显减低(P<0.01),凋亡明显增加(P<0.01),以早期凋亡为主,Ⅲ型胶原的合成和分泌亦明显减少(P<0.05,P<0.01);Western blot结果显示IL-1β作用30 min时细胞质p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白表达明显增加(P<0.01),出现核转位;免疫细胞化学显示细胞核内p65阳性染色细胞增多浓染,提示IL-1β可以诱导HSCs的NF-kB活性;丹参素组细胞质p-h相似文献   

冬凌草甲素对HL-60细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人白血病细胞株 HL-60 细胞生长抑制作用及其机制.方法 收集经不同浓度冬凌草甲素干预的HL-60细胞,制成细胞涂片,光学显微镜下观察细胞形态.采用MTT比色法观察不同浓度冬凌草甲素对HL-60细胞增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Annexin V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并以RT-PCR检测凋亡抑制基因 Survivin的表达.结果 冬凌草甲素在10～25 μmol/L范围内可抑制HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.并可诱导HL-60细胞发生凋亡,表现出特异性的凋亡形态学改变.流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后凋亡细胞比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比, HL-60细胞Survivin mRNA水平下降,且随时间延长表现得更为明显.结论 冬凌草甲素能抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖,并可诱导其发生凋亡, 其作用机制可能与凋亡抑制基因Survivin的下调有关.     

冬凌草甲素诱导人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡及其机制

目的:探讨冬凌草甲素抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞的增殖、诱导其凋亡的作用.方法:用不同浓度的冬凌草甲素干预PC-3细胞,通过MTT实验和细胞的药物浓度-时间生长曲线分析观察其对PC-3细胞活力的影响;用流式细胞仪分析PC-3早期凋亡细胞的百分率;Western印迹检测Bax Bcl-2和caspase...     

肝星状细胞凋亡机制及调控研究进展

抑制活化肝星状细胞(HSCs)增殖和诱导其凋亡成为阻止肝纤维化(HF)进程的途径之一。在细胞凋亡的发生过程中,有多种不同因素和途径参与活化HSCs的凋亡,活化HSCs的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等调控。作者就近年来有关HSCs凋亡及其调控的研究进展作一综述。     

冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用

目的研究冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用。方法以人急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的骨髓原代细胞为研究对象,以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的白血病细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡。结果冬凌草甲素体外可明显地抑制白血病原代细胞的增殖,并能诱导细胞发生凋亡,而且呈现出明显的量-效与时-效关系。结论冬凌草甲素能有效地抑制APL细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,是一种潜在的抗白血病药物。     

冬凌草甲素促进骨肉瘤细胞143B凋亡及其可能机制

目的 研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人骨肉瘤细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用的分子机制.方法 以结晶紫染色和Western blot检测ORI对143B细胞增殖的抑制作用,Annexin V-EGFP染色法和Western blot检测ORI对143B细胞凋亡的促进作用;RT-PCR和Western blot检测ORI对143B细胞内Wnt/β-catenin信号的影响;沉默或过表达β-catenin后,结晶紫染色分析ORI对143B细胞增殖的抑制作用的变化.结果 ORI能够抑制143B细胞株增殖,并诱导其凋亡(P＜0.05);呈浓度依赖性抑制143B细胞PCNA的表达,同时促进其Caspase3、Bad的表达;能够抑制143B细胞内Wnt/β-catenin信号的表达,沉默或过表达β-catenin后则可以相应地促进或抑制143B细胞的凋亡(P＜0.05).结论 ORI能够浓度依赖性抑制143B骨肉瘤细胞株增殖并诱导其凋亡,可能与ORI能够抑制其Wnt/β-catenin信号转导有关.     

肝星状细胞凋亡及其调控

目前认为肝纤维化（HF）发生的中心事件是,由各种慢性肝损伤引起肝星状细胞（HSC）的激活并转化为肌成纤维细胞（MF）,从而大量合成各种细胞外基质（ECM）沉积于肝脏,最终导致了HF。在HF恢复期存在广泛性的HSC凋亡。作者就近年来有关HSC凋亡及其调控的研究进展作一综述。     

红花注射液对肝星状细胞 HSC-T6 增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 研究红花注射液对肝星状细胞 (hepatic steuate cell,HSC) HSC-T6 增殖、凋亡及凋亡相关基因 bcl-2 及 bax mRNA 表达的影响。方法 体外培养 HSC 株,用不同质量浓度的红花注射液处理 HSC-T6,采用 MTT 法检测细胞增殖;采用 5、10、20 mg/mL 红花注射液干预细胞 24 h,流式细胞仪检测细胞周期;倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学改变;并用琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA Ladder 凋亡梯度;Annexin V-FITC/PI 双染色流式细胞仪分析凋亡率;Real time-RT PCR检测凋亡相关基因 bcl-2、bax mRNA 的表达水平。结果 红花注射液对 HSC 增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量和时间依赖性;红花注射液 (10、20 mg/mL) 作用 24 h 流式细胞术测出 G0/G1 期细胞所占比例增多,与对照组比较差异显著 ( P ＜0.05、0.01);药物干预后细胞表现不同程度的凋亡,琼脂糖电泳可见 DNA 出现断裂、PI/Annexin V 双染流式细胞仪分析对照组凋亡率为 (0.73±0.33)%,红花注射液在 5、10、20 mg/mL 凋亡率分别为 (2.04±0.58)%、(9.46±1.29)%、(16.55±1.27)%,差异显著 ( P ＜0.01);Real time-RT-PCR 结果显示红花下调抗凋亡基因 bcl-2 的 mRNA 表达,同时上调 HSC-T6 的促凋亡基因 bax 的 mRNA 表达。结论 红花注射液能抑制 HSC 增殖及增殖周期,促进活化的 HSC 凋亡,其机制可能是调控 bcl-2/bax mRNA 的表达。     

苦参素对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨苦参素对肝纤维化发生的作用机制。方法培养激活的HSC-T6分为对照组及实验组,实验组以不同浓度的苦参素干预(分别为30、60、120、240、480、960 mg/L),MTT法检测肝星状细胞的增殖,TUNUL法检测凋亡指数。结果药物干预后肝星状细胞的增殖能力降低,凋亡指数升高,均呈剂量依赖性。结论苦参素能通过抑制肝星状细胞的增殖和促进其凋亡来影响肝纤维化的发展。     

冬凌草甲素诱导GBC-SD细胞凋亡及对bcl-2,p53,fas/apo-1和c-myc表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素(RuA)对人胆囊癌细胞株(GBC-SD)诱导凋亡的机制。方法:用不同浓度的RuA处理GBC-SD细胞,MTT法检测RuA对GBC-SD细胞生长的抑制作用,通过倒置显微镜、扫描电子显微镜、流式细胞术、荧光分光光度法观察凋亡细胞的形态结构变化,定量检测细胞凋亡及半胱天冬酶(caspase-3)的活性,免疫组化法检测核磷蛋白p53、bcl-2蛋白、fas/apo-1及c-myc蛋白的表达。结果:RuA能诱导细胞凋亡,并呈浓度依赖性。药物作用24h后,对照组和实验组细胞中bcl-2,p53,fas/apo-1和c-myc蛋白的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RuA诱导GBC-SD细胞凋亡与bcl-2,p53,fas/apo-1和c-myc的表达有关。     

冬凌草甲素对胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

目的 探讨冬凌草甲素对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响.方法 采用不同浓度冬凌草甲素(0、10、20、40、80、100μmol/L)处理QBC939细胞24、48、72 h,MTT法测定QBC939细胞活力并计算增殖抑制率;不同浓度冬凌草甲素(0、20、40、80 μmol/L)处理QBC939细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测QBC939细胞B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,端粒酶重复序列扩增法检测QBC939细胞的端粒酶活性.结果 QBC939细胞增殖抑制率随冬凌草甲素的药物浓度升高、作用时间延长而升高;与0μmol/L冬凌草甲素组相比,其他浓度冬凌草甲素组的S期细胞比例降低;0、20、40、80 μmol/L冬凌草甲素组QBC939细胞的凋亡率分别为0.5％、14.8％、25.8％及37.7％;Western Blot结果显示随着药物浓度的升高,QBC939细胞的Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量逐渐降低;其他浓度冬凌草甲素组QBC939的端粒酶活性均低于0μmoL/L冬凌草甲素组,且QBC939细胞的端粒酶活性随冬凌草甲素浓度的升高而降低(P＜0.05).结论 冬凌草甲素可抑制QBC939细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Bel-2表达以降低端粒酶活性有关.     

MicroRNA-29b 对肝纤维化及肝星状细胞 增殖、凋亡的影响

目的 探究microRNA-29b（miR-29b）在肝纤维化过程中的作用,以及对肝星状细胞增殖和 凋亡的影响。方法 将大鼠随机分为对照组和模型组,每组10 只。模型组大鼠经腹部注射60% 3 ml/kg CCl4 复制肝纤维化模型;对照组注射等量生理盐水。分别观察两组大鼠肝纤维化情况,检测肝组织中miR -29b 、 TGF -β 1、SAMD 3 基因及TGF-β1、SAMD3 蛋白的表达。体外培养肝星状细胞HSC-T6、LX-2,转染 miR-29b siRNA,检测miR-29b 对HSC-T6、LX-2 细胞增殖、凋亡的影响,以及对TGF-β1、SAMD3 表 达的影响。结果 与对照组相比,模型组心肌纤维比例增加,随着时间延长,第6 和12 周心肌纤维比例逐渐 升高（P <0.05）。与对照组相比,模型组miR -29b 基因相对表达量降低,随着时间延长,模型组miR -29b 基 因相对表达量逐渐降低（P <0.05）。与对照组相比,模型组TGF-β1、SAMD3 基因和蛋白相对表达量升高; 随着时间延长,TGF-β1、SAMD3 基因和蛋白相对表达量逐渐升高（P <0.05）。在HSC-T6、LX-2 细胞中, miR-29b 转染组G1 期细胞比例高于空白对照组、阴性转染组,S 期细胞比例低于空白对照组、阴性转染组 （P <0.05）。miR-29b 转染组HSC-T6、LX-2 细胞凋亡率高于空白对照组、阴性转染组（P <0.05）。与空白 对照组、阴性转染组相比,HSC-T6、LX-2 细胞中TGF-β1、SAMD3 基因和蛋白相对表达量升高,miR- 29b 基因相对表达量降低（P <0.05）。结论 miR-29b 在肝纤维化过程中表达降低,miR-29b 可抑制肝星状 细胞增殖,诱导其凋亡。     

冬凌草甲素对人软骨肉瘤SW-1353细胞的增殖和凋亡的影响及其机制探究

目的 探究冬凌草甲素对人软骨肉瘤细胞增殖、凋亡及p38 MAPK信号通路的调控作用。方法 体外培养人软骨肉瘤SW-1353细胞,分为对照组(等量体积DMSO溶剂),5、10、15μmol/L冬凌草甲素组(5、10、15μmol/L冬凌草甲素)、10μmol/L冬凌草甲素+抑制剂组(10μmol/L冬凌草甲素+20μmol/L p38 MAPK通路抑制剂SB203580)和阳性药物组(6μmol/L阿霉素)。用倒置显微镜、活细胞计数(CCK-8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色、RT-qPCR及蛋白免疫印迹(WB)法对细胞形态、增殖活性、增殖率、凋亡情况、相关因子表达水平进行分析。结果 与对照组比较,实验组、10μmol/L冬凌草甲素+抑制剂组和阳性药物组SW-1353细胞增殖活性、增殖率、cyclin D1及p-p38 MAPK表达水平显著降低,而细胞凋亡数量和caspase-3表达水平增加,且浓度越高变化越显著(P<0.05),与10μmol/L冬凌草甲素组相比,抑制剂的加入使各指标变化更显著。结论 冬凌草甲素可通过抑制p38 MAPK通路抑制人软骨肉瘤SW-1353细胞的增殖诱其凋亡。