伊曲康唑对皮肤鳞状细胞癌A431细胞抑制作用的初步研究

目的研究伊曲康唑(itraconazole,ITZ)对皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC)A431细胞的生物学效应,探讨其对皮肤鳞状细胞癌的抑制机制。方法取对数生长期A431细胞随机分为2、5、10、15、20、25及30μg/mL浓度组与对照组,依据分组分别采用等体积2、5、10、15、20、25及30μg/mL浓度ITZ溶液及DMEM培养基对细胞进行处理,并分别采用MTT法、流式细胞仪检测法、RT-PCR法和Western blotting法检测各组A431细胞的增殖情况、细胞周期和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及蛋白的表达水平。结果随着ITZ浓度的增加及作用时间的增长,ITZ对A431细胞的抑制作用逐渐增强,且除培养24 h时2μg/mL组细胞生长抑制率与对照组无明显差异(P>0.05)外,培养24 h时5、10、15、20、25、30μg/mL组细胞生长抑制率及培养48、72 h时2、5、10、15、20、25、30μg/mL组细胞生长抑制率分别与对照组对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;与对照组相比,经浓度分别为2、5、10、15、20、25及30μg/mL的ITZ处理后,A431细胞的G0/G1期均出现延长,且除15μg/mL组与对照组无明显差异(P>0.05)外,其余各组与对照组对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;与对照组相比,除ITZ浓度为10μg/mL时,VEGF mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P均<0.05)外,ITZ浓度为2、5、15、20、25及30μg/mL时,VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论ITZ能够抑制CSCC A431细胞的增殖并延长细胞周期,然而其对VEGF的影响却没有规律性,故其抑制细胞增殖的具体机制仍需进一步深入研究。     

紫外线B辐射敏感的miR-365在皮肤鳞癌发生中的作用研究

目的 探讨紫外线(UVB)辐射敏感miR-365在皮肤鳞状细胞癌发生中的作用.方法 取对数生长期正常人皮肤角质细胞HaCaT分为对照组和照射组,照射组给予50 J/m²的UVB照射.照射后培养不同时间,分析miRNA的表达谱.实时荧光定量PCR分析HaCaT细胞和皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达.平板克隆形成实验和Transwell小室细胞运动实验分别检测细胞的克隆形成能力和体外运动能力.构建miR-365高表达的HaCaT细胞系HaCaT^{pre-miR-365-2}.裸鼠皮下注射HaCaT^{pre-miR-365-2}观察其成瘤能力.结果 UVB照射后,HaCaT差异表达的miRNAs共30个,其中miR-365最敏感,且照后6 h升高最明显,为对照的6.7倍;皮肤鳞癌细胞系A431、Tca8113和HSC-1的miR-365的表达均高于HaCaT细胞(P<0.05),其中,A431增加最多,为(15.67±1.12)倍,Tca8113最少,为(4.72±0.85)倍;抑制皮肤鳞癌细胞系miR-365的表达可以显著抑制其克隆形成能力(t=13.68,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=19.98,P<0.05),而提高HaCaT的miR-365的表达则可以显著提高其克隆形成能力(t=7.11,P<0.05)和体外细胞迁移能力(t=22.03,P<0.05),且能够在裸鼠皮下成功地成瘤.结论 miR-365是一种皮肤鳞状细胞癌的促癌基因.     

表皮细胞生长因子在体诱导猪骨髓间充质干细胞向皮肤组织分化作用的研究

目的观察表皮细胞生长因子(EGF)在体内是否具有诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向皮肤组织分化的作用,及其在皮肤创面愈合中的作用。方法抽取小型猪骨髓,体外分离、纯化和培养MSCs,并用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)进行标记。6只小型猪共48个创面,随机分为EGF MSCs治疗组(A组)、MSCs治疗组(B组)、EGF治疗组(C组)和生理盐水对照组(D组)。观察伤后治疗3、7、14、21及84天的创面,并用病理学、免疫组化方法对创面的修复质量进行评估。结果A组的皮肤创面愈合速度明显快于其它治疗组,并且在皮肤愈合的组织病理等级评分上优于B、C和D组。A组表皮层BrdU和CKp双染阳性细胞比B组更为多见。结论EGF具有在体促进猪骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化,加快皮肤创面愈合速度和提高愈合质量的作用。     

高压氧促进急性髓性白血病离体细胞凋亡和化疗药物增敏的初步研究

目的　用体外实验探讨高压氧 (HBO)对化疗药物体外诱导急性髓性白血病 (AML )细胞凋亡及对 AML细胞体外阿糖胞苷敏感性的影响。方法　 3种化疗药物——高三尖杉酯碱 (H)、阿糖胞苷 (A)、足叶乙甙 (V)分别作用于 AML患者的单个核细胞 ,一份加 HBO作测定组 ,另一份不加 HBO作对照组 ,观察各组凋亡细胞 ,并测定各组细胞活性、Bax/ bcl- 2积分比和 TUNEL阳性率及阿糖胞苷组 P-gp的表达。同时设无药加 HBO组和不加 HBO组以排除 HBO或其它因素对 AML细胞的影响。结果　3种化疗药物测定组具有典型凋亡特征的 AML细胞明显增多 ;Bax/ bcl- 2积分比 [测定组 :H :(2 .4 6±0 .4 4 ) ,A:(2 .0 6± 0 .89) ,V:(1.95± 0 .70 ) ;对照组 :H :(1.6 6± 0 .2 5 ) ,A:(1.34± 0 .2 8) ,V:(1.2 9±0 .2 5 ) ]明显高于对照组 (P<0 .0 5 ) ,TU NEL阳性率 [测定组 :H :(0 .397± 0 .0 8) ,A:(0 .377± 0 .0 6 ) ,V:(0 .4 0± 0 .0 6 ) ;对照组 :H:(0 .2 4 9± 0 .0 8) ,A :(0 .2 35± 0 .0 6 ) ,V:(0 .2 4 1± 0 .0 5 ) ]明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,且 3种药物测定组与对照组细胞 Bax/ bcl- 2积分比之差、TU NEL阳性率之差的差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,阿糖胞苷组与对照组之间 P- gp的表达差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　 H     

缺氧对大鼠脑星形胶质细胞释放NO、PGI2、TXA2、ET-1的影响

本实验从星形胶质细胞这一角度出发 ,通过观察缺氧和 (或 )谷氨酸对星形胶质细胞一氧化氮 (NO)、前列腺环素 (PGI2 )、血栓素A2 (TXA2 ) ,以及内皮素 - 1 (ET - 1 )释放的影响 ,探讨大脑星形胶质细胞在缺氧性脑血管反应中的作用及机制。作者将新生Wistar大鼠脑皮层星形胶质细胞原代、传代培养后 ,分为 4组 :对照组 (C组 ) ,谷氨酸组 (G组 ) ,缺氧组 (H组 )和缺氧 +谷氨酸组 (H +G组 )。每组包括 5个时相点 :0、3、6、1 2、2 4h(以缺氧后开始记时 )。G和H +G组加入 1 0 0 μmol/L的L -谷氨酸。H和H +G组用 95 %N2 、5 %CO2 缺氧…     

顺铂诱导肺腺癌A549细胞线粒体基因组及凋亡相关基因的差异表达

目的　探讨顺铂诱导肺腺癌A5 4 9细胞线粒体基因组及核凋亡相关基因的差异表达情况。方法　实验组A5 4 9细胞给予0 5 μg/ml顺铂作用 2 0h,同时设立空白对照组 ,用人线粒体基因组寡核苷酸芯片检测 2 6个靶基因的差异表达。用流式细胞技术分析细胞凋亡比例。结果　实验组A5 4 9细胞的细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(CoxⅠ)、12SrRNA以及半胱氨酸转运RNA(tRNA Cys)、天冬酰胺转运RNA(tRNA Asn)基因表达显著上调 ,促凋亡基因bax和另外 3个编码多肽基因、4个tRNA基因表达也有一定程度上调。实验组A5 4 9细胞凋亡率为 8 5 %± 0 78% ,显著高于对照组的 1 3%± 0 5 6 % (n=5 ,P <0 0 5 )。结论　顺铂诱导能使残存的A5 4 9细胞mtDNA编码的部分基因表达增强 ,并可能通过对bax基因表达的上调促进细胞凋亡。     

Caspase-3对5-ALA诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响

 目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)对光敏剂5-氨基酮戊酸(5-ALA)诱导鳞状细胞癌Colo-16细胞凋亡效应的影响。方法 取对数生长期的Colo-16细胞用于实验,将细胞分为对照组、5-ALA-光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)组和Caspase-3抑制剂组(Z-DEVD-FMK),对照组不给予光敏剂和照光处理,5-ALA-PDT组给予0.4 mg/ml的5-ALA避光孵育4 h后,采用(功率密度10 mW/cm²,能量密度2.5 J/cm²)激光照射3 min,之后继续培养12 h。Caspase-3抑制剂组除孵育时同时加入Z-DEVD-FMK(终浓度40 μmol),其余处理与5-ALA-PDT组相同。实验后收集各组细胞,通过免疫荧光观察各组细胞胞内Caspase-3荧光强度的变化,通过流式细胞术检测活性Caspase-3阳性细胞百分率和细胞凋亡率。结果 免疫荧光结果发现对照组和Caspase-3抑制剂组Colo-16细胞胞浆中有微弱绿色荧光,表明Caspase-3表达量低,而5-ALA-PDT组中绿色荧光显著增强,表明其胞浆内Caspase-3含量显著增高。流式细胞仪的检测结果显示,对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组active-Caspase-3阳性细胞百分率分别为(2.26±0.16)％、(32.16±1.31)％和(3.36±0.31)％,5-ALA-PDT组高于对照组和Caspase-3抑制剂组,差异有统计学差异(P<0.05)。对照组、5-ALA-PDT组和Caspase-3抑制剂组的凋亡率分别为(2.35±0.22)％、(31.55±3.68)％和(11.46±2.25)％,三组之间两两比较,差异都有统计学意义(P<0.01)。结论 5-ALA-PDT可以诱导Colo-16细胞发生凋亡,且这种效应与caspase-3的激活密切相关。     

小剂量X射线照射对人树突状细胞抗原递呈及白介素-12分泌的影响

目的 探讨小剂量x射线照射对体外不同培养时间的人外周血树突状细胞( dendritic cell,DC)抗原递呈及白介素-12(IL-12)分泌的影响.方法 分离人外周血单个核细胞(PBMC),以人粒-巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL-4等诱导分化成DC.实验分为3组,A组:DC培养至第2天接受X射线照射;B组:DC培养至第6天接受X射线照射,A、B组受照剂量均为0.05、0.1、0.2和0.5 Gy;C组:即对照组,为同期培养的未受X射线照射的DC细胞.各组DC培养至第8天时,以DC致敏T 细胞,CCK-8( cell counting kit-8)法检测混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),以评估抗原递呈能力;MTT法检测致敏T细胞杀伤人肺腺癌A549细胞;酶联免疫吸附试验( ELISA)检测DC细胞培养液中IL-12水平.结果 0.2、0.5 Gy照射后的DC抗原递呈能力,A组显著低于对照组(t =2.79和3.71,P＜0.05),B组显著高于对照组(t=3.60和3.11,P＜0.05);检测致敏T细胞对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制能力,与对照组相比,A组抑制A549增殖能力减弱(t =2.89和2.91,P＜0.05),B组抑制A549增殖能力明显增强(t=2.91和2.82,P＜0.05);A组IL-12分泌量下降(t=4.44和6.93,P＜0.05),而B组明显上升(t=3.51和4.12,P＜0.05).结论 DC在培养早期阶段接受0.5 Gy以下的X射线照射,会降低抗原递呈能力及致敏T细胞杀伤A549能力,在培养阶段的后期给予此剂量照射则会增强.     

皮肤癌细胞的5-氨基酮戊酸光动力效应研究

目的研究AIA－PpIX在皮肤癌细胞中的药代动力学规律,分析ALA—PDT对皮肤癌细胞的光动力作用机制。方法利用荧光光谱技术测量皮肤癌细胞A431和A375的ALA—PpIX的荧光强度。利用激光共聚焦显微技术研究ALA—PpIX在皮肤癌细胞中的分布。用倒置相差显微镜观察ALA－PDT作用后细胞的形态学变化。使用CCK－8（CellCounting Kit-8）比色法测定AIA-PDT后细胞的存活率。结果两种皮肤癌细胞内ALA—PpIX的含量随着ALA浓度的增大而增加,当ALA浓度为0．6mM时,ALA-PpIX的含量已基本达到饱和,0．6mM为最佳的药物孵育浓度。给予细胞0．6mMALA孵育4h后,检测到AIA—PpIX弥散分布于两种皮肤癌细胞的胞浆内和细胞膜上。两种细胞经AIA－PDT后的形态发生显著变化。在光剂量增加到1．74J／cm^2时,A431和A375细胞的存活率均下降到25％以下。结论两种皮肤癌细胞吸收ALA后合成PpIX的特性没有显著差异。在相同孵育时间条件下,A431合成PpⅨ的含量比A375高。A431和A375对ALA-PpIX的最佳药物孵育浓度为0．6mM。ALA—PDT对两株皮肤癌细胞均有明显的抑制作用,A431对ALA-PDT更敏感。     

188Re-IGF-1类似物对胰腺癌细胞Patu8988的增殖抑制与诱导凋亡实验

目的 研究188 Re-IGF-1类似物(IGF-1A)对胰腺癌Patu8988细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡作用.方法 (1)制备188 Re-IGF-1A,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测给药后细胞增殖情况,细胞按给药情况分为对照组、IGF-1A组(1、5、10、20 μg)、188ReO4-组(0.37、1.85、3.70、7.40 MBq)和188 Re-IGF-1A组(0.37、0.74、1.85 MBq).188ReO4-组和188Re-IGF-1A组分别在给药后1～7d,IGF-1A组分别在给药后1 ～6d,每天用MTT比色法测定其吸光度(A)值,计算细胞生存率和抑制率.(2)将1×106个细胞接种于培养瓶中,分188 ReO4-组和188 Re-IGF-1A组(均设1.85、3.70、7.40 MBq 3个剂量),在给药后3d用流式细胞仪检测细胞凋亡率.(3)36只荷人胰腺癌裸鼠,瘤内注射188Re-IGF-12.28-4.81 MBq,分别在15 min,1、4h,1、3和5d显像后处死裸鼠6只,计算各组织的％ID/g和每MBq活度的吸收剂量(mGy/MBq).对数据行单因素方差分析.结果 (1) IGF-1A和188Re-IGF-1A能抑制Patu8988细胞生长.加入188Re-IGF-1A后4d,1.85 MBq亚组抑制率达到(90.75±5.20)％,高于相同化学剂量的IGF-1A(5 μg)组或相同放射性活度的188ReO4-组[(49.50±2.39)％与(23.00±4.21)％],差异有统计学意义(F =554.724,P＜0.01).(2)给药1.85、3.70、7.40 MBq3 d后,188Re-IGF-1A组漂浮细胞比例分别为(16.56±0.95)％、(33.39±5.93)％和(43.76±1.38)％,漂浮细胞的凋亡率分别为(12.70±2.27)％、(17.80±1.51)％和(23.23±1.22)％.(3)荷瘤鼠瘤内注射188Re-IGF-1A后15 min和1、3、5d肿瘤内放射性摄取分别为(39.30±17.98)、(10.59±9.39)、(5.32±1.53)和(5.30±2.28) ％ID/g.肿瘤内吸收剂量为5165.8 mGy/MBq.结论 188Re-IGF-1A对胰腺癌细胞生长有明显的抑制作用,并可诱导细胞凋亡;瘤内注射后肿瘤部位摄取较高.     

毛囊真皮鞘细胞在皮肤创伤愈合中作用的实验研究

目的：通过体外培养毛囊真皮鞘细胞移植于大鼠皮肤创面的实验研究,探讨真皮鞘细胞在皮肤创伤愈合中的作用。方法：组织块法原代培养Wistar大鼠触须毛囊真皮鞘细胞,5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记。Wistar大鼠22只,采用背部皮肤缺损模型,分细胞移植组和生理盐水对照组。术后3d、7d、14d、1个月和2个月取材,图像分析计算创面收缩率,免疫组化观察植入细胞在体内的转归,光镜和扫描电镜观察创面愈合病理过程。结果：术后各时间点细胞移植组创面收缩率均大于对照组（P〈0．01）;术后7d移植组新生肉芽组织中见不均匀分布的标记细胞,14d标记细胞减少并出现凋亡;移植组愈合过程中肉芽组织形成、表皮再生、胶原增生和组织改建均较对照组有所提前。结论：毛囊真皮鞘细胞在皮肤创伤修复过程中参与肉芽组织形成,具有加速创面收缩和促进愈合进程的作用。     

高强度皮秒脉冲电场对人宫颈癌HeLa细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的探讨高强度皮秒脉冲电场对体外培养的人宫颈癌细胞HeLa的生长抑制和凋亡诱导作用。方法体外培养人宫颈癌细胞HeLa,将细胞分为处理组(在高强度皮秒脉冲电场处理)及正常对照组(未经高强度皮秒脉冲电场处理)。固定脉宽、频率、场强,按脉冲个数1002、005、001、0001、5002、000分为6个处理组,利用MTT比色法检测脉冲电场对HeLa细胞的生长抑制作用和量效关系。检测细胞存活率发生显著变化的5001、0002、000组细胞的Caspase3活性。根据MTT及Caspase结果,只选取Caspase 3活性高的脉冲个数2000组加入罗丹明123探针后于激光共聚焦扫描显微镜下检测HeLa细胞线粒体跨膜电位。结果 MTT证明高强度皮秒脉冲电场对HeLa细胞有杀伤作用且存在剂量-效应关系,细胞存活率随脉冲个数的增加而降低,脉冲个数100、200、500、10001、5002、000处理组及正常对照组HeLa细胞存活率分别为96.23%±0.76%,94.11%±2.42%,90.31%±1.77%,64.59%±1.59%,32.95%±0.73%,23.85%±2.38%,100%,各处理组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。脉冲个数500、1000、2000及正常对照组Caspase 3吸光度值(A值)分别为0.174±0.012,0.232±0.017,0.365±0.016,0.122±0.011,各处理组均高于正常对照组(P<0.05)。脉冲个数2000组线粒体跨膜电位荧光强度(76.66±13.38)明显低于正常对照组(155.81±2.33,P<0.05)。结论高强度皮秒脉冲电场对HeLa细胞有生长抑制作用,其机制可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制

目的 探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法 选取人绒毛膜滋养层细胞，分为4组：对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况，qRT-PCR检测miR-491-5p的表达，TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因，双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后，qRT-PCR检测miR-491-5p的表达，Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变，细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果 与对照组比较，缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs. 1.000±0.000,P<0.01)；生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示...     

大麻二酚对高糖诱导小鼠肾脏足细胞系MPC5细胞凋亡的保护作用

目的 探讨大麻二酚(cannabidiol,CBD)对高糖环境中小鼠足细胞系MPC5细胞凋亡的影响.方法 将MPC5细胞分为对照组(Vehicle)、高糖组(high glucose,HG)和CBD组.CCK-8试剂盒检测MPC5细胞的增殖活性,流式细胞术检测MPC5细胞的凋亡率,Western blot检测裂孔膜蛋白...     

干扰素基因激活因子激动剂对人皮肤黑色素瘤细胞的放射增敏作用研究

目的探讨干扰素基因激活因子(STING)激动剂对皮肤黑色素瘤细胞的放射增敏作用及其机制。方法为检测STING激动剂环二腺苷酸(c-di-AMP)对人皮肤黑色素瘤细胞(A375)辐射后的影响, 将人皮肤黑色素瘤细胞A375分为空白对照组、10 μmol/L c-di-AMP处理组、X射线照射组、照射+c-di-AMP组。通过CCK-8法、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、平板克隆形成实验以及流式细胞术等手段, 检测c-di-AMP对A375细胞的放射增敏作用。采用Western blot检测细胞死亡相关蛋白表达。结果 10 μmol/L的c-di-AMP联合10 Gy X射线照射时可见明显的放射增敏效应, A375细胞活力较X射线照射组显著下降(t=5.11, P<0.05), 细胞毒性显著增加(t=10.15, P<0.05), 细胞凋亡显著增加(t=4.41, P<0.05), 细胞克隆增殖能力显著降低(t=6.30、3.55、5.45、3.55, P<0.05)。c-di-AMP的放射增敏比(SER)为1.88。10 μmol/L的c-di-AMP联合10 Gy...     

细胞外信号调节激酶信号通路在血小板源生长因子促进糖尿病大鼠创面愈合中的作用

目的观察重组人血小板源生长因子(rhPDGF)促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面修复可能涉及的信号通路：方法26只糖尿病大鼠背部各制备4个全层皮肤缺损创面，创面随机分成A和B两组，A组对照组，B组为rhPDGF(7．0μg／Cm2)治疗组。观察伤后3，7，14d创面肉芽形成、胶原沉积、再上皮化速率以及炎症细胞浸润情况，并采用免疫荧光技术观察创周和创基修复细胞内细胞外信号调节激酶1／2(extracellular signal—regulated kinase1／2，ERK1／2)的表达，用免疫组织化学方法检测原癌基因e—fos、增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PCNA)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)的变化情况。结果组织学检查显示，rhPDGF治疗的创面大量的炎症细胞浸润，毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于对照组，胶原沉积明显，肉芽组织生长活跃，创面收缩显著。免疫学研究显示，伤后3d，rhPDGF治疗组ERK1／2和c—fos的表达明显增强，7d时，ERK1／2和c—fos进一步增强，14d后开始减弱。rhPDGF治疗组各时相点修复细胞PCNA和FAK的表达明显强于对照组：结论ERK1／2信号通路在rhPDGF促糖尿病大鼠创面愈合中起一定作用，并在细胞增殖与迁移中充当重要角色。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF表达的影响

目的应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,以探讨GDNF对损伤神经元的作用.方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组:A组(N=5)正常对照组,B组(N=20)坐骨神经压榨伤组,C组(N=20)坐骨神经切断/结扎组;B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组,每组5例.大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死,取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段,免疫组化染色观测GDNF表达.结果 (1)正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元,少数为大神经元.(2)坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强,伤后2周达到高峰;B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调,伤后2个月恢复为对照组水平.C组背根节细胞GDNF表达保持高水平,并至观察后期2个月.(3)坐骨神经损伤同时诱导背根节卫星细胞及坐骨神经雪旺氏细胞GDNF表达显著增强,其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端.B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周,C组伤后1个月时其表达仍显著.结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子,并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用.     

支气管动脉灌注化疗联合直线加速器放射治疗Ⅲa期非小细胞肺癌

目的　研究支气管动脉灌注化疗联合直线加速器放射治疗Ⅲa期非小细胞肺癌 (NSCLC)的可行性及临床价值。方法　 76例NSCLC患者随机分成A、B 2组 ,A组先行 2次支气管动脉灌注化疗 (BAI) ,第 2次BAI 1～ 2周后再行直线加速器放射治疗 (RT) ;B组单纯行 2次BAI (对照组 )。结果　临床疗效 ,A组 (BAI RT)和B组 (BAI)分别为 89.47%和 60 .5 3% (Ρ <0 .0 1) ;1、3年生存率 ,A、B组分别为 81.5 8%、5 0 .0 0 %和 60 .5 3%、2 1.0 5 % ( 0 .0 1<Ρ <0 .0 5 )。结论　支气管动脉灌注化疗联合直线加速器放射治疗Ⅲa期非小细胞肺癌的临床疗效和患者 1、3年生存率均显著提高     

非培养皮肤细胞喷雾移植技术用于小型猪创伤修复的研究

目的 探讨非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术用于小型猪全层皮肤损伤的修复治疗效果。方法 巴马小型猪背部两侧创建6个直径3 cm的全层皮肤切除创面,分生理盐水组、脱细胞猪真皮基质粉组（ADM组）、多点注射细胞治疗组（细胞注射组）和喷洒细胞治疗组（细胞喷洒组）进行治疗。术后连续监测实验动物的生理状况及创面愈合情况,切取创面组织进行HE染色和细胞角蛋白-10(CK10)、CK14及血管性血友病因子（VWF）免疫组织化学染色,评估创面皮肤损伤修复效果。结果 术后14 d开始,细胞喷洒组的愈合速度更快;21 d时,细胞喷洒组创面的新生皮肤和毛发等皮肤附属器产生。HE染色结果证明,细胞治疗促进皮肤再生,且细胞喷洒组修复效率更高、新生皮肤更薄、更均一。免疫组化结果证明,术后7 d开始,细胞喷洒组中CK10阳性新生皮肤组织更长,修复速度更快;修复后期,细胞喷洒组CK10/CK14阳性新生皮肤更平整光滑,实现了美学修复。另外,细胞喷洒组VWF阳性细胞出现的时间更早,数量更多,排列更规律整齐,证明其新生皮肤富含更多的血管和毛囊,实现了功能修复。结论 非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术的应用显著提高了小型猪全层皮肤...     

用99Tcm-rh-Annexin V检测放疗或化疗后肿瘤细胞凋亡

目的 验证99Tcm直接法标记的重组人膜联蛋白V(99Tcm-rh-AnnexinV)用于早期评价放化疗后肿瘤组织细胞凋亡状态的可行性.方法 将小鼠肝癌细胞(Hca-F25)接种于实验小鼠右腋下,8 d后当肿瘤生长至直径约1 cm时,将模型鼠分为A(化疗组,13只)、B(放疗组,10只)、C(荷瘤对照组,12只)3组.其中A、C组按注射示踪剂后不同时间(1、4、6 h)各分为3个亚组(A1组3只,A2组4只,A3组6只;C1组3只,C2组4只,C3组5只);A组接受环磷酰胺单次化疗(按体重150 mg/kg,腹腔内注射),C组腹腔内注射同等量生理盐水,20h后A、C组鼠尾静脉注射99Tcm-rh-Annexin V 3.7MBq(0.5μg)/只.B组按不同吸收剂量(2、5、10 Gy)分为3个亚组(B1组4只,B2组3只,B3组3只),放疗后1 h注射与A、C组相同剂量示踪剂,6 h后显像.小鼠模型显像后即刻处死,取组织(肿瘤、血、肌肉)称重后,测量放射性计数,并计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及肿瘤(T)/肌肉(M)、T/血液(B)放射性比值,应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率.结果 A、B组小鼠肿瘤组织中凋亡细胞百分率[(11.16±3.83)%、(17.40±5.20)%]均明显高于C组[(2.11±1.51)%,F=56.414、94.748,P＜0.001];A2、A3及B组肿瘤组织%ID/g均明显高于C2及C3组(F值分别为14.307、7.074、28.672,P均＜0.05),且与凋亡细胞百分率呈明显正相关(A2、A3组r=0.813,P=0.002;B组r=0.780,P=0.004),而C组肿瘤组织%ID/g与凋亡细胞百分率无相关性(r=-0.238,P=0.229).结论 接受放疗或化疗后,小鼠肝癌组织对99Tcm-rh-AnnexinV的摄取明显增加,且其摄取程度与肿瘤组织内凋亡细胞量呈明显正相关;应用99Tcm-rh-AnnexinV显像可较准确地反映治疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状态.