PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901细胞化疗效果的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3-K)LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于胃癌细胞系SGC7901,探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法采用MTT比色法,流式细胞术检测5-FU、DDP及ADM单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人胃癌细胞SGC7901的抑制率、凋亡率。并分析单独及联合应用LY294002对SGC7901细胞周期的影响。Western-blot检测单独及联合化疗药后P-Akt蛋白在SGC7901细胞中的表达水平。结果单独使用化疗药5-FU、DDP及ADM均可抑制SGC7901细胞增殖、诱导其凋亡。当化疗药与抑制剂联合应用,对细胞的抑制作用明显增强,促凋亡作用增强,与对照组比较(P0.05)。细胞周期同步分析显示,单独用药均可将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期。联合使用抑制剂使处于G0/G1期细胞增加。Western blot显示化疗药上调P-Akt蛋白的表达,联合使用抑制剂后SGC7901细胞P-Akt蛋白的表达与未使用抑制剂比较减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断PI3K/Akt信号通路可提高化疗药5-FU、DDP及ADM对胃癌细胞株SGC7901的抑制率,凋亡率并使阻滞于G0/G1期细胞增多;LY294002通过阻断PI3K/Akt信号通路,抑制P-Akt蛋白表达,增强化疗药的敏感性;LY294002阻断PI3K/Akt信号通路对5-FU、DDP、ADM治疗胃癌有一定的协同或增强作用。     

Rapamycin抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MGC-803细胞影响

目的探讨rapamycin作用于胃癌细胞株MGC-803后对细胞生长影响及其作用机制。方法体外培养胃癌细胞株MGC-803,使用不同浓度rapamycin干预MGC-803细胞。采用MTT法检测细胞增殖变化;实时荧光定量PCR(QPCR)检测关键基因的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。结果与对照组相比,rapamycin对胃癌MGC-803细胞的增殖活性有明显的抑制作用,呈现出剂量依赖性(P0.05)。Rapamycin显著抑制PI3K、AKT、m TOR、4EBP、P70S6K基因的m RNA表达,差异有统计学意义(P0.05);Rapamycin能抑制p-m TOR、p-P70S6K蛋白的表达;Rapamycin将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P0.05)。结论靶向m TOR抑制剂rapamycin可通过调控PI3K/AKT/m TOR信号通路进而调控胃癌细胞的生长。     

SDF-1和PI3K/Akt通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号传导通路对卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制.方法:将卵巢癌CAOV3细胞分为对照组(未给药),实验组1(100 ng/ml SDF-1),实验组2(50 μmol/L PI3K/Akt信号传导通路抑制剂LY294002)和实验组3(50 μmol/L LY294002,作用0.5h后加入100 ng/ml SDF-1).采用MTT法检测卵巢癌CAOV3细胞经不同药物处理后24、48和72 h的细胞增殖能力.采用Transwell体外细胞侵袭实验和Western Blot法检测经不同药物处理48h后卵巢癌CAOV3细胞的侵袭能力、Akt磷酸化程度和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果:SDF-1可以明显促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05),LY294002可以抑制卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭(P＜0.05);实验组3卵巢癌CAOV3细胞的增殖和侵袭能力与实验组2比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:SDF-1能够通过PI3K/Akt信号传导通路诱导MMP-9蛋白表达上调,增强卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力;应用LY294002阻断PI3 K/Akt信号传导通路可显著抑制SDF-1对人卵巢癌CAOV3细胞增殖和侵袭的促进作用.     

1,25二羟维生素D3对肝癌HepG2细胞增殖侵袭影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]及PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)对人肝癌Hep G2细胞的增殖、侵袭影响及作用机制。方法实验设10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)mol/L 1,25(OH)_2D_3组及2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L LY294002组,10~(-7)mol/L 1,25(OH)_2D_3+5μmol/L LY294002联合组,噻唑蓝法检测人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率;Compu Syn软件计算联合指数;Tanswell小室检测HepG2细胞侵袭数;Western blot检测Hep G2细胞增殖细胞核抗原(PCNA),细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、10号染色体缺失且与张力蛋白同源物磷酸脂酶基因(PTEN)蛋白。结果 1,25(OH)_2D_3及LY294002对人肝癌HepG2细胞增殖抑制率呈时间-剂量依赖效应(P0.05);1,25(OH)2D3联合LY294002组细胞增殖抑制率明显高于二者单独处理组(P0.05),联合指数=0.728,2者具有协同效应;10-7mol/L 1,25(OH)2D3组、5μmol/L LY294002组以及联合组Hep G2细胞侵袭数[分别为(45.9±6.4)、(49.9±6.0)、(27.8±4.0)个]明显低于对照组[(64.6±8.0)个](P0.05)。与对照组比较,10-7mol/L 1,25(OH)2D3组及联合组HepG2细胞PTEN蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),10-7mol/L 1,25(OH)_2D_3组、5μmol/L LY294002组及联合组HepG2细胞PCNA、MMP-9、p-AKT蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P0.05),且联合组蛋白表达量低于二者单独处理组(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭,其机制可能与上调PTEN表达,抑制PI3K/AKT信号通路活性,下调PCNA、M M P-9蛋白有关;与LY294002合用具有协同效应。     

PI3K/Akt信号通路在虾青素调节LX-2细胞活化中作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在虾青素调节人肝星状细胞(LX-2细胞)活化中的作用。方法实验设对照组、低、中、高剂量虾青素组(5、10、20μmol/L)、抑制剂组(25μmol/L LY294002)、抑制剂+虾青素组(25μmol/L LY294002+20μmol/L虾青素),作用48 h后检测LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(col1a1)mRNA表达水平、各组细胞Akt及其磷酸化水平。结果与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中α-SMA和col1a1 mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖关系(P0.05);与对照组比较,抑制剂组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.42±0.05)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.23±0.05)、(0.35±0.06)]均明显降低(P0.05);与对照组比较,虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.60±0.07)、α-SM A和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.48±0.07)、(0.61±0.04)]均明显降低(P0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+虾青素组LX-2细胞中磷酸化Akt水平(0.18±0.04)、α-SMA和col1a1 mRNA表达水平[分别为(0.11±0.05)、(0.20±0.03)]均明显降低(P0.05)。结论虾青素可通过PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞活化,发挥抗非酒精性脂肪肝纤维化作用。     

PI3K/Akt通路在滋养细胞侵蚀能力中的调控机制

目的:探讨PI3K/Akt信号转导通路在滋养细胞侵蚀能力中的调控机制。方法:体外培养滋养细胞系。应用Western blot法检测表皮生长因子(EGF)刺激EVT后Akt、磷酸化Akt及MMP9表达的变化。应用细胞侵蚀小室检测滋养细胞的侵蚀能力。使用PI3K选择性抑制剂LY294002处理细胞,检测以上各项结果的变化。结果:①随EGF浓度增高,滋养细胞的Akt表达无明显变化,磷酸化Akt表达升高,MMP9表达升高;②EGF能够显著促进滋养细胞的侵蚀运动能力;③PI3K抑制剂LY294002明显逆转EGF对EVT侵蚀力的促进效应。结论:表皮生长因子可以活化滋养细胞的PI3K/Akt信号通路,进而促进细胞侵蚀,使用PI3K抑制剂LY294002,上述作用被抑制。     

姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中VEGF和HIF-1α表达通过PI3K／AKT／FRAP信号传导通路

目的探讨MAPK和PI3K信号传导通路在姜黄素调节VEGF和HIF-1α表达中的作用。方法分别加入LY29400225μmol／L、50μmol／L，U012610μmol／L、20μmol／L，rapamycin 5ng／ml、10ng／ml处理人肝癌细胞BEL-7402，30min后加入姜黄素10μmol／L，对照组单独加入0、10μmol／L姜黄素，缺氧环境中培养6h后，行RT—PCR和Western Blot检测VEGF蛋白、mRNA和HIF-1α蛋白表达；分别加入不同浓度的的姜黄素以及LY294002 25 μmol／L处理人肝癌细胞BEL-7402，缺氧环境中培养6h后，行Western Blot检测磷酸化AKT和总AKT蛋白表达。结果姜黄素10μmol／L＋LY29400225μmol／L组、姜黄素10μmol／L＋LY294002 50 μmol／L组、姜黄素10μmol／L＋rapamycin 5 ng／ml组、姜黄素10μmol／L＋rapamycin 10 ng／na组HIF-1α蛋白、VEGF蛋白、mRNA表达分别与姜黄素10μmol／L组相比降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；而姜黄素10μmol／L＋U012610μmol／L组、姜黄素10μmol／L＋U0126 20 μmol／L组HIF—1α蛋白、VEGF蛋白、mRNA表达分别与姜黄素10μmol／L组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；不同浓度的姜黄素、LY294002 25 μmol／L处理的人肝癌细胞BEL-7402缺氧6h后磷酸化AKT蛋白表达逐渐降低，LY294002 25 μmol／L可以基本阻断磷酸化AKT蛋白的表达，而对总AKT蛋白表达无明显变化。结论姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α蛋白和VEGF的表达通过P13K／AKT／FRAP信号传导通路。     

槐定碱通过PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导自噬抑制胰腺癌细胞增殖

目的 探讨槐定碱对胰腺癌细胞增殖及自噬的影响,并分析其机制。方法 MTT法分析Sw1990细胞增殖, MDC染色法检测细胞自噬水平,western blot检测细胞自噬相关蛋白、PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平,运用自噬抑制剂（3 - MA）研究自噬对细胞增殖的影响;裸鼠成瘤实验检测体内胰腺癌细胞增殖情况,并分析瘤组织中LC3 II、p - mTOR蛋白水平。结果 槐定碱抑制胰腺癌Sw1990细胞的增长,促进自噬小泡的形成,上调LC3 II/ LC3 I、Beclin - 1水平,下调p - PI3K、p - AKT、p - mTOR水平（P＜0.05）;与槐定碱40 μmol/L组比较,槐定碱40 μmol/L + 3 - MA 5 μmol/L组细胞抑制率升高,LC3 II/ LC3 I降低,p - mTOR蛋白水平升高（P＜0.05）; 40 mg/kg槐定碱下调裸鼠瘤体体积、瘤体质量,上调LC3 II/ LC3 I水平,下调p - mTOR蛋白水平（P＜0.05）。结论 槐定碱能抑制Sw1990细胞增殖,与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响自噬有关。     

LY294002对人卵巢癌细胞中整合素连接激酶表达的影响

目的探讨磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号转导通路的特异性抑制剂LY294002对体外培养的高转移卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM中整合素连接激酶(ILK)蛋白表达和转录水平的影响。方法经细胞培养后,应用免疫细胞化学、Western-blot和RT-PCR实验技术,将实验数据进行Dumengtt检验。结果LY294002处理组细胞ILK表达显著低于对照组(P<0.05),且随LY294002作用浓度的增加,ILK表达水平逐渐下降。结论PI3K信号转导通路参与了人卵巢癌HO8910PM细胞中ILK表达的调控,LY294002可以抑制ILK在蛋白和转录水平的表达。     

PI3K/Akt/mTOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中协同作用及机制

目的初步探讨PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中的协同作用。方法采用不同浓度的PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路抑制剂rapamycin与PD98059分别单独及联合作用于胃癌细胞SGC-7901。采用CCK8法检测SGC-7901细胞增殖情况;实时荧光定量PCR检测关键基因m RNA的表达;蛋白印迹法(WB)检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化。结果 Rapamycin(12.5、25、50、100、150、200 nmol/L)与PD98059(25、50、100、200、300、400μmol/L)单独作用可抑制SGC-7901细胞增殖活性,联合作用也可抑制其活性,且联合组的抑制作用强于单独作用(P0.05)。与rapamycin、PD98059单独作用相比,联合组对AKT、m TOR、MEK、ERK基因m RNA表达和p-AKT、p-m TOR、p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达的抑制作用明显增强(P0.05)。联合组阻滞于G0/G1期的细胞比例显著增多,且具有更强的促凋亡作用。结论 PI3K/Akt/m TOR和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞生长中具有一定的协同调控作用。     

PI3K-AKT信号传导通路与鼻咽癌的相关性的初步研究

目的探讨鼻咽癌患者磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路及其鼻咽癌细胞株(CNE2)之间的关系。方法按诊断标准选取我院门诊、健康体检和住院病人鼻咽癌患者研究组和空白对照组,各5例。比较2组鼻咽癌患者磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路及其鼻咽癌细胞株(CNE2)的相关性。结果研究组和空白对照组的PI3K和AKT的蛋白表达量明显高于正常值。而LY294002对CNE2细胞生长、增殖具有抑制作用,而且呈剂量依赖性。LY294002作用后鼻咽癌细胞株CNE2细胞的PI3K和AKT的蛋白表达均减弱。LY294002可以诱导CNE2细胞的凋亡。随着LY294002浓度的增加,凋亡率呈上升趋势,15、30、50nmol/L的LY294002作用后CNE2细胞所产生的凋亡率分别为(5.621±0.125)、(18.522±0.764)、(24.270±0.215),而空白对照组为(3.430±0.234),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LY294002与鼻咽癌鼻咽癌细胞株CNE2间存在显著负相关,并可以抑制鼻咽癌鼻咽癌细胞株CNE2的生长和增殖从而诱导其凋亡。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K—AKT)信号转导通路的激活及其鼻咽癌细胞株(CNE2)之间存在显著正相关关系。     

EGCG对体外应激海马神经元的保护作用及其机制探讨

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外应激海马神经元的保护作用,并探讨其相关作用机制。方法体外培养新生大鼠海马神经元,于原代培养D13时加入不同浓度的皮质酮,采用CCK8(cell counting kit-8)法检测对神经元存活率的影响;加入EGCG(0、0.1、1、5、10μmol/L)预处理24h后,加入皮质酮(CORT,1×10-5mol/L)建立应激损伤模型,采用CCK8法检测神经元的存活率;然后加入LY294002(PI3K/AKT特异性阻断剂)和U012(6ERK1/2特异性阻断剂),检测细胞存活率的改变,并以Hoechst33342核染色法检测细胞凋亡情况。结果皮质酮在10-6～10-4mol/L范围内对海马神经元的神经毒性作用呈现浓度-时间依赖性;0.1μmol/L EGCG处理对皮质酮造成的海马神经元损伤具有保护作用,能够增加细胞存活率,降低细胞凋亡的发生;而加入信号通路阻断剂LY294002(10 mol/L)和U0126(10 mol/L)后,此保护作用受到抑制,其能抑制EGCG对抗CORT引起的神经元细胞存活率下降,细胞凋亡增多。结论 EGCG处理对皮质酮造成的大鼠海马神经元损伤具有保护作用,其作用机制可能与EGCG调控PI3K/AKT、ERK1/2信号转导通路相关。     

黄芪多糖通过PI3K/Akt途径抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡的机制研究

目的探讨黄芪多糖对小鼠胰岛βTC-6细胞中PI3K/Akt信号通路和棕榈酸诱导的细胞凋亡的影响及其机制。方法Western blotting检测黄芪多糖对βTC-6细胞中Akt磷酸化的影响;将βTC-6细胞随机分为对照组(不做任何处理)、PA组(给予0.5 mmol/L棕榈酸处理24 h)、PA+APS组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸和0.1 g/L黄芪多糖作用24 h)和PA+APS+LY组(同时给予0.5 mmol/L棕榈酸、0.1 g/L黄芪多糖和50μmol/L LY294002作用24 h),MTT法检测各组细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达水平。结果黄芪多糖能够呈剂量-时间依赖性诱导βTC-6细胞中Akt磷酸化。与对照组相比,PA组、PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05);与PA组相比,PA+APS组和PA+APS+LY组细胞的活性及GLP-1R、PDX-1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高,细胞凋亡率及Bax mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05);且PA+APS+LY组的变化幅度明显低于PA+APS组。结论黄芪多糖可通过激活PI3K/Akt信号通路,上调GLP-1R、PDX-1、Bcl-2和下调Bax表达,进而抑制小鼠胰岛βTC-6细胞凋亡。[营养学报,2019,41(3):265-269]     

丙泊酚对感染性休克大鼠肾功能和PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨丙泊酚对感染性休克大鼠肾功能和PI3K/Akt信号通路的影响。方法将SPF级Wistar大鼠分为对照组、模型组、丙泊酚组、LY294002P组、丙泊酚+LY294002P组,检测各组大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、半胱氨酸抑制素C(CysC)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)。结果与对照组相比,模型组、丙泊酚组、LY294002P组、丙泊酚+LY294002P组的Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax蛋白水平升高(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平降低(P0.05)。与模型组相比,丙泊酚组、丙泊酚+LY294002P组Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax蛋白水平降低(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平升高(P0.05);与模型组相比,LY294002P组Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax蛋白水平升高(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平降低(P0.05)。与丙泊酚组相比,丙泊酚+LY294002P组Scr、BUN、CysC、LDH、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、肾组织凋亡指数、Cleaved-Cas-3、Bax水平升高(P0.05),SOD、GSH-Px含量和Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT蛋白水平降低(P0.05)。结论丙泊酚可以改善感染性休克大鼠肾功能损伤,可能与降低炎症和氧化应激反应、激活PI3K/Akt信号通路有关。     

磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)抑制剂BEZ235联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响,分析其相关机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞分为对照组(未加任何药物刺激)、BEZ235组(100 nmol/L)、SAHA组(10μmol/L)、联合给药组(BEZ235 100 nmol/L+SAHA 10μmol/L)。采用噻唑蓝(MTT)法检测宫颈癌HeLa细胞活力,采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测bcl-2蛋白、Bax蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路激活情况。结果 对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值分别为(0.77±0.05)、(0.62±0.05)、(0.60±0.04)、(0.45±0.05)。与对照组比较,BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值均显著降低(t=5.959,P<0.05;t=7.690,P<0.05;t=13.280,P<0.05)。与BEZ235组和SAHA组比较,联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值均显著降低(t=7.187,P<0.05;t=6.631,P<0.05)。BEZ235组和SAHA组宫颈癌HeLa细胞OD值比较差异无统计学意义(t=1.183,P>0.05)。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞凋亡率分别为(5.72±0.34)%、(13.11±0.67)%、(18.36±0.75)%、(30.46±1.10)%。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组bcl-2相对表达量分别为(0.84±0.06)、(0.47±0.05)、(0.40±0.04)、(0.20±0.04),Bax相对表达量分别为(0.19±0.03)、(0.46±0.05)、(0.67±0.05)、(0.82±0.05)。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组p-AKT相对表达量分别为(0.97±0.08)、(0.72±0.07)、(0.54±0.07)、(0.22±0.05),p-mTOR相对表达量分别为(0.84±0.06)、(0.43±0.07)、(0.61±0.08)、(0.16±0.05)。结论 PI3K/mTOR抑制剂BEZ235、组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独或联合应用能显著抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导细胞凋亡,且具有协同效应,与PI3K/AKT/mTOR信号通路进一步抑制有关。     

1,4苯醌对K562细胞自噬的影响及机制

[目的]研究1,4苯醌(1,4-BQ)对人慢性髓系白血病K562细胞自噬的影响及其机制。[方法]选择人慢性髓系白血病K562细胞,采用1,4-BQ、自噬早期抑制剂LY294002和自噬晚期抑制剂氯喹(CQ)进行染毒处理,分为对照组、1,4-BQ染毒组(5、10、20μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)、CQ组(10μmol/L)、1,4-BQ(20μmol/L)+LY294002(10μmol/L)组和1,4-BQ(20μmol/L)+CQ(10μmol/L)组。应用MTT法检测细胞增殖率;采用CYTO-ID荧光探针并运用荧光染色法和流式细胞术法对细胞自噬水平进行定性、定量检测;采用丫啶橙染色法检测细胞溶酶体pH值;运用实时定量PCR法和Western blot法检测LC3-Ⅱ和P62自噬相关基因和蛋白的表达水平。[结果]10、20μmol/L的1,4-BQ分别作用K562细胞24、48、72 h后,细胞相对增殖率明显降低(P0.05)。CYTO-ID自噬荧光染料特异性聚集在K562细胞胞质内,随着染毒浓度增加荧光强度明显增强。流式细胞术结果显示,与对照组相比,5、10、20μmol/L 1,4-BQ组自噬水平均明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。丫啶橙染色结果显示,不同浓度1,4-BQ组红色荧光强度均高于对照组,即1,4-BQ组溶酶体pH明显降低。Western blot结果显示,当1,4-BQ浓度为10、20μmol/L时,LC3-Ⅱ和P62蛋白表达量明显高于对照组(P0.05),且在染毒24 h时增幅最大。干预自噬后,与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+LY294002组的自噬水平和LC3-Ⅱ蛋白表达量均降低(P0.05)。与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组自噬水平增加(P0.05),而与CQ组的差异无统计学意义。此外,与对照组相比,CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达明显增加(P0.05)。与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达水平差异无统计学意义(P0.05)。[结论]1,4-BQ可引起K562细胞LC3-Ⅱ、P62蛋白表达增加,可能是通过增加自噬体的合成和减少自噬体的降解从而增加细胞自噬。     

表皮生长因子受体及PI3K在硫酸锌诱导人呼吸道上皮细胞间粘附分子-1表达过程中的作用

目的探讨硫酸锌对上皮细胞内细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响及其分子生物学机制。方法应用PCR与蛋白质免疫印迹试验检测硫酸锌诱导人呼吸道上皮细胞ICAM-1mRNA与蛋白的表达,以及表皮生长因子受体(EGFR)及PI3K的活化。结果硫酸锌可诱导ICAM-1mRNA与蛋白的过量表达。在同一试验条件下,硫酸锌可诱发EGFR及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)下游激酶Akt的磷酸化或活化。用EGFR抑制剂(PD153035)及PI3K抑制剂(LY294002)预处理上皮细胞,可明显抑制硫酸锌对ICAM-1表达的诱导作用。结论硫酸锌可激活EGFR与PI3K/Akt信号传导通路,进而上调ICAM-1的表达。     

PI3K/Akt信号通路对二氧化硅诱导人胚支气管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路在二氧化硅(SiO2)粉尘诱导的人胚胎支气管上皮细胞(HBE)表达转化生长因子(TGF)-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)中的作用.方法 将体外培养的HBE细胞分成5组:(1)空白对照组;(2)SiO2处理组;(3)Akt磷酸化抑制剂组;(4)同时用Akt磷酸化抑制剂和SiO2处理组;(5)Akt磷酸化抑制剂处理细胞24 h再用SiO2处理组;SiO2暴露浓度为100 μg/ml,磷酸化抑制剂Ly294002浓度为10 μmol/L;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、TGF-β 、α-SMA表达水平.用免疫荧光技术检测上述处理过程中α-SMA蛋白在细胞中的定位和表达情况.结果 SiO2可以明显促使Akt磷酸化,48 h p-Akt表达增加了近l倍,72 h表达最高;TGF-β在12h明显增高,48 h达高峰;α-SMA表达在24 h开始增高,72h表达上调了1倍.Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制Akt的磷酸化,明显降低α-SMA的表达,尤其是先加抑制剂与细胞作用24 h后再加SiO2,p-Akt和α-SMA表达均明显下调,分别下调了1.5倍和7.6倍,对TGF-p表达则无明显影响.免疫荧光结果显示,SiO2可明显诱导HBE细胞内α-SMA的表达,而Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以使HBE细胞内α-SMA蛋白的荧光强度明显减弱.结论 SiO2诱导HBE细胞表达α-SMA可能是通过PI3K/Akt信号通路实现的,Akt磷酸化抑制剂Ly294002可以有效抑制SiO2诱导的α-SMA表达.     

隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的观察隐丹参酮对人肝癌HepG2细胞自噬的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HepG2细胞,采用CCK-8检测细胞活力,并计算IC_(50);Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡;mRFP-GFP-LC3转染HepG2细胞,检测自噬流情况;Western blot分析检测自噬相关蛋白LC3,Beclin-1及PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果隐丹参酮可显著抑制HepG2细胞活力,并诱导细胞凋亡;隐丹参酮显著增加HepG2细胞自噬小体及自噬溶酶体数量(P0.05);隐丹参酮显著升高HepG2细胞LC3-II/LC3-I比值及Beclin-1表达(P0.05),同时降低p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR(P0.05)。结论隐丹参酮可诱导HepG2细胞自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

莱菔硫烷对膀胱癌细胞增殖抑制作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)信号途径在莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)抑制膀胱癌细胞增殖中的作用。方法噻唑蓝(MTT)法测定膀胱癌细胞的增殖作用,用实时定量PCR方法(re-al time-PCR)测定对环氧化酶(COX-2)mRNA的影响。结果 5～20μmol/L莱菔硫烷能明显抑制膀胱癌细胞的体外增殖、COX-2 mRNA表达;SB202190或LY294002预处理T24细胞,能明显降低莱菔硫烷对T24细胞增殖的抑制作用,提高细胞存活率;SB202190预处理T24细胞1h能完全阻断莱菔硫烷对COX-2 mRNA的抑制作用,而LY294002不影响莱菔硫烷对COX-2 mRNA的抑制作用。结论莱菔硫烷可能是通过活化p38激酶途径和PI3K激酶途径抑制膀胱癌细胞生长,p38激酶信号途径在SFN抑制COX-2 mRNA中起关键作用。