杀草强对人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞全基因表达谱的影响

目的研究杀草强对人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞全基因表达谱的影响。方法以100μg/ml杀草强处理Nthy-ori-3-1细胞24 h后,进行全基因表达谱分析,采用实时定量PCR验证芯片结果,并用GO分析和pathway分析芯片结果。结果实时定量PCR验证差异基因表达与芯片结果一致。GO和pathway分析结果显示共检测了41 001个基因,按P0.005和FC≤0.5或FC≥2的标准筛选,共有20个差异基因涉及44条通路。Agt、cd70、bmp2、arnt2和wint5b基因出现在多条信号通路中。结论杀草强主要影响Nthy-ori-3细胞肿瘤发生相关基因,即上调cd70和wint5b基因表达及下调bmp2和arnt2基因表达,可能是其导致甲状腺肿瘤的机制之一。     

杀草强诱导人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞肿瘤相关基因表达谱变化

目的以人甲状腺Nthy-ori-3-1细胞为受试对象,通过差异性表达谱芯片分析,探索杀草强致人甲状腺肿瘤的相关机制。方法以1~100μg/m L杀草强处理Nthy-ori-3-1细胞24 h后,用MTT法检测其对细胞增殖的影响。以100μg/m L杀草强处理细胞24 h后,做基因表达谱分析,并用GO(Gene Ontology)分析和pathway分析芯片结果,用实时定量PCR验证芯片结果。结果 MTT结果显示,所有检测浓度杀草强对Nthy-ori-3-1细胞增殖均无显著影响。芯片结果显示,有90个基因表达显著变化,55个上调,35个下调;GO分析显示,43个基因与生物过程相关(37个上调,6个下调),42个与分子功能相关(37个上调,5个下调),44个与细胞组分相关(38个上调,6个下调)。Pathway结果显示差异基因共影响45条信号通路,其中10条与肿瘤发生发展密切相关。实时定量PCR验证差异基因表达与芯片结果一致。wnt5b、arnt2和bmp2基因在多条肿瘤相关通路中均有显著变化。结论杀草强可能通过多信号通路导致甲状腺肿瘤,其中wnt5b、arnt2和bmp2等基因可能是其主要靶基因。     

亚慢性砷染毒对大鼠肾小球细胞半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的探讨半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)对砷中毒肾小球细胞凋亡的影响。方法将清洁级SD大鼠随机分为高、低剂量组和对照组(自来水),每组10只,雌雄各半,将As2O3溶于饮水中进行染毒。高、低剂量组砷染毒剂量分别为10、0.4mg/(kg·d),对照组可自由饮水,连续染毒4个月,每周称体重。染毒结束后,测定尿砷、血砷的含量,免疫组化SABC方法检测肾小球细胞caspase-3的表达,并进行图像分析、计数。结果与对照组比较,高、低剂量组尿砷、血砷含量均较高,肾小球细胞caspase-3阳性细胞数均较多,灰度值均较低;与低剂量组比较,高剂量组尿砷、血砷含量均较高,肾小球细胞caspase-3阳性细胞数较多,灰度值较低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论慢性砷中毒所致肾小球细胞凋亡可能与肾小球细胞caspase-3的表达明显增加有关。     

MCHR1基因沉默对3T3-L1细胞诱导分化的影响

摘要:目的　运用RNA干扰技术沉默黑色素浓集激素受体1（Melanin-Concentrating Hormone Receptor 1,MCHR1）基因的表达,观察其对3T3-L1细胞诱导分化的影响,为肥胖症的基因治疗提供新思路。方法　用含绿色荧光蛋白的重组载体sh-MCHR1,通过脂质体法转染3T3-L1细胞。细胞诱导分化的同时用黑色素浓集激素（Melanin-Concentrating Hormone,MCH）干预,并在不同时点对脂滴进行油红O染色。采用RT-PCR以及Western blot分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ,PPAR γ）、CCAAT/增强子结合蛋白-α（CCAAT/ Enhancer-Binding Protein α,C/EBPα）和脂肪酸结合蛋白2（adipocyte protein 2,ap2）mRNA和蛋白的表达。结果　重组载体sh-MCHR1成功转染;与阴性转染组相比,sh-MCHR1转染组d 10后,油红O 染液相对OD510值显著下降（P＜0.05）;PPARγ、C/EBPα和ap2 mRNA的表达量分别在d 6、d 8和d 8后显著下降（P＜0.05）;3者蛋白的表达量均在d 8后显著下降（P＜0.05）。结论　shRNA沉默MCHR1基因可减缓3T3-L1细胞诱导分化,其可能通过抑制PPARγ、C/EBPα和ap2的表达而实现。     

miR-9-3p对HepG2细胞脂蛋白调节因子ABCA1蛋白表达的影响

目的 评估miR-9-3p对ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-bindingcassettetransporterA1,ABCA1基因及蛋白表达的影响。方法 采用HepG2细胞,应用细胞培养、miR-9-3pmimics转染、实时定量PCR技术（qRT-PCR）以及Westernblotting免疫印迹等实验技术,分析miR-9-3p对细胞ABCA1mRAN及蛋白表达水平的影响。结果 (1) miR-9-3p转染组miR-9-3p水平较对照组显著升高,差异有统计学意义（P<0.001）,证明转染成功;(2)两组ABCA1mRNA水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;(3) miR-9-3p转染组ABCA1蛋白水平较对照组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-9-3p能够抑制细胞内ABCA1蛋白表达,但对转录水平未见显著影响。     

特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白表达的抑制作用

目的:探讨特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中肿瘤-睾丸抗原OY-TES-1蛋白表达的影响。方法:针对OY-TES-1基因设计、化学方法合成的siRNA通过脂质体转染体外培养的卵巢癌SKOV3细胞,在转染后24、36、48、72 h,通过免疫细胞化学检测OY-TES-1蛋白的表达水平。结果:靶向OY-TES-1基因siRNA转染SKOV3细胞后,OY-TES-1蛋白的表达明显降低,其抑制作用在转染后24 h出现,转染后36 h几乎完全被抑制,转染后72 h开始出现RNAi衰减现象。结论:OY-TES-1特异性siRNA(1 486～1 504)序列可在体外有效地干扰SKOV3细胞中OY-TES-1基因的表达。     

镉对人胚肾细胞凋亡和血红素氧合酶-1表达的影响

目的探讨镉对人胚肾细胞(HEK239T)凋亡和血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响。方法 MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测镉诱导人胚肾细胞凋亡,应用逆转录多聚酶链反应 (RT-PCR)及Western免疫印迹法检测镉对人胚肾细胞HO-1 mRNA及蛋白表达的影响。结果 5．0、 10．0、20．0、40．0μmol／L CdCl2诱导人胚肾细胞后,凋亡率分别为11．90％±0．28％、9．27％±1．73％、 9．79％±0．67％、8．97％±1．60％,均明显高于对照组(6．69％±0．46％),差异有统计学意义(P< 0．01)。10～40μmol／L CdCl2均可高度诱导人胚肾细胞HO-1表达,随着剂量增高缓慢上升并达到平台期,随时间的延长略有降低。结论镉可诱导人胚肾细胞凋亡,上调HO-1的表达。     

敌敌畏、乐果和马拉硫磷混合染毒对雄性小鼠生殖功能的影响

目的 研究敌敌畏、乐果和马拉硫磷混合染毒后对雄性小鼠生殖功能影响的特点和可能机制。方法 将105只雄性ICR小鼠按体重分层随机分成7组,每组15只,即对照组(0 mg/kg),敌敌畏、乐果和马拉硫磷混合低( 10.8 mg/kg)、中(21.5mg/kg)、高剂量组(43.0 mg/kg),以及敌敌畏组(5.1 mg/kg)、乐果组(12.6 mg/kg)和马拉硫磷组(25.3 mg/kg),经口连续灌胃染毒35 d,每天1次。染毒第36天后处死动物。测量小鼠体重、精子活力,观察精子数量及精子畸形率,检测血清中性激素[包括睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)等]的水平,并观察睾丸及附睾的病理及电镜下改变。结果 染毒后第14天,混合高剂量组小鼠体重[(22.40±3.07)g]低于对照组[(26.73±2.82)g](P＜0.05);染毒后第28天,混合中剂量组小鼠体重[(30.00±4.93)g]亦低于对照组[(33.13±3.29)g](P ＜0.05)。混合中、高剂量组精子数[分别为(321.17±18.19)×106/g附睾重、(225.00±19.67)×106/g附睾重]和精子活力[分别为(64.67±9.91)％、(57.83±9.66)％]均低于对照组[分别为( 373.33±14.65)× 106/g附睾重、(75.17±7.68)％](P值均＜0.05);精子畸形率[分别为(43.33 ±8.66)‰、(55.00±13.80)‰]高于对照组[(32.67±8.17)‰]（P值均＜0.05）;与对照组相比[FSH、E2、LH、T分别为(1.41±0.20)、(17.32±2.72)、(8.75±1.32)、（3.45±0.80）nmol/L],混合中、高剂量组小鼠血清中FSH[分别为(3.14±0.62)、(3.85±0.37) nmol/L]、E2[分别为(36.81±6.68)、（43.76±9.82）nmol/L]水平升高（P值均＜0.01）,LH[分别为(5.21 ±1.23)、(4.27±1.09) nmol/L]、T[分别为(1.37±0.38)、(0.73±0.18)nmol/L]水平降低（P值均＜0.01）。混合高剂量组小鼠睾丸成熟精子数减少,并可见结构异常的精子头、精子尾。结论 敌敌畏、乐果和马拉硫磷混合联合染毒可直接损害小鼠睾丸及附睾的结构和功能,而导致生殖细胞生成过程异常;并导致下丘脑-垂体-性腺轴性激素的分泌紊乱。     

白细胞介素-1β对人子宫内膜细胞间粘附分子-1和金属蛋白酶9的影响

目的 探讨白介素-1β(IL-1β)对分泌中期体外培养的子宫内膜细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和金属蛋白酶9(MMP9)的影响.方法 建立子宫内膜体外培养模型,采用酶联免疫吸附检测(ELISA)方法分别检测经不同浓度IL-1β处理共培养模型后培养液中ICAM-1、MMP9的表达水平;采用免疫细胞化学方法检测子宫内膜中ICAM-1和MMP9的表达.结果 与对照组相比,经10.0μg/L IL-1β干预后培养液中ICAM-1表达水平增加,经0.1、1.0μg/L IL-1β干预后培养液中ICAM-1表达,差异无统计学意义;经1.0、10.0μg/L的IL-1β干预后培养液中MMP9表达水平增加.经免疫细胞化学证实,ICAM-1主要在腺体细胞中表达,基质细胞仅有少量的表达,而MMP9在子宫内膜基质细胞和腺体细胞中均有表达.结论 在体外一定量的IL-1β可以诱导子宫内膜细胞ICAM-1和MMP9表达增加.     

C反应蛋白和可溶性细胞间粘附分子-1在冠心病患者的表达及其意义

[目的]通过检测69例冠心病患者外周血可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)和C反应蛋白(CRP)水平,探讨其临床意义.[方法]入选诊断明确的冠心病患者69例,通过冠状动脉造影检查,分为单支病变组18例和多支病变组51例,分别应用放射免疫法测定患者血清中sICAM-1和CRP浓度,并与30例年龄和性别相当的健康体检者进行比较.[结果]冠心病组的sICAM-1和CRP浓度显著高于对照组(P<0.05);冠状动脉粥样硬化范围越大、狭窄程度越重sICAM-1和CRP活性浓度越高(P<0.05).[结论]sICAM-1和CRP活性浓度与冠状动脉粥样硬化的范围和狭窄程度相关,为判断冠状动脉病变严重程度提供了相应的临床参考指标.     

同型半胱氨酸对肝癌细胞基因mRNA表达的影响

目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对人肝癌细胞株-7721细胞固醇调控元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因mRNA表达的影响。方法用反转录多聚酶联反应法(RT-PCR)不同浓度(0．2，1和5mmol／L)、不同时间(2，4，8，24h)，Hcy对7721细胞SREBP-1基因mRNA表达的影响作用。结果Hcy可使7721细胞SREBP-1基因mRNA表达上调，在Hcy浓度为5mmol／L，作用18h SREBP-1的mRNA表达相对较高。结论Hcy使7721细胞SREBP-1基因mRNA表达上调。     

溃疡性结肠炎患者基质金属蛋白酶-1表达测定的意义

目的检测基质金属蛋白酶-1（MMP-1）在溃疡性结肠炎（UC）患者结肠组织中的表达，探讨MMP-1在溃疡形成过程中的作用以及与病情严重程度之间的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学染色法在40例UC患者的结肠黏膜溃疡区、炎症区以及相对正常区取活组织在mRNA水平及蛋白水平上测定MMP-1表达，以10例正常人的结肠组织（正常对照组）作为对照，分析MMP-1的表达与病情严重程度之间的关系。结果在mRNA水平上，MMP-1在溃疡区、炎症区结肠组织中的表达较相对正常区明显增加（P〈0．01），较正常对照组也明显增加（P〈0．01）；在蛋白水平上，MMP-1在溃疡区、炎症区的表达较相对正常区明显增加（P〈0．05），较正常对照组也明显增加（P〈0．05）；相对正常区与正常对照组之间的表达无论在mRNA水平还是在蛋白水平差异均无统计学意义；MMP-1的表达在溃疡区、炎症区、相对正常区及正常对照组结肠组织中的阳性率分别为85％、82％、58％、40％；MMP-1与UC病情严重程度具有相关性（r=0．406，P〈0．05）。结论UC病变结肠组织中MMP-1的表达增加，并且与UC的组织损伤程度有关，MMP-1可以作为评价UC病情严重程度的生物学指标；应用外源性基质金属蛋白酶抑制剂治疗可能会成为UC治疗的新途径。     

甲状腺乳头状癌VEGF-C、VEGFR-3的表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)VEGF-C、VEGFR-3的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测72例PTC的VEGF-C、VEGFR-3表达,应用图像分析系统定量分析VEGF-C,计算出阳性指数(PI值,Positive in-dex),以VEGFR-3标记淋巴管,在显微镜下计数淋巴管密度(LVD)。结果PTC淋巴结转移组VEGF-C-PI(23.15±3.75)显著高于无转移组(14.54±2.93)(P<0.01);PTC微癌、腺内型、腺外型LVD分别为6.00±0.81、13.80±1.81、19.17±2.96,随癌侵袭程度增加而递增(P<0.05,P<0.05,P<0.05);淋巴结转移组的LVD(19.56±2.45)显著高于无转移组(12.48±2.84)(P<0.05);VEGF-C表达与LVD计数呈正相关(r=0.90)(P<0.01)。结论VEGF-C、LVD与PTC的淋巴结转移有关;LVD与PTC侵袭有关;VEGF-C与淋巴管生成密切相关。     

Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1的克隆表达及抗体制备

目的 克隆表达Ⅱ型登革病毒(dengue virus 2,DV2)非结构蛋白1(DV2-NS1)基因,并制备其单克隆抗体。方法 提取Ⅱ型登革病毒的RNA,扩增其NS1全长基因片段,经TA克隆将NS1基因克隆至pQE30载体中进行诱导表达,表达产物经变性处理后用Ni柱亲和层析纯化并复性,经免疫印迹法(Western Blot)鉴定抗原性。用复性后的NS1蛋白和灭活Ⅱ型登革病毒交替免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、间接免疫荧光法(IFA)进行单抗亚类、特异性的筛选与鉴定。结果 携带重组质粒pQE30/DV2-NS1的菌株经诱导,可高效表达重组DV2-NS1蛋白,经复性获得可溶性蛋白,Western Blot证实重组的DV2-NS1蛋白具有抗原性;用重组蛋白和病毒混合免疫,共获得10株抗NS1蛋白的单抗,其中3株为特异性抗DV2-NS1蛋白,与其他3型登革病毒无交叉,另7株为混合交叉型;亚类分析一株为IgG2b,余为IgG1。结论 获得重组Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1,并得到10株抗DV2-NS1蛋白的杂交瘤细胞株,为进一步研究NS1的生物学特性和临床诊断试剂建立奠定了基础。     

二羟环氧苯并芘诱发细胞恶变后基因和蛋白表达差异分析

目的研究苯并(a)芘代谢产物反式二羟环氧苯并芘(反式-BPDE)诱发人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化的基因和蛋白表达的改变,探讨苯并(a)芘致癌的分子机制.方法应用含4096条人类全长基因的cDNA芯片检测反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因表达谱的变化;应用二维凝胶电泳技术和相应软件ImageMaster2D 3.10分析反式-BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化的蛋白质组变化,基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱结合数据库检索鉴定部分表达有差异的蛋白斑点.结果BPDE诱发的恶性转化细胞与阴性对照细胞比较,cDNA芯片结果显示差异表达基因有143条,其中52条基因在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达增高,91条基因在恶性转化细胞中表达降低;二维凝胶电泳显示有72个蛋白斑点出现表达差异,其中44个蛋白斑点在BPDE诱发的恶性转化细胞中表达升高,28个蛋白斑点在恶性转化细胞中表达降低,对其中7个表达明显差异的蛋白斑点的鉴定显示,原癌基因v-erbb2同源3、锌指蛋白127、硫氧还原蛋白过氧化物酶2、KIAA0471蛋白在恶性转化细胞中高表达,而钙结合蛋白5、锌指蛋白Aiolos、Kelch样蛋白3在恶性转化细胞中低表达.结论反式-BPDE诱发16HBE恶性转化的基因表达谱和蛋白表达谱发生了显著的变化,这些表达改变的基因和蛋白可能参与了BPDE诱发细胞恶变的过程.     

Effect of Iodide Excess on Human Thyroid Cells ( Nthy-ori 3-1) Apoptosis

目的 探讨碘过量对人正常甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1)的损伤作用及机制.方法 用0(对照)、1、10、50mmol/L的碘化钾(KI)作用于体外培养的Nthy-ori 3-1细胞24h后,分别采用噻唑蓝(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)比色法检测细胞存活率和LDH漏出率,利用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平、细胞周期构成比及凋亡率.结果 与对照组相比,50 mmol/L碘染毒组细胞存活率明显下降(P＜0.05),LDH漏出率明显上升(P＜0.05).各剂量组之间ROS产生水平差异无统计学意义.50 mmol/L碘染毒组G0/G1期细胞百分比明显增多(P＜0.05),但S期百分比明显减少(P＜0.05),且细胞凋亡率明显上升(P＜0.05).结论 一定剂量的碘能降低甲状腺细胞存活率,增加LDH漏出率,细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡,碘对甲状腺的损伤作用可能与碘对细胞周期的影响有关.     

碘过量对人甲状腺细胞的损伤作用及机制研究

目的探讨碘过量对人正常甲状腺细胞(Nthy-ori 3-1)的损伤作用及机制。方法用0(对照)、1、10、50mmol/L的碘化钾(KI)作用于体外培养的Nthy-ori 3-1细胞24 h后,分别采用噻唑蓝(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)比色法检测细胞存活率和LDH漏出率,利用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平、细胞周期构成比及凋亡率。结果与对照组相比,50 mmol/L碘染毒组细胞存活率明显下降(P<0.05),LDH漏出率明显上升(P<0.05)。各剂量组之间ROS产生水平差异无统计学意义。50 mmol/L碘染毒组G0/G1期细胞百分比明显增多(P<0.05),但S期百分比明显减少(P<0.05),且细胞凋亡率明显上升(P<0.05)。结论一定剂量的碘能降低甲状腺细胞存活率,增加LDH漏出率,细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡,碘对甲状腺的损伤作用可能与碘对细胞周期的影响有关。