内质网应激及自噬相关蛋白在矽肺患者肺泡巨噬细胞中表达研究

目的研究矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)内质网应激(ERS)和自噬相关蛋白的表达规律。方法采用单纯随机抽样方法,选择矽肺壹期、贰期、叁期男性患者20、28、22例分别设为矽肺壹期、贰期和叁期组,以6例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照组。收集研究对象的支气管肺泡灌洗液,分离、纯化和培养AM,经裂解后提取蛋白,采用免疫印迹法检测AM中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的相对表达水平。结果矽肺壹期、贰期和叁期患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于对照组(P<0.05),矽肺贰期和叁期组患者上述3个指标均高于矽肺壹期组(P<0.05),矽肺叁期组患者AM中GRP78蛋白相对表达水平低于矽肺贰期组(P<0.05);矽肺叁期组患者AM中Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于矽肺贰期组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。多重逐步线性回归分析结果显示,矽肺患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均与矽肺期别呈正相关(P<0.01)。结论不同期别矽肺患者AM中ERS和自噬的相关蛋白表达程度不同,AM的ERS和自噬在矽肺纤维化发生发展中可能发挥重要作用。     

Beclin1介导的自噬在辐射诱导细胞早衰中的作用

自噬是机体及细胞必不可少的调节过程,在维持细胞的正常生理状态过程中发挥重要的作用.Beclin1是自噬的核心功能基因之一,其影响自噬体形成,并通过自噬影响肿瘤的发生和发展.研究发现Beclin1在p62蛋白介导的早衰调控中发挥一定作用,电离辐射可引起细胞发生自噬及早衰等细胞反应,导致细胞死亡.研究Beclin1介导的自...     

活化T细胞核因子在双酚A调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用

研究活化T细胞核因子(NFAT)在环境内分泌干扰物双酚A(BPA)调控小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌白细胞介素-10(IL-10)蛋白中的作用,为进一步研究BPA的免疫毒作用机制提供理论依据。将不同剂量的BPA(0.1、1、10、100及1000μmol/L)作用于RAW264.7细胞24 h、48 h,用CCK8试剂盒检测细胞活性。以1μg/ml脂多糖(LPS)为激活剂,以1、10、50、100μmol/L BPA作用细胞24 h,ELISA试剂盒检测细胞上清液中IL-10蛋白含量。10、100μmol/L BPA作用细胞4 h、12 h,用实时定量PCR方法测定IL-10、NFATc、NFATp基因表达。与对照组比较,1000μmol/L BPA无论作用24 h还是48 h均能明显抑制细胞活性(P0.01);LPS显著促进巨噬细胞分泌IL-10蛋白,50和100μmol/L BPA作用细胞24 h,与LPS组比较,显著抑制IL-10蛋白的分泌(P0.01);10μmol/L、100μmol/L BPA染毒4 h能明显促进NFATp mRNA表达(P0.01);染毒12 h时,IL-10 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。提示本实验条件下,NFATp在BPA调控巨噬细胞分泌IL-10蛋白中具有一定的作用。     

细胞周期蛋白B1和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的 探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义。方法 选取2018年1月—2021年6月在台州市第一人民医院妇科住院的60例宫颈癌患者的标本,采用实时荧光定量PCR(RTPCR)法检测60例宫颈癌组织及60例癌旁组织CCNB1 mRNA和Beclin1 mRNA,采用免疫组织化学（SP）法检测宫颈癌组织及癌旁组织中的CCNB1和Beclin1,用SPSS 22.0软件对结果进行统计学分析。结果 与癌旁组织相比较,宫颈癌组织中CCNB1 mRNA表达水平升高（P<0.05）,Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。宫颈癌组织CCNB1阳性率高于癌旁组织（P<0.05）,Beclin1阳性率低于癌旁组织（P<0.05）。分化程度越低、有淋巴结转移、TNM分期越高、浸润深度越深的CCNB1表达越高（P<0.05）,Beclin1表达越低（P<0.05）。结论 CCNB1在宫颈癌组织中表达上调,Beclin1在宫颈癌组织中表达下调,与宫颈癌的发生发展有关。     

STAT3在双酚A促乳腺癌细胞增殖中的作用研究

目的:探讨STAT3在双酚A促乳腺癌MCF-7细胞增殖中的作用,为研究双酚A诱导乳腺癌的确切机制提供依据。方法:采用Western blot检测双酚A处理乳腺癌MCF-7细胞24 h和48 h后STAT3的表达情况,采用MTT法检测RNA干扰技术抑制STAT3后双酚A对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:Western blot结果表明,STAT3在1μM双酚A作用48 h后其诱导表达最明显(P<0.05);通过对照研究筛选出有效的干扰片段,能显著抑制STAT3基因的表达,当干扰片段抑制了STAT3基因表达后,双酚A未能抑制STAT3的MCF-7细胞发生增殖效应(P>0.05)。结论:在双酚A诱导乳腺癌细胞的增殖作用中,STAT3的活化和活化后的信号传导是非常重要的一个环节。     

PI3K在MG132诱导卵巢癌细胞自噬中作用的研究

目的:研究PI3K通路在蛋白酶体抑制剂MG132诱导卵巢癌细胞自噬中的作用。方法:MG132处理多种卵巢癌细胞(SKOV3、OVCAR3、A2870)后,光镜观察胞质内囊泡的形成,吖啶橙(AO)染色观察酸性囊泡的形成,Western blot检测自噬特异性蛋白LC3的变化。PI3K抑制剂(渥曼青霉素与3-MA)联合MG132处理多种卵巢癌细胞后,AO染色及West-ern blot检测自噬的变化。采用shRNA技术下调OVCAR3细胞的Beclin 1表达,MG132处理细胞,AO染色观察酸性囊泡的形成。结果:在多种卵巢癌细胞系中,MG132可诱导酸性囊泡形成及LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化增强,PI3K抑制剂与MG132联合应用与单独应用MG132相比自噬水平无改变。下调卵巢癌细胞中Beclin 1表达后,MG132诱导的囊泡形成无改变。结论:MG132通过PI3K非依赖性途径诱导多种卵巢癌细胞发生自噬。     

Fas凋亡相关基因在双酚A诱导成年雄性大鼠生殖毒性中的作用

目的探讨Fas凋亡途径相关基因在双酚A（BPA）诱导成年雄性大鼠生殖毒性中的作用。方法 40只成年Wistar雄性大鼠随机等分为4组：溶媒对照组（玉米油）和低、中、高剂量BPA喂养组（10、50、250μg/kg·bw/d）。大鼠在喂养35周后处死,称量睾丸、附睾、肝、肾及心脏重量并计算脏器系数;观察精子形态及计算精子畸形率。采用荧光实时定量PCR（RT-PCR）测定睾丸组织中自杀相关因子（Fas/Fas-L）、天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）mRNA含量。结果高剂量BPA喂养大鼠精子畸形率以及睾丸组织中Fas-L mRNA及Caspase-3 mRNA含量高于对照组,差异均有显著性（P!0.05）。结论在BPA的人体每日容许摄入量水平下（TDI=50μg/kg·bw/d）,未观察到生殖细胞损伤的效应;但长期经膳食暴露高剂量BPA（250μg/kg·bw/d）可致成年雄性大鼠生殖细胞损伤,其机制可能与BPA上调Fas-L mRNA和Caspase-3的表达有关。     

自噬及凋亡因子在慢性氟中毒大鼠肝脏中表达

目的 探讨自噬相关因子LC3A、Beclin-1及凋亡因子Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肝脏中的表达意义。方法 将36只健康SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组、高氟组,分别用含氟量<1 mg/L的自来水和含氟5、50 mg/L的含氟水饲养6个月,观察氟斑牙形成情况;测定尿氟、骨氟含量以及大鼠肝功能;苏木素-伊红染色观察肝脏病理形态学改变;免疫组织化学法检测大鼠肝组织中微管相关蛋白轻链3A （LC3A）、哺乳动物ATG6同源蛋白（Beclin-1）及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白细胞基因伴随蛋白x （Bax）的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟含量分别为[（2.18±0.14）、（2.40±0.19） mg/L]、骨氟含量分别为[（237.42±18.48）、（248.00±14.72） mg/kg]均明显升高（P<0.05）;染氟组大鼠肝脏肝细胞索排列紊乱,肝细胞肿大,部分肝细胞胞质透亮,呈空泡样改变;与对照组比较,染氟组大鼠血清中谷丙转氨酶活性及谷草转氨酶活性明显升高（P<0.05）;低、高氟组大鼠肝脏LC3A[（35.35±2.71）、（44.10±6.72）]、Beclin-1[（57.56±12.1）、（74.76±18.67）]及Bax[（51.1±9.23）、（62.32±10.3）]蛋白表达明显高于对照组,Bcl-2蛋白表达分别为[（55.18±8.36）、（39.05±6.91）]明显低于对照组（P<0.05）。结论 过量氟可激活大鼠肝组织中自噬和凋亡因子,自噬和凋亡可能共同参与慢性氟中毒所致肝脏损伤的发病过程。     

脑源性神经营养因子通过PI3K/Akt/mTOR信号途径对胚鼠缺氧神经元的保护作用

目的 探讨脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对缺氧(oxygen deprivation,OD)神经元的保护作用是否与激活自噬有关,其信号通路是否通过PI3K/Akt/mTOR途径。方法 1)建立胚鼠神经元OD损伤模型;CCK-8法观察不同浓度BDNF对OD神经元细胞活性的影响;2)检测OD神经元1,3,5 h自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达,情况观察BDNF对OD神经元的保护作用是否与自噬有关;3)检测p-Akt,p-mTOR,p-p70S6K以及LC3II的表达,对比BDNF与自噬激活剂雷帕霉素(mammalian target of rapamycin,Rapamycin)对Akt/mTOR/p70S6K的影响,以及自噬被3-MA抑制后,BDNF对Akt/mTOR/p70S6K的影响。结果 1)50 μg/L BDNF可对OD神经元起保护作用(P<0.05),100 μg/L BDNF效应次之;2)BDNF和/或Rapamycin在下调p-Akt/p-mTOR/p-p70S6K表达的同时可上调LC3II的表达;当3-MA抑制自噬后,BDNF对LC3II的上调作用被抑制。结论 BDNF通过PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号途径激活自噬,发挥对OD神经元的保护作用。     

煤工尘肺患者肺灌洗液中肺泡巨噬细胞自噬活动的研究

目的 比较不同期别煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞自噬活动的差别.方法 对116例行全肺灌洗的观察对象和煤工尘肺患者进行现场调查,并收集其肺灌洗液,纯化后得到肺巨噬细胞,用透射电镜观察其自噬形态,采用免疫印迹方法检测自噬标志性蛋白LC3及自噬调控蛋白beclin1、mTOR和p-mTOR的表达量,分析接尘观察对象、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞自噬活动的强弱变化.结果 透射电镜观察,发现自噬活动在不同期别煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞中Ⅱ期煤工尘肺肺泡巨噬细胞中有自噬溶酶体明显多于观察对象和Ⅰ期煤工尘肺,Ⅱ期煤工尘肺的肺泡巨噬细胞中自噬体和自噬溶酶体明显少于Ⅱ期煤工尘肺.Ⅱ期煤工尘肺患者肺巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1蛋白表达量明显高于Ⅰ期,Ⅲ期煤工尘肺患者肺巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1蛋白表达量明显低于Ⅱ期,Ⅲ期煤工尘肺患者肺巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量明显高于Ⅰ期,Ⅱ期煤工尘肺患者Beclin1蛋白表达量高于接尘观察对象,差异均有统计学意义(P＜0.05).Ⅱ期煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞mTOR和p-mTOR的表达量明显低于接尘观察对象和Ⅰ期,Ⅲ期尘肺患者肺泡巨噬细胞mTOR和p-mTOR表达量明显高于Ⅱ期,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 不同期别煤工尘肺患者肺泡巨噬细胞自噬活动不同.     

胆碱对双酚A所致成年大鼠空间记忆损害的改善作用

摘要:目的　观察长期补充胆碱对双酚A（Bisphenol A,BPA）诱导的成年大鼠空间记忆损害是否有保护作用。方法　40只60 d龄的Wistar 雄性大鼠随机分为4组:普通饲料（1.1 mg胆碱/kg饲料）对照组,普通饲料+BPA（BPA 50 μg/kg bw）组、胆碱饲料（5.1 mg胆碱/kg饲料）对照组和胆碱饲料+BPA（BPA 50 μg/kg bw）组。干预24周后行Morris水迷宫和海马乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase,AChE）检测。结果　普通饲料BPA组的大鼠与其他3组大鼠相比,其逃避潜伏期延长、目标象限游泳时间减少,而且海马AChE降低（均P＜0.05）;胆碱饲料BPA组的这些指标与对照组比较差异无统计学意义。结论　长期补充胆碱可以有效缓解BPA所致成年大鼠的空间记忆损害。     

橄榄油对新生期双酚A暴露后青春期雄性小鼠生殖毒性的拮抗作用

目的研究橄榄油对新生期双酚A(bisphenol A,BPA)暴露后青春期雄性小鼠生殖毒性的拮抗作用。方法将32只清洁级新生ICR雄性小鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组、橄榄油组、BPA(100μg/kg,玉米油稀释,前期实验中能明显引起精母细胞减数分裂阻滞)组、橄榄油+BPA(100μg/kg)组,每组8只。自出生第一天(PND 1)至PND 21(断乳),仔鼠每天进行颈背部皮下注射染毒,染毒容量为4μl/g,每天1次,连续染毒至断乳(PND 21)。PND 30,测定睾丸曲细精管直径、生精上皮厚度、管腔直径以及睾丸组织中Boule mRNA和蛋白的表达水平。结果与对照组相比,BPA组小鼠睾丸曲细精管直径和生精上皮厚度均显著下降,曲细精管管腔直径显著上升,差异均有统计学意义(P0.05);虽然橄榄油+BPA组与对照组相比仔鼠曲细精管直径和生精上皮厚度也有明显下降(P0.05),但与BPA组相比,曲细精管直径和生精上皮厚度均显著上升(P0.05),曲细精管管腔直径显著下降(P0.05)。与对照组相比,BPA组小鼠睾丸组织中Boule蛋白的表达下降,差异均有统计学意义(P0.05)。橄榄油+BPA组小鼠睾丸组织中Boule蛋白的表达水平高于BPA组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,BPA组和橄榄油+BPA组小鼠睾丸组织中Boule mRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05)。但橄榄油+BPA组小鼠睾丸组织中Boule mRNA的表达水平高于BPA组,差异有统计学意义(P0.05)。结论橄榄油对BPA所致雄性小鼠生殖毒性及Boule表达下降有一定的拮抗作用。     

The role of dietary calcium in bone health

Approximately 99% of body Ca is found in bone, where it serves a key structural role as a component of hydroxyapatite. Dietary requirements for Ca are determined by the needs for bone development and maintenance, which vary throughout the life stage, with greater needs during the periods of rapid growth in childhood and adolescence, during pregnancy and lactation, and in later life. There is considerable disagreement between expert groups on the daily Ca intake levels that should be recommended, reflecting the uncertainty in the data for establishing Ca requirements. Inadequate dietary Ca in early life impairs bone development, and Ca supplementation of the usual diet for periods of < or = 3 years has been shown to enhance bone mineral status in children and adolescents. However, it is unclear whether this benefit is long term, leading to the optimisation of peak bone mass in early adulthood. In later years inadequate dietary Ca accelerates bone loss and may contribute to osteoporosis. Ca supplementation of the usual diet in post-menopausal women and older men has been shown to reduce the rate of loss of bone mineral density at a number of sites over periods of 1-2 years. However, the extent to which this outcome reduces fracture risk needs to be determined. Even allowing for disagreements on recommended intakes, evidence indicates that dietary Ca intake is inadequate for maintenance of bone health in a substantial proportion of some population groups, particularly adolescent girls and older women.     

The role of calcium in osteoporosis drug therapy

Great advances have been made in the field of osteoporosis treatment and prevention in recent years that have led to the availability of powerful new drugs. These drugs are viewed by patients and physicians as a major breakthrough in the management of osteoporosis. Unfortunately, this view has led many to ignore the importance of concurrent calcium supplementation to ensure the maximum benefit from these drugs, as evidenced by the recent decline in use of calcium supplements. As the majority of patients fail to consume the minimum recommended dietary intake of calcium, it is critical to recommend calcium supplements to raise total daily calcium intake to the levels needed to ensure maximum efficacy of osteoporosis treatments. Furthermore, osteoporosis drug labeling should be strengthened to encourage proper use of these drugs in combination with calcium supplements.     

细胞自噬在急性淋巴细胞白血病化疗中的作用

目的以紫杉醇处理的Jurkat细胞为模型,研究细胞自噬在儿童急性淋巴细胞白血病化疗过程中的作用。方法 10μg/ml的紫杉醇处理人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞后,免疫印迹和流式细胞技术检测LC3β蛋白的表达变化,WST-1法检测PTX对Jurkat细胞的抑瘤率。结果 PTX处理Jurkat细胞0h、24h、48h后,抑瘤率分别为(4.2±1.2)%、(46.7±5.3)%、(65.9±9.4)%,组间比P均小于0.05;LC3β的平均荧光强度相对倍数分别(3.1±0.2)倍、(4.6±0.31)倍、(34.2±4.5)倍,组间比P值均小于0.05,与抑瘤率一样呈现时间依赖性增强;免疫印迹也显示PTX处理24h和48h后,LC3β的蛋白表达逐渐增强。结论细胞自噬在ALL化疗过程中活化,可导致化疗抵抗。     

双酚A对小鼠睾丸和附睾电压依赖性T型钙离子通道的影响及雌激素受体作用特点

目的探讨双酚A(BPA)对雄性小鼠睾丸和附睾中电压依赖性T型钙离子通道(Cav3)的影响及雌激素受体(ERs)的作用特点。方法将野生型(WT)小鼠、雌激素受体基因敲除(αERKO和βERKO)小鼠随机分为对照组和BPA组[100μg/(kg·d)],连续经口灌胃染毒30 d后,荧光定量PCR法检测睾丸和附睾中Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3 mRNA表达的变化。结果 BPA可使小鼠睾丸中Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3 mRNA表达水平升高,附睾中Cav3.1和Cav3.2 mRNA表达水平升高,但Cav3.3 mRNA表达水平降低。应用ERKO小鼠发现BPA通过ERα和ERβ影响附睾Cav3.1和Cav3.2 mRNA表达,对睾丸Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3以及附睾Cav3.3 mRNA的调控则依赖于ERβ。结论 BPA可以影响雄性小鼠睾丸和附睾中电压依赖性T型钙通道3种亚型的基因表达,ERα和ERβ在此过程中发挥了重要作用。