NRAGE对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的作用机制

目的 研究神经营养蛋白受体相互作用的同源物(NRAGE)对结直肠癌(CRC)细胞增殖和侵袭能力的作用机制。方法 选取84例CRC患者的临床病理材料,应用荧光定量PCR(qPCR)及免疫印迹实验检测CRC组织及癌旁正常组织中NRAGE的表达,分析癌组织中NRAGE的表达与临床病理特征的关系。RT-PCR及免疫印迹实验检测CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO及结直肠正常细胞系FHC中NRAGE mRNA及蛋白表达。MTT实验、Transwell迁移实验观察NC组、过表达NRAGE组及NRAGE敲低组肿瘤细胞增殖及迁移能力。qPCR及免疫印迹实验检测各组AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达差异。结果 与癌旁组织相比,CRC癌组织中NRAGE的mRNA及蛋白表达明显升高。癌组织中NRAGE的表达与肿瘤分期、远处转移及淋巴结转移有关(P<0.05)。与FHC细胞相比,CRC肿瘤细胞系HT29、SW480、SW620、LOVO细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达较高(P<0.05)。...     

ORP8对结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察和分析氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(ORP8)蛋白对人结直肠癌DLD-1细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探究其影响机制.方法 通过在结直肠癌DLD-1细胞中转染ORP8表达质粒或特异性沉默siRNA上调和下调ORP8的表达,采用CCK-8、Transwell实验检测干扰或过表达ORP8对DLD-1细胞增殖...     

内皮素3基因对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制.方法 实时荧光定量PCR检测EDN3 mRNA在人结直肠癌组织及对应癌旁组织中的表达情况,半定量PCR检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB) mRNA在结直肠癌细胞(CaC02、LoVo、HT-29)中的表达情况.将包装过载体pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro-EDN3的病毒感染至结直肠癌细胞LoVo,MTS、克隆形成法、划痕法、Transwell检测EDN3对细胞增殖、克隆、迁移和侵袭能力的改变.Western blot检测LoVo中p-ERK1/2和t-ERK 1/2蛋白改变.结果 EDN3在人结直肠癌组织和细胞中表达降低.表达EDN3基因的重组载体成功感染至LoVo细胞.MTS和克隆实验结果显示,实验组和对照组细胞增殖和克隆形成差异无统计学意义(P＞0.05),划痕实验和Transwell实验提示实验组细胞迁移和侵袭能力明显低于对照组(P＜0.01).Western blot检测结果显示磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降(P＜0.01).结论 EDN3在结直肠癌组织和细胞中表达降低,过表达EDN3能抑制结直肠癌LoVo细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与ERK1/2信号通路有关.     

华蟾素对Wnt/β-catenin通路抑制肾癌细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨华蟾素对肾癌细胞侵袭和迁移的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法将肾癌细胞分为对照组（添加PBS）和华蟾素组（添加华蟾素）,CCK-8法检测细胞增殖力,Transwell侵袭和细胞迁移法检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞检测细胞凋亡和细胞周期,免疫蛋白印迹法检测Wnt/β-catenin和上皮间质变（epithelial mesenchymal transition,EMT）信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,华蟾素组可抑制肾癌细胞增殖,抑制细胞侵袭和迁移力,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期 (P<005);E-cadherin蛋白表达上调(P<005),Wnt/β-catenin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达下调(P<005)。结论华蟾素可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,逆转EMT,抑制肾癌细胞增殖和侵袭。     

miR-4496靶向LAMP3在结直肠癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的 探讨微小RNA(miRNA)-4496在结直肠癌细胞增殖和侵袭中的作用及分子机制.方法 qRT-PCR检测结直肠癌细胞株(SW480、HT-29、LoVo、HCT116)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-4496表达,选择相对表达量最低的细胞为转染对象,分别转染mimic-NC(对照组)和miR-4496...     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

BCL6B抑制结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移及其可能机制研究

目的：探讨B细胞淋巴瘤6B（B cell lymphoma 6 member B,BCL6B）对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移的影响及机制。方法：采用定量聚合酶链反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）和Western blot检测和比较人正常肠上皮细胞FHC及人结直肠癌细胞HCT116中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将pcDNA3.1-BCL6B转入HCT116细胞,同时设转入空载体的对照组;运用MTT法、流式细胞术、划痕愈合及Transwell试验检测BCL6B对癌细胞增殖、周期及迁移能力的影响;采用Western blot检测细胞中β-连环蛋白（β-catenin）、磷酸化的糖原合成酶激酶-3β（p-GSK3β）、细胞周期蛋白（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-7（matrix metalloproteinase-7,MMP-7）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。结果：qPCR和Western blot结果显示,与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在结直肠癌细胞HCT116中呈明显低表达（P=0.017）;转染pcDNA3.1-BCL6B后,细胞内BCL6B表达水平明显升高（P=0.000）。与阴性对照组相比,BCL6B组HCT116细胞4 d时的增殖活性降低41.79%（P=0.040）,且G1期细胞百分比增加62.09%（P=0.001）;同时,BCL6B组HCT116细胞48 h划痕愈合率及穿膜细胞数均明显减少（P=0.001）。Western blot结果表明,BCL6B组HCT116细胞内β-catenin、p-GSK3β、CyclinD1和MMP-7的表达水平较阴性对照组分别降低65.66%（P=0.028）、62.03%（P=0.001）、60.87%（P=0.021）和50.88%（P=0.030）,E-钙黏蛋白的表达升高63.64%（P=0.018）。结论：BCL6B可抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖及迁移,其机制可能涉及Wnt/β-catenin通路的抑制。     

健脾消癌方对结直肠癌干细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究健脾消癌方对结直肠癌干细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法从人结肠癌Lovo细胞株中获得结直肠癌干细胞,细胞表面标记物双标法流式检测鉴定结直肠癌干细胞。制备低、中、高剂量的含药血清,设立低、中、高剂量组,正常组及对照组。采用CCK-8法及Transwell实验观察健脾消癌方对结直肠癌干细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果流式细胞术结果显示微球体细胞大量表达CD133、CD44,并较贴壁细胞多。CCK-8法及Transwell实验结果发现低、中、高剂量组细胞较正常组及对照组细胞增殖、迁移及侵袭能力减弱,差异有统计学意义(P0.05),高剂量组细胞较中、低细胞增殖能力减弱,差异有统计学意义(P0.05),高剂量组较低剂量组迁移及侵袭能力减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论健脾消癌方可抑制结直肠癌干细胞增殖、迁移和侵袭的能力,且高剂量组抑制作用明显,可通过降低癌细胞增长能力,减少癌细胞扩散抑制结肠癌的发展。     

ZNF750在结直肠癌细胞增殖中的作用和分子机制研究

目的 探讨锌指蛋白750(ZNF750)在结直肠癌细胞增殖中的作用和分子机制。方法 用干扰siRNA转染结直肠癌细胞株SW620和LoVo,沉默ZNF750的表达;运用MTT实验和平板克隆实验检测ZNF750沉默成功的实验组细胞和对照组细胞增殖能力的差别;运用荧光定量PCR检测实验组细胞株中Kruppel样因子4(KLF4)的表达水平与对照组的差异。结果 MTT实验和平板克隆实验显示ZNF750沉默后,结直肠癌细胞的增殖能力较对照组明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞株ZNF750沉默后,KLF4的表达水平下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ZNF750抑制结直肠癌细胞的增殖,可能通过调控KLF4的表达参与结直肠癌的发生发展。     

RNA干扰FUT6对人肝癌细胞HepG2侵袭迁移的影响

目的 初步探讨α1,3岩藻糖基转移酶-Ⅵ(FUT6)基因在肝癌细胞侵袭和转移中的作用,为肝癌FUT6基因治疗的可行性提供初步依据.方法 靶向FUT6的siRNA转染肝癌细胞株HepG2后,分为3组:空白对照组、阴性对照组和实验组,分别予等体积无RNase水、scrambled-siRNA和iRNA-FUT6,通过Western blot检测FUT6蛋白的表达,Transwell小室方法进行细胞迁移和侵袭实验检测肝癌细胞株HepG2转移和侵袭能力的变化.结果 空白对照组、阴性对照组及实验组FUT6蛋白的表达分别为1.24±0.07、1.09±0.04和0.30±0.06,实验组FUT6蛋白比空白对照组降低75.8％,差异有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组比较,实验组HepG2细胞迁移能力降低了73.3％,侵袭能力降低了73.7％.结论 通过siRNA靶向沉默HepG2细胞的FUT6蛋白表达能削弱HepG2细胞在体外的迁移和侵袭能力.     

ANP32A沉默体外抑制结直肠癌的生长、侵袭和迁移：基于AKT信号通路活性的下降

目的 探讨ANP32A基因下调对结直肠癌细胞侵袭迁移的作用与AKT 信号通路活性的相关性。方法 采用慢病毒转染技术构建结直肠癌细胞 HCT116和SW480 sh-NC和 sh-ANP32A的稳定细胞株,MTT检测24、48及72 h时ANP32A敲低对细胞增殖的影响,Western blot检测ANP32A敲低对 AKT的活性的影响;应用AKT的激活剂（SC79）和抑制剂（MK2206）干预HCT116及 SW480 细胞,MTT 检测 24、48、72 及 96 h 时 SC79 和 MK2206 对结直肠癌细胞增殖的影响,Transwell 小室观察 SC79 和MK2206对结直肠癌细胞侵袭迁移的作用;然后用SC79和MK2206干预上述两种结直肠癌细胞的sh-NC 和 sh-ANP32A稳定细胞株,将每种细胞分为 sh-NC 对照组,sh-NC SC79,sh-NC MK2206,sh-ANP32A 对照组,sh-ANP32A SC79,sh-ANP32AMK2206 六个组,细胞划痕分析细胞迁移能力,Transwell 小室分析细胞侵袭能力,WB 检测SC79和MK2206对shANP32A细胞侵袭迁移相关因子metadherin（MTDH）的影响。结果 与对照组（sh-NC）相比,24、48及72 h检测的sh-ANP32A组结直肠癌细胞的增殖活力均被明显抑制（P<0.01）,同时 ANP32A 的下调能抑制 HCT116 和 SW480 细胞内 AKT 的活性（P<0.01）;AKT抑制剂MK2206能抑制大肠癌细胞的增殖及侵袭迁移（P<0.05）,而AKT激活剂SC79 虽然对细胞增殖影响较小,但是能显著促进大肠癌的侵袭转移（P<0.01）;在ANP32A下调的细胞中,与sh-ANP32A对照组相比,AKT抑制剂MK2206能加强ANP32A下调对结直肠癌细胞增殖和侵袭的抑制作用（P<0.05）,同时增强ANP32A表达下调对MTDH表达的抑制作用,AKT激活剂SC79能部分恢复大肠癌细胞因ANP32A下调导致的侵袭迁移抑制（P<0.01）,且减弱ANP32A表达下调对MTDH表达的抑制作用。结论 ANP32A表达下调抑制结直肠癌细胞的侵袭迁移作用可能与AKT 信号通路活性抑制有关。     

KIF5B过表达和干扰慢病毒载体的构建及对结直肠癌细胞增殖的影响

目的 构建马达蛋白KIF5B基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步构建稳定转染结直肠癌细胞模型,检测敲低KIF5B蛋白对结直肠癌细胞增殖的影响。方法 将PCR扩增的人KIF5B基因序列和设计合成的shRNA序列分别插入GV-358和GV-248表达载体。采用慢病毒三质粒包装系统共转染HEK293T细胞,进行病毒包装和扩增。重组慢病毒感染结直肠癌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot法检测KIF5B过表达和沉默效率。CCK-8检测KIF5B干扰后HCT116和SW480细胞的增殖,并检测细胞内周期相关蛋白的表达。结果 KIF5B过表达及shRNA载体测序与原设计序列完全符合。重组病毒感染结直肠癌细胞中,可见绿色荧光蛋白表达。KIF5B过表达组细胞中KIF5B-FLAG蛋白大量表达,KIF5B沉默细胞中,KIF5B的蛋白表达量显著下降。KIF5B被敲低后,HCT116和SW480细胞增殖加快,细胞内p21、p16两种蛋白表达下调。结论 成功建立了KIF5B过表达和沉默的结直肠癌细胞模型,并且发现KIF5B表达被干扰后,可能会抑制p21与p16蛋白的表达,加速细胞周期,从而促进结直肠癌细胞增殖。     

EphA2在结直肠癌细胞中的生物学功能及其信号调控机制

[目的]探讨EphA2在结直肠癌细胞中的生物学功能及其信号调控机制。[方法]qRT-PCR法检测EphA2在结直肠癌细胞系中的表达情况,筛选得到表达量较高细胞株系,利用si RNA沉默该细胞系中EphA2的表达,利用MTT、Transwell、Western blot、qRT-PCR法检测细胞生物学功能变化及Wnt/β-catenin信号通路相关基因及蛋白的表达变化。[结果]在人结肠癌细胞HCT116、HT29和SW480中筛选得到EphA2高表达细胞HCT116,构建载体EphA2-si RNA并成功转染细胞HCT116。MTT、Transwell法检测结果显示,与对照组相比,EphA2-si RNA组中细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR和western blot分析表明,与对照组相比,EphA2-si RNA组中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白E-cadherin、TCF-4、β-catenin和p-GSK-3βSer9的表达量均呈现下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]结直肠癌细胞中EphA2的表达与结直肠癌的进展和侵袭转移密切相关,EphA2可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠癌的进展。     

安罗替尼对宫颈癌细胞增殖和迁移与侵袭的影响及作用机制

目的 研究安罗替尼对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 取对数生长期宫颈癌SiHa细胞,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验根据半数抑制浓度（IC50）确定安罗替尼实验浓度,将SiHa细胞分为对照组（0μmol/L）、低浓度组（5μmol/L）、中浓度组（10μmol/L）、高浓度组（20μmol/L）。以平板克隆实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测安罗替尼对SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。以Western blot法检测血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-9、上皮钙黏附素（E-cadherin）、无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)和β-连环蛋白（β-catenin）的表达水平。结果 CCK-8实验显示安罗替尼能够剂量依赖性抑制SiHa细胞的增殖,作用24、48和72 h的IC50分别为（26.96±2.25）、（13.59±1.13）和（9.27±0.75）μmol/L。平板克隆实验显示,处理SiHa细胞48 h后,对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组细胞克隆形成率分别为（62.05±7.88）%、（39.96±5.1...     

C ullin 4B 在结直肠癌中表达与β-catenin 关系及临床意义

目的：研究Cullin 4B（Cul4B）在结直肠癌中表达情况及其临床意义,探讨其表达与β‐catenin表达的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测83例结直肠癌组织、正常结直肠组织中Cul4B的表达,同时检测83例结直肠癌组织中β‐catenin的表达情况。结合临床病理情况进行统计学分析。结果83例结直肠癌组织中Cul4B高表达率为74.7％,显著高于正常结直肠组织中的高表达率（39.8％,P＜0.05）,且Cul4B高表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移密切相关。β‐catenin在结直肠癌中阳性率为66.3％,与Cul4B表达呈正相关（r＝0.464,P＜0．01）。结论 Cul4B在结直肠癌中表达与β‐catenin呈正相关。     

TRIM21调控人结直肠癌细胞增殖分子机制研究

目的:探讨TRIM21通过正调控转化生长因子-β1(TGF-β1)-Smad2/3信号通路影响人结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:在人结直肠癌细胞HCT116中转染TRIM21 siRNA沉默TRIM21的表达,采用荧光定量PCR和Western blot检测转染效果;采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h和96 h时的细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1的表达;采用Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad2和Smad3在mRNA水平上的表达,Western blot检测TGF-β1、Smad2/3在蛋白水平上的表达及Smad2/3的磷酸化,验证TRIM21 siRNA转染后对TGF-β1—Smad2/3通路的影响。结果:TRIM21 siRNA转染组HCT116细胞中的TRIM21表达量明显下降(P<0.01),转染后24 h、48 h、72 h和96 h的细胞活力显著高于阴性对照组(P<0.05),Cyclin D1表达量上调(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染后的凋亡细胞比例显著下降(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染组TGF-β1的表达降低(P<0.01),Smad2和Smad3的表达量基本不变(P>0.05),但Smad2/3的磷酸化水平显著下降(P<0.01)。结论:干扰TRIM21的表达促进人结直肠癌细胞HCT116细胞增殖、抑制凋亡,其作用机制可能与影响TGF-β1—Smad2/3信号通路的激活和CyclinD1表达有关。