苦参碱体外诱导人结肠腺癌SW620细胞凋亡的实验研究

目的 观察苦参碱(MT)诱导结肠腺癌细胞株SW620凋亡的作用并探讨其可能机制.方法 采用MTT法检测MT对SW620细胞的增殖抑制作用.应用流式细胞仪检测MT对SW620胞生长周期的影响,光学显微镜、荧光显微镜、电镜下观察细胞形态学变化.Annexin V-FITC法检测MT对SW620细胞凋亡的影响.结果 MT抑制SW620细胞增殖和诱导SW620细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,其48 h IC50=0.934 mg/ml.与对照组相比,苦参碱处理后的SW620细胞G0/G12期百分比明显增高,S期细胞比例下降.细胞爬片HE染色以及透射电镜可见实验组细胞出现典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,体积减小,胞浆凝聚,空泡化明显,凋亡小体形成以及所谓的"印戒"细胞.结论 MT在体外能抑制SW620细胞的增殖.诱导细胞凋亡,其诱导作用具有明显的量效和时效关系.     

长链非编码RNA-ROR对结直肠癌SW620细胞增殖的影响

目的了解长链非编码RNA-ROR（LncRNA-ROR）在结直肠癌SW620细胞增殖中的作用。方法选择40例结直肠癌组织及相应正常组织（距肿瘤切缘5cm以外）,首先采用qRT-PCR技术检测LncRNA-ROR在结直肠癌组织中的表达情况,并分析其表达与病人临床病理因素的相关性。构建慢病毒载体LV5-ROR、LV5-Vector转染到结直肠癌细胞SW620中,验证LncRNA-ROR的表达,分析LncRNA-ROR过表达对结直肠癌细胞CCK-8功能及SW620平板克隆形成的影响。结果与正常组织比较,LncRNA-ROR在结直肠癌组织中低表达（P < 0.01）,其表达水平与TNM分期具有相关性（P < 0.05）。经转染筛选后,qRT-PCR检测证实SW620中的LncRNA-ROR表达增加,其高表达导致SW620增殖能力的下降（P < 0.01）。结论LncRNA-ROR的过表达抑制了结直肠癌细胞SW620的增殖。     

紫草素诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及机制研究

目的探讨紫草素诱导人结肠癌细胞株SW620凋亡及分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞株SW620,加入终浓度分别为2.5～15μmol/L的紫草素。采用MTT法测定紫草素对肿瘤细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,Western blot方法测定对bcl-2、bax蛋白表达水平。结果紫草素随时间和浓度的增加对SW620细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率增加（P〈0.05）。Western blot法检测发现bax蛋白表达升高同时bcl-2蛋白表达下降。结论紫草素有抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的作用,可以通过调控bax和bcl-2蛋白的表达经线粒体途径诱导细胞凋亡。     

氧化苦参碱诱导结肠癌细胞株SW1116凋亡的实验研究

目的：探讨氧化苦参碱（OM）抗肿瘤的作用机制，为OM在抗结肠癌方面的应用提供理论依据。方法：采用流式细胞仪检测不同浓度的OM对结肠癌细胞凋亡率及其细胞周期分布的影响。结果：OM具有一定的诱导结肠癌细胞凋亡的作用。可使S期细胞数目减少，随着OM剂量的加大，结肠癌细胞凋亡率增高，与剂量呈正相关。随药物浓度及作用时间的变化。细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高。结论：OM具有一定的抗结肠癌作用，其机制与抑制癌细胞的增殖及促进癌细胞的凋亡有关。     

稳定沉默黏着斑激酶结肠癌细胞株SW620的构建

目的：构建稳定沉默黏着斑激酶（FAK）结肠癌细胞株SW620。方法：用构建好的FAKRNA干扰（RNAi）慢病毒载体pLL3．7FAK及插入无沉默功能序列的阴性对照慢病毒载体pLL3．7,在293FT细胞中包装成慢病毒,感染体外培养结肠癌SW620细胞,作为实验组和阴性对照组,未感染病毒的SW620细胞作为未处理组,通过荧光倒置显微镜检测SW620细胞的感染效率,运用RT—PCR、Westernblot方法测定FAK的表达情况,建立稳定转染细胞株。结果：成功包装了靶向FAK的RNAi慢病毒,感染效率〉90％,稳定转染细胞株构建成功。RT—PCR及Westernblot方法检测发现实验组与阴性对照组及未处理组相比,FAK的表达明显降低。结论：稳定沉默FAK的RNAiSW620细胞构建成功。     

甲磺酸罗哌卡因与盐酸罗哌卡因用于腋路臂丛神经阻滞的对比研究

目的：比较甲磺酸罗哌卡因与盐酸罗哌卡因用于腋路臂丛神经阻滞的有效性和安全性。方法：48例ASAⅠ～Ⅱ级择期上肢手术患者随机分为0．5％盐酸罗哌卡因组（A组）和0．596％甲磺酸罗哌卡因组（B组）。每组24例,两组患者均行腋路臂丛神经阻滞,观察感觉与运动神经阻滞起效时间、持续时间及不良反应,评价麻醉效果。结果：在感觉与运动神经阻滞的起效时间、持续时间及不良反应方面,0．596％甲磺酸罗哌卡因与0．5％盐酸罗哌卡因未见明显差异。结论：0．596％甲磺酸罗哌卡因与0．5％盐酸罗哌卡因应用于腋路臂丛神经阻滞,具有相似的有效性和安全性。     

LncRNA-ROR抑制结直肠癌细胞转移的作用研究

目的了解LncRNA-ROR在结直肠癌细胞转移中的作用。方法在前期工作中,已经发现LncRNA-ROR在结直肠癌组织中低表达,并抑制肠癌细胞的增殖。进一步,我们采用Transwell功能研究LncRNA-ROR的过表达对结直肠癌细胞SW620迁移的影响;并采用划痕实验探索LncRNA-ROR过表达后结直肠癌细胞SW620伤痕愈合的变化。结果SW620细胞在ROR过表达后,穿过人工膜的细胞数减少(P＜0.01);在迁移和侵袭实验中,与对照组比较,SW620 LncRNA-ROR穿过Transwell膜的细胞数减少(P＜0.01),侵袭能力减弱(P＜0.01);划痕实验中,划痕48 h后LncRNA-ROR的细胞间间距大于对照组(P＜0.01)。结论LncRNA-ROR抑制结直肠癌细胞的转移。     

FGFR4在结直肠癌组织中表达及其对SW620细胞生物学功能的影响

目的 探究成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4,FGFR4)在结直肠癌组织中的表达情况及其对SW620细胞生物学功能的影响。方法 利用癌症基因图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据库中结直肠癌的数据分析FGFR4 mRNA在结直肠癌组织中的表达。使用基因集富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)进行生物信息学分析寻找FGFR4影响的相关信号通路。构建pcDNA3.1-FGFR4过表达载体,分为实验组与对照组。分别采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、流式细胞凋亡检测、细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达FGFR4对SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果 TCGA数据库数据分析结果显示FGFR4 mRNA在结直肠癌中的表达高于癌旁组织(P<0.05),GSEA结果显示FGFR4高表达在碱基切除修复、谷胱甘肽代谢、磷酸戊糖途径、核糖核酸聚合酶、硒氨酸代谢等通路富集(P<0.05)。C...     

右美托咪定复合罗哌卡因腹横肌平面阻滞对结直肠癌根治术后镇痛效果的观察

目的探讨右美托咪定复合罗哌卡因腹横肌平面阻滞对结直肠癌根治术后的镇痛效果。方法选取行择期手术开腹结直肠癌根治术的病人60例,随机分为单纯全麻组（G组）、罗哌卡因+全麻（R+G组）和右美托咪定复合罗哌卡因（DR+G组）,各20例。G组采用全身麻醉,R+G组采用全身麻醉+0.25%罗哌卡因两侧各20 mL腹横肌平面阻滞,RD+G组采用全身麻醉+1 μg/kg右美托咪定复合0.25%罗哌卡因两侧各20 mL腹横肌平面阻滞,术后病人均采用舒芬太尼自控镇痛。观察3组病人手术时间、术中输液量和丙泊酚、瑞芬太尼的用量以及术后24 h舒芬太尼的用量。比较病人术后2 h（T₁）、6 h（T₂）、12 h（T₃）、24 h（T₄）时点静息疼痛视觉模拟量表（VAS）评分和咳嗽VAS评分,记录不良反应。结果3组术中丙泊酚、瑞芬太尼用量、术后舒芬太尼用量差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）;DR+G组术中丙泊酚和瑞芬太尼用量均低于G组（P < 0.05）;DR+G组、R+G组、G组术后舒芬太尼用量逐渐增加,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。在T₁、T₂、T₃时间点3组静息VAS和咳嗽VAS评分差异均无统计学意义（P>0.05）;在T₄时间点,DR+G组静息VAS和咳嗽VAS评分均低于R+G组、G组（P < 0.05~P < 0.01）。DR+G组皮肤瘙痒、恶心呕吐的发生率均低于G组（P < 0.05）。结论右美托咪定复合罗哌卡因腹横肌平面阻滞能减少术中、术后全麻药物用量,改善结直肠癌根治术后镇痛效果,减轻病人疼痛,降低不良反应。     

As2 O3上调FOXO3a促人大肠癌SW620细胞凋亡及其相关研究

目的观察三氧化二砷(As2 O3)对人大肠癌SW620细胞凋亡的影响,进一步研究As2 O3作用后,凋亡相关基因FOXO3a、Bcl-2和Bax 表达的关系.方法体外常规培养人大肠癌SW620细胞,以不同浓度As2 O3干预24 h ,观察细胞形态变化;Hoechst检测药物作用后细胞核形态变化;RT-PCR检测药物作用后FOXO3a、Bcl-2和Bax mRNA的表达;SP法检测药物作用后FOXO3a、Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 As2 O3作用后,SW620细胞数量明显减少,细胞变小、变圆,染色质固缩,胞核致密浓染,核碎裂增多并出现凋亡小体;FOXO3a和Bax mRNA和蛋白的表达随As2 O3浓度增加而增加,Bcl-2 mRNA和蛋白的表达随As2 O3浓度增加而减少.结论 As2 O3具有诱导大肠癌SW620细胞凋亡的作用,且与As2 O3浓度有量效关系.其机制可能是通过上调FOXO3a因子,继而上调Bax和下调Bcl-2的表达影响细胞凋亡.     

罗哌卡因和布比卡因用于剖宫产术后镇痛的对照研究

目的评价罗哌卡因与布比卡因用于剖宫产手术硬膜外麻醉时临床麻醉效果。方法选择剖宫产术病人96例,随机分为两组。硬膜外用药：R组0.15%罗哌卡因加芬太尼3μg/ml;B组O.125%布比卡因加芬太尼3μg/ml。比较两组镇痛效果、运动阻滞效果、术后下床活动及肛门排气时间等。结果 R、B组镇痛效果优良率分别为95.8%和87.5%,差异无统计学意义;R组下肢运动神经阻滞程度评分总体低于B组,下床活动及肛门排气时间提前,差异均具有显著性（P〈0.05）。结论罗哌卡因用于剖宫产手术硬膜外麻醉能够达到满意的镇痛效果,利于患者早期下床活动,增强肠蠕动,优越性明显,是布比卡因的良好替代品。     

金属硫蛋白对罗哌卡因灌注下离体兔心肌细胞凋亡和心肌细胞能供的影响

目的探讨金属硫蛋白对罗哌卡因灌注下的离体兔心肌细胞凋亡和心肌细胞能供的影响。方法成年雄性新西兰大组肌灌脏胞Ⅲ白能凋Ⅰ显兔注行量亡和著液6L0a供率组高中n只g给及Ⅱ于输e,n随障心;组注d心o机碍肌Ⅱ罗f肌f分。三灌。哌细为磷注卡结胞腹酸及因论凋腔腺灌组金亡(注苷注属率组(射液A硫组Ⅲ蒸中T)蛋ⅡP馏)输。白显、水注在二能著,罗灌磷2显高4哌注酸著于h卡液腺后抑组因中苷取制Ⅰ(组输离罗和A(注体D哌组组P罗心)卡ⅢⅡ、哌脏)因,环组;卡行引酸腹Ⅲ因L起腺腔显a1的n苷注0著g(心em射n高Aid肌n3M于o.后细6fPf组%)灌,胞含3ⅠZ注组凋量n;S组动心亡。O(物肌的4组,结2取发4AⅠ果Th心生)P后心;室,含腹取同肌肌量腔时离金分组注显体属别Ⅰ射著心硫测显蒸减脏蛋量著馏轻行白金高水罗含L属于a,哌量2n硫组4g卡组eh蛋Ⅱn后因Ⅲd白和o取引显f含组f灌离起著量Ⅲ注体的高,,及于心心组细     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.     

腹腔镜下结直肠癌根治术患者采用地塞米松联合罗哌卡因竖脊肌平面阻滞治疗有效性和安全性分析

目的：观察腹腔镜下结直肠癌根治术患者采用地塞米松联合罗哌卡因竖脊肌平面阻滞治疗的有效性,同时进行安全性评价。方法：共纳入90例结直肠癌患者,均在本院择期行腹腔镜下结直肠癌根治术,随机分为E组（n=30）、D组（n=30）、N组（n=30）。比较三组疼痛评估结果、48h内的酮咯酸总镇痛消耗量、创伤应激指标、术中丙泊酚用量、术中瑞芬太尼用量、术后48h内不良反应总发生率。结果：视觉模拟评分法（VAS）评分、血糖、乳酸的时间变化与组别存在交互作用（P＜0.05）;术后不同时间点VAS评分、血糖、乳酸组间比较（P＜0.05）;3组术后不同时间点VAS评分、血糖、乳酸组内比较（P＜0.05）。E组、D组、N组丙泊酚用量、术中瑞芬太尼用量、术后48h内不良反应总发生率均依次升高（P＜0.05）。结论：对腹腔镜下结直肠癌根治术患者而言,地塞米松复合罗哌卡因竖脊肌阻滞能提供良好镇痛效果,减轻创伤应激程度,减少不良反应发生。     

布比卡因介导PI3K/AKT/mTOR通路诱导结肠癌SW480细胞自噬和凋亡及抑制裸鼠移植瘤的形成

【摘要】目的 探究布比卡因介导PI3K/AKT/mTOR通路诱导结肠癌SW480细胞自噬和凋亡的机制及其对裸鼠移植瘤形成的抑制作用。方法 结肠癌SW480细胞分为对照组、布比卡因组（025、05、1 mM）。各组细胞处理24h后采用Edu染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测增殖、凋亡、自噬及信号通路相关蛋白表达。建立结肠癌裸鼠模型,随机分为布比卡因组（5、10、20 mg）及对照组,分别腹腔注射5、10、20 mg/kg的布比卡因及等体积生理盐水,1次/d,连续治疗30d后处死小鼠,取瘤、称重,免疫组化检测肿瘤组织Ki67蛋白阳性表达,并绘制各组裸鼠生存曲线。〖HT结果 随着布比卡因浓度增加,SW480细胞增殖数及增殖相关蛋白Ki67、PCNA表达量逐渐降低（F=94068、160905、49255,P＜005）,且均低于对照组（P＜005）;SW480细胞凋亡数及凋亡相关蛋白Caspase 3、Caspase 9表达量逐渐升高（F=30948、110730、233550,P＜005）,且均高于对照组（P＜005）。随着布比卡因浓度增加,SW480细胞Beclin1、ATG8蛋白相对表达量,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及LC3阳性数均逐渐升高（F=65287、112337、50602、26690,P＜005）,且高于对照组（P＜005）;p62蛋白相对表达量及p PI3K/PI3K、p AKT/AKT、p mTOR/mTOR比值逐渐降低（F=33276、98246、102488、58051,P＜005）,且均低于对照组（P＜005）。给药30d后,布比卡因给药组裸鼠肿瘤质量、Ki67阳性细胞占比及30d生存率均低于对照组（P＜005）。结论 布比卡因可抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其发生自噬及凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的形成,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路有关。     

紫檀芪通过线粒体途径调控结直肠癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨紫檀芪对结直肠癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法 使用梯度浓度的紫檀芪体外处理结直肠癌细胞,CCK-8法检测结直肠癌细胞增殖和活性,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平的变化,JC-1荧光探针检测细胞内线粒体膜电位的变化,Western blot法检测线粒体途径相关蛋白表达水平。结果 与对照组比较,紫檀芪对结直肠癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);Hoechst 33258染色和流式结果显示,紫檀芪促进结直肠癌细胞凋亡(P<0.05);紫檀芪诱导细胞内ROS产生、降低线粒体膜电位水平(P<0.05),增加Apaf-1、AIF、Bax、Cyt C、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达,降低Bcl-2、PCNA和survivin的蛋白水平(P<0.05)。结论 紫檀芪增加结直肠癌细胞内ROS水平、降低线粒体膜电位水平,通过线粒体途径抑制结直肠癌细胞增殖,诱导结直肠癌细胞凋亡。     

褐藻素通过线粒体通路和氧化应激诱导前列腺癌细胞凋亡

目的 旨在探讨褐藻素（Fx）对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用相应的试剂盒检测PC-3细胞活力和细胞凋亡。荧光探针染色检测PC-3细胞中的线粒体膜电位、线粒体形态和线粒体超氧化物。同时采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中三磷酸腺苷、过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量以及总抗氧化能力。Western blot方法检测PC-3细胞中Bcl-2、Bax和细胞色素c蛋白的表达。采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中caspase-9和caspase-3/7活性。结果 Fx呈时间和剂量依赖性地抑制PC-3细胞活力,呈剂量依赖性地诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05）。经Fx处理后,PC-3细胞中的线粒体膜电位水平降低,线粒体碎片化,线粒体超氧化物水平升高（P<0.05）,且Fx的作用效果成剂量依赖性。Fx剂量依赖性地降低PC-3细胞中的三磷酸腺苷水平和总抗氧化能力,剂量依赖性地增加过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量（P<0.05）。经Fx处理后,PC-3细胞中Bax和细胞质中细胞色素c的水平呈剂量依赖性增加,PC-3细胞中Bcl-2和线粒体中细胞色素c的水平呈剂量依赖性降低（P<0.05）。结论 Fx通过引发线粒体功能障碍导致氧化应激和激活线粒体介导的凋亡信号通路诱导PC-3细胞凋亡,提示Fx有望成为治疗前列腺癌的潜在药物。     

罗哌卡因诱导子宫内膜癌生长阻滞和氧化损伤

目的 研究罗哌卡因对子宫内膜癌生长阻滞和氧化损伤的影响。方法 选择子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞进行研究。采用CCK8法检测HEC-1B和Ishikawa细胞活性,最终选择1 mM的罗哌卡因处理HEC-1B和Ishikawa 细胞。克隆形成试验,流式细胞术,Transwell试验和微管形成试验分别检测细胞增殖,凋亡,侵袭及微管形成结节数;采用Western Blot检测E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达量。试剂盒检测HEC-1B和Ishikawa细胞中ROS、8-OHdG、ATP和线粒体超氧化物的表达量。结果 罗哌卡因能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,侵袭及微管形成,并促进细胞凋亡。同时罗哌卡因能抑制 Vimentin和VEGF蛋白的表达量,促进E-cadherin蛋白的表达量。另外,HEC-1B和Ishikawa细胞中ROS、8-OHdG 和线粒体超氧化物的表达水平显著增加,ATP的表达水平显著降低。结论 罗哌卡因抑制HEC1B和Ishikawa 细胞增殖,侵袭及微管形成,并促进细胞凋亡和氧化损伤。     

罗哌卡因在子宫切除术后行硬膜外镇痛的效果研究

目的观察低浓度罗哌卡因硬膜外术后镇痛的临床效果。方法择期子宫切除手术患者60例,随机分为3组(n=20)。A、B组分别用0.125%罗哌卡因和0.125%布比卡因 2mg吗啡 氟哌利多5mg/100ml进行硬膜外镇痛(PCEA),C组术后疼痛时按需肌注哌替定。对比术后镇痛效果,并分别于麻醉前、切皮后90分钟、术后1、2、3天抽取外周静脉血测定血糖、胰岛素、皮质醇、肾上腺素浓度。结果A组术后运动评分明显优于B组(P<0.05)。3组于切皮后90分钟血皮质醇、血糖浓度均升高,但A组低于B、C两组(P<0.05)。结论0.125%罗哌卡因复合小剂量吗啡用于术后镇痛,效果确切,运动神经阻滞轻微,优于同等浓度布比卡因。