低温缺氧复氧时大鼠心肌成纤维细胞对H9c2细胞Cx43表达的影响

目的:评价低温缺氧复氧时大鼠心肌成纤维细胞(RCF)对H9c2细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:体外培养的H9c2细胞,采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、低温缺氧复氧组(HHR组)、RCF共培养组(Co组)和RCF共培养+低温缺氧复氧组(Co+HHR组)。C组于37 ℃...     

托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响：与α7nAchR的关系

目的:评价托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响及其与α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的关系。方法:正常培养的H9C2心肌细胞,采用随机数字表法分成4组( n＝6)：对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、托烷司琼+缺氧复氧组(Tro+H/R组)和α7nAchR拮抗剂MLA+托烷司琼+缺氧复氧组(ML...     

铁死亡在高脂高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的:评价铁死亡在高脂高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法:正常培养的H9c2心肌细胞,采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、高脂高糖-缺氧复氧组(HFHG+H/R组)和Ferrostatin-1+高脂高糖-缺氧复氧组(Fer-1+HFHG+H/R组)。采用高脂高糖处理12 h,随后缺氧...     

低温联合七氟醚对兔心肌缝隙连接蛋白connexin43表达的影响

目的 探讨低温联合七氟醚对兔心室肌缝隙连接蛋白connexin43(Cx43)表达的影响.方法 成年家兔,体重1.5 ～2.0 kg,雌雄不拘,成功制备Langendorff模型的40个心脏,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10),平衡灌注15 min时,正常对照组(C组)继续灌注37℃K-H液;七氟醚组(S组)灌注2.4％七氟醚饱和的37℃K-H液;低温组(H组)灌注30℃ K-H液;低温联合七氟醚组(HS组)灌注2.4％七氟醚饱和的30℃K-H液,于灌注30 min时取左心室前壁组织,分别采用免疫组化及Westem blot法检测心肌细胞Cx43表达情况.结果 与C组比较,H组心肌细胞Cx43表达下调(P＜0.05),S组和HS组心肌细胞Cx43表达差异无统计学意义(P＞0.05),S组和HS组Cx43主要表达细胞两端的闰盘处,H组Cx43在闰盘处分布较少,而在侧侧连接处增多.结论 七氟醚可抑制低温诱导兔心肌Cx43表达下调和分布紊乱,可能是七氟醚抑制低温诱发心律失常发生的机制.     

心肌细胞缝隙连接蛋白43在线粒体敏感性钾通道介导七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注中的作用

目的 评价心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)在线粒体敏感性钾(mito-KATP)通道介导七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,采用Langendorff灌注模型进行离体心脏灌注.采用随机数字表法,将心脏随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(S组)、七氟醚预处理+5-羟葵酸(5-HD)组(SH组)和5-HD组(H组).采用结扎左冠状动脉前降支(LAD) 30 min,恢复灌注120 min的方法制备心脏缺血再灌注模型.各组平衡灌注10 min;然后C组持续灌注,仅于LAD下穿线而不结扎;I/R组继续灌注30 min后结扎LAD;S组、S+H组和H组结扎LAD前30 min时分别用3％七氟醚预先饱和的K-H液、3％七氟醚预先饱和的K-H液+100 μmol/L 5-HD和K-H液+100 μmol/L 5-HD灌注15 min,然后用K-H液冲洗15 min.分别于给药前(T0)、给药结束即刻(T1)、缺血前即刻(T2)、缺血30 min(T3)和再灌注120 min(T4)时,记录HR、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室最大下降速率(- dp/dtmax).再灌注结束后,取左心室心肌组织,测定心肌梗死体积,采用免疫组化法测定心肌细胞Cx43表达,采用Western Blot法测定心肌细胞Cx43和磷酸化Cx43(p-Cx43)表达.结果 与C组比较,I/R组、S+H组和H组HR、LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax降低,LVDP升高,心肌细胞Cx43和p-Cx43表达下调(P＜0.05).与I/R组比较,S组HR、LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax升高,LVDP和心肌梗死体积降低,心肌细胞Cx43和p-Cx43表达上调(P＜0.05),S+H组和H组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可能通过开放mito-KATP通道,促进心肌细胞Cx43磷酸化,减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

琥珀酸脱氢酶在缺氧后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其与mito-KATP的关系

目的评价琥珀酸脱氢酶(SDH)在缺氧后处理(HPC)减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其与线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP)的关系。方法分离成年雄性SD大鼠心肌细胞并培养48 h, 采用随机数字表法分为7组(n=24):空白对照组(Nor组)、缺氧复氧组(H/R组)、SDHA-siRNA腺病毒+缺氧复氧组(siRNA+H/R组)、HPC组、SDHA-siRNA腺病毒+HPC组(siRNA+HPC组)、5-羟葵酸(5-HD)+HPC组和SDHA-siRNA腺病毒+5-HD+HPC组(siRNA+5-HD+HPC组)。Nor组常氧条件下持续培养195 min。缺氧复氧损伤模型制备:5%CO2+1%O2+94%N2条件下缺氧45 min, 复氧150 min。HPC方法:缺氧45 min时行3个循环的复氧5 min-缺氧5 min处理, 继续复氧培养120 min。mito-KATP阻断剂5-HD给药方法:缺氧30 min时加入终浓度为100 μmol/L的5-HD。各siRNA组心肌细胞成功转染SDHA-siRNA腺病毒, 沉默SDHA表达。于复氧末, 分别检测细胞活力、钙...     

氢气对脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体动力学的影响

目的:评价氢气对脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体动力学的影响。方法:清洁级健康雄性C57小鼠224只,体重20～25 g,6～8周龄,采用随机数字表法分为4组( n＝56)：假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H 2组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+氢气组(SA...     

FOXO4通过抑制炎症反应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的探讨叉头框蛋白O(forkhead box protein O, FOXO)4在心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤中的作用及对炎症反应的影响。方法 H9c2细胞体外培养至密度30%～50%, 按随机数字表法分为6组(每组3孔):对照组(Con组)、缺氧/复氧组(H/R组)、过表达FOXO4+H/R组(OF+H/R组)、过表达FOXO4阴性对照+H/R组(OF-NC+H/R组)、沉默FOXO4+H/R组(siFOXO4+H/R组)、沉默FOXO4阴性对照+H/R组(siRNA-NC+H/R组)。Con组细胞正常培养。H/R组细胞进行缺氧6 h复氧6 h处理。OF+H/R组、OF-NC+H/R组、siFOXO4+H/R组和siRNA-NC+H/R组细胞在质粒或RNAoligo转染5 h后正常培养48 h, 再进行H/R处理。Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活性, 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)试剂盒检测培养液中LDH含量, 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluoresce...     

hsa_circ_0081596在人神经细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用

目的:评价 hsa_circ_0081596在人神经细胞氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用。 方法:培养人神经母细胞瘤细胞,采用随机数字表法将细胞(5代以内)分为4组( n＝20)：对照组(C组)、OGD/R组(O组)、OGD/R+小干扰RNA(siRNA)组(S组)、OGD...     

红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧环境下SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设常氧对照组(21%O_2)、低氧组(1%O_2)、低氧+红景天苷8μg/ml组、低氧+红景天苷16μg/ml组、低氧+红景天苷32μg/ml组和低氧+红景天苷64μg/ml组,分别培养48 h;Western印迹测定Cx43相对表达量。结果:体外培养CCSMC生长良好,抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和抗desmin抗体免疫组化染色阳性,CCSMC占比90%以上。MTT法结果显示,红景天苷浓度≤64μg/ml时,对CCSMC无明显毒性;而128μg/ml和256μg/ml红景天苷对CCSMC有一定的抑制作用。未加红景天苷干预时,与常氧对照组相比,低氧组Cx43总蛋白和磷酸化蛋白表达均显著升高(P0.01和P0.05),磷酸化比例未见明显变化(P0.05);与低氧不加药组相比,不同浓度红景天苷干预后Cx43表达量仍显著升高,但Cx43蛋白磷酸化比例显著降低,差异均有显著性(P均0.05)。结论:低氧促进大鼠CCSMC Cx43表达升高,红景天苷浓度≤64μg/ml无法逆转上述缺氧改变,但降低了Cx43磷酸化比例。推测红景天苷能通过降低Cx43磷酸化比例抑制缺氧引起的缝隙连接通道形成,保护平滑肌细胞功能。     

连接蛋白40/43调节大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度与肠系膜上动收缩反应性的研究

目的 了解连接蛋白40(Cx40)/43调节失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)内膜依赖的血管收缩反应性,探讨与血管平滑肌细胞(VSMC)胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的关系.方法 以传至3～5代培养的SD大鼠血管内皮细胞(VEC)及VSMC为研究对象,观察不同程度缺氧对SMA和VSMC收缩反应性的影响;用Cx40/43的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)阻断SMA、VEC和VSMC的Cx40/43表达,观察Cx40/43对缺氧SMA的收缩反应性和VSMC[Ca2+]i的作用.结果 缺氧后SMA和VSMC的收缩反应性均呈先增加后降低的变化过程;缺氧可以引起VSMC钙超载,[Ca+]i从常氧状态下的(82±4)%增至缺氧30 min时的(115±8)%和缺氧2 h的(133±13)%;Cx40 ASODN可以增加VSMC的[Ca+]i和SMA对杨梅黄酮的收缩反应性,Cx43 ASODN则引起相反效应.结论 Cx40/43通过调节VSMC[Ca+]i,间接参与调节休克后SMA内膜依赖的血管收缩反应性.     

瘦素减轻高浓度氧气所致幼鼠脑损伤

目的 探讨瘦素在高浓度氧气所致幼鼠脑损伤中的作用及相关分子机制.方法 健康清洁级SD雄性幼鼠60只,14日龄,体重40～50 g,采用随机数字表法分为三组:对照组(C组)、高浓度氧气组(H组)和高浓度氧气+瘦素组(L组),每组20只.C组呼吸正常空气,于每日同一时点腹腔注射生理盐水0.5 ml,连续7 d.H组放置于有...     

吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤及线粒体动力学的影响

目的评价吸入高浓度氢气对脓毒症小鼠急性肾损伤(AKI)及线粒体动力学的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠128只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H组)、脓毒症AKI组(S-AKI)和脓毒症AKI+氢气组(S-AKI+H组)。采用盲肠结扎穿孔法建立小鼠脓毒症模型。Sham+H组和S-AKI+H组于假手术或造模后1和6 h时分别吸入67%氢气+33%氧气1 h。取20只小鼠观察造模后7 d的生存情况。于造模后24 h时, 取血标本, 采用比色法测定血清BUN和Cr浓度;取肾组织, HE染色后进行肾小管损伤评分, 采用ELISA法测定肾组织TNF-α、IL-1β和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的含量, 采用分光光度法测定SOD和过氧化氢酶(CAT)的活性, 采用Western blot法测定动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达水平。结果与Sham组比较, S-AKI组生存率降低, 血清BUN和Cr浓度、肾小管损伤评分、肾组织TNF-α、IL-1β和HMGB1含量升高,...     

对乙酰氨基酚对小鼠脓毒症相关性脑病的影响及其与铁死亡的关系

目的:评价对乙酰氨基酚对小鼠脓毒症相关性脑病的影响及其与铁死亡的关系。方法:清洁级健康成年雄性C57BL/6J小鼠160只,6周龄,体重22～24 g,采用随机数字表法分为4组( n＝40)：假手术组(Sham组)、假手术+对乙酰氨基酚组(Sham+APAP组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性...     

小干扰RNA抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43的表达

目的:利用小干扰RNA(siRNA)抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43(Cx43)的表达和检测细胞间间隙连接通讯功能,探讨该技术在阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接和阴茎勃起功能研究中的应用。方法:利用Ambion公司设计软件,构建靶向人Cx43基因的siRNA重组质粒,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞48h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测Cx43基因和蛋白的相对表达水平、划痕标记荧光染料传输技术检测细胞间间隙通讯功能,并分别与siRNA阴性对照、空白对照组比较。结果:酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA重组质粒转染细胞后的Cx43 mRNA和蛋白相对表达水平分别为(0.45±0.08)%、(0.56±0.06)%,与siRNA阴性对照组(0.72±0.04)%、(0.80±0.08)%和空白对照组(0.74±0.09)%、(0.77±0.11)%相比,差异均有显著性(P(0.05);转染后的细胞间间隙连接通讯功能也显著降低。结论:siRNA能有效抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞Cx43的表达和阻断间隙连接介导的间隙连接通讯功能。     

铁死亡在脂肪肝缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨铁死亡在大鼠脂肪肝缺血再灌注损伤中的表达及作用。方法:随机数字表法将36只7~8周龄清洁级雄性SD大鼠分为6组：普通饲料(ND)和高脂饲料(HFD)分别喂养的假手术(Sham)、肝脏缺血再灌注损伤(HIRI)和HIRI联合铁死亡抑制剂(Fer-1)治疗(HIRI+Fer-1)组,每组6只。油红O和苏木精-伊红...     

三叉神经节TET3在小鼠颌面部炎性痛中的作用

目的:评价三叉神经节10-11易位蛋白3(TET3)在小鼠颌面部炎性痛中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠40只,8～10周龄,体重19～23 g,采用随机数字表法分为5组( n＝8)：对照组(C组)、炎性痛组(IP组)、对照+TET3-siRNA组(C+siTET3组)、炎性痛+TET3-...     

自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用

目的评价自噬在氢气减轻脓毒症小鼠心肌损伤中的作用。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠192只, 6～8周, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为6组(n=32):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、脓毒症组(S组)、脓毒症+氢气组(S+H2组)、脓毒症+巴佛洛霉素组(S+BafA1组)和脓毒症+氢气+巴佛洛霉素组(S+H2+BafA1组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型。Sham+H2组、S+H2组及S+H2+BafA1组于CLP后1和6 h吸入2%氢气1 h。S+BafA1组和S+H2+BafA1组于CLP后1 h腹腔注射巴佛洛霉素A1 1 mg/kg。每组随机取20只小鼠, 记录CLP后7 d的生存情况。于CLP后24 h处死小鼠, 光镜下观察心肌组织病理学改变, 进行病理学评分, ELISA法检测血清cTnI浓度, 采用Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62表达水平, 计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与Sham组比较, S组生存率降低, 血清cTnI浓度和心肌组织病理学评分升高, 心肌组织P62表达上调...     

细胞自噬在七氟醚致老年小鼠海马区神经元细胞凋亡中的保护作用

目的探讨细胞自噬在七氟醚致老年小鼠海马区神经元细胞凋亡中的作用机制。方法 18月龄BL/C57小鼠16只, 按随机数字表法分为两组(每组8只):七氟醚组和对照组。七氟醚组吸入47.5%空气+2.5%七氟醚+50%氧气3 h, 对照组吸入50%空气+50%氧气3 h。建模后24 h进行新物体识别实验, 随后断头取海马组织, 尼氏染色检测海马神经元细胞凋亡情况, Western blot法检测海马神经元细胞自噬相关蛋白[微管关联蛋白(microtubule-associated protein, LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ、Becline-1、p62蛋白]水平。另取18月龄BL/C57小鼠18只, 按随机数字表法分为3组(每组6只):七氟醚+3-甲基腺嘌呤组(M组, 吸入麻醉前2 h经腹腔注射3-甲基腺嘌呤)、七氟醚+雷帕霉素组(R组, 吸入麻醉前24 h和2 h经腹腔注射雷帕霉素)、七氟醚+生理盐水组(N组, 吸入麻醉前2 h经腹腔注射生理盐水100 μl)。经腹腔注药及七氟醚处理后, 尼氏染色检测海马神经元细胞凋亡情况, Western blot法检测海马神经元细胞自噬相关蛋白(LC3Ⅱ/L...     

蛋白激酶Cβ2在高糖与缺氧/复氧诱导的心肌细胞焦亡中的作用

目的:探讨蛋白激酶Cβ2 (protein kinase Cβ2, PKCβ2）在高糖与缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, HR）诱导的心肌细胞焦亡中的作用。方法:将培养的H9c2心肌细胞按随机数字表法分为5组（每组6孔）：低糖组（LG组）、低糖缺氧/复氧组（LG+HR组）、高糖组（HG组）、高糖...