雷公藤甲素对关节炎大鼠心功能的影响及其作用机制探讨

  目的  观察关节炎大鼠心功能的变化及雷公藤甲素的干预作用,探讨其可能的作用机制。  方法  将40只大鼠随机分为正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、来氟米特（LEF）组和雷公藤甲素（TP）组。除NC组外,其余各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备关节炎模型,制模第12天开始给药干预,TP组、LEF组大鼠分别灌胃其混悬液（TP 0.1 mg/mL,LEF 0.5 mg/mL）1 mL/100 g （体质量）,NC组、MC组大鼠相应时间灌胃等量的生理盐水,给药30 d。末次用药24 h后,采用左心室插管术检测大鼠心功能;应用酶联免疫吸附实验法测定血清超氧化物歧化酶(SOD）、丙二醛(MDA）、活性氧(ROS）、总抗氧化能力(T-AOC）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。采用荧光定量PCR法检测心组织Keap样蛋白1（Keap1）、肌腱膜纤维肉瘤(maf）、核因子-E2相关因子2(Nrf2）mRNA表达;采用Western blot法检测心组织Keap1、maf、Nrf2蛋白表达。  结果  ① 与NC组比较,MC组大鼠的心功能指标中心率（HR）、心脏指数（HI）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）升高,左心室压力上升和下降最大变化率（±dp/dtmax）降低(P均<0.01)。SOD、MDA、ROS、T-AOC、TNF-α升高,IL-10降低 (P均<0.01)。心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达均升高（P<0.01）。② 与MC组比较,TP组大鼠HR、LVSP、HI、LVEDP降低,±dp/dtmax升高(P<0.01)。TNF-α、T-AOC、MDA、SOD、ROS下降,IL-10升高(P <0.05或 P <0.01)。TP组大鼠心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）。  结论  TP可改善关节炎大鼠心功能,其机制可能与提高心肌细胞抗氧化能力、减轻氧化应激损伤、抑制异常免疫炎症反应有关。     

Keap1/Nrf2信号通路在非小细胞肺癌氧化应激机制中的作用

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (Keap1)、核因子E2相关因子2 (Nrf2)蛋白表达水平,分析其与临床病理参数、氧化应激指标的相关性,为临床治疗提供潜在靶点。方法 选取2017年4月至2020年4月郑州市第三人民医院收治的100例NSCLC患者为研究对象,免疫组化法检测并比较癌组织、癌旁组织中Keap1、Nrf2蛋白表达水平;比较不同临床病理参数患者Keap1、Nrf2蛋白表达水平;比较不同Keap1、Nrf2蛋白表达患者血清超氧化物歧化酶(SOD)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)水平,并采用Spearman法分析SOD、i NOS、MDA与临床病理参数的相关性,采用Pearson法分析SOD、iNOS、MDA与Keap1、Nrf2蛋白水平的的相关性;比较不同Keap1、Nrf2蛋白表达患者的生存率。结果 癌组织、癌旁组织Keap1蛋白阳性率分别为77.00%、53.00%,Nrf2蛋白阳性率分别为74.00%、45.00%,Keap1蛋白OD值分别为0.41±0.07、0.33±0.05,Nrf2蛋白OD值分别为0...     

金匮肾气丸对慢性肾衰竭大鼠Keap1/Nrf2/ARE通路及肾功能的影响

目的观察金匮肾气丸(JSP)对慢性肾衰竭大鼠肾功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法将SD大鼠随机分为对照组(n=12)、模型组(n=13)、JSP低(n=12)、中(n=13)和高(n=13)剂量组,除对照组外分别给予250 mg/kg腺嘌呤灌胃,连续28 d,复制慢性肾衰竭模型,对照组给予等量盐水。造模成功后JSP低、中和高剂量组大鼠给予0.6、1.2和2.4 g/kg JSP进行灌胃处理,1次/d,连续给药15周,对照组和模型组给予等量生理盐水。酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清肾功能指标尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和尿酸(UA)及肾组织炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达情况;苏木素伊红(HE)染色法观察各组大鼠肾组织病理学变化情况;采用丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)试剂盒检测各组大鼠肾组织中氧化应激指标变化情况;蛋白免疫印迹分析检测各组大鼠肾组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达情况。结果对照组大鼠肾组织中肾小球和肾小管排列整齐,结构正常,模型组大鼠肾组织中肾小球变形,肾小管扩张,水肿渗出,出现轻度坏死和炎性细胞浸润等病理学变化,给予JSP治疗后,以上病理变化得到改善。与对照组比较,模型组肾功能指标(BUN、Scr、UA)、ROS、MDA、炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平和Keap1蛋白表达显著增加,SOD、CAT活性、Nrf2磷酸化水平和HO-1蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,JSP低、中和高剂量组肾功能指标(BUN、Scr、UA)、ROS、MDA、炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平和Keap1蛋白表达显著降低,SOD、CAT活性、Nrf2磷酸化水平和HO-1蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05),且呈剂量依赖性。结论 JSP能够缓解慢性肾衰竭大鼠肾功能损伤,可能与抑制Keap1蛋白表达,激活Nrf2/抗氧化响应元素(ARE)通路,降低炎症反应与氧化应激相关。     

结肠癌组织Nrf2和Keap1表达及其与增殖指数的关系

目的检测结肠癌(CRC)组织核因子E2相关因子2(Nrf2)和Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)表达,分析二者与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系。方法 96例CRC术后肿瘤组织作为观察组,选择距肿物边缘3cm正常结肠黏膜组织作为对照组。应用免疫组化法、Western Blot法检测两组组织标本Nrf2、Keap1蛋白表达,应用荧光实时定量PCR法检测两组组织标本Nrf2、Keap1 mRNA表达。应用相关分析探讨Nrf2、Keap1与PCNA的关系。结果免疫组化方法显示,两组组织标本Nrf2和Keap1蛋白阳性率比较,差异有统计学意义[Nrf2:52.08%比16.67%;41.67%比89.58%,P均0.05];观察组Nrf2和Keap1表达阳性率在不同肿物最大径、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期亚组比较,差异有统计学意义[Nrf2:34.88%比66.03%,35.71%比75.00%,44.73%比80.00%,22.22%比70.00%,36.84%比74.35%;Keap1:62.79%比24.53%,53.57%比25.00%,47.37%比20.00%,75.00%比21.67%,54.38%比23.08%,P均0.05],Nrf2和Keap1表达阳性率在不同性别、年龄和分化程度分组比较,差异无统计学意义(P0.05);观察组Nrf2和Keap1表达与预后相关(P0.05)。观察组Nrf2表达和PCNA呈正相关性(r=0.52,P0.05),Keap1表达和PCNA呈负相关性(r=-0.51,P0.05)。Western Blot法显示,两组组织标本Nrf2 mRNA和Keap1 mRNA半定量表达差异有统计学意义[Nrf2:(1.01±0.13)比(0.49±0.11);Keap1:(0.59±0.15)比(1.08±0.10),P均0.05]。荧光PCR法显示,两组组织标本Nrf2和Keap1 mRNA表达差异有统计学意义[Nrf2:(1.01±0.21)比(0.82±0.19);Keap1:(0.83±0.15)比(1.20±0.25),P均0.05]。结论 Nrf2高表达、Keap1低表达在CRC的形成和进展有重要作用。Nrf2/Keap1可能通过对细胞增殖的调节起协同作用,术后检测肿瘤组织Nrf2和Keap1表达对判断预后有一定价值。     

二甲双胍对糖尿病非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏内脏脂肪素表达的作用

目的观察二甲双胍对糖尿病合并非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏内脏脂肪素表达的影响。方法雄性SD大鼠,分为正常对照(NC)组、肥胖(OB)组、糖尿病(DM)组和二甲双胍治疗(MET)组。所有大鼠均测FBG、TG、TC、LCL-C、FFA、FIns,计算HOMA-IR指数。采用RT-PCR测定肝脏内脂素mRNA表达,Western blotting测定蛋白表达,H.E.染色后观察肝脏病理变化。结果 OB组及DM组FBG、TG、TC、LCL-C、FFA、FIns、HOMA-IR均增高(P<0.05),ISI显著减低(P<0.01),肝脏发生脂肪变性。MET组上述指标均显著下降。DM组大鼠肝脏内脂素mRNA及蛋白表达较NC组及OB组均显著增高(P<0.05),MET组较DM组显著降低(P<0.01),肝脏脂肪变性程度减轻。结论二甲双胍能减轻糖尿病大鼠肝脏脂肪变性,可能与降低了肝脏visfatin的表达有关。     

二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠肾组织nephrin表达的影响

目的 观察不同剂量二甲双胍( MET)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠肾组织nephrin 表达的影响,了解其对肾小球足细胞的保护作用. 方法 高脂饲料喂养结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立T2DM大鼠模型,给予不同剂量[150、300、500 mg/(kg·d)]MET干预治疗(MET1组、MET2组、MET3组),并设立糖尿病模型组(T2DM组)和正常对照组(NC组). 8 周后,观察各组大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白和尿nephrin排泄的情况以及肾脏组织病理改变和nephrin表达的变化. 结果 8 周末, MET 三组 BG、HbA1c、尿白蛋白/尿肌酐(UACR)、基底膜厚度(GBMT)和足突融合率(FRFP)明显低于T2DM 组,高于 NC 组(P <0. 05);MET2、MET3 组低于MET1 组( P <0. 05 ). MET 组血 BUN、尿 nephrin/尿肌酐(UNER)低于T2DM组(P<0. 05),MET3与MET1组差异有统计学意义(P<0. 05). MET组肾组织nephrin蛋白和mR-NA表达较T2DM 组显著升高(P<0. 05),但是低于 NC组( P<0. 05 );各MET组间nephrin蛋白表达差异无统计学意义,MET3 组nephrin mRNA表达高于MET1 组( P<0. 05 ).结论 MET可减轻T2DM模型大鼠肾组织nephrin表达的减少和保护足细胞,并有一定的剂量依赖性.     

结肠癌中Nrf2和Keap1的表达及与增殖指数的关系

目的 检测结肠癌(Colorectal carcinoma, CRC)中核因子E2相关因子2(Nrf2)和Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)的表达,分析二者与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系。方法 本实验以96例CRC术后的肿瘤组织作为观察组,选择距肿物边缘>3厘米正常结肠粘膜组织作为对照组。应用免疫组化法、Western Blot法检测二组中Nrf2、Keap1蛋白的表达,应用荧光实时定量PCR法检测二组中Nrf2、Keap1 mRNA的表达。应用相关分析观察Nrf2与PCNA、Keap1与PCNA的关系。结果 免疫组化方法显示二组中Nrf2和Keap1蛋白的阳性率差别有统计学意义(P<0.05)。观察组中Nrf2和Keap1的阳性率在不同肿物最大径、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期分组中的表达差别有统计学意义(P<0.05),Nrf2和Keap1的阳性率在不同性别、年龄和分化程度分组中的表达差别无统计学意义(P>0.05),观察组中Nrf2和Keap1的表达与预后有关(P<0.05)。观察组中Nrf2和PCNA之间具有正相关性(P<0.05),Keap1和PCNA之间具有负相关性(P<0.05)。Western Blot法显示二组中Nrf2和Keap1的半定量表达差别有统计学意义(P<0.05)。荧光PCR法显示二组中Nrf2和Keap1 mRNA的表达差别有统计学意义(P<0.05)。结论 Nrf2高表达、Keap1低表达在CRC的形成和进展有重要作用。Nrf2/Keap1的协同作用可能通过对细胞增殖的调节起作用,术后检测Nrf2和Keap1的表达对判断预后有一定价值。     

布托啡诺联合罗哌卡因镇痛对大鼠创面愈合、瘢痕的影响及机制研究

目的研究布托啡诺和罗哌卡因对SD大鼠血液中IL-1、IL-6、IL-10,创面周围GM-CSF的表达、创面愈合及瘢痕组织的影响。方法取SPF级雄性SD大鼠64只,随机分为4组,B组大鼠鼠尾静脉注射布托啡诺0.3 mg/(kg·12 h),R组大鼠创面周围浸润注射0.5%的罗哌卡因1 mL/(kg·12 h),B+R组大鼠鼠尾静脉注射布托啡诺0.3 mg/(kg·12 h)和创面周围浸润注射0.5%的罗哌卡因1 mL/(kg·12 h),C组大鼠鼠尾静脉注射等容量0.9%氯化钠注射液。在造模后的第3、7、10天,每组随机取4只大鼠用ELISA法测定血清IL-1、IL-6、IL-10和创面GM-CSF的含量,每组剩余4只SD大鼠用来观察创面愈合时间和愈合后瘢痕面积。通过HE染色和MASSON染色病理切片观察创面病理变化。结果在第3天、第7天和第10天,B+R组IL-1、IL-6的含量低于C组(P0.05);在第3天和第10天,B组和B+R组IL-10的含量高于C组(P0.05);在第3天和第7天,B+R组的GM-CSF/BCA的比值高于C组和R组(P0.05);B组、R组和B+R组愈合时间均短于C组(P0.05),而B+R组在创面愈合率和瘢痕面积方面优于C组和R组(P0.05);B+R组的HE染色和MASSON染色组织学表现优于C组、B组和R组(P0.05)。结论布托啡诺联合罗哌卡因可以通过抑制IL-1和IL-6的表达、增强IL-10和GM-CSF的表达,使创面更快更好地愈合,减少创面愈合后的瘢痕面积。     

Nrf2抗氧化损伤通路在CCl4所致小鼠肝毒性中的保护作用（英文）

目的观察核转录相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)抗氧化损伤通路对四氯化碳(CCl4)所致小鼠肝毒性的保护作用。方法选取Nrf2-null、Wild-type、Keap1-KD、Keap1-HKO小鼠,按基因型分为4组,分别给予40 mg/kg CCl4腹腔注射,腹腔注射生理盐水(10 m L/kg)作对照,16 h后收集血浆和肝组织样本,检测血中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性以及肝组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;HE染色观察肝组织病理学变化,Real-time PCR和Western blot法检测相关基因表达。结果 CCl4增加Nrf2-null组和Wild-type组血中ALT、LDH活性及肝组织MDA含量,同时造成肝组织病理损伤,而在Keap1-KD组和Keap1-HKO组影响不明显;Nrf2因子靶基因(Nqo1和Gclc)在CCl4的诱导表达逐渐增高(顺序为Nrf2-null、Wild-type、Keap1-KD、Keap1-HKO),继而使炎症因子、内质网应激基因、细胞凋亡基因、细胞坏死基因的表达(m KC、MIP-2、IL-1β、TNFα、Gadd45、Chop10、Bax、Caspase 3、Mcl、Noxa)按Nrf2-null、Wild-type、Keap1-KD、Keap1-HKO顺序逐渐下降。结论 Nrf2因子激活保护CCl4所致小鼠肝损伤反应。     

Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对胰岛细胞半胱天冬酶-3表达的影响

目的 探讨核因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相互作用对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响及其可能机制.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(NC组,n=20)、糖尿病模型组(DM组,n=20)和叔丁基对苯二酚干预组(tBHQ组,n=20),干预8周后处死所有大鼠,TUNEL检测胰岛细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胰腺组织中丙二醛(MDA)水平,Western blot检测AKT、p-AKT、总Nrf2、核Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、Caspase-3在胰岛细胞中蛋白表达水平.结果 与NC组比较,DM组胰岛细胞凋亡率显著增加(P=0.000),而tBHQ组胰岛细胞凋亡率明显低于DM组(P=0.000).DM组血清及胰腺组织中MDA水平较NC组明显升高(P=0.000),而tBHQ组血清及胰腺组织中MDA水平明显低于DM组(P=0.000).DM组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均较NC组显著降低(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平较NC组明显升高(P=0.000);与DM组比较,tBHQ组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均明显增加(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P=0.017);AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对抑制胰岛细胞Caspase-3的表达及延缓胰岛细胞凋亡进程产生重要的保护作用.     

2型糖尿病足溃疡患者外周血miR-155表达水平的改变及其临床意义

目的 探讨2型糖尿病足溃疡患者外周血miR-155表达变化及其与糖尿病足溃疡(DFU)发病的相关关系。方法 共入选60例新诊断2型糖尿病无足溃疡患者(T2DM组)、112例2型糖尿病合并足溃疡患者(DFU组)和60名糖耐量正常的对照人群(NC组)。应用实时定量PCR(qRT-PCR)方法测定受试者外周血miR-155表达水平,并对DFU的临床特点以及危险因素进行分析。结果 T2DM组外周血miR-155表达水平较NC组降低(P<0.05),DFU组外周血miR-155表达水平较T2DM组增高(P<0.01)。DFU患者外周血miR-155表达水平与足溃疡病程以及足溃疡Wagner分级呈正相关(P=0.02,P=0.01),与8周后足溃疡愈合率呈负相关(P=0.04)。多元逐步Logistic回归分析显示高表达的miR-155为DFU的独立危险因素(OR=3.98,P=0.002)。结论 2型糖尿病足溃疡患者外周血miR-155表达水平增高,为DFU的独立危险因素,并与DFU预后密切相关。     

异甘草酸镁对酒精性肝病大鼠肝组织Nrf2/HO-1信号通路和肝纤维化指标的影响

目的:研究异甘草酸镁(MgIG)对酒精性肝病(ALD)大鼠肝组织核因子2相关因子/血红素氧合酶(Nrf2/HO-1)信号通路和肝纤维化指标的影响.方法:喂养酒精液体饲料构建ALD大鼠模型,另取SD大鼠以普通饲料喂养作对照组,将建模成功大鼠随机分为模型组、MgIG低、中、高剂量组,每组10只.MgIG低、中、高剂量组分别腹腔注射15 mg/kg、30 mg/kg、45 mg/kg MgIG,1次/d,连续注射8周,对照组和模型组注射等体积生理盐水.采用生化试剂盒检测大鼠肝功能、肝组织甘油三酯(TG)及氧化应激指标含量,苏木精—伊红(HE)染色和Masson染色观察肝组织病理变化,酶联免疫吸附法检测纤维化指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测肝组织Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达.结果:模型组血清ALT、AST、TBi1、MDA、肝组织TG、LN、HA、PC-111含量、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达明显高于对照组,血清SOD、GSH水平明显低于对照组(P＜0.05);与模型组比较,MgIG中、高剂量组ALT、AST、TBi1、MDA、TG、LN、HA、PC-Ⅲ水平显著降低,SOD、GSH、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论:MgIG对ALD大鼠有保护作用,可能通过Nrf2/HO-1途径减轻氧化应激及改善肝纤维化,从而缓解酒精性肝损伤.     

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。     

内脂素在糖尿病大鼠肝组织的表达及其对肝糖代谢的作用

目的：检测糖尿病大鼠肝组织内脂素（visfatin）的表达,探讨内脂素在肝糖代谢的作用。方法雄性 SD 大鼠,分为5组：正常对照组（NC 组）、肥胖组（DIO 组）、糖尿病组（DM 组）、胰岛素治疗组（INS 组）、二甲双胍治疗组（MET 组）。检测大鼠空腹血糖（FPG）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、游离脂肪酸（FFA ）、空腹胰岛素（Fins）水平;RT‐PCR 测定大鼠肝组织 visfatin 、葡萄糖6磷酸酶（G‐6‐Pase）mRNA 的水平,Western blot 检测 visfatin 、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶‐α（p‐AMPKα）和腺苷酸活化蛋白激酶‐α（AMPKα）蛋白表达量。结果 DM 组 FBG 较 NC 组、DIO 组均显著升高（P＜0．01）;INS 组、MET 组 FBG 较 DM 组显著下降（P＜0．01）。 DIO 组、DM 组 HOMA‐IR 均较 NC 组显著升高（P＜0．01）;DM 组 HOMA‐IR 较 DIO 组显著升高（P ＜0．01）。DIO 组、DM 组 ISI 均较 NC 显著降低（P＜0．01）,DM 组 ISI 较 DIO 组显著降低（P＜0．01）。 DIO 组 TG 较 NC 组显著升高（P＜0．01）;INS 组、MET 组 TG 较 DM 组显著降低（P＜0．05）,DM 组、INS 组、MET 组 TG 、TC 均较 NC 组升高（P＜0．05）。 DM 组、MET 组、INS 组 FFA 均较 NC 组明显升高（P＜0．05）;DM 组 FFA 较 DIO 组明显升高（P＜0．05）。 DM 组 visfatin mRNA 表达较NC 组、DIO 组显著升高（P＜0．05）;INS 组、MET 组 visfatin mRNA 较 DM 组显著降低（P ＜0．01）。 DM 组、MET 、INS 组 G‐6‐Pase mRNA 较 DIO 组显著升高（P＜0．05）,MET 组 G‐6‐Pase mRNA 较 DM 组显著降低（P ＜0．05）。 DM 组、INS 组、MET 组visfatin 蛋白表达较 NC 组显著升高（P＜0．05）;DM 组、MET 组、INS 组 AMPKα蛋白表达较 NC 组显著降低（P＜0．05）,DM 组AMPKα蛋白表达较 DIO 组显著降低（P ＜0．05）;DIO 组、DM 组、INS 组、MET 组 p‐AMPKα蛋白表达较 NC 组显著降低（P＜0．01）。结论大鼠肝组织 visfatin 表达可能与肝糖脂代谢有关联,visfatin 可能未参与到二甲双胍激活 AMPK 降低血糖的机制中。     

银杏种子中胰蛋白酶抑制剂的降糖活性研究

目的:探讨银杏种子中胰蛋白酶抑制剂(TI)对2型糖尿病的防治作用。方法:将成模的大鼠随机分为4组,分别做为模型对照组,TI高剂量治疗组(TI-H),TI低剂量治疗组(TI-L),二甲双胍药物对照组(MET),10只/组,TI-H组大鼠按15.60 mg/kg体重剂量每天灌胃1次,TI-L组大鼠按7.8mg/kg体重剂量每天灌胃1次。MET组按250 mg/kg体重剂量每日灌胃给MET片溶液;模型对照组和正常对照组每日灌服生理盐水,持续给药1个月,分别测定血糖、血清甘油三酯、血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、血清肌酐和血尿素氮、胰组织脂联素、TGF-β1和MCP-1蛋白表达水平。结果:与模型组比较,MET、TI-H、TI-L组血糖明显下降(P0.05),血肌酐明显下降(P0.05),血尿素氮明显下降(P0.05),脂联素水平明显增高(P0.05),TGF-β1水平、MCP-1蛋白明显降低(P0.05),TI-L组、TI-H组较MET组起效快,作用时间长,以TI-H组效果最明显。结论:银杏种子中胰蛋白酶抑制剂可以通过有效的降低血糖、血肌酐、血尿素氮、TCTG、升高HDL-c,同时可提高胰组织脂联素水平,降低MCP-1蛋白、TGF-β1水平,达到治疗糖尿病目的。     

姜黄素类似物J7对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨姜黄素（CUR）类似物J7对2型糖尿病（T2DM）大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法将雄性SD大鼠随机分成5组：正常对照（NC）组、模型组、CUR治疗组、J7低剂量（LJ7）治疗组和J7高剂量（HJ7）治疗组。后4组采用高脂高糖饮食喂养4周,单次腹腔注射链脲佐菌素（30mg/kg）诱导T2DM模型。CUR组、LJ7组和HJ7组分别按20mg/kgCUR、10mg/kgJ7、20mg/kgJ7灌胃8周,1次/d;每次灌胃量按1ml/100g计算得出,其余组予同等容积羧甲基纤维素钠灌胃。在光镜和电镜下观察各组大鼠肾脏组织形态改变;测量各组大鼠体重、肾重,计算肾重指数;检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平;硫代巴比妥酸法检测各组大鼠肾脏组织丙二醛（MDA）水平;羟胺法检测各组大鼠肾脏组织超氧化物歧化酶（SOD）活性;免疫组化染色法检测各组大鼠肾脏转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达;Westernblot法检测各组大鼠肾脏组织TGF-β1、人信号转导因子7（Smad7）、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白相对表达量及Bcl-2/Bax。结果与NC组比较,模型组大鼠肾小球肥大,胶原纤维增多,细胞外基质沉积,足突融合;体重、SOD活性和Bcl-2、Smad7蛋白相对表达量及Bcl-2/Bax均明显降低（均P＜0.05）,肾重指数、FBG、Scr、BUN、MDA水平和Bax、TGF-β1蛋白相对表达量均明显升高（均P＜0.05）;经CUR或J7治疗后,相应病理学改变减轻,体重略有上升,SOD活性和Bcl-2、Smad7蛋白相对表达量及Bcl-2/Bax均明显升高（均P＜0.05）,FBG、MDA水平和Bax、TGF-β1蛋白相对表达量均明显降低（均P＜0.05）。结论CUR类似物J7对T2DM大鼠的肾脏具有保护作用,可能与其具有抑制氧化应激、抗细胞凋亡、抑制TGF-β/Smad通路及纤维化作用有关。     

二甲双胍对肥胖大鼠血清及下丘脑中胃促生长素表达的影响

目的观察肥胖大鼠血清及下丘脑中胃促生长素水平在二甲双胍干预前后的变化,探讨其在肥胖及代谢紊乱中的作用。方法 SD大鼠50只随机分为普通饮食(NC,n=10)组和高脂(n=40)组,16周高脂组成功建立肥胖模型后(n=20)随机分为:肥胖对照(OB)组,二甲双胍(MET)组,各10只。MET组灌胃MET 200 mg/(kg.d),OB组及NC组灌胃等剂量蒸馏水。分别测定干预前及干预6周后各组体重(BW)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指(HOMA-IR)及胃促生长素。免疫组化法检测各组大鼠下丘脑中胃促生长素表达水平。结果①干预前,OB组、MET组较NC组BW、FPG、TG、TCH、FINS、HOMA-IR升高,胃促生长素降低(P<0.05,P<0.01),OB组、MET组间各指标比较差异无统计学意义。MET干预后,MET组较OB组BW、TG、TCH、FPG、FINS、HOMA-IR降低,胃促生长素水平升高(P<0.05,P<0.01)。②免疫组化显示:OB组下丘脑中胃促生长素表达较NC组降低,MET组较OB组升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。③研究总体中FINS与胃促生长素呈负相关(r=-0.817,P<0.05)。结论肥胖大鼠血清及下丘脑胃促生长素水平降低,MET可改善胰岛素敏感性、降低BW,可能与血清及下丘脑胃促生长素水平增高有关。     

肺癌组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白的表达

目的:研究肺癌组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白表达的情况。方法:采用免疫组化法检测67例肺癌患者的肺癌组织及癌旁正常组织中Nrf2、Keap1和NQO1蛋白的表达,并分析Keap1、Nrf2和NQO1蛋白的表达与肺癌临床病理特征的关系。结果:Keap1蛋白在肺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期鳞癌和Ⅲ期、Ⅳ期腺癌中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05);Nrf2蛋白在肺Ⅰ期鳞癌和Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期腺癌中的表达低于癌旁正常组织(P<0.05);NQO1蛋白在肺Ⅰ期鳞癌中的表达低于癌旁正常组织(P<0.05),在Ⅱ期腺癌中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。3种蛋白的表达与肺癌患者的临床分期和是否侵及胸膜有关(P<0.05)。结论:肺癌组织中Keap1、Nrf2、NQO1蛋白表达异常,提示Keap1-Nrf2/ARE通路在肺癌的发生发展中可能发挥重要的作用。     

红芪多糖对糖尿病大鼠视网膜的影响

目的观察红芪多糖(Hedysarum Polybotys Saccharide,HPS)对糖尿病大鼠视网膜Nrf2、SOD、iNOS表达水平的影响,并探讨其机制。方法用60μg/g一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型。将糖尿病模型大鼠分为模型对照组(DM)、红旗多糖治疗组(HPS),另设正常对照组(NC),每组10只。均灌胃给药,1 d/1次,HPS组给予相应药物,DM组和NC组给予等剂量生理盐水,分别喂养12周。在12周后采用HE染色观察视网膜形态,免疫组化法观察细胞凋亡情况,和PCR方法检测Nrf2、SOD、iNOSmRNA表达。结果与NC组对比,DM组与HPS组视网膜SOD含量下降,iNOS、Nrf2的表达增加(P 0.05)。与DM组对比,HPS组的Nrf2、SOD的表达增加(P0.05),iNOS表达明显降低(P0.05)。结论 HPS对DM大鼠视网膜有保护作用,推测其机制可能是通过作用于Nrf2-ARE通路,增加SOD含量,降低大鼠视网膜中iNOS含量,减轻氧化应激反应,从而保护视网膜。     

姜黄素在大鼠创伤性脑损伤模型中的抗氧化应激作用

目的探讨大鼠创伤性脑损伤模型中核因子E2转录相关因子2(Nrf2)及抗氧化应激相关因子的含量或活性的改变,研究姜黄素对大鼠脑损伤的保护作用及抗氧化应激机制。方法选取SPF级雄性SD大鼠20只,分为正常对照组、脑损伤模型组(TBI组)、脑损伤溶剂组(TBI+S组)、脑损伤姜黄素处理组(TBI+C组),每组各5只。其中正常对照组仅给予麻醉和生理盐水处理,TBI组、TBI+S组和TBI+C组均使用自由落体式脑外伤造模装置进行造模,随后分别给予等量生理盐水、DMSO溶剂(0.05%)和姜黄素(5 mg/kg)处理,1 d后处死所有大鼠并取脑组织,提取RNA和蛋白。定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测Nrf2的mRNA表达,Western Blot检测Nrf2蛋白的表达。化学比色法检测大鼠脑组织匀浆液中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和血红素氧合酶-1(HO-1)的含量。结果与正常对照组相比,TBI组、TBI+S组脑组织中Nrf2的mRNA和蛋白表达均显著增加,MDA含量、i NOS和HO-1的活力均增加,GSH含量、SOD和CAT的活性均降低,差异有显著性(P0.05)。与TBI组、TBI+S组相比,TBI+C组Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显著降低,MDA含量、i NOS和HO-1的活力均降低,GSH含量、SOD和CAT的活性均增加,差异有显著性(P0.05),而TBI组与TBI+S组之间差异无显著性(P0.05)。结论姜黄素对脑损伤大鼠具有抗氧化应激的作用,它能够通过降低Nrf2的表达,改变机体抗氧损伤相关指标,由此可能起到对TBI脑组织的保护作用。