某中学一起流感暴发疫情实验室检测分析

目的分析安阳市北关区暴发流感病例不同标本中流感病毒检测结果,为流感常规检测方案的制定提供依据。方法将我区胜利路中学2017年12月疑似流感疫情暴发中的25名症状严重、体温≥38℃,伴有咳嗽或咽痛之一的学生作为研究对象,同时采集咽拭子、鼻拭子标本,分别以实时荧光定量(RT-PCR)法进行流感病毒核酸检测。一周内,以MDCK细胞培养分离病毒进行分型鉴定。比较RT-PCR法核酸检测中,咽拭子、鼻拭子标本流感病毒阳性检出率。结果RT-PCR法核酸检测中,咽拭子标本流感病毒阳性率72%高于鼻拭子标本56%(P0.05);咽拭子H1Ct平均值为32.02±5.52,小于鼻拭子H1Ct平均值35.34±6.37(P0.05)。MDCK细胞培养病毒样本分离鉴定结果显示,咽拭子标本流感病毒真阳性率100%高于鼻拭子标本真阳性率77%(P0.05)。结论在甲型H1N1流感病毒核酸检测中,鼻拭子检测准确性不及咽拭子,在流感病毒常规检测中,应进行鼻、咽拭子双采样,以确保检测准确性,无法同时采样时,应依据当季流行的主要流感病毒亚型选择采样拭子。     

婴幼儿巨细胞病毒感染不同检测方法的比较

人类巨细胞病毒简称(CMV)属疱疹病毒科,为双链线状DNA病毒,是婴幼儿期最常见的病毒感染。很多CMV感染婴幼儿无明显临床症状,仅有尿中排毒,但其中部分在数年后可出现智力发育障碍、耳聋和视力障碍等后遗症,对优生优育和人口素质构成极大的威胁。     

不同病程百日咳病例各种实验室检测方法的对比研究

目的对处于不同病程的百日咳病例,开展细菌培养、血清抗体和聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）等检测方法,对比分析其临床诊断的价值与意义。方法 2010~2012年,通过社区百日咳症状主动监测和医院被动监测两种模式,采用细菌培养、PCR和血清抗体检测[单份血抗百日咳毒素（Antibody to Pertussis Toxin,Anti-PT）-免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）G、IgM和双份血清IgG≥4倍增高]等方法,对百日咳监测病例开展检测。按照百日咳流行病学调查表的内容,对确诊病例的基本信息、就诊信息和临床症状开展流行病学调查。结果共确诊百日咳400例,单份血标本采集率为72.5%,Anti-PT-IgG阳性率为57.93%,病程中位数（Median,M）为21d,四分位间距（Interval of Quartiles,IQR）为15~30d;IgM的阳性率为17.59%,M为6d,IQR为5~16d,两种抗体检测结果的一致率为51.38%。双份血清IgG≥4倍增高采集率为2.5%,阳性率为90%。鼻咽拭子采集率91%,PCR检测阳性率为58.24%;鼻咽抽取液采集率为18.25%,阳性率为69.86%,两种采集方法检测阳性率差异无统计学意义[Fisher＇s Exact Test（费希尔精确检验）P=0.18]。PCR阳性病例的病程M为10d,IQR为7~18d,两种采样方法检测的一致率为80.82%。260例百日咳确诊病例同时采集了鼻咽拭子和血标本,其中Anti-PT-IgG阳性率为58.46%,鼻咽拭子PCR阳性率为50.76%,两种采样方法检测的一致率为20%。结论百日咳病例的实验室检测方法应考虑病程因素,单份血Anti-PT-IgG检测适合于中晚期病程的病例,鼻咽拭子PCR适合于早期病程的病例,两种方法有较好的互补性。     

用RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测诺沃克病毒的比较分析

目的:研究用不同方法检测诺沃克病毒核酸的阳性率关系,为进一步完善诺沃克病毒核酸的实验室检测提供依据。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-tim e RT-PCR)两种方法,对124例腹泻标本进行诺沃克病毒核酸的检测。结果:124份标本中,RT-PCR检出诺沃克病毒阳性31例,阳性率为25%;实时RT-PCR检出阳性37例,阳性率为29.84%;两种方法均阳性的28例,均阴性的84例,符合率为90%;不同性别阳性率无显著性差异;采用实时RT-PCR检测诺沃克病毒,敏感性较RT-PCR高,但两种方法的阳性率无统计学差异。对于强阳性样本(Ct值在20以内或电泳结果特异性条带很亮),两种方法检出率均为100%;对于弱阳性样本,则大部份标本实时RT-PCR检出阳性而RT-PCR未能检出,少部份标本RT-PCR检出阳性而荧光RT-PCR未能检出。结论:对于诺沃克病毒的实验室检测方法,首选实时RT-PCR;在可能的情况下,应该RT-PCR和实时RT-PCR两种方法联用进行检测,以避免发生弱阳性样本漏诊的情况。     

实时荧光聚合酶链反应检测解脲脲支原体的临床意义

目的探讨实时荧光聚合酶链反应(PCR)在检测解脲脲支原体(Uu)中的临床意义。方法对278例未经治疗的门诊就诊者和35例确诊为Uu感染的患者经抗菌药物应用两周停药1周后分别采用实时荧光PCR和培养技术进行Uu的检测。结果 278例首次就诊者经实时荧光PCR检测Uu阳性125例,阳性率44.96%,培养阳性113例,阳性率40.65%,两者比较差异无统计学意义,35例确诊为Uu患者经抗菌药物治疗后停药1周,采用实时荧光PCR检测阳性12例,阳性率34.29%,但病原体含量要远远低于用药初期,35例患者经培养阳性5例,阳性率14.29%;两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光PCR在判断是否存在Uu感染时要较培养法灵敏,对经抗菌药物治疗停药后判断是否治愈时培养法要较荧光PCR更为准确。     

实时荧光定量PCR法与常规PCR法检测沙门菌的比较

目的:比较实时荧光定量PCR法、常规PCR法检测沙门菌的灵敏度与特异性。方法:采用建立的实时荧光定量PCR、常规PCR方法,同时对沙门菌等细菌进行检测。结果:实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达33 cfu/m l,且有很高的特异性,对金黄色葡萄球菌等10种相关细菌均无交叉反应,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论:实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是2种方法中最为快速敏感的方法,适用于临床实验室的快速诊断。     

实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒病毒的比较

目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性.方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒.结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份.实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右.结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断.     

实时荧光定量PCR法与常规PCR法及细菌培养法检测单增李斯特菌的比较

目的：比较实时荧光定量PCR法、常规PCR法及细菌培养法检测单核细胞增生性李斯特菌的灵敏度与特异性。方法：采用建立的实时荧光定量PCR、常规PCR及传统细菌培养法3种方法,同时对单核细胞增生性李斯特菌等细菌进行检测。结果：实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达19 cfu/ml,且有很高的特异性,对英诺克李斯特菌等10种相关细菌均无交叉反应,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论：实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。     

4种方法检测男性尿道分泌物淋菌结果比较分析

目的 通过4种方法对尿道分泌物淋病奈瑟球菌(简称淋菌)检测结果比较分析,以期为临床提供一种更加简便和适用的检测方法.方法 瑞氏染色和革兰染色同时检测226份分泌物中的淋菌,其中部分标本加用培养法和(或)聚合酶链反应(PCR)进行鉴定.结果 瑞氏染色和革兰染色检查尿道分泌物淋菌阳性率分别为71.68%和73.89%,差异无统计学意义(P＞0.05),两种染色法的阳性率均明显高于分离培养法(33.33%)(P＜0.05),而较PCR法检出率85.71%低(P＜0.05).结论 对于男性尿道分泌物淋菌检查,PCR法阳性率最高;染色法阳性率较高,其中瑞氏染色法更简便、快速和廉价;培养法阳性率最低,不适于常规检查.     

EMA-RTQ-PCR快速检测沙门菌活细胞方法的应用

摘要:目的　检测EMA-RTQ-PCR快速鉴别沙门菌死活细胞方法的应用效果,评价该方法的实际应用价值。方法　利用EMA-RTQ-PCR以及国标GB4789.4-2010对人工模拟样品及实际样品分别进行检测。结果　对于人工模拟死菌样品,EMA-RTQ-PCR与国标法检测结果一致,均为阴性;对于人工模拟死活菌混合样品,EMA-RTQ-PCR直接检测结果与国标法存在差异,EMA-RTQ-PCR为阴性,国标法为阳性;人工模拟死活菌混合样品增菌后用EMA-RTQ-PCR进行检测,结果与国标法一致,均为阳性;增菌后的实际样品用EMA-RTQ-PCR进行检测的结果与国标检测结果一致,均为阴性。结论　通过对样品进行前增菌,可以保证检验结果的准确可靠。该方法能够快速、灵敏、准确的检测沙门菌活细胞,具有很好的应用价值。