大鼠局灶性脑缺血再灌流后Caspase-3激活与神经元凋亡的关系

目的探讨Caspase-3与局灶性脑缺血后神经元凋亡的关系。方法局灶性脑缺血再灌流大鼠模型,按再灌流时间不同随机分为5组。用半定量RT-PCR观察了脑缺血后不同时程Caspase-3mRNA表达及四肽荧光底物法检测Caspase-3蛋白酶活性;用TUNEL方法检测不同时程细胞凋亡。结果脑缺血2h再灌流2h组Caspase-3mRNA水干即已升高(P＜0.05)),蛋白酶活性轻度升高,再灌流6h后两者均明显升高(P＜0.05);脑缺血再灌流后不同时程细胞凋亡具有与Caspase-3相似的变化趋势。结论提示脑缺血后细胞凋亡的发生与Caspase-3的激活有关。     

巴曲酶对大鼠脑缺血再灌流损伤保护作用机理的研究

为探讨巴曲酶对大鼠短暂性脑缺血再灌流损伤引起的细胞凋亡有无抑制作用，参照Ｓｍｉｔｈ等（１９８４）方法，制备大鼠前脑短暂性缺血再灌流模型，采用ＴＵＮＥＬ（脱氧核苷酸转移酶末端介导的ｄＵＴＰ－生物素切口末端标记）法，观察了海马脑区细胞凋亡的特征变化—ＤＮＡ降解片段（凋亡小体）。发现脑缺血１０ｍｉｎ再灌流２４ｈ，海马ＣＡ１区即可见凋亡小体，于再灌流４８ｈ、９６ｈ凋亡小体明显增多。给予巴曲酶（１．６ＢＵ／ｋｇ．ｉｖ）后上述变化被明显逆转。本实验提示巴曲酶对脑缺血再灌流损伤所引起的细胞凋亡有抑制作用。     

不同疗程促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的探讨不同疗程的促红细胞生成素（EPO）对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响。方法36只雄性SD大鼠随机分成EPO治疗组和生理盐水治疗组，每组分成短、中、长三个疗程，两组大鼠均制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。EPO治疗组短、中、长疗程相应时间点分别腹腔注射EPO3000U／kg；生理盐水治疗组各时间点注射等量生理盐水。疗程24h后进行神经功能评分，断头取脑制作石蜡切片，免疫组化染色检测caspase-3，流式细胞仪检测神经细胞凋亡。结果与生理盐水组比较，EPO各疗程组神经功能相应地改善，而凋亡细胞与caspase-3表达均相应地减少，其中长疗程组减少最为显著，较中、短疗程有统计学差异（氏0．05）。结论不同疗程的EPO对缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响不完全相同，长疗程接近最佳疗程。     

氧自由基在家兔不完全性脑缺血再灌流损伤中的作用

本文应用电子自旋共振技术,用直接冷冻样品方法,动态观测家免不完全性缺血再灌流脑组织中的氧自由基信号,同时用TBA比色法检测脑组织中的脂质过氧化水平。结果表明,脑缺血再灌流后,早期即可产生大量的氧自由基,而且在再灌流相当时间内仍可持续大量产生,由它引发的脂质过氧化是导致脑损伤的主要原因之一。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂减少大鼠脑缺血模型caspase-3的表达

目的 :研究半胱氨酸蛋白酶caspase 3及calpain抑制剂干预治疗对大鼠局灶性脑缺血 /再灌注模型caspase 3表达的影响。方法 :大鼠随机分为经左侧侧脑室注射caspase 3抑制剂Ⅲ组 (DEVD组 )、calpain抑制剂Ⅰ组 (ALLN组 )、联合治疗组 (DEVD +ALLN组 )、溶剂二甲基亚砜对照组 (DMSO组 )以及左侧大脑中动脉缺血 /再灌注对照组 (MCAO组 ) ,诱导左侧大脑中动脉缺血 2h ,再灌注2 4或 48h ;再灌注 2 4h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况 ;用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL)检测鼠脑中的神经元凋亡情况 ;并分别通过原位杂交和免疫组化技术检测鼠脑中caspase 3mRNA及活性蛋白的表达。结果 :DMSO组的各项指标与MCAO组无明显差异 ;DEVD组或ALLN组缺血侧脑中细胞凋亡数、caspase 3mRNA及活性蛋白的表达均明显减少 ,联合治疗组作用更强。结论 :caspase 3与calpain抑制剂干预治疗可减少大鼠缺血再灌注脑区神经元凋亡和caspase 3的表达 ,从而产生神经保护作用 ,并具有潜在的临床应用价值。     

肿瘤坏死因子在局部脑缺血/再灌流中的表达

目的：为探讨局部脑缺血／再灌流中肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）的动态变化及其与白细胞浸润的关系。方法;采用大鼠大脑中动脉梗死模型,分别用免疫组织化学方法检测ＴＮＦ－α、酶组化方法检测髓过氧化物酶（ＭＰＯ）的动态变化,用图像分析进行定量分析。结果：ＴＮＦ－α在缺血组（Ｉ）和缺血再灌流组（ＩＲ）０．５ｈ表达增多,１２ｈ达高峰,与对照组比较差异非常显著（Ｐ〈０．０１）,持续至１２ｈ;Ⅰ组１２ｈ、ＩＲ缄０     

大鼠脑缺血再灌流后Bcl-2、Caspase-3 mRNA水平表达与大脑皮层及纹状体区炎性细胞浸润的影响

目的探讨大鼠脑缺血再灌流后Bcl-2蛋白、Caspase-3mRNA的表达及炎性细胞浸润与神经细胞凋亡的关系。方法将54只Wistar大鼠随机分为二组：假手术组，缺血再灌流组。采用原位末端标记(TUNEL)、免疫组化和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌流后不同时间点神经细胞凋亡及损伤的变化与Bcl-2、Caspase-3mRNA表达。结果Bcl-2表达于缺血再灌流12～24h迭高峰，再灌流2～4d呈下降趋势，至16d略高于假手术组；Caspase-3mRNA于缺血再灌流12～24h迭高峰，2～4d呈降低趋势，至16d略高于假手术组。结论脑缺血再灌流后细胞凋亡介导神经细胞损伤、坏死是一个渐进的动态演变过程。Bcl-2蛋白、Caspase-3mRNA表达在押制细胞凋亡和介导神经细胞损伤等方面起非常重要的作用。     

脑缺血再灌流后海马区细胞凋亡的研究

目的:观察脑缺血再灌流后海马区细胞凋亡。方法:钳夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型,应用Tunel法染色。结果:短暂性前脑缺血不同时间再灌流后海马CA_1区锥体细胞发生凋亡,CA_2、CA_3区锥体细胞层、水平层、放射层、分子层及齿状回部位未见细胞凋亡。结论:短暂性脑缺血可导致CA_1区锥体细胞凋亡。     

降纤酶对大鼠局灶脑缺血／再灌后caspase—3 mRNA表达和细胞凋亡的影响

目的:通过观察降纤酶对大鼠脑缺血损伤后半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和细胞凋亡的影响,研究其对脑保护机制。方法:采用大鼠线栓法栓塞一侧大脑中动脉(MCAO)制作局灶脑缺血/再灌注模型,健康雄性Wistar大鼠144只,分为生理盐水组和降纤酶两组,用原位杂交和原位末端标记(TUNEL)方法,观察缺血0、1、3、6和24 h;缺血3 h再灌注3、6和24 h;缺血 6 h再灌注3、6和 24 h的caspase-3 mRNA的表达和 TUNEL染色阳性细胞数。结果:降纤酶保护组caspase-3 mRNA的表达和TUNEL染色阳性细胞数明显少于生理盐水组。结论:降纤酶可抑制大鼠脑缺血/再灌注后caspase-3 mRNA的表达和细胞凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase—9 mRNA及Apaf—1mRNA表达的动态变化

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后再灌注期caspase-9 mRNA及Apaf-1 mRNA表达的动态变化.方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血后再灌注模型,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测caspase-9 mRNA及Apf-1 mRNA的表达.结果缺血2 h后再灌注,缺血皮质中caspase-9 mRNA的表达在再灌注后24h达高峰,48h仍保持高水平,而Apaf-1 muRNA的表达无明显改变.结论局灶性脑缺血后再灌注48h内caspase-9 mRNA表达增强.     

Glial Damage After Transient Focal Cerebral Ischemia in Rats

We investigated the immunohistochemical changes of 8-hydroxy-2′-deoxyguanosine (8-OHdG) immunoreactivity as a marker of DNA damage and single-strand DNA (ssDNA) immunoreactivity as a marker of apoptosis in the striatum from 1 up to 15 days after 90 min of focal cerebral ischemia caused by middle cerebral artery occlusion in rats. In the present study, marked loss of MAP2 immunostaining was observed in the ipsilateral striatum 3 days after focal cerebral ischemia. A significant increase in the number of ssDNA-immunoreactive apoptotic neurons was observed in the ipsilateral striatum 1 and 3 days after focal cerebral ischemia. In contrast, a significant increase in densities of 8-OHdG-immunopositive cells was observed in the ipsilateral striatum from 3 up to 15 days after focal cerebral ischemia. Our double-labeled immunochemical study showed that 8-OHdG immunoreactivity was observed in both isolectin B₄-positive microglia and glial fibrillary acidic protein-immunopositive astrocytes in the ipsilateral striatum 7 days after focal cerebral ischemia. These results suggest that focal cerebral ischemia can cause a marked increase in the number of microglia and astrocytes with oxidative DNA damage in the ipsilateral striatum. Furthermore, our results show that most microglia and astrocytes in the ipsilateral striatum after focal cerebral ischemia may not die by apoptosis. Thus, our findings provide novel evidence that focal cerebral ischemia can cause oxidative DNA damage in most microglia and astrocytes.     

老龄大鼠局灶性脑缺血后CyclinD1表达与小胶质细胞活化、神经元凋亡间关系的研究

目的:探讨老龄大鼠局灶性脑缺血后CyclinD1表达与小胶质细胞活化、神经元凋亡之间的内在关系。方法:建立光化学诱导的老龄大鼠局灶性脑缺血模型,利用原位分子杂交、IsolectinB4免疫组织化学和原位末端标记等方法,检测缺血4、24 h和3、5 d组大鼠脑组织中的CyclinD1 mRNA阳性细胞、小胶质细胞和凋亡细胞的时空分布规律。结果:CyclinD1 mRNA阳性细胞、小胶质细胞和凋亡细胞皆分布于缺血灶周围,发布空间相互重叠。CyclinD1 mRNA在多种形态细胞中表达,以胶质细胞最为多见,其表达高峰与小胶质细胞活化高峰一致。在各时间点的病灶周围皆发现TUNEL阳性细胞,其高峰时点提前于CyclinD1 mRNA阳性细胞及小胶质细胞活化高峰。结论:CyclinD1可能参与了缺血后小胶质细胞的活化及神经元的凋亡过程。     

去骨瓣减压术对大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡的影响

目的:探讨去骨瓣减压术对局灶性脑缺血细胞凋亡的影响。方法:改良Koizumi法制作脑缺血动物模型,6 h后在缺血侧行去骨瓣减压术,采用 TUNEL法测定减压术后4、8、16、24 h皮质和纹状体区细胞凋亡变化,并采用流式细胞仪测定术后4和 24 h细胞凋亡的改变。结果:在术后第24小时,去骨瓣减压组皮质区凋亡细胞比例与对照组相比显著减少(P<0.05和P<0.01),而两组纹状体区凋亡细胞比例在各时间点均无显著性差异(均P>0.05)。结论:皮质区细胞凋亡的减少可能是去骨瓣减压术对局灶性脑缺血保护作用的重要机制之一。     

灯盏花对脑缺血神经元凋亡的防治作用

目的探讨蛋白激酶C抑制剂灯盏花注射液对神经元凋亡的防治作用。方法采用大鼠全脑缺血模型，观察脑缺血／再灌流后蛋白激酶C活性、神经元凋亡的变化及灯盏花对上述的影响。结果脑缺血／再灌流可以导致蛋白激酶C的移位激活、神经元凋亡的增加。灯盏花可以阻止脑缺血／再灌流导致的上述变化。结论灯盏花注射液对脑缺血／再灌流导致神经元凋亡有防治作用。     

皮质扩散性抑制对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡的影响

目的:确定皮质扩散性抑制(ＣＳＤ)对大鼠脑缺血的保护作用时间窗及对细胞凋亡的影响。方法:氯化钾诱发ＳＤ大鼠ＣＳＤ,改良Ｌｏｎｇａ法大鼠缺血模型,测定脑梗死体积和细胞凋亡及其相关基因的表达。结果:经ＣＳＤ预处理后１、３、５、７和１０ｄ再缺血时,皮质梗死体积均小于对照组,其中以３ｄ最明显。主要分布在梗死灶边缘区内层的凋亡细胞,ｂｃｌ－２和Ｂａｘ表达有所下降(Ｐ＜０．０５);ｂｃｌ－２/ｂａｘ比率升高(Ｐ＜０．０５)。结论:ＣＳＤ的保护作用时间窗为１－１０ｄ,经ＣＳＤ处理后再缺血时,细胞凋亡受到抑制。     

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后单、双链DNA断裂的实验研究

目的 :观察大鼠脑缺血 /再灌注后脑细胞单、双链DNA损伤情况 ,以揭示该病的损伤机制。方法 :分别用Klenow及TdT(TUNEL)标记染色法检测大脑中动脉阻塞 (MCAO)模型组、假手术组及正常大鼠脑细胞的单、双链DNA断裂 ,观察缺血侧、对照侧皮质及海马阳性细胞数的动态变化。结果 :MCAO模型组缺血侧皮质及海马Klenow及TUNEL阳性细胞数均逐渐增多 ,Klenow阳性细胞的出现早于TUNEL阳性细胞 ,皮质的出现早于海马。结论 :大鼠MCAO模型中DNA单、双链断裂均参与了脑损伤机制